A doença de Newcastle, causada por cepas patogênicas de paramixovírus aviário 1 (APMV-1), é uma doença de aves importante por causar altos índices de mortalidade e perdas econômicas. Em aves da ordem Columbiformes, vários surtos têm sido relatados ao longo de 30 anos, em diferentes partes do mundo, causados por uma cepa denominada pigeon paramyxovirus tipo 1 (PPMV-1). Este trabalho descreve um surto de mortalidade em pombos domésticos (Columba livia), provenientes de uma praça pública, no município de Porto Alegre, no Sul do Brasil, ocorrido no mês de novembro de 2014. Aves moribundas e mortas, no intervalo de cinco semanas, foram submetidas ao exame de necropsia, exame histopatológico, imuno-histoquímico anti- Newcastle, de transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RTPCR), exame de sequenciamento e analise filogenética. Foram acometidas aves adultas, de ambos os sexos e a mortalidade foi estimada em 80%, os sinais neurológicos apresentados foram tremores da cabeça, torcicolo, dificuldade em manter-se em estação, dificuldade de locomoção, paresia, paralisia, asas caídas e vômito. As lesões encontradas no exame macroscópico eram inespecíficas e no exame histológico do sistema nervoso central eram caracterizadas por encefalite e encefalomielite não supurativas. No rim, fígado e pâncreas foi observado infiltrado inflamatório mononuclear, que por vezes era associado à necrose. No baço, além de necrose, foi observado depleção linfoide e infiltrado de macrófagos. Das 24 aves testadas para a RTPCR, seis foram positivas para a proteína da matriz (M) e através do sequenciamento destas amostras, pode-se identificar que todas as aves foram acometidas pela mesma cepa viral. Para confirmação de que a cepa encontrada tratava-se de uma cepa virulenta, foi feita a análise por sequenciamento do sítio de clivagem da proteína F, comparando a sequência de aminoácidos encontrada, 112RRQKRF117, com outras cepas já conhecidas. Observou-se que as amostras analisadas apresentaram aminoácidos na região do sítio de clivagem da proteína F, compatíveis com cepas virulentas. De acordo com a análise filogenética, o virus foi classificado como pertencente à classe II e ao genótipo VI. Ao exame imuno-histoquimico, a marcação foi observada no cérebro, no citoplasma de astrócitos e no núcleo de neurônios; no fígado, associada ao infiltrado inflamatório no interior de macrófagos; em células epiteliais do pâncreas exócrino e no citoplasma de células epiteliais do rim. / The Newcastle disease caused by avian paramyxovirus 1 strains (APMV-1) is an important avian disease involved into high rates of mortality and economic losses. Over the last 30 years several outbreaks have been reported in the order Columbiformes in many parts of the world caused by a strain, known as pigeon paramyxovirus type 1 (PPMV-1). This paper describes a mortality outbreak in free-living pigeons (Columba livia) from a public square in a city in Southern Brazil, occurred in November 2014. Moribund or freshly dead pigeons, within five weeks interval, were submitted to necropsy, histopathological, immunohistochemical (anti-Newcastle), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), sequencing analisys and phylogenetic analysis. It was affected only adult free-living pigeons of both sexes, and the mortality was estimated at 80%. Neurological signs presented by the pigeons were head tremors, stiff neck, lack of balance, incoordination, paresis, paralysis, drooped wings, and vomit. Gross findings were nonspecific. Histological findings in the central nervous system were characterized by encephalitis and encephalomyelitis nonsuppurative. In the kidney, liver and pancreas was observed mononuclear inflammatory infiltrate, which sometimes was associated with necrosis. In the spleen was observed necrosis, lymphoid depletion and macrophage infiltration. Out of 24 pigeons examined by RT-PCR, 6 pigeons had positive signal for the presence of matrix (M) protein gene and by sequencing analysis it appears that the sequences were identical to each other. The complete genome sequence and the complete coding sequence of the fusion (F) gene according to the unified NDV classification system showed that isolate had cleavage site 112RRQKRF117 which is characteristic of velogenic strains. Phylogenetic analysis showed that this strain could be classified into class II and genotype VI. Immunohistochemical analysis showed that the virus antigens were detected in astrocytes and in neurons in the brain, in liver macrophages, in exocrine pancreas epithelial cells, and in kidney epithelial cells.

Uma série de fatores como ambiente, nutrição e doenças podem ser consideradas como estressores em sistemas de produção. Frangos de corte expostos a estressores por períodos prolongados de tempo apresentam de forma geral, redução do ganho de peso e consumo de ração, aumento da conversão alimentar, aumento da média de mortalidade e predisposição a doenças. A vacinação é uma prática essencial para um adequado manejo da produção e o desenvolvimento da imunidade do frango de corte frente a desafios bacterianos e virais presentes no ambiente. O entendimento dos fatores que podem interferir com o sucesso da vacinação é essencial para a otimização da saúde e do bem-estar animal, permitindo a utilização de todo o seu potencial genético e nutricional. Poucos estudos têm enfatizado o efeito do estresse por calor na imunidade celular e humoral de frangos de corte. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito do estresse por calor sobre a imunidade celular (linfócitos B e T), humoral sérica (IgM e IgY) e o peso relativo de órgãos (baço, bursa e fígado) de frangos de corte submetidos a um protocolo de vacinação para a Doença de Newcastle (cepa LaSota). Para tanto, 96 frangos de corte Cobb machos foram aleatoriamente divididos em quarto grupos: grupo 1. Frangos de corte não vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 2. Frangos de corte vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 3. Frangos de corte não vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C); e grupo 4. Frangos de corte vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C). Todas as aves foram alojadas em isoladores com água e ração ad libitum. Foi utilizada uma vacina com o vírus atenuado para Doença de Newcastle (cepa LaSota) administrada em duas doses, aos 7 e aos 14 dias de vida. Os frangos submetidos ao protocolo de estresse foram expostos a uma temperatura de (38±2°C) do segundo até o sexto dia de vida. Os dados obtidos demonstraram que o estresse por calor de forma isolada reduziu o peso relativo do fígado e aumenta aquela do baço e da bursa e induziu uma alteração significativa do perfil de células imunes no sangue periférico das aves, como consequência, observou-se alteração no padrão de imunoglobulinas, o que influenciou diretamente a resposta da ave frente ao desafio ambiental (quando o estresse foi avaliado isoladamente) ou vacinal (quando o estresse foi avaliado juntamente ao desafio vacinal com o vírus da Doença de Newcastle). Dessa forma, sugerimos que o estresse por calor diminuiu a eficácia da resposta vacinal aos frangos de corte, em função de mudanças que induziu no perfil de linfócitos e produção de imunoglobulinas. / A number of factors, such as environment, nutritional status and diseases are stressful for animals during livestock production. It has been shown that broilers exposed to stressors for prolonged periods tend to present decreased weight gain and feed intake and to have an increased feed conversion ratio, increase mortality rate and predisposition to diseases caused by secondary agents. Vaccination is an essential practice for adequate management of the livestock and protection of poultry against bacterial and viral infectious agents. Understanding the factors that modify the success vaccination is essential for optimizing animal health and welfare, thus allowing them to use of all the genetic and nutritional potential they have. Few studies have emphasized the effects of heat stress on cellular and humoral broilers immunity. This study aimed at discussing the effects of heat stress on cellular immunity (B and T lymphocytes) and humoral immunity (IgM and IgY) of broilers undergoing a vaccination protocol for Newcastle disease (LaSota strain). For this purpose, 96 male broilers (Cobb) were random divided into four groups: 1. Unvaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 2. Vaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 3. Unvaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). 4. Vaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). All broilers were housed in isolators and provided water ad lib. We used a live Newcastle vaccine disease virus of LaSota strain given in two doses at 7 and 14 days. The broiler chickens were exposed to heat stress (38±2°C) from the 2nd to 6th day of life. It has been observed that when combined with the vaccination challenge, heat stress was able to change immune cells profile from a B to T cytotoxic and T helper immune cells, keeping this change pattern until the end of the study period (over 19 days). This change in the cellular response pattern modified the ability of the broiler chickens´ immune system to react while challenged by vaccination, reducing its efficiency and making them more susceptible to the disease agent. The data obtained suggest that heat stress by itself induced considerable modifications in the liver, spleen and bursa de Fabricius and induced a significant modification in the profile of immune cells in peripheral blood of birds, with responsive modifications in the pattern of immunoglobulins, directly influencing the response of the broilers against the environmental challenge (when the stress is evaluated separately) or the vaccination (when the stress is measured along the challenge vaccination with Newcastle Disease virus). Therefore, we suggest that the heat stress was capable of reduce the efficacy of the vaccinal response in broiler chickens, related to the modification of the lymphocytes and the production of immunoglobulins.

Thesis (M.S.)--Mississippi State University. Department of Chemistry. / Title from title screen. Includes bibliographical references.

Este trabalho teve como objetivo geral avaliar os fatores de risco de disseminação da Doença de Newcastle relacionados ao trânsito de veículos entre empresas integradoras e unidades de produção de frangos de corte. Uma área de grande produção avícola do estado do Rio Grande do Sul foi escolhida para ser objeto de estudo da presente pesquisa, sendo simuladas a partir de uma granja índex, as zonas de proteção e vigilância, como determina o Plano de Contingência para a Influenza Aviária e Doença de Newcastle. A metodologia foi fundamentada em análises espaciais e probabilísticas, associadas a situações reais que fazem parte do processo de logística das empresas. Foi realizada a análise espacial da região, através de técnicas de geoprocessamento, a extração da taxa reprodutiva básica, estudo exploratório da proporção de alojamento de frangos de corte e desenvolvimento do modelo epidêmico clássico de Reed-Frost, avaliando assim, as possibilidades de disseminação da doença na área de estudo. Os resultados obtidos demonstraram que somente o trânsito referente a visitas técnicas e caminhões de ração nas unidades de produção são fatores que podem desencadear um surto da doença. Quanto mais rápido for obtido o diagnóstico definitivo e tomadas medidas de contenção, menor é a probabilidade de disseminação da doença. / This thesis had as general objective to evaluate the factors of risk of spread of the Newcastle Disease related to the traffic of vehicles between companies and poultry farms. An area of great poultry production of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, was chosen to be object of study of the present researches, being simulated starting from a farm index, the protection areas and surveillance, as it determines the Plan of Contingency for Avian Influenza and Newcastle Disease. The methodology was based in space analyses and probability, associated to real situations that are part of the process of logistics of the companies. The space analysis of the area was accomplished, through the use of geographical information systems, the extraction of the basic reproductive rate, study exploratory of the proportion of lodging of cut chickens and development of the model epidemic classic of Reed-Frost, evaluating like this, the possibilities of spread of the disease in the study area. The obtained results demonstrated that only the traffic regarding technical visits and ration trucks in the units of production is factors that can unchain an outbreak of the disease. The more fast it be obtained the definitive diagnosis and sockets contention measures, minor is the probability of spread of the disease.

A doença de Newcastle, causada por cepas patogênicas de paramixovírus aviário 1 (APMV-1), é uma doença de aves importante por causar altos índices de mortalidade e perdas econômicas. Em aves da ordem Columbiformes, vários surtos têm sido relatados ao longo de 30 anos, em diferentes partes do mundo, causados por uma cepa denominada pigeon paramyxovirus tipo 1 (PPMV-1). Este trabalho descreve um surto de mortalidade em pombos domésticos (Columba livia), provenientes de uma praça pública, no município de Porto Alegre, no Sul do Brasil, ocorrido no mês de novembro de 2014. Aves moribundas e mortas, no intervalo de cinco semanas, foram submetidas ao exame de necropsia, exame histopatológico, imuno-histoquímico anti- Newcastle, de transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RTPCR), exame de sequenciamento e analise filogenética. Foram acometidas aves adultas, de ambos os sexos e a mortalidade foi estimada em 80%, os sinais neurológicos apresentados foram tremores da cabeça, torcicolo, dificuldade em manter-se em estação, dificuldade de locomoção, paresia, paralisia, asas caídas e vômito. As lesões encontradas no exame macroscópico eram inespecíficas e no exame histológico do sistema nervoso central eram caracterizadas por encefalite e encefalomielite não supurativas. No rim, fígado e pâncreas foi observado infiltrado inflamatório mononuclear, que por vezes era associado à necrose. No baço, além de necrose, foi observado depleção linfoide e infiltrado de macrófagos. Das 24 aves testadas para a RTPCR, seis foram positivas para a proteína da matriz (M) e através do sequenciamento destas amostras, pode-se identificar que todas as aves foram acometidas pela mesma cepa viral. Para confirmação de que a cepa encontrada tratava-se de uma cepa virulenta, foi feita a análise por sequenciamento do sítio de clivagem da proteína F, comparando a sequência de aminoácidos encontrada, 112RRQKRF117, com outras cepas já conhecidas. Observou-se que as amostras analisadas apresentaram aminoácidos na região do sítio de clivagem da proteína F, compatíveis com cepas virulentas. De acordo com a análise filogenética, o virus foi classificado como pertencente à classe II e ao genótipo VI. Ao exame imuno-histoquimico, a marcação foi observada no cérebro, no citoplasma de astrócitos e no núcleo de neurônios; no fígado, associada ao infiltrado inflamatório no interior de macrófagos; em células epiteliais do pâncreas exócrino e no citoplasma de células epiteliais do rim. / The Newcastle disease caused by avian paramyxovirus 1 strains (APMV-1) is an important avian disease involved into high rates of mortality and economic losses. Over the last 30 years several outbreaks have been reported in the order Columbiformes in many parts of the world caused by a strain, known as pigeon paramyxovirus type 1 (PPMV-1). This paper describes a mortality outbreak in free-living pigeons (Columba livia) from a public square in a city in Southern Brazil, occurred in November 2014. Moribund or freshly dead pigeons, within five weeks interval, were submitted to necropsy, histopathological, immunohistochemical (anti-Newcastle), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), sequencing analisys and phylogenetic analysis. It was affected only adult free-living pigeons of both sexes, and the mortality was estimated at 80%. Neurological signs presented by the pigeons were head tremors, stiff neck, lack of balance, incoordination, paresis, paralysis, drooped wings, and vomit. Gross findings were nonspecific. Histological findings in the central nervous system were characterized by encephalitis and encephalomyelitis nonsuppurative. In the kidney, liver and pancreas was observed mononuclear inflammatory infiltrate, which sometimes was associated with necrosis. In the spleen was observed necrosis, lymphoid depletion and macrophage infiltration. Out of 24 pigeons examined by RT-PCR, 6 pigeons had positive signal for the presence of matrix (M) protein gene and by sequencing analysis it appears that the sequences were identical to each other. The complete genome sequence and the complete coding sequence of the fusion (F) gene according to the unified NDV classification system showed that isolate had cleavage site 112RRQKRF117 which is characteristic of velogenic strains. Phylogenetic analysis showed that this strain could be classified into class II and genotype VI. Immunohistochemical analysis showed that the virus antigens were detected in astrocytes and in neurons in the brain, in liver macrophages, in exocrine pancreas epithelial cells, and in kidney epithelial cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:04:03Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_mcm_dr_jabo.pdf: 761601 bytes, checksum: 6236742e70d7cbec76cc87afe87574a1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foi realizada a clonagem e expressão do gene da glicoproteína HN da estirpe La Sota do vírus da doença de Newcastle (VDN), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina no sistema hospedeiro constituído por leveduras da espécie Saccharomyces cerevisiae, que apesar de tentativas de otimização, não evidenciou a expressão da proteína recombinante. Após isso, foram produzidas as porções N-terminal e C-terminal da glicoproteína HN como proteínas recombinantes de fusão contendo uma cauda de poli-histidina e o peptídeo SUMO no sistema hospedeiro constituído pela bactéria Escherichia coli. Contatou-se que o sistema procarioto de expressão foi mais eficiente e permitiu a geração de dois peptídeos, que depois de devidamente caracterizados e purificados foram utilizados como antígenos para a realização de testes de imunodiagnóstico em sustituição aos kits comerciais utilizados atualmente. Foram desenvolvidos dois ensaios de ELISA baseados na adsorção de um antígeno formado pela expressão da porção N-terminal da glicoproteína HN (ELISA HN N-terminal) e na porção C-terminal da mesma glicoproteína (ELISA HN C-terminal), recuperados a partir da purificação da fração solúvel de culturas de E. coli. O ELISA C-terminal mostrou os melhores coeficientes de correlação com o teste padrão HI e com o teste S-ELISA-ConA, além de melhores índices de sensibilidade, especificidade e acurácia. Com isso, o ELISA baseado em um antígeno da porção C-terminal da glicoproteína HN e uma única diluição do soro desenvolvido neste estudo pode ser aplicado no diagnóstico e monitoramento pós-vacinal do VDN / Was carried out the cloning and expression of the glycoprotein gene of the strain La Sota HN of the Newcastle disease virus (NDV), as a recombinant fusion protein containing a poly-histidine tail at the host system consisting of the yeast species Saccharomyces cerevisiae, which despite attempts at optimizing, showed no expression of recombinant protein. After that, the portions N-terminal and C-terminal from glycoprotein HN were produced as recombinant proteins containing a fusion tail and the poly-histidine peptide SUMO at the host system consisting of Escherichia coli. It was noted that the prokaryotic expression system was more efficient and allowed the generation of two peptides, which once characterized and purified were used as antigens for immunodiagnostic tests replacement in the commercial kits currently used. Were developed two ELISA assays based on the adsorption of the antigen formed by expression of the N-terminal portion of the HN glycoprotein (HN ELISA N-terminal) and the C-terminal portion of the same glycoprotein (HN ELISA C-terminus), recovered from purification of the soluble fraction of cultures of E. coli. The C-terminal ELISA showed the best correlation coefficients with the standard HI test and ELISA test S-ConA-, and higher sensitivity, specificity and accuracy. Therefore, the ELISA of the antigen based on a C-terminal portion of the glycoprotein HN and a single serum dilution developed in this study can be applied in the diagnosis and monitoring of post-vaccination VDN

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2014-11-10T11:57:41Z : No. of bitstreams: 1 000792136_20141231.pdf: 436044 bytes, checksum: df19c9ddacbd0b80cd1d62771aece5e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:56Z: 000792136_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:51Z : No. of bitstreams: 1 000792136.pdf: 1761626 bytes, checksum: 714d3718119b395634a93761902c8401 (MD5) / O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes enfermidades em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo foi feito o sequenciamento do genoma completo da estirpe vacinal lentogênica (LaSota) e de um isolado de campo brasileiro patogênico (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) do VDN, seguido de análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma das estirpes LaSota e APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 estão constituídos respectivamente por um total de 15.186 e 15.192 nucleotídeos, seis genes na ordem 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. Para a estirpe LaSota o local de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondentes às encontradas em estirpes não virulentas do VDN, oposto ao que acontece com a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75, no qual o sítio de clivagem da proteína F apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às encontradas nas estirpes virulentas do VDN. O genoma completo da estirpe LaSota não apresentou grandes diferenças genômicas, de forma que na análise filogenética ficou evidenciado que esta estirpe está classificada no genótipo II, já a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 apresentou grandes diferenças genômicas nas sequências deduzidas de aminoácidos de suas principais proteínas estruturais, de forma que na análise filogenética do genoma completo foi demonstrado que esse vírus está classificado no genótipo V. Os dados obtidos a partir do presente estudo podem contribuir consideravelmente para ... / Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. Viruses consist of single-stranded, non-segmented, negative-sense, RNA, associated with diseases in respiratory tract, digestive and nervous in birds. The ND control is based on biosafety, use of vaccines and early detection of infected batches. Here we present the complete genome sequence and phylogenetic analysis of a lentogenic strain (LaSota) and a velogenic strain (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) of NDV. The results revealed that the genome of LaSota and APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 are constituted respectively by a total of 15,186 and 15,192 nucleotides and six genes in the order 3'-NP-P-M-F-HN-L-5’. The cleavage site of fusion protein (F) in LaSota strain shows the amino acid sequence found in non-virulent NDV strains, as opposed to happen with APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain, the cleavage site of the F protein has the amino acid sequence corresponding to that found in virulent strains of NDV. The complete genome of LaSota strain showed no genomic differences and the phylogenetic analysis evidenced that this strain is classified in genotype II. The APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain there are large differences in the genomic sequences and in the deduced amino acid sequences of its major structural proteins, so the phylogenetic analysis of the complete genome was demonstrated that this virus is classified in genotype V. This study can contribute significantly to understand better the genomic evolution of NDV in Brazil and in Americas, such as these strains with genotypic and phenotypic characteristics were no longer isolated in Brazil after 1975, while continued to be isolated in North America

Este trabalho teve como objetivo geral avaliar os fatores de risco de disseminação da Doença de Newcastle relacionados ao trânsito de veículos entre empresas integradoras e unidades de produção de frangos de corte. Uma área de grande produção avícola do estado do Rio Grande do Sul foi escolhida para ser objeto de estudo da presente pesquisa, sendo simuladas a partir de uma granja índex, as zonas de proteção e vigilância, como determina o Plano de Contingência para a Influenza Aviária e Doença de Newcastle. A metodologia foi fundamentada em análises espaciais e probabilísticas, associadas a situações reais que fazem parte do processo de logística das empresas. Foi realizada a análise espacial da região, através de técnicas de geoprocessamento, a extração da taxa reprodutiva básica, estudo exploratório da proporção de alojamento de frangos de corte e desenvolvimento do modelo epidêmico clássico de Reed-Frost, avaliando assim, as possibilidades de disseminação da doença na área de estudo. Os resultados obtidos demonstraram que somente o trânsito referente a visitas técnicas e caminhões de ração nas unidades de produção são fatores que podem desencadear um surto da doença. Quanto mais rápido for obtido o diagnóstico definitivo e tomadas medidas de contenção, menor é a probabilidade de disseminação da doença. / This thesis had as general objective to evaluate the factors of risk of spread of the Newcastle Disease related to the traffic of vehicles between companies and poultry farms. An area of great poultry production of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, was chosen to be object of study of the present researches, being simulated starting from a farm index, the protection areas and surveillance, as it determines the Plan of Contingency for Avian Influenza and Newcastle Disease. The methodology was based in space analyses and probability, associated to real situations that are part of the process of logistics of the companies. The space analysis of the area was accomplished, through the use of geographical information systems, the extraction of the basic reproductive rate, study exploratory of the proportion of lodging of cut chickens and development of the model epidemic classic of Reed-Frost, evaluating like this, the possibilities of spread of the disease in the study area. The obtained results demonstrated that only the traffic regarding technical visits and ration trucks in the units of production is factors that can unchain an outbreak of the disease. The more fast it be obtained the definitive diagnosis and sockets contention measures, minor is the probability of spread of the disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T18:56:52Z : No. of bitstreams: 1 martins_grv_me_jabo.pdf: 434340 bytes, checksum: 1f4cb80c686c33def0fc530fbe6542ad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As avaliações dos parâmetros clínicos, imunitários e epidemiológicos da vacinação contra a doença de Newcastle (DN) em agapornis (Agapornis roseicollis) foram investigadas em dois experimentos. Amostras vacinais Ulster 2C, B1 e LaSota do vírus da doença de Newcastle (VDN) foram utilizadas para imunização das aves. No experimento 1, utilizaram-se 48 agapornis, distribuídos em quatro tratamentos de 12 animais cada, num total de três repetições, submetidos a diferentes esquemas imunoprofiláticos. A resposta imune foi avaliada pelo teste de HI. Não foram observados sinais clínicos de reação pós-vacinal em qualquer grupo experimental. Os resultados dos títulos de anticorpos (HI) mostraram que a estirpe vacinal LaSota conferiu maior grau de imunidade aos agapornis, quando comparada às estirpes Ulster 2C e B1. Estas aves foram posteriormente desafiadas frente a uma estirpe patogênica do VDN (EID50=108,15/0,1mL), aos 12 meses de idade. Em todos os grupos, procedeu-se a pesquisa do RNA viral a partir de suabes cloacais, através da técnica de RT-PCR. Os agapornis de todos os grupos não demonstraram qualquer sinal clínico sugestivo da DN, mostrando-se refratários à doença clínica frente a este vírus. Entretanto, ficou caracterizado o estado de portador de VDN nesta espécie decorridos até 21 dias da infecção experimental com este patógeno. No experimento 2, foram utilizadas aves SPF (“Specific-Pathogen-Free”) conviventes com agapornis inoculados com uma estirpe patogênica do VDN. Observou-se a transmissão do VDN dos agapornis para as aves SPF conviventes decorridos até 21 da infecção experimental com este patógeno, o que realça a importância do agapornis como fonte potencial de infecção do VDN para aves domésticas / The evaluations of clinical, immunological and epidemiological parameters of vaccination against Newcastle disease (ND) in lovebirds (Agapornis roseicollis) were investigated in 2 experiments. Ulster 2C, B1 and LaSota vaccines strains of the Newcastle disease virus (NDV) were used to immunization of birds. In experiment 1, 48 lovebirds were distributed into 4 different treatments, with 12 birds in each, with a total of 3 repetitions, submitted to different vaccination programs. The immunological responses were measured by HI test. Lovebirds from all groups did not show any clinical signs of post vaccinal reaction. The antibody titers (HI) results showed that the immune vaccine programs adopted were different in stimulating protective levels of humoral immune response. These birds were also challenge with a pathogenic NDV strain (EID50=108.15/0.1mL) at 12 months of age. After the challenge in all groups, cloacal swabs were collected for RT-PCT to find the pathogenic viruses. Lovebirds from all groups did not demonstrate clinical signs of ND, being refractory to the clinical disease with the NDV. However, a NDV carrier state was demonstrated in this specie until 21 days after experimental infection. In experiment 2, SPF chicks were housed with lovebirds previously inoculated with a pathogenic NDV strain. The pathogenic virus (NDV) was transmitted from lovebirds to SPF chicks until 21 days after challenge, showing the importance of the lovebirds as source of dissemination of NDV to domestic birds

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:56:58Z : No. of bitstreams: 1 silva_kr_me_jabo.pdf: 746958 bytes, checksum: 651e28fc6f5b0bad0768768aa6ff7a22 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A nucleoproteina do vírus da doença de Newcastle (VDN) é um dos componentes antigênicos ideais para fazer o imunodiagnóstico da DN, por ser mais conservada e possuir uma elevada imunogenicidade. A sequência completa do gene da nucleoproteína (NP) (1470 pb) da estirpe La Sota do VDN foi amplificada, nesse estudo, por RT-PCR e submetida a clonagem no vetor de expressão em Escherichia coli pETSUMO (Invitrogen). A proteína NP foi expressa sob a forma de uma proteína recombinante de fusão contendo o peptídeo SUMO e a sequência de poli-histidina, em seguida foi purificada em resina de níquel-agarose e caracterizada por SDSPAGE e Western-blotting, apresentando um peso molecular de cerca de 66kDa e reatividade com anticorpos policlonais de galinhas hiperimunizadas com esse mesmo vírus. Foi então desenvolvido um método indireto de ELISA com essa proteína (NPVDN- ELISA) para ser aplicado na detecção de anticorpos anti-virais específicos. O NP-VDN-ELISA revelou ser capaz de diferenciar amostras de soros positivos para o VDN das amostras de soros negativos e, na comparação dos resultados obtidos na análise de 125 soros de campo pelo NP-VDN-ELISA com os do teste de Inibição da Hemaglutinação (HI), foi encontrado um coeficiente de correlação significante entre estes métodos (r = 0,8345), bem como elevadas sensibilidade (89,3%), acurácia (90,4%) e especificidade (95,5%). Concluindo, a proteína NP recombinante expressa pelo sistema pET SUMO – E. coli compartilha os principais epítopos para interagir com anticorpos de galinhas produzidos contra a proteína NP do VDN, tendo, portanto, um bom potencial de ser aplicada de forma bem sucedida e com vantagens no teste de ELISA para realizar de forma mais rápida e prática, o imunodiagnóstico da DN de um maior número de amostras séricas de galinhas / The nucleocapsid protein (NP) of Newcastle Disease Virus (NDV), is a preferred choice to develop a serologic assay on account of highly conserved sequences, and high immunogenicity. The whole open-reading-frame (orf) of NP gene from LaSota strain of NDV was amplified by RT-PCR and cloned in pETSUMO vector (Invitrogen) and Escherichia coli as cellular host. The NP protein was expressed as a fusion recombinant protein containing SUMO peptide and poly-histidine tags. This protein was easily purified in nickel-agarose resin, and characterized by SDS-PAGE and Western-blotting, showing a molecular weight of approximately 66 kDa and reactivity with polyclonal antibodies from NDV hiperimmunized chickens. The recombinant NP protein was used as antigen to develop an indirect ELISA (NP-NDVELISA) for the detection chicken anti-NDV antibodies. The capability of the recombinant NP protein to differentiate positive from normal chicken sera was evident in NP-NDV-ELISA, and by comparing this ELISA with haemagglutination-inhibition test (HI) a high and significant correlation with the haemagglutination-inhibition test (r = 0,8345), as well as high sensitivity (89,3%), specificity (95,5%) and accuracy (90,4%) were obtained. In conclusion the results indicated that the recombinant NP protein shared the main epitopes with the homologous viral protein and has a great potential to be advantageously used in the ELISA for the analysis of large number of samples in the DN immunodiagnosis