Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:23Z : No. of bitstreams: 1 000848339.pdf: 757255 bytes, checksum: 9dcc3acba66df8e1de6d584184ea3dc8 (MD5) / O vírus da doença de Newcastle (VDN) provoca uma das doenças infecciosas mais importantes para as aves domésticas, devido aos elevados impactos negativos para a saúde aviária e a interposição de barreiras comerciais para a indústria avícola. Isso requer a constante evolução de técnicas cada vez mais eficazes de diagnóstico para esse vírus. Neste contexto, a nucleoproteína (NP) de VDN é um dos componentes antigênicos ideais para uso no imunodiagnóstico, porque é mais conservada e tem uma elevada imunogenicidade, de modo que NP pode melhorar o desempenho de sorodiagnóstico do VDN. Assim, este estudo teve como objetivo determinar os perfis de produção de anticorpos (Acs) anti-VDN dos isótipos IgA, IgM e IgG, usando NP recombinante (NPr) do VDN como um antígeno alvo. Amostras de soro e de lágrima foram colhidas de plantéis comerciais de aves de postura e também de aves SPF infectadas experimentalmente com a estirpe vacinal LaSota do VDN. O método de ELISA indireto, usando a NPr do VDN como antígeno de revestimento, foi padronizado e utilizado de forma bem sucedida para a detecção de Acs de galinha anti-VDN dos isótipos IgG e IgM em amostras de soro, e de ambos os isotipos mais IgA para amostras de secreção lacrimal. Ainda, este método de ELISA com NPr foi capaz de diferenciar amostras positivas das negativas para o VDN de soro e de lágrima, e nas aves submetidas à infecção experimental com a estirpe vacinal LaSota, a soroconversão foi detectada mais precocemente para os anticorpos do isótipo IgA (lágrima) e IgM (lágrima e soro), que alcançaram uma concentração máxima no sétimo dia após a infecção (pi), enquanto que os níveis de anticorpos IgG anti-VDN começaram a ser detectados mais tardiamente e atingiram um pico aos 14 dias pi. Além disso, a aplicação do ELISA em amostras de soro e de lágrima colhidas a partir de plantéis comerciais de galinhas de postura, para detecção de dois... / Newcastle disease virus (NDV) causes one of the most important infectious diseases for chickens, due to the high negative impacts for health and the demands of trade barriers to poultry industry. This requires the constant development of increasingly more effective diagnostic techniques. In this context, the nucleoprotein (NP) of VDN is one of the ideal antigenic components for immunodiagnostics, because it is more conserved and has a high immunogenicity, so that NP may improve the performance of serodiagnosis of NDV. Thus, this study aimed to determine the production profiles of anti-NDV antibodies of IgA, IgM and IgG isotypes, using recombinant NP (rNP) of VDN as a target antigen. Serum and tear samples were collected from commercial poultry flocks, and from SPF birds experimentally infected with the LaSota vaccine strain of NDV. The indirect ELISA method using the NPr VDN as coating antigen was standardized and used for the detection of anti-NDV chicken antibody isotypes IgG, IgM in serum samples and antibodies of both isotypes added of IgA isotype for lacrimal secretion samples. This ELISA method with NPr was effectively able to differentiate NDV-positive and NDV-negative serum and tear samples, and in the birds subjected to a experimental infection with vaccine strain, the seroconversion was detected earlier for the antibodies of the IgA (tear) and IgM (tear and serum) isotypes, which have reached maximum concentration on the 7th day post-infection (pi), while the IgG anti-NDV antibody levels began to be detected later and peaked at 14 days pi. Moreover, the application of ELISA in serum and lachrymal samples collected from commercial layer chickens,with the detection of two (IgG and IgM for serum samples) or three isotypes (IgG, IgM and IgA for lachrymal samples) of anti-NDV antibodies, resulted in the highest detection frequencies than each antibody isotype was individually detected. By comparing the results of serum samples for ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T21:00:44Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_es_me_jabo.pdf: 649478 bytes, checksum: d2bee0b53ef4e30c3486df035f84bee1 (MD5) / Existem diversos trabalhos publicados sobre métodos de diagnóstico da Doença de Newcastle (DN) em aves comerciais da espécie Gallus gallus. Entretanto, é escassa a literatura sobre o desenvolvimento de técnicas para o diagnóstico laboratorial da infecção pelo vírus da Doença de Newcastle (VDN) em espécies de aves não-galiformes. O presente trabalho foi delineado com o objetivo de desenvolver e aplicar a técnica de bloqueio de fase líquida de ELISA com a concanavalina A (BFL-Con A-ELISA) para a detecção e quantificação de anticorpos contra o VDN em soros de pombos de vida livre e da técnica de Semi-nested-RTPCR para detecção do vírus da DN (VDN) em suabes cloacais das mesmas aves. Na comparação entre o BFL-Con A-ELISA e o HI para a detecção de anticorpos em 107 amostras de soros de pombos, foram obtidos uma correlação significativa com o teste de HI (r = 0,875), bem como valores elevados de sensibilidade (100%), especificidade (95,8%), acurácia (96,3%) e concordância (κ = 0,83). Os resultados obtidos na técnica de semi-nested-RT-PCR mostraram que nove das 101 amostras analisadas foram positivas para o VDN. Na análise comparativa dos resultados da técnica do semi-nested-RT-PCR com os obtidos nas técnicas sorológicas, foram observados índices de especificidade relativa de 93,9% e 96,8% em relação aos métodos de HI e BFL-Con A-ELISA, respectivamente; além de uma máxima sensibilidade relativa (100%), comparativamente a esses testes. Esses dados demonstram que tanto o BFL-Con A-ELISA como o semi-nested-RT-PCR desenvolvidos no presente estudo foram eficientes no diagnóstico da DN, ou detectando anticorpos anti-VDN, ou esse agente viral, respectivamente, e ambas as técnicas apresentaram um grande potencial para serem usadas com vantagens no diagnóstico da infecção pelo VDN em pombos e em outras espécies de aves não-galiformes. / A number of studies were done on diagnostic methods of Newcastle disease in commercial poultry (Gallus gallus, species). However the literature is scarce on the development of techniques for the diagnosis of Newcastle disease (ND) infection in non-galiforme and free-living birds. The present study aims to develop and apply a liquid-phase blocking ELISA with Concanavalin A (BFL-Con AELISA) for the detection and quantification of antibodies against ND virus (NDV) in sera of free-living pigeons and a semi-nested-RT-PCR technique for detection of NDV in cloacal swabs collected from these birds. The results of BFL-Con A-ELISA and HI were compared for the detection of antibodies in serum samples from 107 pigeons, and a significant correlation with the HI test was obtained (r = 0.875) as well as high values of relative sensitivity (100 %), specificity (95.8%), accuracy (96.3%) and agreement (k = 0.83). The results of semi-nested-RT-PCR showed that nine of the 101 samples were positive for the presence of NDV. By comparing the seminested- RT-PCR with serological tests, high relative specificity values of 93.9% and 96.8% were obtained with regard to HI and BLF-Con A-ELISA tests, respectively, as well as a maximum relative sensitivity (100%) was observed regarding these serological tests. These data demonstrate that the BFL-Con A-ELISA and seminested- RT-PCR developed in this study were effective in the diagnosis of NDV infection, detecting either specific antibodies, or this virus, respectively, and have a great potential to be used advantageously in the diagnostic of NDV infection in pigeons and other species of non-galliforme birds.

O uso de antibióticos promotores de crescimento de forma indiscriminada vem causando enorme preocupação a cada ano por causa de uma possível resistência cruzada. Essa é uma das razões pela quais pesquisas vêm sendo desenvolvidas para substituição destes agentes por produtos naturais e/ou alternativos. Desde 1973 o Conceito de Exclusão Competitiva (CE) vem sendo estudado e usado na avicultura mundial. Com esse objetivo, inúmeras pesquisas relacionadas com produtos de Exclusão Competitiva vêm demonstrando, ao passar dos anos, não só a eficiência desse método no controle de patógenos indesejáveis como Salmonella ssp, como também sua eficácia em desempenho zootécnico. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo verificar a influência de um produto de Exclusão Competitiva sobre os índices zootécnicos e parâmetros de imunidade de frangos de corte, tendo um antibiótico e um controle para comparação. A revisão bibliográfica também apresenta pesquisas sobre o controle de Salmonella spp com o uso da CE. Foram utilizados 420 pintos de corte, criados até 42 dias de idade em gaiolas. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, com 3 tratamentos: Dieta basal (DB) com Antibiótico; DB com produto de Exclusão Competitiva, e DB sem Antibiótico (controle); sendo 20 repetições/tratamento. Quanto ao desempenho zootécnico e, considerando-se o período total de criação, o produto de Exclusão Competitiva testado demonstrou efeito benéfico para os valores de ganho médio de peso (GMP) e peso final (PF), que foram melhores ou similares comparados ao antibiótico principalmente até a fase final de criação. Já os resultados de conversão alimentar e mortalidade mostraram-se melhores com o uso da CE quando foram comprados com os demais tratamentos. Com relação à imunidade, a Exclusão Competitiva não apresentou efeito sobre o parâmetro avaliado neste trabalho. Diante dos resultados aqui obtidos, conclui-se que os ensaios com aditivos alternativos devem continuar, já que houve evidências de seus possíveis efeitos benéficos na produção animal. / The use of growth-promoting antibiotics inappropriately has been addressing concerns every year for possible cross-resistance. This is one of the reasons why studies have been carried through to replace such agents by natural and/or alternative products. Since 1973, the concept of Competitive Exclusion (CE) has been studied and used in poultry raising worldwide. Aiming at reaching the said objective, several studies on Competitive Exclusion products have been showing, over the years, not only how effective the method is in controlling undesirable pathogens, such as Salmonella ssp, but also its efficacy for animal performance. Thus, the present paper aims at verifying the influence of a Competitive Exclusion product on zoological properties and immunity parameters for broilers, having one antibiotic group and one control group for comparison. In addition, the bibliography includes studies on the control of Salmonella ssp when CE is used. A total of 420 broilers, reared in cages for maximum 42 days of age, have been used. The study design consisted in a randomized study, with three treatment groups: Baseline diet (DB) and antibiotic; DB and Competitive Exclusion, DB without Antibiotic (control); with 20 repetitions/treatment. With regard to animal performance and, considering total breeding period, the investigational Competitive Exclusion product has showed beneficial effect on average weight gain (GMP) and final weight (PF) values, which have been found to be improved or similar to the antibiotic group, specially when used until the final breeding stage. In turn, the results for feed conversion and mortality have showed to be improved when CE was used in comparison to the other two treatments. In relation to immunity, Competitive Exclusion has not affected the immunity parameter assessed in this paper. According to the results found in this study, it can be concluded that the use of alternative additives should be further studied, as evidences of their possible beneficial effects on animal raising have been found.

Uma série de fatores como ambiente, nutrição e doenças podem ser consideradas como estressores em sistemas de produção. Frangos de corte expostos a estressores por períodos prolongados de tempo apresentam de forma geral, redução do ganho de peso e consumo de ração, aumento da conversão alimentar, aumento da média de mortalidade e predisposição a doenças. A vacinação é uma prática essencial para um adequado manejo da produção e o desenvolvimento da imunidade do frango de corte frente a desafios bacterianos e virais presentes no ambiente. O entendimento dos fatores que podem interferir com o sucesso da vacinação é essencial para a otimização da saúde e do bem-estar animal, permitindo a utilização de todo o seu potencial genético e nutricional. Poucos estudos têm enfatizado o efeito do estresse por calor na imunidade celular e humoral de frangos de corte. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito do estresse por calor sobre a imunidade celular (linfócitos B e T), humoral sérica (IgM e IgY) e o peso relativo de órgãos (baço, bursa e fígado) de frangos de corte submetidos a um protocolo de vacinação para a Doença de Newcastle (cepa LaSota). Para tanto, 96 frangos de corte Cobb machos foram aleatoriamente divididos em quarto grupos: grupo 1. Frangos de corte não vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 2. Frangos de corte vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 3. Frangos de corte não vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C); e grupo 4. Frangos de corte vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C). Todas as aves foram alojadas em isoladores com água e ração ad libitum. Foi utilizada uma vacina com o vírus atenuado para Doença de Newcastle (cepa LaSota) administrada em duas doses, aos 7 e aos 14 dias de vida. Os frangos submetidos ao protocolo de estresse foram expostos a uma temperatura de (38±2°C) do segundo até o sexto dia de vida. Os dados obtidos demonstraram que o estresse por calor de forma isolada reduziu o peso relativo do fígado e aumenta aquela do baço e da bursa e induziu uma alteração significativa do perfil de células imunes no sangue periférico das aves, como consequência, observou-se alteração no padrão de imunoglobulinas, o que influenciou diretamente a resposta da ave frente ao desafio ambiental (quando o estresse foi avaliado isoladamente) ou vacinal (quando o estresse foi avaliado juntamente ao desafio vacinal com o vírus da Doença de Newcastle). Dessa forma, sugerimos que o estresse por calor diminuiu a eficácia da resposta vacinal aos frangos de corte, em função de mudanças que induziu no perfil de linfócitos e produção de imunoglobulinas. / A number of factors, such as environment, nutritional status and diseases are stressful for animals during livestock production. It has been shown that broilers exposed to stressors for prolonged periods tend to present decreased weight gain and feed intake and to have an increased feed conversion ratio, increase mortality rate and predisposition to diseases caused by secondary agents. Vaccination is an essential practice for adequate management of the livestock and protection of poultry against bacterial and viral infectious agents. Understanding the factors that modify the success vaccination is essential for optimizing animal health and welfare, thus allowing them to use of all the genetic and nutritional potential they have. Few studies have emphasized the effects of heat stress on cellular and humoral broilers immunity. This study aimed at discussing the effects of heat stress on cellular immunity (B and T lymphocytes) and humoral immunity (IgM and IgY) of broilers undergoing a vaccination protocol for Newcastle disease (LaSota strain). For this purpose, 96 male broilers (Cobb) were random divided into four groups: 1. Unvaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 2. Vaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 3. Unvaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). 4. Vaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). All broilers were housed in isolators and provided water ad lib. We used a live Newcastle vaccine disease virus of LaSota strain given in two doses at 7 and 14 days. The broiler chickens were exposed to heat stress (38±2°C) from the 2nd to 6th day of life. It has been observed that when combined with the vaccination challenge, heat stress was able to change immune cells profile from a B to T cytotoxic and T helper immune cells, keeping this change pattern until the end of the study period (over 19 days). This change in the cellular response pattern modified the ability of the broiler chickens´ immune system to react while challenged by vaccination, reducing its efficiency and making them more susceptible to the disease agent. The data obtained suggest that heat stress by itself induced considerable modifications in the liver, spleen and bursa de Fabricius and induced a significant modification in the profile of immune cells in peripheral blood of birds, with responsive modifications in the pattern of immunoglobulins, directly influencing the response of the broilers against the environmental challenge (when the stress is evaluated separately) or the vaccination (when the stress is measured along the challenge vaccination with Newcastle Disease virus). Therefore, we suggest that the heat stress was capable of reduce the efficacy of the vaccinal response in broiler chickens, related to the modification of the lymphocytes and the production of immunoglobulins.

Uma série de fatores como ambiente, nutrição e doenças podem ser consideradas como estressores em sistemas de produção. Frangos de corte expostos a estressores por períodos prolongados de tempo apresentam de forma geral, redução do ganho de peso e consumo de ração, aumento da conversão alimentar, aumento da média de mortalidade e predisposição a doenças. A vacinação é uma prática essencial para um adequado manejo da produção e o desenvolvimento da imunidade do frango de corte frente a desafios bacterianos e virais presentes no ambiente. O entendimento dos fatores que podem interferir com o sucesso da vacinação é essencial para a otimização da saúde e do bem-estar animal, permitindo a utilização de todo o seu potencial genético e nutricional. Poucos estudos têm enfatizado o efeito do estresse por calor na imunidade celular e humoral de frangos de corte. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito do estresse por calor sobre a imunidade celular (linfócitos B e T), humoral sérica (IgM e IgY) e o peso relativo de órgãos (baço, bursa e fígado) de frangos de corte submetidos a um protocolo de vacinação para a Doença de Newcastle (cepa LaSota). Para tanto, 96 frangos de corte Cobb machos foram aleatoriamente divididos em quarto grupos: grupo 1. Frangos de corte não vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 2. Frangos de corte vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 3. Frangos de corte não vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C); e grupo 4. Frangos de corte vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C). Todas as aves foram alojadas em isoladores com água e ração ad libitum. Foi utilizada uma vacina com o vírus atenuado para Doença de Newcastle (cepa LaSota) administrada em duas doses, aos 7 e aos 14 dias de vida. Os frangos submetidos ao protocolo de estresse foram expostos a uma temperatura de (38±2°C) do segundo até o sexto dia de vida. Os dados obtidos demonstraram que o estresse por calor de forma isolada reduziu o peso relativo do fígado e aumenta aquela do baço e da bursa e induziu uma alteração significativa do perfil de células imunes no sangue periférico das aves, como consequência, observou-se alteração no padrão de imunoglobulinas, o que influenciou diretamente a resposta da ave frente ao desafio ambiental (quando o estresse foi avaliado isoladamente) ou vacinal (quando o estresse foi avaliado juntamente ao desafio vacinal com o vírus da Doença de Newcastle). Dessa forma, sugerimos que o estresse por calor diminuiu a eficácia da resposta vacinal aos frangos de corte, em função de mudanças que induziu no perfil de linfócitos e produção de imunoglobulinas. / A number of factors, such as environment, nutritional status and diseases are stressful for animals during livestock production. It has been shown that broilers exposed to stressors for prolonged periods tend to present decreased weight gain and feed intake and to have an increased feed conversion ratio, increase mortality rate and predisposition to diseases caused by secondary agents. Vaccination is an essential practice for adequate management of the livestock and protection of poultry against bacterial and viral infectious agents. Understanding the factors that modify the success vaccination is essential for optimizing animal health and welfare, thus allowing them to use of all the genetic and nutritional potential they have. Few studies have emphasized the effects of heat stress on cellular and humoral broilers immunity. This study aimed at discussing the effects of heat stress on cellular immunity (B and T lymphocytes) and humoral immunity (IgM and IgY) of broilers undergoing a vaccination protocol for Newcastle disease (LaSota strain). For this purpose, 96 male broilers (Cobb) were random divided into four groups: 1. Unvaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 2. Vaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 3. Unvaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). 4. Vaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). All broilers were housed in isolators and provided water ad lib. We used a live Newcastle vaccine disease virus of LaSota strain given in two doses at 7 and 14 days. The broiler chickens were exposed to heat stress (38±2°C) from the 2nd to 6th day of life. It has been observed that when combined with the vaccination challenge, heat stress was able to change immune cells profile from a B to T cytotoxic and T helper immune cells, keeping this change pattern until the end of the study period (over 19 days). This change in the cellular response pattern modified the ability of the broiler chickens´ immune system to react while challenged by vaccination, reducing its efficiency and making them more susceptible to the disease agent. The data obtained suggest that heat stress by itself induced considerable modifications in the liver, spleen and bursa de Fabricius and induced a significant modification in the profile of immune cells in peripheral blood of birds, with responsive modifications in the pattern of immunoglobulins, directly influencing the response of the broilers against the environmental challenge (when the stress is evaluated separately) or the vaccination (when the stress is measured along the challenge vaccination with Newcastle Disease virus). Therefore, we suggest that the heat stress was capable of reduce the efficacy of the vaccinal response in broiler chickens, related to the modification of the lymphocytes and the production of immunoglobulins.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-12-22T15:43:12Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Lia Muniz Barretto Fernandes.pdf: 1185581 bytes, checksum: a574788d65eeda6abbf9b9ce1dcc5ee9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T15:43:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Lia Muniz Barretto Fernandes.pdf: 1185581 bytes, checksum: a574788d65eeda6abbf9b9ce1dcc5ee9 (MD5) / Doença de Newcastle é uma enfermidade viral aguda, altamente contagiosa, que acomete aves de várias espécies, considerada como uma das doenças mais importantes para a indústria avícola moderna. Ferramentas para diagnóstico e controle estão disponíveis para galinhas, porém ainda não foram desenvolvidos testes específicos para avestruzes. O presente trabalho visou padronizar testes sorológicos para a detecção de anticorpos contra a Doença de Newcastle em avestruzes e avaliar a situação soroepidemiológica de plantéis do estado da Bahia e de São Paulo. A padronização da técnica da Inibição da Hemaglutinação revelou interferência do tipo de eritrócito utilizado e demonstrou a necessidade do uso de hemácias da mesma espécie ou, alternativamente, de perus. Testes de ELISA indiretos foram desenvolvidos ou modificados para a utilização nesta espécie e, apesar de apresentarem alta correlação entre si, demonstraram baixa correlação com a HI. Foram desenvolvidos ainda os testes “western blot” e “dotblot”, que podem auxiliar na avaliação da resposta imune e facilitar a implantação de programas de controle. As amostras séricas analisadas revelaram a presença de anticorpos e, a ausência de vacinação dos animais avaliados, reforça a hipótese de que as avestruzes estão em contato com o vírus vacinal ou vírus de campo.

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-08-01T14:25:54Z No. of bitstreams: 1 Tese Waldyr.pdf: 1037034 bytes, checksum: 0951d0a31dbee3d54d18141b2e411b8d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-01T14:25:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Waldyr.pdf: 1037034 bytes, checksum: 0951d0a31dbee3d54d18141b2e411b8d (MD5) Previous issue date: 2014 / Rio de Janeiro. Secretaria de Estado de Desenvolvimento Regional, Abastecimento e Pesca / No presente trabalho, foi realizada uma revisão bibliográfica sobre o vírus influenza, enfatizando sua ação e correlacionando-o com as espécies aviárias, com enfoque diferenciado para os pombos domésticos (Columba livia domestica). Alguns aspectos tais como as condições ambientais, o estreito contato com o homem e a disseminação destas aves nos centros urbanos e em diferentes pontos do mundo, foram considerados. Durante o estudo da interação entre homens e pombos, outro agente patogênico mereceu atenção, por ocasião da revisão bibliográfica e por ser considerado o impacto financeiro causado na avicultura, o vírus da doença de Newcastle. Concomitante à revisão, foram analisadas 322 amostras de fezes de pombos, coletadas em praças públicas em várias áreas do município do Rio de Janeiro. Para tal análise foram utilizadas diferentes técnicas, tais como: inoculação em ovos embrionados, hemaglutinação, inibição da hemaglutinação e reação da polimerase em cadeia. As amostras testadas não apresentaram atividade hemaglutinante, bem como, não apresentaram positividade para a presença do vírus influenza e nem para o vírus da Doença de Newcastle, quando submetidas à prova de PCR. Com isto, pôde-se verificar a inexistência dos vírus na população de aves estudada, o que demonstrou não oferecer risco potencial para transmissão destas patologias, no presente momento. / In the present work, influenza was carried through a bibliographical revision on the virus, emphasizing its action and correlating it with the avian species, with approach differentiated for the domestic pigeons (Columba livia domestica). Some aspects such as the ambient conditions, the narrow contact with the man and the dissemination of these birds in the urban centers at different points of the world had been considered. During the study of the interaction between men and pigeons, another pathogenic agent had deserved attention, for occasion of the bibliographical revision, to caused financial impact in the poultry keeping, the virus of Newcastle disease. Concomitant to the bibliographical revision, 322 excrement samples had been analyzed of pigeons, collected in public squares in some areas of the city of Rio de Janeiro. For such analysis, different techniques had been used, such as: inoculation in embrionatted eggs, hemaglutination, inhibition of the hemaglutination and polymerase chain reaction. The tested samples had not presented hemaglutination activity, as well as, had not presented positivism for the presence of the virus influenza and nor for the Newcastle virus when submitted to the test of PCR. With this, the inexistence of the viruses in the studied population of birds could not be verified, what it demonstrated not to offer potential risk for transmission of these pathologies, in the present moment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:04:03Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_mcm_dr_jabo.pdf: 761601 bytes, checksum: 6236742e70d7cbec76cc87afe87574a1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foi realizada a clonagem e expressão do gene da glicoproteína HN da estirpe La Sota do vírus da doença de Newcastle (VDN), como proteína recombinante de fusão, contendo uma cauda de poli-histidina no sistema hospedeiro constituído por leveduras da espécie Saccharomyces cerevisiae, que apesar de tentativas de otimização, não evidenciou a expressão da proteína recombinante. Após isso, foram produzidas as porções N-terminal e C-terminal da glicoproteína HN como proteínas recombinantes de fusão contendo uma cauda de poli-histidina e o peptídeo SUMO no sistema hospedeiro constituído pela bactéria Escherichia coli. Contatou-se que o sistema procarioto de expressão foi mais eficiente e permitiu a geração de dois peptídeos, que depois de devidamente caracterizados e purificados foram utilizados como antígenos para a realização de testes de imunodiagnóstico em sustituição aos kits comerciais utilizados atualmente. Foram desenvolvidos dois ensaios de ELISA baseados na adsorção de um antígeno formado pela expressão da porção N-terminal da glicoproteína HN (ELISA HN N-terminal) e na porção C-terminal da mesma glicoproteína (ELISA HN C-terminal), recuperados a partir da purificação da fração solúvel de culturas de E. coli. O ELISA C-terminal mostrou os melhores coeficientes de correlação com o teste padrão HI e com o teste S-ELISA-ConA, além de melhores índices de sensibilidade, especificidade e acurácia. Com isso, o ELISA baseado em um antígeno da porção C-terminal da glicoproteína HN e uma única diluição do soro desenvolvido neste estudo pode ser aplicado no diagnóstico e monitoramento pós-vacinal do VDN / Was carried out the cloning and expression of the glycoprotein gene of the strain La Sota HN of the Newcastle disease virus (NDV), as a recombinant fusion protein containing a poly-histidine tail at the host system consisting of the yeast species Saccharomyces cerevisiae, which despite attempts at optimizing, showed no expression of recombinant protein. After that, the portions N-terminal and C-terminal from glycoprotein HN were produced as recombinant proteins containing a fusion tail and the poly-histidine peptide SUMO at the host system consisting of Escherichia coli. It was noted that the prokaryotic expression system was more efficient and allowed the generation of two peptides, which once characterized and purified were used as antigens for immunodiagnostic tests replacement in the commercial kits currently used. Were developed two ELISA assays based on the adsorption of the antigen formed by expression of the N-terminal portion of the HN glycoprotein (HN ELISA N-terminal) and the C-terminal portion of the same glycoprotein (HN ELISA C-terminus), recovered from purification of the soluble fraction of cultures of E. coli. The C-terminal ELISA showed the best correlation coefficients with the standard HI test and ELISA test S-ConA-, and higher sensitivity, specificity and accuracy. Therefore, the ELISA of the antigen based on a C-terminal portion of the glycoprotein HN and a single serum dilution developed in this study can be applied in the diagnosis and monitoring of post-vaccination VDN

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-31Bitstream added on 2014-11-10T11:57:41Z : No. of bitstreams: 1 000792136_20141231.pdf: 436044 bytes, checksum: df19c9ddacbd0b80cd1d62771aece5e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:56Z: 000792136_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:51Z : No. of bitstreams: 1 000792136.pdf: 1761626 bytes, checksum: 714d3718119b395634a93761902c8401 (MD5) / O vírus da doença de Newcastle (VDN) é o agente causador de uma das mais importantes enfermidades em aves e representa uma ameaça para a indústria avícola. O VDN é membro da família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. São vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma RNA de fita simples sentido negativo, associado à doença do trato respiratório, digestivo e nervoso das aves. O controle da DN se baseia em biossegurança, uso de vacinas e detecção precoce de lotes infectados. No presente estudo foi feito o sequenciamento do genoma completo da estirpe vacinal lentogênica (LaSota) e de um isolado de campo brasileiro patogênico (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) do VDN, seguido de análise filogenética. Os resultados revelaram que o genoma das estirpes LaSota e APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 estão constituídos respectivamente por um total de 15.186 e 15.192 nucleotídeos, seis genes na ordem 3'-NP-P-M-F-HN-L-5'. Para a estirpe LaSota o local de clivagem da proteína de fusão (F) apresenta a sequência de aminoácidos correspondentes às encontradas em estirpes não virulentas do VDN, oposto ao que acontece com a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75, no qual o sítio de clivagem da proteína F apresenta a sequência de aminoácidos correspondente às encontradas nas estirpes virulentas do VDN. O genoma completo da estirpe LaSota não apresentou grandes diferenças genômicas, de forma que na análise filogenética ficou evidenciado que esta estirpe está classificada no genótipo II, já a estirpe APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 apresentou grandes diferenças genômicas nas sequências deduzidas de aminoácidos de suas principais proteínas estruturais, de forma que na análise filogenética do genoma completo foi demonstrado que esse vírus está classificado no genótipo V. Os dados obtidos a partir do presente estudo podem contribuir consideravelmente para ... / Newcastle disease virus (NDV) is the agent that causes one of the most important diseases in birds and represents a threat to industrial aviculture. NDV is a member of the Paramyxoviridae family, Paramyxovirinae subfamily, Avulavirus genus. Viruses consist of single-stranded, non-segmented, negative-sense, RNA, associated with diseases in respiratory tract, digestive and nervous in birds. The ND control is based on biosafety, use of vaccines and early detection of infected batches. Here we present the complete genome sequence and phylogenetic analysis of a lentogenic strain (LaSota) and a velogenic strain (APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75) of NDV. The results revealed that the genome of LaSota and APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 are constituted respectively by a total of 15,186 and 15,192 nucleotides and six genes in the order 3'-NP-P-M-F-HN-L-5’. The cleavage site of fusion protein (F) in LaSota strain shows the amino acid sequence found in non-virulent NDV strains, as opposed to happen with APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain, the cleavage site of the F protein has the amino acid sequence corresponding to that found in virulent strains of NDV. The complete genome of LaSota strain showed no genomic differences and the phylogenetic analysis evidenced that this strain is classified in genotype II. The APMV-1/Chicken/Brazil/SJM/75 strain there are large differences in the genomic sequences and in the deduced amino acid sequences of its major structural proteins, so the phylogenetic analysis of the complete genome was demonstrated that this virus is classified in genotype V. This study can contribute significantly to understand better the genomic evolution of NDV in Brazil and in Americas, such as these strains with genotypic and phenotypic characteristics were no longer isolated in Brazil after 1975, while continued to be isolated in North America

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T18:56:52Z : No. of bitstreams: 1 martins_grv_me_jabo.pdf: 434340 bytes, checksum: 1f4cb80c686c33def0fc530fbe6542ad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As avaliações dos parâmetros clínicos, imunitários e epidemiológicos da vacinação contra a doença de Newcastle (DN) em agapornis (Agapornis roseicollis) foram investigadas em dois experimentos. Amostras vacinais Ulster 2C, B1 e LaSota do vírus da doença de Newcastle (VDN) foram utilizadas para imunização das aves. No experimento 1, utilizaram-se 48 agapornis, distribuídos em quatro tratamentos de 12 animais cada, num total de três repetições, submetidos a diferentes esquemas imunoprofiláticos. A resposta imune foi avaliada pelo teste de HI. Não foram observados sinais clínicos de reação pós-vacinal em qualquer grupo experimental. Os resultados dos títulos de anticorpos (HI) mostraram que a estirpe vacinal LaSota conferiu maior grau de imunidade aos agapornis, quando comparada às estirpes Ulster 2C e B1. Estas aves foram posteriormente desafiadas frente a uma estirpe patogênica do VDN (EID50=108,15/0,1mL), aos 12 meses de idade. Em todos os grupos, procedeu-se a pesquisa do RNA viral a partir de suabes cloacais, através da técnica de RT-PCR. Os agapornis de todos os grupos não demonstraram qualquer sinal clínico sugestivo da DN, mostrando-se refratários à doença clínica frente a este vírus. Entretanto, ficou caracterizado o estado de portador de VDN nesta espécie decorridos até 21 dias da infecção experimental com este patógeno. No experimento 2, foram utilizadas aves SPF (“Specific-Pathogen-Free”) conviventes com agapornis inoculados com uma estirpe patogênica do VDN. Observou-se a transmissão do VDN dos agapornis para as aves SPF conviventes decorridos até 21 da infecção experimental com este patógeno, o que realça a importância do agapornis como fonte potencial de infecção do VDN para aves domésticas / The evaluations of clinical, immunological and epidemiological parameters of vaccination against Newcastle disease (ND) in lovebirds (Agapornis roseicollis) were investigated in 2 experiments. Ulster 2C, B1 and LaSota vaccines strains of the Newcastle disease virus (NDV) were used to immunization of birds. In experiment 1, 48 lovebirds were distributed into 4 different treatments, with 12 birds in each, with a total of 3 repetitions, submitted to different vaccination programs. The immunological responses were measured by HI test. Lovebirds from all groups did not show any clinical signs of post vaccinal reaction. The antibody titers (HI) results showed that the immune vaccine programs adopted were different in stimulating protective levels of humoral immune response. These birds were also challenge with a pathogenic NDV strain (EID50=108.15/0.1mL) at 12 months of age. After the challenge in all groups, cloacal swabs were collected for RT-PCT to find the pathogenic viruses. Lovebirds from all groups did not demonstrate clinical signs of ND, being refractory to the clinical disease with the NDV. However, a NDV carrier state was demonstrated in this specie until 21 days after experimental infection. In experiment 2, SPF chicks were housed with lovebirds previously inoculated with a pathogenic NDV strain. The pathogenic virus (NDV) was transmitted from lovebirds to SPF chicks until 21 days after challenge, showing the importance of the lovebirds as source of dissemination of NDV to domestic birds