Tesis Magister En Ciencias Odontológicas Con Mención En Patología Y Medicina Oral / Introducción: El fluido crevicular gingival (FCG) representa una potencial fuente de biomarcadores de enfermedades inflamatorias crónicas que afectan a los tejidos periodontales. Estas patologías constituyen las principales causas de pérdida dentaria en adultos. El objetivo del presente estudio fue evaluar niveles y precisión diagnóstica de un set de marcadores de metabolismo óseo en FCG de sujetos con periodontitis marginal crónica (PC) y de sujetos con periodontitis apical asintomática (PAA). Método: En el presente estudio analítico transversal, los sujetos fueron seleccionados desde la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile. Las muestras de FCG se obtuvieron de sitios de dientes de sujetos con diagnóstico de PC (n=30), PAA (n=30) y controles sanos (n=30). La concentración de proteínas totales (CPT) fue determinada con el método del ácido bisciconínico. La actividad gelatinolítica de las metaloptoteinasas de la matriz (MMP) -2 y -9 fue determinada con zimografía y análisis densitométrico. Niveles de MMP-8 fueron determinados mediante ELISA e IFMA, mientras que marcadores óseos directos (DKK-1, osteonectina, periostina, TRAP y OPG), por el método cuantitativo multiplex. Para las comparaciones entre los grupos se realizó la prueba de Kruskal-Wallis utilizando el paquete estadístico Stata V12 y para la evaluación de precisión diagnóstica se realizó la construcción de curvas ROC y el cálculo del área bajo la curva utilizando el programa estadístico SPSS19. Se consideró significación estadística con un valor p<0,05. Resultados: La proenzima, forma activa, tasa de activación de MMP-9 y nivel de MMP- 8 (ELISA e IFMA) fueron significativamente mayores en sitios de individuos con PC, seguidos por PAA, en comparación con individuos sanos, con diferencias estadísticamente significativas entre todos los grupos (p<0,05). La CPT, ProMMP-2, TRAP y OPG fueron significativamente mayores en los sitios de sujetos con PC en comparación con PAA y sanos (p<0,05). Al asociar los niveles moleculares de los marcadores con variables clínico-radiográficas en sujetos con PC, se observó una correlación directa estadísticamente significativa entre los niveles de Pro-MMP-2, MMP-9 activa, porcentaje de activación de MMP-9 y TRAP con profundidad al sondaje (PS) y nivel de inserción clínica (NIC) (p≤ 0,01), de MMP-8 con PS (p≤ 0,01) y de ON con NIC (p< 0,05). Se observó además una correlación indirecta estadísticamente significativa entre TRAP y nivel óseo radiográfico (NOR) (p<0,05). El análisis de precisión diagnóstica de los marcadores reveló que CPT, ProMMP-2, ProMMP-9, MMP-9 activa, MMP-8 (ELISA), y TRAP presentaron un muy alto rendimiento en sitios de sujetos con PC, con áreas bajo la curva mayores a 0,9 y con valores de sensibilidad que fluctuaron entre un 77,42% y 96,77%, y de especificidad entre 80,65% y 100%. A su vez, en sitios de sujetos con PAA, MMP-8 (ELISA) presentó una alta precisión diagnóstica con un área bajo la curva de 0,869, valores de sensibilidad de 92%, y de especificidad de 75,86%. Conclusión: El FCG evidencia cambios en su composición en presencia de procesos inflamatorios crónicos del periodonto, tanto a nivel marginal como apical del diente, a su vez estos cambios se asocian con signos clínicos y radiográficos de destrucción periodontal. La determinación de marcadores moleculares en FCG podría constituir una herramienta útil como potencial método complementario al diagnóstico clínico- radiográfico de periodontitis crónica y periodontitis apical asintomática.

Tesis Magister En Ciencias Odontológicas Con Mención En Patología Y Medicina Oral / El carcinoma de celulas escamosas es el tipo histológico más prevalente en tumores de la cavidad oral. Además de ser un cáncer altamente agresivo e infiltrante, tiende a generar compromiso linfático y metástasis con mucha rapidez. MMP-9, ha sido asociada a destrucción del colageno IV y promotora de la angiogénesis y, a la densidad de vasos linfáticos y sanguíneos han sido asociados en su progresión, metástasis y sobrevida. El objetivo de este estudio fue determinar la relación existente entre la expresión inmunohistoquímica de MMP-9, densidad de vasos linfáticos (D2-40) y densidad de vasos sanguíneos (CD34) en COCE. Se obtuvieron 37 biopsias de carcinoma espinocelular, desde la base de datos del Servicio de Anatomía Patológica, diagnosticadas entre los años 2000- 2008, que cumplieron con los criterios de inclusión. Estas biopsias fueron procesadas para el estudio histopatológico y teñidas con los anticuerpos monoclonales anti-MMP-9, anti-D2-40 y anti-CD34 y evaluadas mediante microscopía óptica. En nuestro estudio no se encontró asociación entre los niveles de expresión de MMP-9 y la densidad de vasos linfáticos y sanguíneos. Del los 37 casos analizados, todas las muestras presentaron algún grado de inmunoreactividad para MMP-9, en promedio un 80,3% de las células epiteliales neoplásicas fueron positivas por caso. No se observó asociación con otras varaibles clinico-patológicas excepto edad. En relación al componente vascular se determinó una mayor densidad promedio de vasos sanguíneos (128,0 vasos/mm2) que linfáticos (42,9 vasos/mm2) y además, una correlación positiva entre la DVL y la DVS en los casos COCE. La densidad de vasos linfáticos no presentó diferencias significativas con variables clinico-patológicas, pero evidenció que lengua tienen en promedio 23,4 vasos/mm2 más que la localización reborde alveolar. / Esta tesis forma parte de los proyectos FONDECYT No. 1120248 y FONDEF No. D11/1096

Tesis Magister En Ciencias Odontológicas Con Mención En Patología Y Medicina Oral / El virus papiloma humano (VPH), es el agente causal de cánceres de la región anogenital. Hasta la fecha se ha encontrado asociación entre la presencia del VPH y el desarrollo de un subconjunto de cánceres de la región orofaringe. Sin embargo, existe controversia de la participación del virus en el Carcinoma Oral de Células Escamosas (COCE) y de su rol oncogénico. El objetivo de este estudio fue determinar una eventual asociación entre la presencia de VPH 16/18 y el recuento de células epiteliales p16, pRb, p53 y Ki-67 positivas en COCE. Estudio observacional analítico de corte transversal. Se seleccionaron 80 casos de COCE registrados en el Servicio de Anatomía Patológica de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile y del Instituto Nacional del Cáncer. La presencia de VPH fue detectada a través de PCR convencional y la detección de p16, pRb, p53 y Ki-67 mediante inmunohistoquímica. Se contabilizó el número de células positivas por cada 1000 células epiteliales utilizando el software Image J. Los análisis estadísticos se realizaron mediante el software Stata 11.0. De un total de 80 casos analizados, 9 casos (11%) resultaron positivos en la detección de VPH genérico utilizando los partidores GP5+/GP6+, de estos 9 casos, 8 (10%) resultaron ser positivos para la detección de VPH 16/18 y 1 caso resultó positivo para VPH-10. De los 8 casos positivos para VPH 16/18, 5 fueron VPH-16 y 3 fueron VPH-18. 71 casos resultaron negativos para la detección de VPH genérico. La prevalencia del VPH 16/18 en muestras de COCE fue similar a lo reportado en la literatura. El VPH-16 fue el genotipo más prevalente en muestras de COCE VPH positivas. No hubo asociación entre la presencia de VPH 16/18 con el recuento de células epiteliales p16, pRb, p53 y Ki-67 positivas en COCE. Según nuestros resultados la expresión de células epiteliales p16, pRb, p53 y Ki-67 positivas en COCE, sería independiente a la presencia de VPH 16/18. La detección de p16 a través de IHQ no se comporta como un marcador sustituto de la infección por VPH. / Tesis adscrita al proyecto FONDECYT No. 1120248.

Tesis Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Patología y Medicina Oral / La diabetes tipo 2 (DM2) es la enfermedad metabólica más frecuente del mundo. Si no es rigurosamente controlada por parte del sujeto afectado, puede comprometerse la integridad de sistemas y órganos y consecuentemente, derivar en el desarrollo de alteraciones renales, cardiovasculares, neurológicas, orales aumentar la predisposición a infecciones oportunistas. La medición continua de los niveles de hemoglobina glicosilada (HbA1c), es fundamental para prevenir las complicaciones derivadas de la progresión de la enfermedad ya que mide en sangre, el porcentaje de hemoglobina unida a la glucosa en un lapso de 90 días. Este valor en definitiva, representa el grado de control metabólico de la enfermedad. El objetivo de un adecuado control de la DM2, es mantener una HbA1c por debajo de 7% y de esta forma, evitar las complicaciones asociadas. Actualmente los biomarcadores en saliva, son utilizados como método de diagnóstico e indicativos del grado de progresión y control, de diferentes enfermedades tanto orales como sistémicas. Un estudio reciente demostró que los niveles de la proteína α-2-macroglobulina (A2MG) detectados en saliva presentan un incremento significativo en sujetos con DM2 en comparación con aquellos sujetos en estados pre diabético. El objetivo de este estudio fue evaluar la asociación que existe entre A2MG detectada en saliva en sujetos con DM2 y los valores de HbA1. Se reclutaron 120 sujetos con diagnóstico de DM2 a los cuales se les tomó una muestra de saliva para determinar la concentración de A2MG a través de la técnica de ELISA. Posteriormente se correlacionó esta variable con los valores de HbA1 obtenidos en sangre en cada individuo. Además, se asociaron los niveles de A2MG con otras variables, como la velocidad de flujo salival (VFS), pH y concentración de proteínas. El análisis de los resultados muestra una correlación positiva entre A2MG y HbA1. También observamos una correlación positiva entre las variables A2MG y concentración de proteínas en saliva y una correlación negativa entre A2MG y pH salival. Estos resultados sugieren que la determinación de A2MG en saliva es una alternativa de evaluación de control metabólico de la diabetes que eventualmente podría complementar o reemplazar a la HbA1, ya que es un procedimiento más sencillo, no invasivo y de bajo costo que podría favorecer una mayor adherencia a los mecanismos de control de la enfermedad por parte de los sujetos enfermos y mejorar su calidad de vida. / Tesis adscrita a proyecto FIOUCH 13-002