Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las periodontitis son un conjunto de enfermedades de naturaleza inflamatoria y etiología infecciosa. La biopelícula patogénica subgingival, constituida principalmente por bacterias anaerobias Gram-negativas, es el factor etiológico responsable del inicio y progresión de las periodontitis. Esta biopelícula está compuesta por una amplia variedad de bacterias, entre ellas, Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Sobre la base de la antigenicidad del O-polisacárido componente del LPS, en A. actinomycetemcomitans se describen distintos serotipos bacterianos y se ha propuesto que entre ellos existe una virulencia y patogenicidad distinta. Las bacterias periodonto-patógenas son reconocidas por las células dendríticas periodontales. Una vez activadas, las células dendríticas expresan moléculas co-estimuladoras y liberan citoquinas pro-inflamatorias y quimioquinas, determinantes de la presentación antigénica a los linfocitos TCD4 . Durante esta presentación antigénica, las células dendríticas inducen la activación, proliferación y diferenciación selectiva de los linfocitos TCD4 + hacia los distintos fenotipos efectores, caracterizados por la expresión y secreción de un patrón específico de citoquinas que determina el tipo de respuesta inmune en el hospedero y, finalmente, el fenotipo clínico de las periodontitis. En este estudio, se evaluó la respuesta de células dendríticas estimuladas con los serotipos a, b o c de A. actinomycetemcomitans. Ante el serotipo b se detectaron mayores niveles de expresión y secreción de IL-6 y TNF-α en comparación a las células dendríticas estimuladas con los serotipos a o c. Adicionalmente, se analizó la activación de los linfocitos TCD4 + naïve ante células dendríticas autólogas estimuladas con los serotipos a, b o c de A. actinomycetemcomitans y se cuantificaron los niveles de expresión de los factores de transcripción Spi.B y AhR y de expresión y secreción de las citoquinas IL-9 e IL-22. En los linfocitos TCD4 + naïve activados por células dendríticas estimuladas con el serotipo b de A. actinomycetemcomitans se detectaron mayores niveles de + vi expresión del factor de transcripción AhR y de producción de las citoquinas IL-22, característicos de un patrón de respuesta inmune tipo Th22 (osteo-destructivo), en comparación a las mismas células estimuladas con los serotipos a o c. En conjunto, estos datos permiten establecer que: (1) existe un mayor potencial inmuno-estimulador del serotipo b de A. actinomycetemcomitans en las células dendríticas y linfocitos TCD4 + naïve y (2) los linfocitos Th22 podrían cumplir un rol importante en la etiopatogenia de las periodontitis.

Trabajo De Investigacion Requisito para Optar al Titulo de Cirujano Dentista / Introducción: El uso de las sobredentaduras nos proporciona un incremento significativo en la estabilidad, retención y soporte mejorando la calidad de vida del paciente. En este tipo de rehabilitación, existe un porcentaje, en los cuales se han presentado complicaciones luego de la instalación, éstas principalmente afectan al pilar protésico y corresponden a alteraciones biológicas, como enfermedad periodontal y caries, y un número reducido comprende fallas técnicas o de algún elemento constitutivo de las prótesis. Debido a la gran variabilidad que puedan presentar este tipo de tratamientos, sumado a la inexistencia de estudios en nuestro medio, se decidió realizar esta investigación con el fin de observar el estado periodontal de los pilares protésicos utilizados en sobredentaduras que utilizan dispositivos retentivos resilientes y móviles (Locator®), uno de los ataches más utilizados en el mercado, de forma tal de conocer su comportamiento clínico en el tiempo. Material y Métodos: Se realizó un estudio correlacional y transversal tomando 16 pacientes rehabilitados en el Programa de Especialización de Rehabilitación Oral de la Universidad de Chile, dados de alta con un estado de salud periodontal, entre los años 2006 y 2009 en que existían 8 pacientes rehabilitados en un mediano plazo y 8 pacientes rehabilitados en un largo plazo, con 35 pilares con Locator® en total. Se diagnosticó el estado periodontal de los pilares en 3 estados, salud, gingivitis y periodontitis. Posteriormente se correlacionó el estado periodontal con el tipo de pilar y con el tipo de atache según fabricación. Resultados: El 22.86% de los pilares presenta estado de salud, 48.57% gingivitis y 28.57% periodontitis. Existen diferencias entre el estado de salud y el tiempo con p de 0.0079. No existen diferencias entre el estado periodontal y tipo de pilar como tampoco con el tipo de fabricación del Locator®. Conclusión: El tiempo es una variable que afecta el estado periodontal de los dientes pilares con dispositivos, sin considerar el tipo de pilar ni el modo de fabricación del Locator®.

Memoria para optar el título de Bioquímico / La periodontitis crónica es una enfermedad periodontal, caracterizada por la inflamación de la encía, iniciada por la placa microbiana y propagada por el hospedero, con la posterior destrucción de la estructura de soporte de los dientes. Los neutrófilos son la primera línea de defensa frente a patógenos como parte de la respuesta inmune innata. En la periodontitis los neutrófilos responden a la presencia de la bacterias anaerobias Gram negativas, que colonizan el tejido subgingival, que incluye a Porphyromonas gingivalis. Los neutrófilos reconocen patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs), dentro de los cuales se encuentran los lipopolisacaridos (LPS), por medio de receptores de reconocimiento de patrones (PRR) de los que forman parte los TLR. Una vez que los neutrófilos han reconocido al patógeno, se producen cambios en la membrana plasmática señal de su activación. Dentro de estos cambios se encuentran la disminución de L-selectina (CD62L), seguido por el incremento en la expresión de Mac-1 de la familia β2 integrina (CD11b) en la superficie de los neutrófilos. Después de la activación de los neutrófilos comienza el proceso apoptótico asociado con algunas funciones importantes, tales como adhesión y fagocitosis, las que eventualmente llevan a la resolución de la inflamación. En la periodontitis, los neutrófilos presentarían una desregulación en la apoptosis, acumulándose y aumentando el daño tisular. De esta manera, nosotros proponemos que los pacientes con periodontitis crónica presentan activación y un retardo de la apoptosis de neutrófilos con respecto a los controles sanos. Como una forma de acercarnos a los cambios en el sistema inmune que hacen a un sujeto más susceptible a la periodontitis, se estudió la activación y apoptosis de neutrófilos en cultivo, de sangre periférica de individuos periodontalmente sanos y con periodontitis crónica. También estudiamos el efecto de LPS Escherichia coli y el extracto bacteriano de P. gingivalis sobre ambos grupos. Los neutrófilos se purificaron desde sangre periférica de 11 pacientes con periodontitis crónica sin tratamiento y 8 controles periodontalmente sanos. Los neutrófilos purificados se incubaron con LPS E. coli o extracto de P. gingivalis por periodos de 0, 4 y 8 h, para posteriormente la determinación de los nivel relativos de expresión de CD62L y CD11b y apoptosis, por citometría de flujo. Los resultados muestran una disminución de la expresión de CD62L y de CD11b en los neutrófilos de pacientes con respecto a los controles sanos en sus niveles basales. Además existe una disminución significativa de la intensidad de florescencia media (MFI) en el tiempo de los niveles basales de CD11b en el grupo control. Al ser estimulados los neutrófilos de pacientes y controles con LPS E. coli o P. gingivalis, existe una disminución de MFI de CD62L y un aumento de CD11b en ambos grupos sin llegar a ser significativos estadísticamente frente P. gingivalis. Sin embargo, LPS E. coli alcanza significación estadística con respecto a los basales en pacientes y controles. MFI de CD11b y CD62 de pacientes y controles a las 8 h de incubación se igualan. Además, los neutrófilos de pacientes presentan un retardo apoptótico en sus niveles basales, con respecto a los controles, y que no es alterada por los estímulos de LPS E. coli o P. gingivalis. Este retardo de la apoptosis ayudaría al neutrófilo a demorar su acción en el tejido liberando el contenido de sus gránulos, contribuyendo al daño tisular y a la etiopatogénesis de la enfermedad periodontal

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las propiedades antimicrobiales de nanopartículas metálicas tales como plata y cobre, están siendo exploradas en diferentes aplicaciones (ej. “Nanosilvers”). En este contexto existen potenciales usos odontológicos para estas propiedades (ej. “Control de Biofilm, enfermedad periodontal, periimplantitis, etc.). La enfermedad periodontal es una de las patologías infecciosas más prevalentes en la población. Las complicaciones causadas por la terapia antibiótica y el limitado control de los actuales sistemas antimicrobiales usados en la enfermedad periodontal, conlleva a la búsqueda de nuevas formas de tratamiento. Dentro de este escenario, la terapia localizada usando un sistema de nanopartículas metálicas con propiedades de liberación controlada, podría constituir una nueva alternativa para el manejo de la enfermedad periodontal. El objetivo de este trabajo fue preparar materiales nanocompositos a base de biopolímeros dopados con nanopartículas de plata (AgNP) y cobre (CuNP), y evaluar sus propiedades de inhibición de crecimiento bacteriano frente a un patógeno representativo de la enfermedad periodontal. Se sintetizaron nanopartículas (NPs) de plata (AgNPs) y cobre (CuNPs) puras (Ag 0 y Cu 0 ) utilizando reactivos biocompatibles como agentes reductores. Estas partículas se utilizaron para preparar materiales nanocompositos antibacterianos en la forma de gel es, esponjas y esferas usando los biopolímeros alginato y quitosano como matrices biodegradables. Las NPs se caracterizaron mediante espectrometría de absorción molecular (UV-Vis), microscopía electrónica de transmisión (TEM) y difracción de rayosX (DRX). La presencia de NPs en los biopolímeros se caracterizo mediante microscopía SEM acoplado a Energía Dispersiva de rayos-X (EDX) en modo de retrodispersión de electrones (back-scattering, BS). La actividad antimicrobiana de los materiales se evaluó frente a la bacteria Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) Las AgNPs y CuNPs sintetizadas presentaron un tamaño de partícula en el rango 15-25 nm. Su naturaleza nanométrica fue confirmada mediante la presencia del plasmón de resonancia superficial a 432 nm y 593 nm, respectivamente. La incorporación de las nanopartículas (NPs) en las 1 correspondientes matrices se logró en los geles, esponjas y esferas. En todos estos nanocompositos (biopolímeros con NPs) las AgNPs fueron estables en el tiempo, mientras que las CuNP presentaron variada estabilidad dependiendo del tipo de matriz. Los resultados de los ensayos de actividad antimicrobiana mostraron que todos los nanocompositos presentaron inhibición de crecimiento bacteriano frente a la bacteria A.a. Se encontró también, que la matriz controla la liberación de las NPs, regulando su acción y actividad. Entre las formas de matrices estudiadas, las esferas de biopolímero fueron las que, a diferencia de las esponjas y geles, permitieron un mayor control de la liberación de NPs y de la actividad antimicrobiana. Por otro lado, y en general, los nanocompositos cargados con CuNPs, presentaron mayor actividad que los cargados con AgNPs. Entre todos los sistemas estudiados los nanocompositos a base de quitosano presentaron mejor actividad, demostrando un efecto de potenciación entre las propiedades bactericidas intrínsecas del biopolímero y las presentadas por las nanopartículas metálicas. Se puede concluir que los sistemas de AgNPs y/o CuNPs/biopolímero presentan propiedades de inhibición bacteriana frente a la bacteria A.a. Por otra parte, la matriz del biopolímero regula la liberación y consecuentemente la actividad antimicrobiana en el tiempo. Estos resultados preliminares indican que estos sistemas podrían presentar potencial para aplicaciones en terapia periodontal localizada.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Las periodontitis son un conjunto de enfermedades infecciosas cuya causa es la bio-película patogénica subgingival. Las bacterias que constituyen esta biopelícula pueden provocar daño directo a los tejidos de inserción periodontal; sin embargo, la destrucción de ellos es producida principalmente por la respuesta inmune desarrollada por el hospedero ante ellas. Durante esta respuesta inmunoinflamatoria, las quimioquinas, en particular las quimioquinas CC (CCLs), y sus receptores específicos (CCRs) definen la migración de células inmunológicas, por ejemplo los linfocitos T, y determinan, al menos en parte, el inicio, progresión y severidad de las periodontitis. En diversas enfermedades infecciosas, distintos patrones de CCLs y CCRs se expresan en los tejidos afectados y estos se asocian a la diferenciación y función de fenotipos de linfocitos T colaboradores (Th) particulares. Por ejemplo, en las lesiones periapicales consecutivas a necrosis pulpar séptica, un patrón con predominio de CCL5 y CCR5 se asocia a un fenotipo Th1 pro-inflamatorio y un patrón con predominio de CCL21 y CCR7 favorece una respuesta tipo Th17 osteodestructiva. En las periodontitis, aún no se ha descrito la asociación entre un patrón particular de CCLs y CCRs y la inflamación y osteo-destrucción que caracterizan a la enfermedad. Aggregatibacter actinomycetemcomitans es una bacteria que compone la bio-película patogénica subgingival de pacientes con periodontitis y uno de los principales factores de virulencia que expresa es el lipopolisacárido (LPS). Sobre la base de la variable inmunogenicidad de las distintas formas de LPS, en A. actinomycetemcomitans se describen distintos serotipos y entre ellos se especula que existen diferencias en su asociación a la enfermedad. Con el objeto de realizar una aproximación en la asociación entre los patrones de CCLs y CCRs característicos de los distintos fenotipos efectores de linfocitos Th y la patogenia de las periodontitis, en este trabajo de investigación se 4 analizó la expresión de distintos CCLs y CCRs en linfocitos T estimulados in vitro con los distintos serotipos de A. actinomycetemcomitans. En linfocitos T estimulados con el serotipo b, se detectó un incremento en los niveles de expresión de CCL3, CCL5, CCL20, CCL21, CCL28 y sus receptores CCR1, CCR2, CCR5, CCR6, CCR7 y CCR9, característicos de un patrón de respuesta tipo Th1 y Th17, en comparación a las células estimuladas con los serotipos a o c. Además, este incremento de expresión de CCLs y CCRs tipo Th1/Th17 se correlacionó positivamente con los niveles de expresión de los factores de transcripción T-bet y RORC2, determinantes de la diferenciación selectiva de estos fenotipos. En conclusión, el serotipo b de A. actinomycetemcomitans induce un incremento en los niveles de expresión de CCLs y CCRs asociados a los linfocitos Th1 y Th17.

Tesis Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Periodontologia / Las enfermedades inflamatorias que afectan al periodonto producto de la infección por microorganismos de la microbiota oral determinan la liberación de una serie de productos bacterianos y mediadores inflamatorios a la circulación general. Entre estos IL-6 cumple un rol fundamental en la destrucción local de los tejidos periodontales y en el aumento del status inflamatorio sistémico por inducción en la síntesis de PCR a nivel hepático. Esta última corresponde a una proteína de fase aguda y su concentración en el plasma sanguíneo depende de la inflamación, infección y daño tisular que pudiese afectar diversos órganos y tejidos. Se le considera como una llave biológica entre los hábitos de salud y la morbilidad y mortalidad, fundamentalmente relacionada con el daño cardiovascular. En este estudio, se cultivaron FLP humanos los que fueron estimulados con IL-6, IL-6RS y anti IL-6R a distintos tiempos y concentraciones. Se cuantificó la expresión y secreción de PCR y de las citoquinas IL-1β, IL-12, IL18, TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-21, IL-23, IL-4, IL-5, IL-10 y TGF-β1. Además se identificó las vías de señalización involucradas en el estímulo de IL-6 en los cultivos de FLP. Se detectaron mayores niveles de expresión y secreción de PCR ante el estímulo de IL-6 en comparación con el grupo control no inducido y este efecto se vio potenciado con el coestímulo de IL-6 / IL-6RS. Las citoquinas asociadas al perfil Th1 (IL-1β, IL-12, IL-18, TNF-α, IFN-γ), Th17 (IL-21 e IL-23) y Treg (IL10 y TGF-β1) presentaron mayores niveles de expresión en relación con los grupos controles. Del mismo modo la secreción de las citoquinas más representativas del perfil linfocitario Th1 (IL-1β, TNF-α), Th17 (IL-23) y Treg (TGF-β1) fueron significativamente mayores en comparación con los grupos controles. La vía de señalización ERK 1/2, STAT-3, JNK y p38, no se modificó de forma significativa frente al estímulo de IL-6 / IL-6RS y anti IL-6R. Los resultados sugieren que el periodonto constituiría un sitio extrahepático de expresión y secreción de PCR. El estímulo inflamatorio local producido durante la enfermedad periodontal determinaría un aumento en la expresión y secreción de PCR y de las citoquinas asociadas a un perfil osteodestructivo (Th1 y Th17), aumentando con ello el status inflamatorio local y sistémico. Este estudio corroboró el mecanismo de acción del eje IL-6 –PCR en los tejidos periodontales.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Las enfermedades gingivales son un grupo heterogéneo de condiciones que afectan la salud de la encía con una alta prevalencia en la población mundial. Últimamente, se ha determinado que el aumento de inflamación gingival puede producir una mayor pérdida de inserción clínica (PIC) en comparación con los individuos que no la presenta, provocando un mayor deterioro en los tejidos periodontales, estableciendo un aumento en la prevalencia de la necesidad del tratamiento periodontal. Material y métodos: En este estudio con diseño transversal se examinaron 550 individuos de 18 años y más, residentes de la comuna de Santiago. El tamaño muestral se determinó sobre la base de una prevalencia estimada para la gingivitis de 93,9% (media índice gingival ≥0,5) obtenidos de forma proporcional según el género y edad de la población, mediante una muestra probabilística por etapas que involucraba la comuna, el distrito censal, el hogar e individuo. El examen se realizó por sólo un examinador calibrado (kappa >0,75) mediante el índice gingival (Loe y Sillnes) para determinación de prevalencia y severidad gingival y el Examen Periodontal Básico (EPB) para la evaluación de la necesidad del tratamiento periodontal. El análisis estadístico se realizó en software STATA v.13 con intervalo de confianza del 95% y una significancia del 0,05% Resultados: La prevalencia de gingivitis fue del 99,1% en los individuos de 18 años a 89 años de edad (media, 42,4 ± 16 años). El índice gingival media fue de 1,73 ± 0,3 (inflamación moderada). Hubo relación significativa (p <0.05) entre edad e IG. La prevalencia y severidad de gingivitis fue significativamente mayor en hombres (p <0.05). En el Examen Básico Periodontal (EBP) se observó que el 41,45% de los sujetos necesita de un tratamiento periodontal complejo, evidenciando un aumento de su complejidad a medida del incremento de edad. Conclusiones: Se muestra una altísima prevalencia de gingivitis en la población representada. Teniendo como principal factor la alta cantidad de placa bacteriana. Además, se determinó que el 100% de los individuos requieren algún tipo de tratamiento periodontal, tratamientos que aumentan de complejidad en individuos con mayor edad.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Las gingivitis y periodontitis son enfermedades de alta prevalencia en Chile y el resto de los países de América. En nuestro país, en la actualidad las medidas preventivas del Ministerio de Salud se orientan principalmente a la población menor de 20 años y los datos epidemiológicos son imprescindibles para planificar estas políticas de salud. Tradicionalmente, durante los estudios epidemiológicos se utiliza el examen periodontal estándar; sin embargo, su implementación involucra la utilización de una gran cantidad de recursos humanos y económicos. El objetivo de este trabajo de investigación es validar un sistema de auto-reporte de salud periodontal en adolescentes pertenecientes a la provincia de Santiago, con el objeto de proponer su utilización para la obtención de datos epidemiológicos a menor costo. Material y métodos: En este estudio de tipo transversal y descriptivo se analizó una muestra de 139 adolescentes residentes en la ciudad de Santiago. Cada individuo contestó el auto-reporte de salud periodontal y fue sometido a un Examen Periodontal Básico Simplificado con registro de Índice Gingival. La validez predictiva de necesidad de tratamiento periodontal básico (NTPB), tratamiento periodontal simple (NTPS) y gingivitis (GIN) fue evaluada utilizando regresión logística mediante sensibilidad (SS), especificidad (ES) y el área bajo la curva (ROC). Resultados: El 5,7% de los individuos examinados están sanos (código 0). El 86,3% requiere NTPB y un 7,9% NTPS. El modelo más específico, fue el para predecir NTPS, con una curva ROC=0,85 que incluyó las siguientes variables: sangrado gingival durante el cepillado ajustado por género, tipo de establecimiento educacional (ED), tratamiento de ortodoncia y frecuencia de visita al dentista. El modelo predictivo para gingivitis incluyó todas las variables anteriores. Conclusiones: La variable presencia de sangrado durante el cepillado, parece ser un buen predictor para valorar la presencia de Gingivitis o Necesidad de Tratamiento Periodontal Simple en una población adolescente y podría justificar su utilidad en estudios epidemiológicos e intervenciones preventivas. / Adscrito a Proyecto FIOUCH 13-009

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La enfermedad periodontal corresponde a la segunda causa de pérdida dentaria a nivel global. A nivel nacional, la necesidad es de enfoque en programas de intervención preventiva. Para ello, se debe contar con datos de condiciones periodontales de la población y factores de riesgo asociados. Actualmente, los datos epidemiológicos existentes son fruto de estudios basados en exámenes clínicos, que corresponden al gold standard para estimar la prevalencia de la patología. Sin embargo, realizar estos estudios resulta muy costoso. La Academia Americana de Periodoncia ha impulsado una serie de estudios destinados a establecer la validez de un set de preguntas de autoreporte de síntomas y signos de enfermedad periodontal para predecir su presencia. Material y método: tras realizar una revisión de la literatura, se seleccionaron y confeccionaron ítems basados en los autoreportes encontrados, orientados a establecer la presencia de gingivitis, para una población de adolescentes entre 12 y 18 años en la Región Metropolitana. Se estableció la validez de contenido del instrumento inicial mediante consulta a panel de expertos (n=5) y, posteriormente, se aplicó en un grupo piloto (n=20) con posterior realización de un focus group con sus participantes. Se obtuvo el instrumento definitivo para aplicar en la muestra de validación (n=178) en distintos colegios seleccionados según financiamiento estatal o particular. Posteriormente, se estimó la fiabilidad del instrumento según su consistencia interna, a través del alfa de Cronbach, y estabilidad temporal, según el índice kappa, mediante la aplicación de un re-test al 30% de la muestra. Se estableció un nivel de significación de p<0.05, con una confianza del 95%. Para los cálculos estadísticos se usó el programa STATA13. Resultados: El valor obtenido para el alfa de Cronbach para el instrumento completo resultante de 5 items de autopreporte de salud periodontal fue de 0.7695. Los valores obtenidos para el índice kappa variaron de 0.4104 a 0.7695 entre los ítems. Conclusiones: Este Instrumento presentó una consistencia interna aceptable entre sus ítems, con una estabilidad temporal que varió de moderada a considerable. / Adscrito a Proyecto FIOUCH 13-009

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