Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

Within recent years, numerous fields of engineering, like mechanics, optics and electronics, have been influenced and revolutionised by the technique of microand nano-structuring. For example, special optical elements for beam shaping, surface structures for the reduction of friction or modern "lab on chip" devices have been produced. Within this thesis a universal system has been developed facilitating the production of such structured surfaces with dimensions down to 500 nm. This system is not only capable of structuring surfaces by means of lithographic processes; it further allows the inspection of surfaces by scanning their topography. To realise such a system, two different technologies have been evaluated: Scanning Near-field Optical Lithography (SNOL), a very sophisticated technique which uses a thin fibre tip to expose a photo resist-covered surface, and confocal scanning technology. Here, the confocal scanning is accomplished using an adapted optical component, the optical pickup unit (OPU), from a gaming console, which turned out to be the most suitable and cost-efficient solution for the realisation of this system. Several test series have been carried out during this work, to verify the performance of the confocal system, both to structure photo resist surfaces and to characterise unknown surfaces. This present work will show the ability of the developed system to produce structures down to the sub-micron range and to characterise unknown surfaces with sub- micron precision. Various patterns have been written into photo resistcoated substrates to structure their surface. Beginning with diffractive optical elements (DOE) for beam shaping, followed by Dammann gratings for twodimensional beam shaping and optical gratings for light guidance as well as producing technical surfaces imitating the properties of sharkskin or simple micromechanical structures, the developed confocal system has shown itself to be flexible and widely-applicable. IV During the development of the confocal system, a strong need for a beam profiling system analysing the light beam diverging from the OPU, was recognised. Due to the fact that no commercially available system was capable of characterising beam sizes within the range of the diffraction limit, a novel method for beam profiling was invented. This method makes use of the fibre tips already applied within the SNOL system, producing tomographical scans of the beam spot.

A produção in vitro de embriões em vacas Holandesas de alta produção (Bos taurus) ainda apresenta baixa eficiência quando comparada à de fêmeas Bos indicus. Nesse contexto, a utilização de novilhas de 8-10 meses de idade como doadoras de oócitos pode ser uma alternativa para melhorar a eficiência dessa biotecnologia e acelerar o ganho genético pela redução do intervalo de gerações dos rebanhos. Entretanto, as informações acerca da produção in vitro de embriões originados de doadoras pré-púberes são controversas na literatura. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a aspiração folicular, seguida da produção in vitro (PIVE) de embriões de doadoras pré-púberes da raça Holandesa e posteriormente, a taxa de concepção após a transferência dos embriões. Um total de 120 doadoras de quatro categorias animais: novilhas pré-púberes (PP, n = 30), novilhas púberes (PU, n = 30), vacas lactantes (VL, n = 30) e vacas não lactantes (VNL, n = 30) foi submetido à aspiração folicular (OPU), sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com cinco animais de cada categoria, ou seja, vinte doadoras por sessão. Imediatamente antes da OPU, os folículos ovarianos foram quantificados e classificados de acordo com o diâmetro [folículos pequenos (FP = < 6 mm), folículos médios (FM = 6 a 10 mm) e folículos grandes (FG = > 10 mm)]. Posteriormente, todos os folículos &ge; 2 mm foram puncionados e o total de estruturas recuperadas, quantidade e qualidade de oócitos viáveis foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à produção in vitro e o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto) foi avaliado. Sêmen sexado do mesmo touro e partida foi utilizado para fertilização dos oócitos de todas as categorias de doadoras. Os embriões produzidos (n = 206) foram transferidos em receptoras cruzadas (Bos taurus x Bos indicus) de corte. Número de folículos no dia da OPU, proporção de folículos conforme o diâmetro, número de oócitos totais e viáveis recuperados, taxa de recuperação, taxa de clivagem, número de embriões produzidos por OPU e taxa de blastocisto foram variáveis analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg; e a taxa de concepção pelo teste exato de Fisher. Não foi observada diferença entre os grupos experimentais quanto ao número total de folículos aspirados (PP: 18,3 ± 2,1; PU: 17,3 ± 1,2; VL: 14,0 ± 1,0; VNL: 17,7 ± 1,7; P = 0,08). Entretanto, verificou-se que as doadoras PP apresentaram maior proporção de folículos pequenos (PP: 58,4% a; PU: 45,7% b; VL: 41,7% b; VNL: 50,6% b; P < 0,0001) quando comparado às demais categorias. Apesar do semelhante número de oócitos totais recuperados (PP: 14,2 ± 2,2; PU: 13,1 ± 1,1; VL: 9,8 ± 1,1; VNL: 14,6 ± 1,7; P = 0,12), PP apresentaram quantidades intermediárias de oócitos viáveis (PP: 10,5 ± 1,8ab; PU: 8,3 ± 0,8 ab), sendo que VNL obtiveram maior número de oócitos viáveis (11,5 ± 1,4 a; P = 0,03) quando comparadas às VL (6,5 ± 0,9 b). Ainda, doadoras PP apresentaram menor taxa de clivagem (PP: 68,6% b; PU: 98,8% a; VL: 87,6% a; VNL: 90,1% a; P < 0,0001), menor número de embriões produzidos por sessão de OPU (PP: 0,5 ± 0,2 b; PU: 1,1 ± 0,2 b; VL: 1,2 ± 0,4 b; VNL: 4,2 ± 0,6 a; P < 0,0001) e menor taxa de blastocisto (PP: 4,8% c; PU: 12,7% b; VL: 18,0% b; VNL: 36,5% a; P < 0,0001) quando comparada às demais categorias. Por fim, observou-se diferença na taxa de concepção após transferência de embriões oriundos de doadoras novilhas e vacas [PP: 0,0% (0/15) b; PU: 9,7% (3/28) b; VL: 28,6% (10/25) a; VNL: 32,7% (36/74) a; P < 0,05]. Dessa forma, conclui-se que doadoras pré-púberes da raça Holandesa apresentam baixa competência para produção in vitro de embriões, sendo vacas não lactantes a categoria mais eficiente para programas de PIVE. Ainda, embriões de novilhas pré-púberes apresentam taxas de concepção inferiores a de embriões de vacas lactantes e não lactantes. Entretanto, taxas de concepção semelhantes foram verificadas entre embriões de novilhas pré-púbere e púberes. / The in vitro embryo production of high productive dairy cows (Bos taurus) presents low efficiency in comparison to Bos indicus females. In this context, the use of heifers of 8-10 months age as oocyte donors could be an alternative in order to improve results of this biotechnology and accelerate the genetic gain by the reduction of the interval between generations. However, informations about the in vitro production of embryos coming from prepubertal donors are controversial at literacture. Thus, the objective of the present study was to evaluate the in vivo ovum pick-up (OPU), followed by in vitro embryo production of prepubertal Holstein donors and the conception rate after embryo transfer. The study was performed at Santa Rita farm, with a completely randomized experimental design, performed in six consecutive replicates with distinct animals. A total of 120 donors of four animal categories: prepubertal heifers (PP, n = 30), pubertal heifers (PU, n = 30), lactating cows (LC, n = 30) and non-lactating cows (NLC, n = 30) were submitted to OPU without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions ware performed with five animals of each category i.e., 20 donors per session. Immediately before the OPU, all follicles were quantified and classified according to their diameter [small (SF &le; 6 mm), medium (MF = 6 to 10 mm) and large (LF &ge; 10 mm) follicles]. Subsequently, all visible follicles (&ge; 2 mm) were punctured and the total recovered structures, quantity and quality of viable oocytes were registered. All viable oocytes were submitted to the in vitro embryo production and their development (cleavage and blastocyst rate) was evaluated. Sex-sorted sperm from the same bull and semen batch were used for the oocytes fertilization of all donor categories. The embryos produced (n = 206) were transferred in crossbred recipients (Bos taurus x Bos indicus). Number of follicles at OPU day, proportion of follicles according to its diameter, number of total and viable oocytes, recovery rate, clivage rate, number of embryos produced per OPU and blastocyst rate were the variables analyzed by the GLIMMIX procedure of SAS&reg; and conception rate by the Fishers exact test. No difference was observed between the experimental groups, regarding the total number of aspirated follicles (PP: 18.3 ± 2.1; PU: 17.3 ± 1.2; LC: 14.0 ± 1.0; NLC: 17.7 ± 1.7; P = 0.08). However, PP donors presented higher proportion of small follicles (PP: 58.4% a; PU: 45.7% b; LC: 41.7% b; NLC: 50.6% b; P < 0.0001) in comparison to other categories. Despite the similar number of total recovered oocytes (PP: 14.2 ± 2.2; PU: 13.1 ± 1.1; LC: 9.8 ± 1.1; NLC: 14.6 ± 1.7; P = 0.12), PP presented intermediate quantity of viable oocytes (PP: 10.5 ± 1.8 ab; PU: 8.3 ± 0.8 ab) and NLC produced more viable oocytes (11.5 ± 1.4 a; P = 0.03) in comparison to LC (6.5 ± 0.9 b). Still, PP donors presented lower clivage rate (PP: 68.6% b; PU: 98.8% a; LC: 87.6 a; NLC: 90.1 a; P < 0.0001), fewer embryos produced per OPU session (PP: 0.5 ± 0.2 b; PU: 1.1 ± 0.2 b; LC: 1.2 ± 0,4 b; NLC: 4.2 ± 0.6 a; P < 0.0001) and lower blastocyst rate (PP: 4.8% c; PU: 12.7% b; LC: 18.0% b; NLC: 36.5% a; P < 0.0001) in comparison to other categories. Lastly, it was observed a different conception rate among heifers and adult cows [PP: 0.0% (0/15)b; PU: 9.7% (3/28)b; LC: 28.6% (10/25)a; NLC: 32.7% (36/74)a; P < 0.05]. Thus, it is concluded that prepubertal Holstein donors present low competence for in vitro embryo production, being non-lactating cows the most efficient category for IVEP. Yet, PP embryos resulted in inferior conception rate in comparison to LC and NLC embryos. However, similar conception rate was verified between PP and PU embryos.

Dez vacas Gir foram adaptadas em tie-stall por 28 dias (Fase I/ pré-tratamento/ dias -28 a -1), sendo submetidas a duas sessões de OPU (dias -14 e -7). Na Fase II (tratamento/ dias 0 a 28) as mesmas foram divididas em Controle (GC/n=5) e Estresse (GE/n=5). O GC permaneceu em normotermia e o GE foi submetido a estresse calórico (EC) em câmara climática com temperatura e umidade controladas [38°C e 80% UR (DIA); 30°C e 80% UR (NOITE)], por 28 dias, procendendo-se, nesta fase, cinco OPU/fêmea. Na Fase III (pós-tratamento / dias 28 a 147) todas as fêmeas retornaram à normotermia (ambiente), sendo realizadas mais 17 OPU/fêmea. Diariamente foram registradas as temperaturas de bulbo seco (TBS) e úmido (TBU) e o índice de temperatura e umidade (ITU). As respostas fisiológicas avaliadas foram consumo de matéria seca (CMS), freqüência respiratória (FR), temperatura retal (TR), temperatura cutânea (TC), taxa de sudação (TS) e concentrações de cortisol e progesterona (P4). Fase luteínica foi definida como o período compreendido entre colheitas com P4 <1,0ng/mL. Semanalmente, com auxílio de um ultra-som (Scanner 200s) equipado com transdutor setorial intravaginal de 7,5MHz, foram aferidas a população folicular e o diâmetro dos dois maiores folículos. Em seguida, os folículos &ge;3mm foram puncionados e os oócitos recuperados foram avaliados morfologicamente, selecionados, maturados, fertilizados e cultivados in vitro. Os efeitos das variáveis classificatórias (animal, tratamento, fase e semana/sessão de OPU) sobre as variáveis resposta, e suas interações, foram analisadas por ANOVA para medidas repetidas no tempo (PROC MIXED do SAS®) e pelo teste de Qui-quadrado, com significância de 5%. Um animal foi excluído do GE após seis sessões, permanecendo somente quatro animais no GE e cinco no GC. O ITU durante o tratamento foi aumentado no GE em relação ao GC (93,1±0,15 vs. 73,6±0,5, respectivamente; P<0,05), acompanhado de uma elevação altamente significativa na FR, TR e TC (P<0,0001), caracterizando EC efetivo no grupo tratado. Na Fase II o GE apresentou CMS inferior ao GC (6,9±0,2 vs. 8,0±0,3, respectivamente; P<0,05). Nas fases pré e pós-estresse todas as variáveis climáticas e fisiológicas foram similares (P>0,05) entre tratamentos. Não houve efeito do EC na TS e nas concentrações de cortisol. O EC ocasionou longos períodos de aciclicidade (P4 <1ng/mL) e ciclos de curta duração (GE; 37,5% vs. GC; 8,6%; P<0,001). Houve efeito de sessão de OPU, mas não de tratamento no número de folículos visualizados e CCO\'s recuperados. Houve aumento no diâmetro folicular e codominância no GE. O percentual de CCO\'s selecionados para MIV e a taxa de clivagem não sofreram efeito do EC, contudo houve efeito imediato e tardio na taxa de produção de blastocistos, sendo de 35,5% no GE vs. 25,0% no CG (P=0,15) na fase II, e 27,2% vs. 13,3% (P<0,05) para os respectivos grupos, na fase III. De acordo com os dados aqui apresentados conclui-se que o EC em Bos indicus afetou negativamente a dinâmica ovariana, ocasionando falha no mecanismo de dominância folicular e diminuição na produção in vitro de embriões por um período superior a 105 dias. / Ten Gir (Bos indicus) cows were kept in tie-stalls for 28 days (Phase I/ before-trial/ days -28 to -1). Cows were submitted to two OPU sessions (days -14 and -7). In Phase II (trial/ days 0 to 28), cows were divided in Control (C/n=5) and Heat-stressed (HS/n=5). The CG remained in thermoneutral environment and the HS was kept under heat-stress in environmental chamber with controlled temperature and humidity [38°C and 80%UR (DAY), 30°C and 80%UR (NIGHT)], for 28 days. During this phase five OPU sessions were accomplished. In Phase III (post-trial/ days 28 to 147) all cows returned to thermoneutral environmental temperatures and 17 OPU sessions were performed. The dry (DBT) and humid (HBT) bulb temperatures were daily measured and obtained the temperature-humidity index (THI). Physiological responses as dry matter intake (DMI), respiratory frequency (RF), rectal temperature (RT), skin temperature (ST), sweating rate (SR), plasma cortisol and progesterone (P4) were assessed. Luteal phase was defined as the period between two samples with P4 below 1.0ng/mL. Once a week, prior to OPU procedure, the number of follicles in the ovary and the diameter of the two biggest follicles were evaluated using an ultrasound (Scanner 200s, 7.5MHz sectorial probe). Subsequently, all follicles &ge;3mm were aspirated and the oocytes morphologically evaluated, selected, maturated, fertilized and cultivated for embryo production in vitro. The effects of independent variables (cow, treatment, phase, and week/OPU session) on the dependent variables were analyzed by ANOVA for repeated measures (PROC MIXED of SAS®) and by Chi-square test, both with a significance level of 5%. One animal was excluded from HS after sixth session, having remained four vs. five cows for CG and HS groups respectively. The THI increased during heat-stress treatment (93.1 ± 0.15 vs. 73.6 ± 0.5 for HS and CG respectively, P<0.05), simultaneously to a significant increase in RF, RT and ST (P<0.0001). It was characterized as effective heat-stress on the treated cows. In phase II the HS showed lower DMI than CG (6.9±0.2 vs. 8.0±0.3 respectively, P<0.05). All environmental and physiologic variables were similar (P>0.05) between treatments in the periods before and post heat-stress. There was no effect of heat-stress on SR and cortisol levels. The HS treatment induced to longer periods of ovarian inactivity (P4 <1ng/mL) as well as short cycles (HS, 37.5% vs. CG, 8.6%, P<0.001). There was effect of OPU session but not of treatment on number of visualized follicles or recovered oocytes. The diameter of the biggest follicles and incidence of codominance increased in HS treatment (P<0.05). Moreover, there was no effect of heat-stress on percentage of COCs selected to IVF or cleaved. However, immediate and delayed effects were observed on blastocists yield (35.5% vs. 25.0%, P=0.15, for CG and HS groups on the phase II and 27.2% vs. 13.3%, P<0.05, for respective groups on the phase III). Our results suggest that the ovarian dynamics of Bos indicus cattle was affected by heat-stress exposure, showing failures on follicular dominance and on in vitro embryos yield for at least 105 days after the heat-stress subside.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. The objective of the present study was to evaluate the in vitro embryo production in Holstein heifers. A total of 179 heifers of three categories [prepubertal heifers (PP), n = 60; pubertal heifers (PU), n = 60 and; pregnant heifers (PR), n = 59)] were submitted to Ovum Pick-Up (OPU) without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions were conducted with ten animals of each category per session. The total number of retrieved structures and the quantity and quality of the oocytes were registered. The viable oocytes were submitted to in vitro embryo production and the embryonic development (cleavage and blastocyst rates) was assessed. Semen from a single sire was used for oocytes fertilization. The variables were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS&reg;. PU heifers presented greater follicular population when compared to the PP and PR heifers (PP = 13.7b &#177; 1.43; PU = 20.2 &#177; 1.64a; PR = 14.0&#177; 1.74b; P = 0.0002). No difference was observed among the experimental groups regarding the oocyte recovery rate (PP = 66.6%; PU = 75.4%; PR = 62.9%; P = 0.26). However, PU heifers had more recovered oocytes when compared to the other categories (PP = 9.75 &#177; 1.29b; PU = 15.6 &#177; 1.42a; PR = 9.85 &#177; 1.60b; P = 0.002). There was no significant differences on the viable oocytes rate (PP = 48.5%; PU = 58.9% and PR = 58.3%; P = 0.41). Moreover, the cleavage rate was lower in PP heifers (PP = 28.2%c; PU = 55.2%b; PR = 67.8%a; P &lt; 0.0001). The blastocyst rate (PP = 2.3%c; PU = 11.9%b; PR = 20.3%a; P &lt; 0.0001) and the number of produced embryos per OPU (PP = 0.13 &#177; 0.05c; PU = 0.90 &#177; 0.17b; PR = 1.76 &#177; 0.32a; P &lt; 0.0001) was lower for PP heifers. The data of the present study indicate that PR heifers present higher efficacy on the in vitro embryo production when compared to PP and PU heifers. Furthermore, it is observed that the IVEP results in PP heifers is significantly inferior to PU heifers.

O objetivo do presente estudo foi o de determinar em qual fase da onda de crescimento folicular são obtidas maiores taxas de recuperação e competência de oócitos obtidos por aspiração folicular (OPU) em novilhas cruzadas (Bos indicus x Bos taurus; Capítulo 1) ou em novilhas bubalinas (Bubalus bubalis), zebuínas (Nelore; Bos indicus) e taurinas (Holandês; Bos taurus; Capítulo 2). No Capítulo 1, 30 novilhas cruzadas foram submetidas à OPU aos 2 (D2), 4 (D4) e 6 (D6) dias após a emergência da onda de crescimento folicular (n=10/ grupo), em delineamento &quot;cross-over&quot; realizado em 3 réplicas. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Foram produzidos maior taxa de blastocistos aos 6 dias pós-FIV, bem como maior número de blastocistos aos 9 dias pós-FIV e maior número de núcleos dos embriões eclodidos quando procedeu-se com aspiração no D2. Contudo, a OPU realizada no D6 também influenciou positivamente a taxa de blastocistos 6 dias pós FIV e não diferiu dos outros momentos com relação ao número de núcleos dos embriões eclodidos. No Capítulo 2, foram realizados 2 experimentos (1 e 2). No Experimento 1, foi avaliado o efeito de 50 mg de progesterona injetável na sincronização de emergência folicular em novilhas Nelore, Holandesas e bubalinas submetidas a protocolo de sincronização à base de progestágeno associado a 2 mg de benzoato de estradiol (n=10/ grupo). Os dados foram analisados por regressão logística, utilizando o PROC GLIMMIX. O momento da emergência folicular não foi afetado pela administração de progesterona injetável, ocorrendo entre 4,2 a 4,5 dias após o início do protocolo de sincronização para os três grupos genéticos. No Experimento 2, foram avaliados os efeitos de momento de sincronização da emergência folicular para a aspiração folicular (1, 3 ou 5 dias após a emergência) e de grupo genético (Nelore, Holandês e búfalo) na produção de embriões in vitro. Um total de 27 novilhas (9 de cada grupo genético, subdivididas nos 3 momentos de aspiração folicular) foram submetidas a 6 sessões de OPU, em delineamento &quot;cross-over&quot;. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de grupo genético, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Os resultados demonstraram que novilhas Nelore apresentaram melhor eficiência para a produção de embriões in vitro do que as novilhas Holandesas ou bubalinas, e que a aspiração folicular realizada em diferentes momentos da onda folicular sincronizada não influenciou a produção in vitro. / The objective of the present study was to determine in which phase of follicular wave higher recovery rates and better oocyte competence can be obtained by ovum pickup (OPU) in crossbred (Bos indicus x Bos taurus; Chapter 1) or buffalo (Bubalus bubalis), Nelore (Bos indicus) and Holstein heifers (Bos taurus; Chapter 2). In Chapter 1, 30 crossbred heifers were submitted to OPU on days 2 (D2), 4 (D4) or 6 (D6) after follicular wave emergence (n=10/ group), in a cross-over design performed in 3 replicates. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Higher blastocyst rate (6 days after IVF), number of blastocysts (9 days after IVF), and number of nuclei of hatched embryos were produced when OPU was done on D2. However, OPU on D6 also produced a higher blastocyst rate (6 days after IVF), and did not differ from other times of OPU concerning number of nuclei of hatched embryos. In Chapter 2, two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of 50 mg of injectable progesterone was evaluated in the synchronization of follicular wave emergence of Nelore, Holstein, and buffalo heifers submitted to a progestin plus 2 mg of estradiol benzoate protocol (n=10/ group). Data were analyzed by logistic regression, by PROC GLIMMIX. The time of follicular wave emergence was not affected by administration of injectable progesterone. Besides, follicular wave emergence occurred between 4.2 and 4.5 days after the beginning of synchronization protocol for all genetic groups. In Experiment 2, the effects of time of OPU relative to follicular wave emergence (1, 3 or 5 days) and of genetic group (Nelore, Holstein, and buffalo) on in vitro embryo production were evaluated. A total of 27 heifers (9 of each genetic group, assigned in the 3 times of OPU) were submitted to 6 OPU sessions, in a cross-over design. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, genetic group, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Results demonstrated that Nelore heifers showed a better efficiency for in vitro embryo production than Holstein or buffalo heifers. Additionally, OPU performed at different times of synchronized follicular wave did not influence in vitro embryo production.

O presente estudo foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal da Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA, localizada no município de Tamarana - Paraná. O experimento se refere aos resultados obtidos na produção in vitro de embriões através da aspiração folicular transvaginal em bovinos das raças Nelore (não CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22). Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) totalizando 172 animais, no período de O 1 janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. Todos os animais foram submetidos à OPU (Ovum Pick Up) totalizando 397 procedimentos entre as doadoras, sendo 104 OPUs em Nelore (não CEIP), 52 OPUs em Nelore (CEIP). 133 OPUs em Brangus e 108 OPUs em Girolando. Com estes procedimentos foram aspirados 7335 oócitos, destes 3597 foram considerados viáveis (49%), produzindo 969 embriões (26.93%), destes foram transferidos 922 embriões em receptoras previamente selecionadas, resultando em 266 prenhes (taxa de prenhes 28.85%). Após a obtenção dos oócitos estes eram enviados para o laboratório acima citado para maturação, fecundação e cultivo in vitro, em um período de oito dias. Os embriões produzidos eram transferidos para receptoras de embrião previamente selecionadas e submetidas ao protocolo de TETF (transferência de embrião em tempo fixo), sendo o diagnóstico de gestação realizado aos 30 dias com auxílio de ultrassonografia transretal. Na raça Brangus recuperou-se um total de 2139 oócitos sendo 967 viáveis (45,2%), destes foram obtidos 272 embriões os quais foram transferidos 241 embriões resultando em 81 prenhezes (33.3%). Na raça Girolando, foram recuperados 1806 oócitos, destes 972 foram considerados viáveis (53.8%) e resultaram na produção de 251 embriões (25.8%), os quais foram transferidos 245, obtendo-se 61 prenhezes (24.9%). Com relação às doadoras da raça Nelore (CEIP). recuperou-se 1850 oócitos, destes 842 foram considerados viáveis (45.5%), resultando em 214 embriões (25.4%), obtendo-se 61 prenhezes (28.5%). Na raça Nelore (não CEIP) recuperou-se 1540 oócitos sendo 816 considerados viáveis (53.0%), os quais resultaram na produção de 232 embriões (28.4%), sendo transferidos 222 dos quais se obteve 63 prenhezes (28.4%). De acordo com a análise estatística observou-se que a raça Nelore (CEIP) teve resultados superiores de (P< 0.0001) em relação à média total de oócitos por OPU, total de oócitos viáveis por sessão de OPU (P< 0.0001), produção de embriões (P< 0.0001) e prenhes por OPU (P<O,0115). O presente trabalho forneceu dados inéditos de PIVE para discussão nas raças sintéticas Brangus e Girolando ( Bos taurus x Bos indicus), em larga escala, porém, o experimento também destaca a necessidade de mais estudos relacionados à produção in vitro de embriões nessas raças. Quanto ao comparativo entre as raças, observou que a quantidade total de oócitos não variou de acordo com as raças Brangus, Girolando e Nelore (não CEIP), no entanto podemos notar uma grande variação individual de animais da mesma raça, Nelore (CEIP) e Nelore (não CEIP), onde se obteve nas fêmeas da raça Nelore (CEIP, selecionadas) uma maior produção total de oócitos, oócitos viáveis e embriões por sessão de aspiração. / This study was developed at the Laboratory of Animal Reproduction from the \"Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA\", town of Tamarana, Paraná State, Brazil. Results from in vitro production of cattle embryos through follicular aspiration in the breeds Nelore (no CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22), Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) from January 1st of 2010 to December 31th of 2012 were used totalizing 397 oocyte donors OPU. From those, 104 OPU were realized in Nelore (no CEIP), 52 OPUs in Nelore (CEIP), 133 OPUs in Brangus, and 108 OPUs in Girolando. The total of recovered oocytes was 7335. Then, the oocytes were sent to the Laboratory for in vitro maturation, fertilization and culture during a period of eight days. The number ofviable oocytes was 3597 (49%) and 969 embryos were in vitro produced (26.9%). A total of 922 were transferred to recipients previously selected and submitted to estrous synchronization using the farm routine FTET (fixed-time embryo transfer) protocol. The pregnancy rate was 28.9% (266 pregnancies). Pregnancy diagnosis was done at the embryo age of 30 days using B-mode transrectal ultrasonography. From Brangus cows, a total of 2139 oocytes were recovered and 967 were c1assified as viable (45.2%), 272 embryos were produced and 241 were transferred resulting in 81 pregnancies (33.3%). From Girolando cows, 1806 oocytes were recovered and 972 c1assified as viable (53.8%). A total of 251 embryos (25.8%) were produced, 245 transferred and the pregnancy rate was 24.9% (61 pregnancies).From the Nelore CEIP cows, a total of 1850 oocytes were recovered and 842 were c1assified as viable (45.5%), 214 embryos were produced and 214 were transferred resulting in 61 pregnancies (28.5%).From Nelore cows, 1540 oocytes were recovered and 816 c1assified as viable (53.0%). A total of 232 embryos (28.4%) were produced, 222 transferred and the pregnancy rate was 28.4% (63 pregnancies).The Nelore CEIP presented superior results for the number of oocytes recovered per OPU (P<0.0001), for the total of viable oocytes per OPU (P<0.0001), embryos produced (P<0.0001), and total of pregnancies per OPU procedures (P<0.0115). This work presents for the first time data from IVPE from Brangus and Girolando breeds (Bos taurosx Bos indicus). When the four studied breeds were compared, the results showed a considerable variation between animais in the same breed. Also, it was observed, in the same breed Nelore, a superiority ofthe Nelore CEIP for oocyte recovery rate, viable oocytes e total of embryos produced by OPU procedure.

O objetivo do presente estudo foi o de determinar em qual fase da onda de crescimento folicular são obtidas maiores taxas de recuperação e competência de oócitos obtidos por aspiração folicular (OPU) em novilhas cruzadas (Bos indicus x Bos taurus; Capítulo 1) ou em novilhas bubalinas (Bubalus bubalis), zebuínas (Nelore; Bos indicus) e taurinas (Holandês; Bos taurus; Capítulo 2). No Capítulo 1, 30 novilhas cruzadas foram submetidas à OPU aos 2 (D2), 4 (D4) e 6 (D6) dias após a emergência da onda de crescimento folicular (n=10/ grupo), em delineamento &quot;cross-over&quot; realizado em 3 réplicas. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Foram produzidos maior taxa de blastocistos aos 6 dias pós-FIV, bem como maior número de blastocistos aos 9 dias pós-FIV e maior número de núcleos dos embriões eclodidos quando procedeu-se com aspiração no D2. Contudo, a OPU realizada no D6 também influenciou positivamente a taxa de blastocistos 6 dias pós FIV e não diferiu dos outros momentos com relação ao número de núcleos dos embriões eclodidos. No Capítulo 2, foram realizados 2 experimentos (1 e 2). No Experimento 1, foi avaliado o efeito de 50 mg de progesterona injetável na sincronização de emergência folicular em novilhas Nelore, Holandesas e bubalinas submetidas a protocolo de sincronização à base de progestágeno associado a 2 mg de benzoato de estradiol (n=10/ grupo). Os dados foram analisados por regressão logística, utilizando o PROC GLIMMIX. O momento da emergência folicular não foi afetado pela administração de progesterona injetável, ocorrendo entre 4,2 a 4,5 dias após o início do protocolo de sincronização para os três grupos genéticos. No Experimento 2, foram avaliados os efeitos de momento de sincronização da emergência folicular para a aspiração folicular (1, 3 ou 5 dias após a emergência) e de grupo genético (Nelore, Holandês e búfalo) na produção de embriões in vitro. Um total de 27 novilhas (9 de cada grupo genético, subdivididas nos 3 momentos de aspiração folicular) foram submetidas a 6 sessões de OPU, em delineamento &quot;cross-over&quot;. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de grupo genético, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Os resultados demonstraram que novilhas Nelore apresentaram melhor eficiência para a produção de embriões in vitro do que as novilhas Holandesas ou bubalinas, e que a aspiração folicular realizada em diferentes momentos da onda folicular sincronizada não influenciou a produção in vitro. / The objective of the present study was to determine in which phase of follicular wave higher recovery rates and better oocyte competence can be obtained by ovum pickup (OPU) in crossbred (Bos indicus x Bos taurus; Chapter 1) or buffalo (Bubalus bubalis), Nelore (Bos indicus) and Holstein heifers (Bos taurus; Chapter 2). In Chapter 1, 30 crossbred heifers were submitted to OPU on days 2 (D2), 4 (D4) or 6 (D6) after follicular wave emergence (n=10/ group), in a cross-over design performed in 3 replicates. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Higher blastocyst rate (6 days after IVF), number of blastocysts (9 days after IVF), and number of nuclei of hatched embryos were produced when OPU was done on D2. However, OPU on D6 also produced a higher blastocyst rate (6 days after IVF), and did not differ from other times of OPU concerning number of nuclei of hatched embryos. In Chapter 2, two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of 50 mg of injectable progesterone was evaluated in the synchronization of follicular wave emergence of Nelore, Holstein, and buffalo heifers submitted to a progestin plus 2 mg of estradiol benzoate protocol (n=10/ group). Data were analyzed by logistic regression, by PROC GLIMMIX. The time of follicular wave emergence was not affected by administration of injectable progesterone. Besides, follicular wave emergence occurred between 4.2 and 4.5 days after the beginning of synchronization protocol for all genetic groups. In Experiment 2, the effects of time of OPU relative to follicular wave emergence (1, 3 or 5 days) and of genetic group (Nelore, Holstein, and buffalo) on in vitro embryo production were evaluated. A total of 27 heifers (9 of each genetic group, assigned in the 3 times of OPU) were submitted to 6 OPU sessions, in a cross-over design. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, genetic group, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Results demonstrated that Nelore heifers showed a better efficiency for in vitro embryo production than Holstein or buffalo heifers. Additionally, OPU performed at different times of synchronized follicular wave did not influence in vitro embryo production.

Biotecnologias como a Ovum Pick-Up e a Produção In vitro de embriões (OPU-PIVE) tem sido uma importante ferramenta para alcançar o melhoramento genético rápido nos rebanhos, diminuindo o intervalo entre gerações. No Brasil, a PIVE está em fase de crescimento e representa 70,7% de toda a produção in vitro mundial. Contudo a OPU-PIVE é ainda ineficiente em vacas de leite, especialmente devido à sua reduzida população folicular. Muitos estudos têm mostrado um efeito positivo do FSH em gado de leite e corte. Recentemente, a pré-estimulação com FSH mostrou ser capaz de aumentar o diâmetro dos folículos aspirados e a porcentagem de embriões transferíveis. O FSH estimula o recrutamento dos folículos na fase antral, fazendo com que eles possam se desenvolver até o momento em que ocorre a divergência e um ou mais folículos se torne dominante. A hipótese do presente estudo é que o uso de FSH (200 mg), fracionado em 4 ou 6 aplicações, em vacas holandesas não lactantes, com emergência de onda folicular sincronizada, aumenta o número de folículos ovarianos, o número de oócitos viáveis e a quantidade de embriões na produção in vitro. Trinta e seis vacas Holandesas não lactantes foram utilizadas como doadoras de oócitos e distribuídas em três tratamentos: Controle (C), 4 aplicações de FSH (F4) e 6 aplicações de FSH (F6). Todas as vacas foram submetidas ao mesmo protocolo de sincronização de emergência de onda folicular, diferindo apenas pela administração e número de 4 ou 6 doses de FSH, conforme descrito acima. Em dia aleatório do ciclo estral (D0), todas as vacas receberam um dispositivo de P4 (Primer&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, SP, Brasil) e 2 mg de benzoato de estradiol (Ric-BE&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, SP, Brasil). Três dias após (D3), foi administrado 0,530 mg de Cloprostenol Sódico (Cioprostinn&reg;, Innovare Biotecnologia e Saúde Animal Ltda, Monte Aprazível, SP, Brasil), induzindo a luteólise com a intenção de liberar espaço no estroma ovariano para o crescimento folicular e facilitar a visualização de folículos na OPU. Vacas do grupo C não receberam tratamentos adicionais. Vacas do grupo F4 receberam 200 mg de FSH (Folltropin - Bioniche Anim,al Health, Belleville, ON, Canadá) fracionados em 4 aplicações de equivalentes concentrações em intervalos de 12 h, iniciando no D4 pela manhã. Vacas do grupo F6 receberam 200 mg de FSH fracionados em 6 aplicações de equivalentes concentrações em intervalos aproximados de 12 h, tendo início no D3 pela manhã. No D7, o dispositivo foi removido e a OPU realizada concomitantemente à contagem dos folículos existentes nos ovários. Os oócitos considerados viáveis foram fertilizados in vitro com sêmen sexado de touros da raça Holandesa. Os dados foram analisados pelo PROC GLIMIX do SAS 9.3, utilizando contrastes ortogonais C1 (C x FSH) e C2 (F4 x F6). Não houve efeito de tratamento no número de folículos (C = 53,3 &plusmn; 4,9 vs FSH = 51,36 &plusmn; 3,1;P = 0,89), número total de oócitos (C = 19,46 &plusmn; 1,64 vs FSH = 18,47 &plusmn; 1,27; P = 0,55), número de oócitos viáveis (C = 12,57 &plusmn; 1,26 vs FSH = 12,70 &plusmn; 1,03; P= 0,606), taxa de recuperação de oócitos (C = 36,5% vs FSH = 36,0%; P = 0,48) e produção de embriões in vitro (C = 4,11 &plusmn; 0,52 vs FSH = 4,32 &plusmn; 0,46; P = 0,79). Apesar de não ter havido efeito no número de folículos, o tratamento com FSH alterou a distribuição dos mesmos, proporcionando o aumento no número de folículos médios (6 a 10 mm). No entanto, não houve efeito do tratamento com FSH no número de oócitos totais e viáveis recuperados, nem na produção de embriões. / Reproductive biotechnologies such as Ovum Pick-Up and in vitro Embryo production (OPU-IVEP) have been widely used as important tools to achieve faster genetic improvement in herds, diminishing the intervals between generations. In Brazil, in vitro Embryo Production (IVEP) is growing in popularity and accounts for 70.7% of all in vitro embryo production worldwide. However, the OPU-IVEP is still poorly efficient in high-producing dairy cattle, especially because of their reduced follicular population. Several studies have shown a positive effect of FSH on OPU-IVEP yeld. Recently, FSH pre-stimulation has shown to be able to increase the diameter of aspirated follicles and the percentage of transferable embryos. The hormone FSH stimulates follicle recruitment in the antral phase, in the way that they develop until the moment of divergence and one or more follicles becomes dominant. The hypothesis of this study is that the use of 200mg FSH split into 6 doses in non-lactating Holstein cows with a synchronized follicular wave emergence increases the number of follicles, the recovery rate and the number of embryos produced in vitro. Thirty six Holstein cows used as oocyte donors were homogenously allocated to one of three treatment groups in a 3x3 Latin square design: Control (C); 4 doses of FHS (FSH4); 6 doses of FSH (F6). All cows were synchronized using the same protocol for synchronization of follicular wave emergence, except for the administration and number of doses of FSH as previously described. At random days of the estrous cycle known as D0, all cows received an intravaginal P4 device (Primer&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, Brazil) and 2mg estradiol benzoate (Ric-BE&reg;, Tecnopec-Agener União). Three days after (D3), all cows received 0.530 mg D-Cloprostenol (Cioprostinn&reg;, Innovare Biotecnologia e Saúde Animal Ltda, Monte Aprazível, SP, Brasil). Cows from the Control group received no additional treatment. Cows from group FSH4 were treated with 200 mg of FSH split in 4 doses of similar concentration given approximately 12 h apart, starting on D4 AM. Cows form group FSH6 were treated with 200 mg of FSH split in 6 doses of similar concentration given approximately 12 h apart, starting on D3 AM. On D7, the device was removed and OPU was performed concomitant with antral follicle count in each ovary. The oocytes considered as viable were sent to IVEP. Data was analyzed using the Glimmix of SAS 9.3, with orthogonal contrasts C1 (C x Treatment with FSH) and C2 (FSH4 x F6). There was no effect on the number of antral follicle (C = 53.3 &plusmn; 4.9 vs FSH = 51.36 &plusmn; 3.1;P = 0.89), number of total oocytes (C = 19.46 &plusmn; 1.64 vs FSH = 18.47 &plusmn; 1.27; P = 0.55), number of viable oocytes (C = 12.57 &plusmn; 1.26 vs FSH = 12.70 &plusmn; 1.03; P= 0.61), oocyte recovery rate (C = 36.5% vs FSH = 36.0%; P = 0.48) and number of embryos produced in vitro (C = 4.11 &plusmn; 0.52 vs FSH = 4.32 &plusmn; 0.46; P = 0.79). Although FSH treatment did not affect the number of follicles, it affected the distribution of them, increasing the number of follicles from 6 to 10 mm. However, FSH treatment did not alter the total number of oocytes and number of viable oocytes or embryo production.