Zabrotes subfasciatus é considerado um dos principais predadores de sementes da espécie Phaseolus vulgaris, causando sérios prejuízos para esta espécie em armazenagem. Este trabalho teve como objetivo conhecer alguns dados do comportamento de oviposição das fêmeas de Z. subfasciatus (Coleoptera, Bruchidae) que ainda são desconhecidos. Foi estudada a oviposição de Z. subfasciatus em P. vulgaris, ao longo de toda a vida e em situações de privação do hospedeiro, logo após a emergência dos adultos, por períodos determinados de 1 a 10 dias. Foi utilizada apenas uma variedade de P. vulgaris: rosinha. O trabalho foi dividido em 2 fases, realizadas concomitantemente. Na primeira fase, foi estudada a variação da oviposição, ao longo do tempo de vida total das fêmeas, sem e com privação do hospedeiro, por até 10 dias, bem como a variabilidade entre as fêmeas dentro de cada grupo, observando as estratégias de cada uma delas no interior de cada grupo. Foram analisados vários parâmetros, como: número de ovos colocados diariamente, a longevidade, o período de oviposição e o número de ovos colocados por cada fêmea dentro de cada grupo. O número de ovos depositados por dia variou estatisticamente, sendo que o pico de oviposição na presença do hospedeiro (Grupo Controle) ocorreu entre o 2o e 5o dia de postura. A longevidade média foi de 11,1±1,8; o período de oviposição médio foi de 8,7±1,1 dias e o número de ovos colocados por cada fêmea ao longo da vida foi de 37,0±9,3. Nos Grupos em que houve privação do hospedeiro, também observou-se que o número de ovos colocados por dia foi diferente estatisticamente, sendo que o pico de oviposição ocorreu sempre no 1o. dia seguinte à privação, com exceção do nível 1, em que o pico ficou entre os dias 1 e 4 (após a presença do hospedeiro). A fecundidade máxima de cada grupo diminuiu, mas só foi diferente estatisticamente a partir do nível 6 (6 dias sem o hospedeiro), sendo que a média foi de 13,9±9,2 ovos, quando o tempo de espera foi de 10 dias. Isso sugere que em até 5 dias de privação, Z. subfasciatus consegue manter sua capacidade de postura, graças a uma boa retenção dos seus ovos e, a partir do 6o dia, há, provavelmente, uma reabsorção. A longevidade foi maior nos Grupos de Privação do hospedeiro a partir do nível 3, em relação ao Grupo Controle, mas o período de oviposição foi menor (4,3±4,6 dias no nível 10) a partir do nível 1, em relação ao Grupo Controle. O número de ovos colocados por todas as fêmeas, tanto no Grupo Controle como nos de Privação, não diferiu, indicando assim que não há variabilidade intraespecífica dentro de cada grupo. Na segunda fase, o objetivo foi comparar a distribuição dos ovos por grão, no Grupo em que não houve privação do hospedeiro (Controle) e nos Grupos em que houve privação por 2, 5, 8 e 10 dias, respectivamente. Foi constatado que as fêmeas privadas do hospedeiro por 5 e 8 dias apresentaram maior número de grãos com 4 ou mais ovos, no 1o dia de oviposição (1,4 grão em média), em relação ao Grupo Controle e as fêmeas que ficaram privadas do hospedeiro por 2 e 10 dias (0,8 grão em média). Quanto ao número de grãos com 1 ou nenhum ovo, observou-se que o Grupo Controle e os Grupos em que houve privação do hospedeiro por 8 e 10 dias apresentaram um maior número de grãos (3,2 grãos em média) em relação aos demais (2,1 grãos em média), no 1o dia de oviposição. E quanto ao número de ovos no grão com mais ovos, observou-se que ocorreu um maior número de ovos em todos os Grupos Privados (5,1 ovos/ grão em média), em relação ao Grupo Controle (1,9 ovo/ grão, em média). / Zabrotes subfasciatus is considered to be one of the main predators of Phaseolus vulgaris seeds, causing severe damage to this species during storage. The aim of the present study was to investigate some aspects of the oviposition behavior of Z. subfasciatus (Coleoptera, Bruchidae) females that are still unknown. The oviposition of Z. subfasciatus on P. vulgaris was studied along the entire life cycle of the parasite and in situations of host privation, right after the emergence of the adults, for periods of time ranging from one to ten days. Only one variety of P. vulgaris ("rosinha") was used. The study was divided into two parts carried out concomitantly. In the first part, the variation of oviposition along the total lifetime of the females was studied, with and without host privation up to ten days, as well as the variability among the females inside each group, with individual observation of the strategies of each insect. Several parameters were analyzed: number of eggs laid daily, longevity, oviposition period and number of eggs laid per female inside each group. The number of eggs laid per day varied significantly and the peak oviposition in the presence of the host (Control Group) occurred between the second and the fifth day after deposition. The mean longevity was 11.1 ± 1.8 days, the mean oviposition period was 8.7 ± 1.1 days and the number of eggs laid by each female along their lives was 37.0 ± 9.3. In the groups submitted to host privation the number of eggs deposited per day was significantly different, with peak oviposition occurring always on the first day after privation, except for level 1 where the peak was observed between the first and fourth days (after the presence of the host). The maximum fecundity of each group has reduced, but the difference was statistically significant only when level 6 (six days without the host) and higher levels were reached, the average being 13.9 ± 9.2 eggs when the waiting time was ten days. This suggests that, for up to five days of privation, Z. subfasciatus is able to maintain its oviposition capacity thanks to the good retention of its eggs. After the sixth day, however, reabsorption is likely to occur. The longevity of the groups submitted to host privation from level 3 to higher levels was longer than the longevity of the Control Group, but the oviposition period from level 1 to higher levels (4.3 ± 4.6 days at level 10) was lower than in the Control Group. The number of eggs laid by all females in the Control and Privation Groups did not differ, thus indicating that there is no intraspecific variability inside each group. In the second part of the experiment, the aim was to compare the distribution of eggs per grain in the group where there was no host privation (Control) and in the groups where privations of 2, 5, 8 and 10 days were imposed. The females kept under host privation for 5 and 8 days presented a larger number of grains with four or more eggs on the first day of oviposition (average of 1.4 grains) compared with the Control Group and with the females that were kept under host privation for 2 and 10 days (average of 0.8 grains). As regards the number of grains with one or no egg, the Control Group and the groups submitted to host privation for 2 and 10 days presented a larger number of grains (average of 3.2 grains) in relation to the others (average of 2.1 grains) on the first day of oviposition. As regards the number of eggs on the grains with a larger content of eggs, the number of eggs was larger in all the Privation Groups (average of 5.1 eggs/grain) in relation to the Control Group (average of 1.9 eggs/grain).

Orientadores: João Vasconcellos Neto, Gustavo Quevedo Romero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T08:37:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanatta_MateusFornazari_M.pdf: 1558379 bytes, checksum: 8b7c43c47346a21b0fb6f2df8d0e504c (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As aranhas apresentam uma grande variedade de estilos de vida, comportamentos e interações ecológicas, mas pouco se sabe sobre a história natural da maioria delas. Existe uma diversidade de formas de cuidado materno em aranhas e ele costuma ser essencial para a proteção e sobrevivência da prole. A seleção de um local adequado para depositar os ovos é uma das primeiras e mais importantes decisões tomadas pelas fêmeas e pode afetar o desenvolvimento dos ovos, a capacidade de proteção das mães e a facilidade para obter alimento. Aysha piassaguera é uma aranha cursorial da família Anyphaenidae e suas fêmeas constroem ninhos em folhas de plantas da borda da mata, onde depositam seus ovos e cuidam deles até a eclosão e dispersão dos filhotes. Nesse trabalho estudamos alguns aspectos de sua história de vida, mais especificamente seu desenvolvimento (capítulo 1), preferência por locais para construção dos ninhos e oviposição (capítulo 2) e função de seu comportamento parental na sobrevivência dos ovos (capítulo 3). Para o estudo do desenvolvimento, coletamos algumas ootecas e criamos as aranhas em laboratório. As fêmeas depositaram em média 123,7 ovos, que levaram 14 dias para eclodir e mais 9,88 dias para dispersar. As aranhas emergiram já no 2º instar, onde a taxa de mortalidade foi maior (20,51%), cada instar durou em média 27,28 dias, a maturidade sexual foi atingida em torno do 11º instar, após uma média de 250,36 dias após a eclosão, sobrevivendo 77,68 dias como adultas. Investigamos se havia preferência por locais para construção dos ninhos em relação à altura do substrato (próximo ao solo ou à copa) e ao grupo de plantas (Monocotiledôneas ou Dicotiledôneas) comparando a proporção de ninhos construídos nesses lugares, além de analisarmos o quanto algumas características foliares (Razão comprimento/largura, Espessura, Força de dobra e MFA - massa foliar por área) explicam a utilização das folhas para a construção dos ninhos. Os ninhos foram construídos em maior proporção na região próxima ao solo e em Monocotiledôneas, algo possivelmente relacionado ao modo de vida errante e arbustivo desta aranha e ao formato alongado das folhas dessas plantas. Inclusive, a característica foliar que melhor explicou a utilização das folhas foi a Razão comprimento/largura, com folhas mais compridas sendo preferidas, provavelmente por permitirem a construção de um ninho mais simétrico e fechado. Considerando o cuidado materno, testamos a influência da presença da mãe e dos ninhos na sobrevivência dos ovos em três tratamentos: Controle (mãe presente e ninho fechado), Sem Mãe (mãe ausente e ninho fechado) e Aberto (mãe ausente e ninho aberto). A sobrevivência foi maior no Controle do que nos outros dois tratamentos, entre os quais não houve diferença. Como a principal causa de mortes foi ataques de inimigos naturais, isso sugere que a presença da mãe é importante para a proteção dos ovos, enquanto o abrigo sozinho é pouco eficiente nisso. Apesar disso, ele poderia influenciar na manutenção de um microambiente propício ao desenvolvimento dos ovos ou facilitar a defesa dos ovos pela fêmea / Abstract: Spiders display a wide range of lifestyles, behaviors and ecological interactions, but little is known about the natural history of the majority of them. There is a great variety of forms of maternal care in spiders and it is usually essential for the protection and survival of offspring. Selecting an appropriate site for egg laying is one of the first and most important decisions made by females and may affect egg development, the protective ability of mothers and the facility to obtain food. Aysha piassaguera is an anyphaenid hunting spider in which females build box-like nests by folding leaves of forest edge plants, in which females lay their eggs and guard them until hatching and dispersal. In this work we studied some aspects of its life history, particularly, its development (chapter 1), preference for nest building and oviposition sites (Chapter 2) and the effect of parental behavior on egg survival (chapter 3). To study development, we collected egg sacs and reared the spiderlings in the laboratory. Females laid on average 123,7 eggs per egg sac, eggs took 14 days to hatch and another 9,9 days for spiderlings to start dispersing. Spiderlings emerged already in the second instar, which had the higher death rate (20,5%). Each instar lasted 27,3 days, on average, and spiders reached sexual maturity around the 11º instar. From emergence it took an average of 250,4 days for a spider to become adult and the adults survived 77,68 days. We investigated whether females displayed preference for nest construction sites concerning substrate high (near the ground or on plants crowns) and group of plants (monocotyledons or dicotyledons) by comparing the proportion of nests built on those places and we also verified how much some leaf traits (length/width ratio, thickness, folding force and LMA - leaf mass per area) explain the use of leaves for nest construction. Female built their nests mainly near the ground and on monocots, which could be related to this being a wandering species that hunts and takes cover on the lower part of the substrate and to the elongated shape of these plants' leaves, for the leaf trait that best explained leaf use was length/width ratio, with females preferring longer leaves, probably because elongated leaves allow the construction of a more symmetric and sealed nest. Concerning maternal care, we tested whether the presence of the mother and the nest affects egg survival using three treatments: Control (nests intact and mother present), Motherless (nest intact and mother removed) and Opened (nest opened and mother removed). Survival was higher on Control treatment than on the other two, which did not differ between each other. Considering that natural enemies' attacks were the main cause of deaths, this shows how the mother presence is crucial for egg protection, whereas the nest has no role in it. Nevertheless, they may help on the maintenance of a proper microenvironment for egg development or make it easier for the females to defend the eggs / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ecologia

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 margarethdibo_tese.pdf: 1810718 bytes, checksum: 4df01c13c55a541f2c4aff4668fbacd7 (MD5) Previous issue date: 2004-03-17 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / The strategy to contain the vector of Dengue fever in the state of São Paulo is centered around a reduction in breeding places and by chemical controls. To obtain better results in the reduction of the vectorial density it is important to incorporate other measures in the routine approach. Egg traps are considered to be preventative and control measures of Aedes aegypti, however, there are no studies that define the favorite egg-laying locations in residences. The utilization of an infusion of Panicum maximum in traps increases its attractiveness to vector females and increases the number of eggs collected. This study aims to contribute to techniques by using traps to evaluate the number of weeks this infusion remains attractive to females. More importantly, it aims to assess the egg-laying behavior of the Aedes aegypti and Aedes albopictus populations in Mirassol, a town situated in the region of São José do Rio Preto, Brazil. Traps with egg-collecting paddle were installed in 200 houses in 20 blocks giving a total of 10 houses to each block. Half of the blocks were chosen at random for the installation of traps baited with the infusion and in the other half, traps with ordinary water were installed. Two egg-traps were placed inside the house (bedroom and living room) and two outside (one under cover and the other in the open). Weekly visits were made from September to December 2002, to analyze all the traps, collecting the existing sticks and leaving new ones. In the laboratory the viable and nonviable eggs on the sticks were counted. Positive sticks were considered to be those on which eggs were found and these were correlated with the type of trap, infusion or water, the location of the trap within the house and the number of weeks after the start of the trial. A sample of these sticks was placed in water, to hatch the larvae with the aim of identifying the species. The mean numbers of eggs and larvae of the Aedes aegypti and Aedes albopictus were calculated and associated with the location within the house, the type of trap used, infusion or water, and the week number. Analyzing the number of positive sticks, and the mean number of eggs on the traps, it was evidenced that the traps with infusion were more attractive/stimulating for egg-laying for females of the genera Aedes than those with water in the first three weeks of exposition. The uncovered outdoor traps were the most favored location for egg-laying during the entire study period; in second place were the outdoor ones under cover. High values of the Spearman correlation coefficients and p-values less than 0.004 demonstrated a strong correlation between the positivity and the mean number of eggs, indicating that one variable predicts the other. From the analysis of the hatched larvae, Aedes aegypti were identified on 99.6% (CI 95%: 99.04 99.84) of the sticks and Aedes albopictus on 1.8% (CI 95%: 1.19 2.70) of them. In Mirassol the probability of finding eggs of Aedes aegypti on any one stick under these circumstances is greater than 99%. / A estratégia para controle do vetor do dengue no estado de São Paulo está centrada na redução de criadouros e ações de controle químico. Para a obtenção de melhores resultados na redução da densidade vetorial é importante que se incorpore outras medidas de uso rotineiro. Armadilhas de oviposição são consideradas medidas de vigilância e controle de Aedes aegypti, entretanto não existem estudos sobre locais do domicílio preferidos para oviposição. A utilização de infusão de Panicum maximum em armadilhas propicia maior atração às fêmeas do vetor e coleta de maior quantidade de ovos. Através deste estudo, procurou-se subsidiar as técnicas para o uso de armadilhas, avaliar durante quantas semanas a referida infusão manteve sua atração sobre as fêmeas e, principalmente, avaliar o comportamento de oviposição de populações de Aedes aegypti em Mírassol, cidade situada na região de São José do Rio Preto. Instalaram-se armadilhas de oviposição em 200 casas, divididas em 20 quadras, distribuindo-as em 10 casas por quadra. Foram sorteadas 50% das quadras para instalação de armadilhas iscadas com infusão, e nas demais se instalou armadilhas com água. Duas armadilhas foram colocadas no intradomicílio (quarto e sala) e duas no peridomicílio (uma sob cobertura e outra ao relento). Foram feitas visitas semanais entre setembro e dezembro de 2002, para a análise de todas as armadilhas, e substituição das palhetas. Em laboratório, contaram-se ovos viáveis e inviáveis existentes nas palhetas. A presença de ovos na palheta significou a sua positividade, a qual foi verificada quanto à presença ou não de infusão, local de instalação na casa e número de semanas. Uma amostra destas palhetas foi colocada em água, para eclosão de larvas, visando à identificação específica. Os números médios de ovos e de larvas Aedes aegypti e Aedes albopictus foram quantificados segundo o posicionamento no domicílio, presença de armadilha iscada com infusão ou água e o número de semanas. Analisando-se Nota de Resumo as positividades e os números médios de ovos das armadilhas, obteve-se que as armadilhas iscadas com infusão mostraram-se mais atraentes/estimulantes para oviposição pelas fêmeas do gênero Aedes que as com água, nas três primeiras semanas de exposição. O relento foi o local com maior preferência para oviposição durante todo o estudo; em segundo lugar encontrou-se o coberto. Elevados valores dos coeficientes de correlação de Spearman e valores de p inferiores a 0,004 mostraram forte correlação entre positividade e média de ovos, indicando que uma variável prediz a outra. A partir das análises das larvas eclodidas, identificou-se a presença de Aedes aegypti em 99,6% (IC 95%: 99,04 -99,84) das palhetas e de Aedes albopictus em 1,8% (1C95%: 1,19 - 2,70) delas. Em Mirassol, a probabilidade de se encontrar ovos de Aedes aegypti em uma palheta sob estes condições é superior a 99%.

O proteassoma 26S é uma estrutura em forma de barril com um núcleo catalítico 20S que é flanqueado por tampas 19S em ambos os lados. Nosso grupo tem demonstrado que o proteassoma 26S é crítico para o desenvolvimento e sobrevivência do Schistosoma mansoni, sendo que mais de 95% dos casais de vermes tratados com o inibidor de proteassoma MG132 apresentaram alteração na postura dos ovos e viabilidade. O tampão 19S é o complexo regulador e funciona no desdobramento e na desubiquitinação das proteínas, antes de sua entrada no complexo 20S, usando enzimas desubiquitinadoras (DUBS). Recentemente, foi demonstrado que a inibição das DUBS, UCHL5 e USP14, que estão reversivelmente ligadas à partícula 19S do complexo 26S, chamada b-AP15, resulta em autofagia, seguida de morte celular, pois leva uma variedade de células de mamíferos ao estresse oxidativo. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o efeito da droga sobre o desenvolvimento reprodutivo de S. mansoni e como possível alvo terapêutico, tendo como objetivos específicos determinar os seus efeitos: na inibição da oviposição in vitro de casais de parasitas Schistosoma mansoni através da contagem dos ovos e expressão do gene p14; avaliar se os órgãos reprodutores dos parasitas sofreram alguma modificação estrutural; se a substância utilizada leva a autofagia; se o tratamento dos casais de parasita com a droga leva a apoptose, ocasionada pela ativação de caspase-3. Este estudo é o primeiro a documentar o papel da droga b-AP15 como um agente esquistossomicida, pois desencadeia alterações ultraestruturais em casais de vermes de S. mansoni. Os seguintes métodos foram utilizados para analisar as alterações: Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), Varredura (MEV) e Confocal; ensaio quantitativo colorimétrico baseado no brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazólio (MTT), atividade do proteassoma através do substrato Suc-Leu-Le-Al-Tyr-AMC específico para atividade de quimotripsina-like; western blotting; Reação de Polimerase em Cadeia em tempo real e TUNEL. Foram testadas várias concentrações do fármaco (0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2 até 50 µM), sendo que a partir de 1,6 µM de b-AP15 ocorreu a inibição da produção de ovos dos casais de parasitas tratados in vitro por 24 h, não havendo alteração da viabilidade, mas mostrou alterações a partir da dosagem de 3,2 µM. A partir de 1,6 µM ocorreram alterações celulares e tegumentares e vermes adultos tratados com 50 µM estavam mortos. O Western blotting mostrou acúmulo de proteínas poliubiquitinadas de alto peso molecular na presença de 1,6µM, havendo mudanças na atividade quimotripsina-like do proteassoma 20S. Os resultados mostraram que o b-AP15 altera a oviposição, a viabilidade e leva à morte de casais de parasitas, reforçando a hipótese de que o sistema ubiquitina/ proteassoma e que as enzimas deubiquitinadoras ligadas a partícula 19S são essenciais para a biologia de S. mansoni. / The 26S proteasome is a barrel structure with a catalytic core 20S that is flanked by 19S caps on both sides. Our group has been showed that 26S proteasomes are critical for Schistosoma mansoni development and survival, being that more than 95% of worms pairs treated with the proteasome inhibitor MG132 showed alteration on egg laying and viability. The 19S cap is the regulatory complex and functions in unfolding and deubiquitinating the proteins before their entry into the 20S complex using constitutive deubiquitinating enzymes (DUBS). Recently, it has been demonstrated that inhibition of the DUBS, UCHL5 and USP14, which are reversibly bound to the 19S particle of the 26S complex, called b-AP15 , results in cell death because it leads to autophagy, followed by cell death in a variety of mammalian cells. The general objective of this work was to evaluate the effect of the drug on the reproductive development of S. mansoni and as a possible therapeutic target. The specific objectives to determine its effects: in inhibiting the in vitro oviposition of couples of Schistosoma mansoni parasites by counting eggs and p14 gene expression; evaluate whether the reproductive organs of the parasites have undergone some structural modification; if the substance used leads to autophagy; if the treatment of the parasite couples with the drug leads to apoptosis, caused by the activation of caspase-3. This study is the first to document the role of the b-AP15 drug as a schistosomicidal agent, as it triggers ultrastructural changes in couples of S. mansoni worms. The following methods were used to analyze the changes: Transmission Electron Microscopy (MET), Scanning (SEM) and Confocal; Colorimetric assay based on 3- (4,5- dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), proteasome activity through Suc-Leu-Le-Al-Tyr-AMC substrate specific for chymotrypsin-like activity; western blotting; Polymerase chain reaction in real time and TUNEL. Various concentrations of the drug (0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2 to 50 ?M) were tested. 1.6 ?M b-AP15 occurred the inhibition of egg production of couples of parasites treated in vitro for 24 h, with no change in viability, but showed changes from the dosage of 3.2 ?M. Cell and tegumentary changes occurred in 1.6 ?M and adult worms treated with 50 ?M were dead. Western blotting showed accumulation of high molecular weight polyubiquitinated proteins in the presence of 1.6?M, with changes in the chymotrypsin-like activity of the 20S proteasome. The results showed that b-AP15 alters the oviposition, viability and leads to the death of couples of parasites, reinforcing the hypothesis that the ubiquitin / proteasome system and the deubiquitinating enzymes bound to the 19S particle are essential for the biology of S. mansoni.

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O proteassoma 26S é uma estrutura em forma de barril com um núcleo catalítico 20S que é flanqueado por tampas 19S em ambos os lados. Nosso grupo tem demonstrado que o proteassoma 26S é crítico para o desenvolvimento e sobrevivência do Schistosoma mansoni, sendo que mais de 95% dos casais de vermes tratados com o inibidor de proteassoma MG132 apresentaram alteração na postura dos ovos e viabilidade. O tampão 19S é o complexo regulador e funciona no desdobramento e na desubiquitinação das proteínas, antes de sua entrada no complexo 20S, usando enzimas desubiquitinadoras (DUBS). Recentemente, foi demonstrado que a inibição das DUBS, UCHL5 e USP14, que estão reversivelmente ligadas à partícula 19S do complexo 26S, chamada b-AP15, resulta em autofagia, seguida de morte celular, pois leva uma variedade de células de mamíferos ao estresse oxidativo. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o efeito da droga sobre o desenvolvimento reprodutivo de S. mansoni e como possível alvo terapêutico, tendo como objetivos específicos determinar os seus efeitos: na inibição da oviposição in vitro de casais de parasitas Schistosoma mansoni através da contagem dos ovos e expressão do gene p14; avaliar se os órgãos reprodutores dos parasitas sofreram alguma modificação estrutural; se a substância utilizada leva a autofagia; se o tratamento dos casais de parasita com a droga leva a apoptose, ocasionada pela ativação de caspase-3. Este estudo é o primeiro a documentar o papel da droga b-AP15 como um agente esquistossomicida, pois desencadeia alterações ultraestruturais em casais de vermes de S. mansoni. Os seguintes métodos foram utilizados para analisar as alterações: Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), Varredura (MEV) e Confocal; ensaio quantitativo colorimétrico baseado no brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazólio (MTT), atividade do proteassoma através do substrato Suc-Leu-Le-Al-Tyr-AMC específico para atividade de quimotripsina-like; western blotting; Reação de Polimerase em Cadeia em tempo real e TUNEL. Foram testadas várias concentrações do fármaco (0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2 até 50 µM), sendo que a partir de 1,6 µM de b-AP15 ocorreu a inibição da produção de ovos dos casais de parasitas tratados in vitro por 24 h, não havendo alteração da viabilidade, mas mostrou alterações a partir da dosagem de 3,2 µM. A partir de 1,6 µM ocorreram alterações celulares e tegumentares e vermes adultos tratados com 50 µM estavam mortos. O Western blotting mostrou acúmulo de proteínas poliubiquitinadas de alto peso molecular na presença de 1,6µM, havendo mudanças na atividade quimotripsina-like do proteassoma 20S. Os resultados mostraram que o b-AP15 altera a oviposição, a viabilidade e leva à morte de casais de parasitas, reforçando a hipótese de que o sistema ubiquitina/ proteassoma e que as enzimas deubiquitinadoras ligadas a partícula 19S são essenciais para a biologia de S. mansoni. / The 26S proteasome is a barrel structure with a catalytic core 20S that is flanked by 19S caps on both sides. Our group has been showed that 26S proteasomes are critical for Schistosoma mansoni development and survival, being that more than 95% of worms pairs treated with the proteasome inhibitor MG132 showed alteration on egg laying and viability. The 19S cap is the regulatory complex and functions in unfolding and deubiquitinating the proteins before their entry into the 20S complex using constitutive deubiquitinating enzymes (DUBS). Recently, it has been demonstrated that inhibition of the DUBS, UCHL5 and USP14, which are reversibly bound to the 19S particle of the 26S complex, called b-AP15 , results in cell death because it leads to autophagy, followed by cell death in a variety of mammalian cells. The general objective of this work was to evaluate the effect of the drug on the reproductive development of S. mansoni and as a possible therapeutic target. The specific objectives to determine its effects: in inhibiting the in vitro oviposition of couples of Schistosoma mansoni parasites by counting eggs and p14 gene expression; evaluate whether the reproductive organs of the parasites have undergone some structural modification; if the substance used leads to autophagy; if the treatment of the parasite couples with the drug leads to apoptosis, caused by the activation of caspase-3. This study is the first to document the role of the b-AP15 drug as a schistosomicidal agent, as it triggers ultrastructural changes in couples of S. mansoni worms. The following methods were used to analyze the changes: Transmission Electron Microscopy (MET), Scanning (SEM) and Confocal; Colorimetric assay based on 3- (4,5- dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), proteasome activity through Suc-Leu-Le-Al-Tyr-AMC substrate specific for chymotrypsin-like activity; western blotting; Polymerase chain reaction in real time and TUNEL. Various concentrations of the drug (0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2 to 50 ?M) were tested. 1.6 ?M b-AP15 occurred the inhibition of egg production of couples of parasites treated in vitro for 24 h, with no change in viability, but showed changes from the dosage of 3.2 ?M. Cell and tegumentary changes occurred in 1.6 ?M and adult worms treated with 50 ?M were dead. Western blotting showed accumulation of high molecular weight polyubiquitinated proteins in the presence of 1.6?M, with changes in the chymotrypsin-like activity of the 20S proteasome. The results showed that b-AP15 alters the oviposition, viability and leads to the death of couples of parasites, reinforcing the hypothesis that the ubiquitin / proteasome system and the deubiquitinating enzymes bound to the 19S particle are essential for the biology of S. mansoni.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-01T11:07:43Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1438069 bytes, checksum: 3f61827c8e132bc94b33f7590e8c41c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-01T11:07:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1438069 bytes, checksum: 3f61827c8e132bc94b33f7590e8c41c4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A implantação de variedades de cana-de-açúcar resistentes à broca-da-cana é uma ferramenta importante para reduzir a perda na produção causada por esta praga chave. Objetivou-se neste estudo, avaliar a preferência de oviposição e o desempenho larval de Diatraea saccharalis em genótipos de cana-de-açúcar, assim como, caracterizar os mecanismos e as causas de resistência a esta praga. Desta forma, pode-se ajudar a selecionar os genótipos a serem utilizadas como genitores em programas de melhoramento de cana-de-açúcar visando à obtenção de variedades resistentes. Os experimentos foram realizados no Centro de Experimentação em Cana-de-açúcar (CECA) da Universidade Federal de Viçosa (UFV). No primeiro capítulo, foi avaliada a preferência de oviposição com e sem chance de escolha da D. saccharalis em oito clones de cana-de-açúcar (IJ76-314, IM76-228, RB825336, RB867515, RB985523, SP80-1842, SP80-3280 e TUC71-7), onde foram avaliadas em todas as parcelas dos dois experimentos a quantidade de ovos, posturas e razão ovos por postura. Após a avaliação dos clones no experimento sem chance de escolha, estes foram utilizados no teste de fertilidade dos ovos. No experimento com chance de escolha também foram avaliadas as características das plantas (largura foliar, leituras SPAD, teor de lignina e a captação de voláteis das plantas) e dos insetos (distribuição das posturas nas plantas). No segundo capítulo, avaliou-se o efeito dos mesmos oito clones na sobrevivência das lagartas recém-eclodidas e a escala de dano visual nas folhas de cana-de-açúcar aos quatro meses de idade. No experimento de desempenho larval no interior dos colmos de cana-de-açúcar, os mesmos clones foram utilizados aos seis meses de idade, onde avaliou em todas as parcelas a porcentagem de sobrevivência larval, índice de infestação, o ganho de peso médio dos insetos, porcentagem de pupação e injúria. Em estudo complementar, no mesmo experimento foram acrescentados 16 clones de cana- de-açúcar, totalizando 24 genótipos avaliados. O clone IM76-228 foi o menos preferido para a oviposição no experimento com chance de escolha, e apresentou maior quantidade de compostos voláteis. Quando avaliado o experimento sem chance de escolha e fertilidade dos ovos não revelaram diferenças significativas entre as variáveis. A D. saccharalis prefere ovipositar no terço apical das folhas de cana-de-açúcar. O IM76-228 e a variedade RB867515 apresentaram as menores porcentagens de sobrevivência das lagartas recém-eclodidas da D. saccharalis, sendo a menor nota dano visual para IM76-228, em folhas de cana-de-açúcar aos quatro meses de idade. O desempenho larval no interior dos colmos de cana-de-açúcar foi menor no clone IM76- 228 tendo apresentado, os menores índices de infestação e injúria. / The introduction of varieties of sugarcane borer resistant sugarcane is an important tool to reduce the loss in production caused by this key pest. The aim of this study was to evaluate the oviposition preference and Diatraea saccharalis’ larval performance in sugarcane genotypes, as well as to characterize the mechanisms and causes of resistance to this pest. In this manner, it can help the selection of the genotypes to be used as genitors in programs of sugarcane breeding in order to obtain resistant varieties. The experiments were performed at the Experience Center in Sugarcane (CECA) from Universidade Federal de Viçosa (UFV). In the first chapter, we evaluated the oviposition preference with and without choice of Diatraea saccharalis in eight sugarcane clones (IJ76-314, IM76-228, RB825336, RB867515, RB985523, SP80-1842, SP80- 3280 and TUC71-7), which were evaluated in all portions of the two experiments the amount of eggs, postures and reason eggs/posture. After evaluation of the clones in the experiment no choice, these were used in the fertility test of eggs. In the experiment with free choice were also evaluated the characteristics of plant (leaf width, SPAD readings, lignin content and uptake of volatile plants) and insects (distribution of positions in plants). In the second chapter, the paper evaluated the effect of the same eight clones survival of the newly hatched larvae and the visual damage level in the leaves of sugar cane with four months-age. Besides, the study dealt with the effect of genotypes on the establishment of the caterpillars inside the stalks at six months age. At the end of the experiment, it was possible to evaluate the percentage of larval survival, rate of infestation, the average weight gain of insects, percentage of pupation and injury. In a complementary study, in the larval development experiment were added 16 clones of sugarcane, totaling 24 genotypes. The clone IM76-228 was the least preferred for oviposition in free choice experiment and had higher amounts of volatility compounds. When evaluated the experiment no choice and fertility of eggs revealed no significant differences between the variables. The Diatraea saccharalis prefer to lay eggs in the apical third of the sugarcane leaves. The IM76-228 and RB867515 variety had the lowest percentages of survival, with the smallest visual damage note to IM76-228 in sugarcane leaves at four months old. Larval performance inside of sugarcane stalks was lower in clone IM76-228 and presented the lowest rates of infestation and injury.

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:32:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 574.pdf: 4167257 bytes, checksum: 48c5b8ff9f1aae0fa414559c4af159c1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Os altos índices de infestação pelo Aedes aegypti registrados em Santa Cruz do Capibaribe-PE (IIP = 5,8 a 13,2 por cento) durante os ciclos bimestrais do Programa de Controle da Dengue, desde 1997, mostraram a necessidade de se buscar novos métodos de abordagem objetivando resultados que apresentem maior impacto sobre este vetor. Neste sentido um Sistema de Monitoramento e Controle Populacional do Aedes aegypti (SMCP-Aedes), desenvolvido pela rede SAUDAVEL (Sistema de Apoio Unificado para Detecção e Acompanhamento em Vigilância Epidemiológica), vem sendo testado no município, desde 2008, em parceria com a Secretaria Estadual de Saúde e a Fiocruz/PE. O sistema inclui: a) coleta mensal de palhetas com ovos depositados em 262 ovitrampas-sentinela (OVT-S) georreferenciadas; b) contagem dos ovos, com repasse das informações para o banco de dados geográficos-SAUDAVEL que analisa e gera mapas de densidades; c) remoção mecânica massiva de ovos e de alados do ambiente, utilizando ovitrampas-controle (OVT-C) e aspiradores, em locais priorizados com base na vigilância entomológica; Os resultados da aplicação do SMCP-Aedes, como piloto, em Santa Cruz do Capibaribe (maio/2008 a abril/2010), permitiram uma compreensão mais clara da ocupação do território urbano pelo vetor, revelando altos níveis de infestação com áreas de maior concentração populacional do Aedes. O sistema, muito sensível para detectar e distinguir baixa e altíssimas densidades permitiu medir o impacto das ações integradas de controle mecânico, que resultaram em eliminação de 4,5 milhões de ovos de Aedes em seis meses e 10.819 culicídeos adultos do ambiente, causando redução importante da densidade do vetor. As ferramentas e estratégias empregadas neste sistema favorecem a compreensão da biologia do vetor pelos habitantes. A inserção dessas ferramentas permitiu melhor atuação daequipe responsável pelo controle da doença

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-26Bitstream added on 2014-06-13T19:24:50Z : No. of bitstreams: 1 lima_lc_dr_ilha.pdf: 971910 bytes, checksum: fb99b31c387943da7c35413238434f36 (MD5) / Os intensos ataques de cigarrinha-das-raízes, Mahanarva fimbriolata, ocorridos em cana-de-açúcar, tem causado perdas econômicas expressivas. Devido a novas práticas culturais utilizadas no setor, ou seja, colheita de cana crua, aumentou significativamente a ocorrência e os danos provocados por esta praga na cultura. O trabalho foi conduzido em casa-de-vegetação e no Laboratório do Centro APTA - Cana-de-Açúcar do Instituto Agronômico, Ribeirão Preto-SP e teve por objetivos estudar a densidade adequada de adultos com o propósito de obter uma infestação suficiente para discriminação de variedades de cana- de-açúcar e a idade mais adequada da planta visando à realização de ensaios de resistência à cigarrinha-das-raízes; discriminar as variedades de cana-de-açúcar de importância econômica quanto à resistência de plantas a insetos de acordo com a excreção, atratividade, a não- preferência com e sem chance de escolha, a antibiose da cigarrinha-das-raízes e assim fornecer uma ferramenta a mais no manejo e controle dessa praga. Pela análise dos resultados conclui-se que M. fimbriolata prefere ovipositar em plantas com 25 e 35 dias de idade e, nas densidades de 2 a 5 casais por planta, depositaram número suficiente de ovos para diferenciar variedades de cana-de-açúcar após 48 horas da infestação. Na variedade SP80-1842, M. fimbriolata produziu uma maior quantidade de excreção em relação à variedade SP83-5073. As variedades RB83-5486, RB72-454 e SP80-1842 foram mais atrativas à cigarrinha-das- raízes que IACSP87-3396 e SP83-5073. Quanto à preferência para oviposição, SP83-5073, em teste com e sem chance de escolha, apresentou menor oviposição por M. fimbriolata. Ao analisar todos os parâmetros biológicos, constatou-se que a variedade SP80-1842 apresenta suscetibilidade a M. fimbriolata. As variedades SP83-5073 e IAC87-3396 determinaram... / The sugarcane spittlebug Mahanarva fimbriolata has inflicted intense attacks on sugarcane, resulting in expressive economic losses. Due to the new cultural practice of green harvest (mechanical), occurrence and damage by the spittlebug have increased significantly. This research was conducted in a greenhouse and at the laboratory of the “Centro APTA- Cana-de-Açúcar” in Ribeirão Preto, state of São Paulo, Brazil. The objectives were to study the adequate adult density to conduct experiments to ascertain which were the best age and varieties of sugarcane to be utilized in tests of resistence to the spittlebug; to discriminate economically important sugarcane varieties when checked for resistance to the spittlebug in trials of excretion, attraction, non-preference (choice and no-choice) and antibiosis. Results showed that the spittlebug preferred to oviposit in 25-35 days old plants, and at the density between 2-5 couples/plant it laid sufficient eggs to differentiate sugarcane varieties after 48 h of infestation. The spittlebug excreted more when fed on variety SP80-1842, when compared to variety SP83-5073. The varieties RB83-5486, RB72-454 and SP80-1842 were more attractive to the spittlebug than varieties IACSP87-3396 and SP83-5073. In trials with choice and no-choice, the spittlebug laid less eggs on variety SP83-5073. After analyzing all biological parameters, concluded that variety SP80-1842 showed susceptibility to the spittlebug. When fed on the varieties SP83-5073 and IAC87-3396 the spittlebug displayed the highest duration of incubation period, nymphal period and mortality, while the oviposition period and longevity of males and females shortened and fecundity dropped; antibiosis was the primary cause of resistance.

Cotesia flavipes é uma vespa endoparasitóide introduzida no Brasil para controlar biologicamente o hospedeiro Diatraea saccharalis, conhecida como a broca da cana-de-açúcar. Estes insetos são criados há mais de trinta anos no Brasil em laboratórios de criação massal. Em épocas de boa produtividade de fêmeas nos laboratórios de criação massal os parasitóides são utilizados logo após a emergência. Porém, em alguns períodos do ano, a produção de insetos apresenta com a razão sexual desviada para machos então, os insetos são utilizados após 24 horas, para tentar garantir a cópula. O objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência de C.flavipes de três idades (0, 24 e 48h) no parasitismo de D. saccharalis de 5° instar e com a densidade de 3 hospedeiros. Três hospedeiros foram oferecidos à fêmea parasitóide para que a mesma realizasse as posturas em um curto intervalo de tempo e com densidade fixa. Verificou-se que C. flavipes das três idades foram capazes de parasitar os 3 hospedeiros oferecidos para oviposição e também de gerar prole nos mesmos. Porém, os hospedeiros que receberam a primeira postura das vespas com 0, 24 e 48 de idade tiveram o maior tamanho de prole. Houve diferença no tamanho da prole para as 3ª lagartas parasitadas de 24 e 48 horas de idade enquanto as vespas de 0 h parasitaram, mas não geraram prole no hospedeiro D. saccharalis. Mas, quando comparou-se estatisticamente o a média das três idades o tamanho da prole foi igual. A razão sexual tambémfoi estatisticamente igual em todas idades e nas três posturas. Concluí-se que C. flavipes de 0, 24 e 48 horas de idade são igualmente eficientes no parasitismo de Diatraea saccharalis. / Cotesia flavipes is an endoparasitoid wasp introduced in Brazil to biologically control the host Diatraea saccharalis, commonly known as the sugar cane drill. These insects have been reared for more than thirty years in Brazil, in massal rearing creation laboratories. In times of good female productivity in massal rearing creation laboratories, the parasitoids are used immediately after emergence. Though, in certain periods of the year, insect production presents a sex ratio towards males, so the insects are used after 24 hours in order to guarantee copulation. The objective of this work was to compare the efficiency of C. flavipes of three ages (0, 24 and 48h) in the parasitism of 5th instar D. saccharalis with a density of three hosts. Three hosts were offered to a female parasitoid so that she would deposit eggs in a short time interval with a fixed density. The study verified that C. flavipes of all three ages was capable of parasitizing the three hosts offered for oviposition and also of generating offspring from them. Though, the host which received the wasps first deposit with 0, 24 and 48h of age, had the largest number of offspring. There was a difference in the number of offspring for the third parasitized caterpillar for wasps? aged 24 and 48 h, while newly emerged (0h) wasps parasitized the host D. saccharalis without generating offspring. Although, when the means for the three ages were compared statistically, offspring sizes were equal. Sexual bias was also statistically equal in all three ages and in the three deposits. We conclude that C. flavipes aged 0, 24 and 48 h are equally efficient in the parasitism of D. saccharalis.