Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:51:30Z : No. of bitstreams: 1 huck_c_me_arafo.pdf: 1252085 bytes, checksum: 4404e50a78d5f2b1ee7cc3f93a760e73 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo da presente pesquisa foi avaliar in vitro os efeitos citotóxicos de diferentes concentrações de um agente clareador de ativação dual à base de peróxido de hidrogênio, sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Para isso, 50 discos de dentina com 0,5mm de espessura, obtidos de dentes terceiros molares humanos íntegros, foram tratados com EDTA 0,5 M, pH 7,4 por 1 minuto, sendo a condutância hidráulica (Lp; æL/mm2/min/cm H2O) determinada para cada um deles. Estes discos foram distribuídos em 5 grupos de acordo com os valores de permeabilidade. Os discos de dentina adaptados a um dispositivo metálico foram autoclavados, posicionados de maneira invertida (superfície pulpar dos discos voltados para cima) em recipientes plásticos de 24 compartimentos (wells). Então, 5 x 104 células MDPC-23/cm2 foram semeadas em cada compartimento. Após 72 horas de incubação na temperatura de 37º C, 5% de CO2 e 95% de ar, os dispositivos com os discos foram invertidos nos compartimentos, de tal maneira que os materiais experimentais pudessem ser aplicados (2 trocas de 15 minutos cada) sobre a superfície oclusal dos discos, caracterizando os 164 seguintes grupos experimentais: G1: H2O2 7,5%; G2: H2O2 20%; G3: H2O2 35%; e G4: gel base (sem o H2O2). No grupo controle (G5) os discos não foram tratados. Após esta etapa do experimento, o metabolismo das células MDPC-23 que permaneceram aderidas à superfície pulpar dos discos de dentina foi avaliado pela técnica de MTT. A morfologia das células e dentina tratada com os agentes experimentais foram avaliadas em microscopia eletrônica de varredura. A análise estatística de Kruskal-Wallis demonstrou que as três concentrações do agente clareador à base de H2O2 causaram intenso efeito citotóxico sobre as células MDPC-23. As concentrações de 7,5%, 20% e 35% de H2O2 aplicadas sobre os discos de dentina com 0,5mm... . / The aim of this in vitro study was evaluate the transdentinal effects of an experimental bleaching agent with different concentration of hydrogen peroxide on the immortalized odontoblast-cell line MDPC-23. Fifty dentin disks, 0.5mm thick, cut from extracted non-carious permanent third human molar were conditioned for 1 minute with 0.5M EDTA, pH 7.4 and the hydraulic conductance (Lp; æL/mm2/min/cm H2O) was determined. The dentin discs were adapted to a metallic device which were sterilized and placed in wells of 24-well dishes (the pulpal surface of the discs remained in up position). Then, the cells were plated (5 x 104 cells/cm2) on the pulpal surface of the discs and incubated for 72 hours at 37oC, with 5% CO2 and 95% air. The metallic devices with the adapted dentin discs were inverted into the wells in such way that the experimental bleaching agents were applied on the oclusal surface of the discs for 30 minutes (2 changes of 15 minutes). The different concentration of H2O2 present in the bleaching agent gave rise to the following experimental groups: G1: 7.5% H2O2; G2: 20% H2O2; G3: 35% H2O2; and G4: 0% H2O2. In control group the dentin discs were not 167 submitted to treatment. The metabolism of MDPC-23 cells which remained attached to the pulpal surface of the discs was evaluated by the methyltetrazolium assay (MTT) and the cell and dentin morphology was assessed under scanning electron microscope (SEM). The statistical analysis of Kruskal-Wallis determined that the experimental bleaching agent caused an intense cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. This experimental agent containing H2O2 at 7.5%; 20%; and 35% concentration decreased the cell metabolism by 62.65%; 62.28%; and 65.69%, respectively. The complementary statistical test of Mann-Withney demonstrated no difference between groups 1 and 2. The bleaching agent with... (Complete abstract, click electronic address below).

Resumo: Objetivo: O presente trabalho, dividido em três estudos, teve como objetivo geral identificar e quantificar a liberação de componentes e avaliar a citotoxicidade e a biocompatibilidade de cimentos de ionômero de vidro (CIVs). Método: Para o estudo 1, extratos dos CIVs Vitrebond (VB), Fuji Lining LC (FL), Vitremer (VM), Fuji II LC (FII), Ketac Fil Plus (KF) e Ketac Molar Easymix (KM) foram obtidos pela imersão de corpos-de-prova em meio de cultura celular (DMEM). Esses extratos (n=9 por grupo) foram analisados por eletrodo específico quanto à presença de flúor e por espectrometria de absorção atômica quanto à presença de alumínio e zinco. HEMA e iodobenzeno foram identificados por CG/EM (n=6). Para o estudo 2, células MDPC-23 foram colocadas em contato com os extratos dos CIVs por 24 horas. Em seguida, foram avaliadas a atividade da desidrogenase succínica (SDH) (n=8), a produção de proteína total (PT) (n=8), a atividade da fosfatase alcalina (FAL) (n=8) e a morfologia celular (n=2). Para o estudo 3, tubos de polietileno (n=24 por grupo) foram preenchidos com os CIVs e implantados no tecido subcutâneo de 42 ratos. Como grupo controle foi utilizada a guta-percha. Após 7 ou 15 dias de pós-operatório, metade dos espécimes de cada grupo e período (n=6) foi preparada para análise histológica, e os demais (n=6) para análise da expressão de genes que codificam para IL-1β e TNF-α. Resultados: Os extratos de todos os CIVs apresentaram uma concentração de flúor significativamente maior do que o meio de cultura DMEM (controle), tendo o VB liberado maior quantidade, estatisticamente significante, do que os demais CIVs. O VB foi, também, o único material que liberou quantidades relativamente altas de alumínio e de zinco. O HEMA foi identificado nos extratos de todos os CIVs modificados por resina (VB, FL, VM e FII), e o iodobenzeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: The aim of this work, divided into three studies, was to identify and quantify released components, and to investigate the cytotoxicity and biocompatibility of glass-ionomer cements (GICs). Materials and Methods: For the first study, extracts were obtained by immersion of round-shaped samples of the GICs, Vitrebond (VB), Fuji Lining LC (FL), Vitremer (VM), Fuji II LC (FII), Ketac Fil Plus (KF) and Ketac Molar Easymix (KM) in culture medium (DMEM). The extracts (n=9 per group) were analyzed by an ion-selective electrode and atomic absorption to determine fluoride, and aluminum and zinc, respectively. HEMA and iodine benzene were identified into the extracts by GC/MS (n=6). In the second study, MDPC-23 cells were maintained in contact with the extracts of the GICs for 24 hours. Then, succinic dehydrogenase (SDH) activity (n=8), total protein (TP) synthesis (n=8), alkaline phosphatase (ALP) activity (n=8) and cell morphology (n=2) were evaluated. For the third study, polyethylene tubes were filled with the GICs (24 from each material) and implanted into the subcutaneous tissue of 42 rats. Gutapercha was used as control group. After a post-operative period of 7 or 15 days half of the specimens from each group and period (n=6) were prepared for histological analysis, and the other part (n=6) for analysis of the expression of genes that encode for IL-1β and TNF-α. Results: The extracts of all GICs showed a significantly higher amount of fluoride than the culture medium (DMEM - control group), and VB was the material that released the highest amount of fluoride compared to the other GICs. VB was the only material that released relatively high amounts of aluminum and zinc. HEMA was identified in the extracts of all the resin modified GICs (VB, FL, VM and FII), and iodine benzene only in VB. Percentages of SDH activity related to the control group... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Josimeri Hebling / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade in vitro de cimentos de ionômero de vidro modificados por resina para forramento, quando submetidos a diferentes tempos de fotoativação, utilizando cultura de células imortalizadas de linhagem odontoblástica (MDPC-23). Foram confeccionados 40 espécimes de cada material experimental (Fuji Lining LC e Vitrebond). Filtros de papel embebidos com 5æL de PBS ou com 5æL de HEMA puro foram usados como controle negativo e positivo (n = 10), respectivamente. Quatro diferentes tempos de fotoativação foram avaliados: ausência de fotoativação, metade do tempo recomendado pelo fabricante (15s), tempo recomendado pelo fabricante (30s) e uma vez e meia o tempo recomendado pelo fabricante (45s). Os espécimes foram posicionados em compartimentos de recipientes plásticos para cultura de células e, 1 mL do meio de cultura DMEM suplementado, contendo cerca de 3 X 104 células MDPC-23/cm2 foi introduzido em cada um dos mesmos. Em seguida, estes foram mantidos por 72 horas em estufa com 100% de umidade à 37ºC, com 5% de CO2 e 95% de ar. A citotoxicidade foi avaliada por meio do teste de viabilidade celular (teste do MTT) e da análise da morfologia celular pela microscopia eletrônica de varredura. A análise estatística determinou que o Fuji Lining LC apresentou menor citotoxicidade que o Vitrebond (p<0,05) e ambos os materiais proporcionaram uma redução no metabolismo celular de 9,3% e 80,7%, respectivamente. A citotoxicidade do Fuji Lining LC aumentou acentuadamente na ausência de irradiação pela luz, entretanto o mesmo não foi observado para o Vitrebond. O tempo de fotoativação não exerceu influência na toxicidade de ambos os cimentos para forramento quando estes foram aplicados sobre a cultura de células da linhagem odontoblástica- MDPC-23. / Abstract: The aim of this in vitro study was to evaluate the cytotoxicity of resin-modified glass-ionomer lining cements submitted to different light-curing times, applied to an immortalized odontoblast-cell line. Forty round-shaped specimens of each experimental material (Fuji Lining LC and Vitrebond) were prepared. Sterilized filter papers soaked with either 5æL of PBS or 5æL of pure HEMA were used as negative and positive control (n = 10), respectively. Four different light-curing times were evaluated: no light activation, light activation for half of the time recommended by the manufactures (15s), manufacturersþ recommended time (30s) and light activation for 1.5 times the manufacturersþ recommended time (45s). The specimens were placed into wells of 24-well dishes and odontoblast-like cells MDPC-23 were plated at 3 X 104 cells/cm2 in each well. Culture medium (DMEM) with 10% of fetal bovine serum, supplemented with penicillin, streptomycin and glutamine was used. Finally, the well dishes were maintained for 72 hours in a humidified incubator at 37ºC, with 5% of CO2 and 95% air. The cytotoxicity was evaluated by the test of cellular viability, Methyltetrazolium assay (MTT) and the cell morphology was assessed using a scanning electron microscope (SEM). The statistical analysis determined that Fuji Lining LC was less cytotoxic than Vitrebond (p <0,05) and both materials provided a reduction in the cellular metabolism of 9,3% and 80,7%, respectively. The cytotoxicity of Fuji Lining LC remarkably increased in the absence of light activation, while the same was not observed for Vitrebond. The length of light curing (15s, 30s and 45s) did not influence the toxicity of both lining materials when applied on a odontoblast-cell line-MDPC-23. / Mestre

Orientador: Marcelo Rocha Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_GustavoNarvaes_D.pdf: 3246599 bytes, checksum: 781e1f21b54daff1efa5c67e98bb5e59 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O hormônio paratireóideo (PTH) é o principal regulador da homeostasia dos íons minerais, cálcio e fosfato, no organismo, exercendo um papel chave no desenvolvimento e homeostase dos tecidos mineralizados. Recentemente nós demonstramos que durante a formação do incisivo de camundongos, a administração intermitente de PTH causou um aumento da taxa de aposição dentinária e resultou em mudanças nas propriedades mecânicas e materiais da dentina formada. Com isso, os estudos apresentados aqui se propuseram a investigar: 1) Os efeitos da exposição transiente (1 ou 24h/ciclo) ou contínua (48h) ao hPTH(1-34) na deposição mineral, na expressão gênica de Fosfatase Alcalina (ALP), Metaloproteinase 2 (MMP2), Biglican (BGN) e Colágeno tipo I (COL1), e na atividade de MMP2 e ALP em odontoblastos MDPC-23; 2) A participação das vias de sinalização dependentes de proteína quinase A (PKA) e proteína quinase C (PKC) na resposta proliferativa e apoptótica de odontoblastos MDPC-23 a diferentes tempos de exposição ao hPTH(1-34) (1, 24 ou 48 horas); 3) O efeito do tratamento do hPTH(1-34) na espessura dos cristais minerais formados durante a odontogênese de incisivos de camundongos. 4) Os efeitos da administração intermitente de hPTH(1-34) na dentinogênese terciária em camundongos. Os resultados mostram que a exposição transiente ao PTH diminuiu a deposição mineral e atividade de ALP. Já as expressões gênicas de ALP, BGN e COL1 estavam aumentadas no grupo 24h/ciclo, enquanto que o grupo Contínuo apresentou um aumento da expressão gênica de BGN e COL1. Também, os níveis de MMP2 secretados estavam aumentados no grupo 1h/ciclo e diminuídos no grupo Contínuo. A exposição ao PTH modula a resposta proliferativa e apoptótica de odontoblastos MDPC-23 de uma maneira dependente do tempo. Além disso, a via PKA atua na resposta a curta exposição ao PTH (1h), mantendo os níveis de proliferação e apoptose das células, enquanto que a via PKC é ativada nos tempos mais longos de exposição (24 e 48hs) levando a um aumento da apoptose e redução da proliferação celular. A administração intermitente de PTH não alterou a espessura dos cristais minerais da dentina de incisivos em formação e nem a quantidade de dentina terciária reacional em molares de camundongos. No entanto, o tratamento com PTH aumentou a concentração de zinco e diminuiu a concentração de cálcio na dentina de molares normais e em molares com indução de dentinogênese terciária. Com isso, pode-se concluir que o hPTH (1-34) modula a mineralização, apoptose e proliferação de odontoblastos MDPC-23 de maneira dependente do tempo, e que as vias de sinalização dependentes de PKA e PKC participam da resposta proliferativa e apoptótica. Além disso, nos modelos utilizados, a administração intermitente de PTH não teve efeito na espessura de cristais da dentina de incisivos, e também não demonstrou ser capaz de aumentar a formação de dentina terciária reacional em molares de camundongos / Abstract: Parathyroid hormone (PTH) is the major regulator of the calcium and phosphate ions in and plays a key role in the development and homeostasis of mineralized tissues. Recently we demonstrated that during the formation of the incisor of mice, intermittent PTH administration caused an increase of dentin apposition rate and it was associate to changes in the composition and in the mechanical properties of the formed dentin. Thus, the studies presented here were designed to investigate: 1) The effects of transient exposure (1 or 24h/cycle) or continuous (48h) to hPTH (1-34) in the mineral deposition and in the gene expression of alkaline phosphatase (ALP), metalloproteinase 2 (MMP2), Biglican (BGN) and type I collagen (COL1), and activity of MMP2 and ALP in odontoblast-like cells (MDPC-23); 2) The involvement of signaling pathways dependent of protein kinase A (PKA) and protein kinase C (PKC) in the proliferative and apoptotic response of MDPC-23 at different times of exposure to hPTH (1-34) (1, 24 or 48 hours); 3) The effect of the hPTH (1-34) treatment on the thickness of mineral crystals formed during dentinogenesis of the mice incisors. 4) The effects of intermittent hPTH (1-34) administration on the tertiary dentinogenesis in mice molars. The results showed that the transient exposure to PTH decreased the mineral deposition and ALP activity. The gene expressions of ALP, COL1 and BGN were higher in the group treated with PTH for 24h/cycle, while the PTH continuous administration group (48h) showed an increase in gene expression of COL1 and BGN. Also, the levels of secreted MMP2 were increased in 1h/cycle and decreased in the Continuous group (48h). The exposure to PTH modulates apoptotic and proliferative response of MDPC-23 in a time-dependent manner. Furthermore, the PKA pathway operates in response to short-term exposure to PTH (1h), maintaining levels of proliferation cell and apoptosis, whereas the PKC pathway is activated in longer exposure times (24 and 48h) leading to an increase apoptosis and decreased cell proliferation. The intermittent PTH administration did not change the thickness of the dentin mineral crystals of the incisors mice, and did not alter the deposition volume of the reactional tertiary dentin in the mice molars. However, treatment with PTH increased the concentration of zinc and decreased calcium concentration in normal dentin of molars with or without induction of tertiary dentinogenesis. Thus, it can be concluded that hPTH (1-34) modulates the mineral deposition, proliferation and apoptosis of the odontoblasts MDPC-23 in a time-dependent manner, and the signaling pathways PKA and PKC dependent participate of that proliferative and apoptotic response. Furthermore, in the models used here, the intermittent administration of PTH did not affect the thickness of the incisor dentinal crystals, and also not shown to be able to enhance the formation of reactional tertiary dentin in molar mice / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Abstract The dentin-pulp complex comprises mineralized dentin and the vital soft tissues encased inside dentin, i.e. odontoblasts and pulp tissue. During caries progression, the dentinal minerals are dissolved and eventually the collagenous organic matrix is degraded. However, the exact mechanisms and enzymes responsible for the organic matrix breakdown remain unknown. Matrix metalloproteinases (MMPs), a family of endopeptidases capable of degrading in concert virtually all extracellular matrix components, are expressed during normal dentin-pulp complex formation and maintenance. MMP activity has also been suggested to contribute to the organic matrix degradation during dentin caries progression and to the repair and defense reactions elicited by caries in the dentin-pulp complex cells. The aim of the study was to further elucidate the role of host MMPs in dentin caries progression and the origin of MMPs in carious dentin as well as the possible changes in MMP expression in the cells of the dentin-pulp complex in response to caries. MMP inhibitors decreased the area of dentin caries lesions in vivo, suggesting the involvement of host MMPs in dentin caries pathogenesis. When the overall MMP gene expression was examined by cDNA microarray, pooled pulp samples demonstrated a high level of MMP-13 expression, but failed to show any unequivocal changes in MMP expression due to caries. MMP-13 expression is rare among normal human adult tissues. Real-time quantitative PCR of individual pulp and odontoblast samples demonstrated a rather large variation in relative MMP-13 mRNA expression between samples, especially pulp samples. Protein expression of MMP-13 was detected in pulp and odontoblasts without any major differences between the tissues of sound and carious teeth. This was also the case with the MMP-20 (enamelysin) protein, which was demonstrated in odontoblasts and the pulp tissue of fully developed human teeth. MMP-20, MMP-8, and gelatinases (especially MMP-2) were demonstrated in human dentin, and dentinal MMPs exhibited activity against native and denatured type I collagen when released. The study demonstrates the presence of MMPs in the soft and hard tissue compartments of the dentin-pulp complex. These enzymes may also contribute to dentin caries progression and response reactions to caries.

Abstract Dentin formation in physiological and pathological conditions has been widely studied, but the events and regulation are still not completely understood. Odontoblasts, terminally differentiated post-mitotic cells located in a single cell layer around pulp tissue, synthesize and mineralize dentin organic matrix. Growth factors, such as TGF-β1 and BMP-2, have been implicated in the regulation of the responses of odontoblasts and pulp tissue to external irritation. Matrix metalloproteinases (MMPs), a family of 28 endopeptidases collectively capable of degrading virtually all extracellular matrix components, and their specific tissue inhibitors (TIMPs) participate in the organo- and morphogenesis, physiological tissue turnover and pathological tissue destruction in many tissues, but very little is known about their presence, function, and regulation in the dentin-pulp complex cells and tissues. The aim of the work presented in this thesis was to analyze the expression and regulation of collagens, MMPs and TIMPs by TGF-β1 and BMP-2 in mature human odontoblasts and pulp tissue. Odontoblasts synthesize and secrete type I and type III collagens, with no clear effect of TGF-β1 on their expression levels. MMP-1, -2, -8, -9, -10, -11, -14, -15, -16, -19 and TIMP-1, -2, -3 and -4 were expressed by both odontoblasts and pulp tissue. MMP-3 and MMP-12 were not expressed in native odontoblasts or pulp tissue, and MMP-7, -24, and -25 were expressed only in odontoblasts. MMP-2, -10, -14, -20 and -23 were expressed more abundantly in odontoblasts, whereas pulp tissue expressed more MMP-13 and MMP-17. Growth factors differentially regulated the expression of different MMPs and TIMPs within and among the cells and tissues studied. In odontoblasts, MMP-1, -8 and -14 were down-regulated, but MMP-7, MMP-9, TIMP-1 and TIMP-3 up-regulated, by either TGF-β1 or BMP-2, alone or in combination. In pulp tissue, growth factors up-regulated the expression of MMP-1, -2, -10, -13, -17 and TIMP-3, but down-regulated TIMP-4. The widespread of expression of MMPs and TIMPs by mature human odontoblasts and pulp tissue suggests that they may participate in dentin matrix organization prior to mineralization, and that growth factors may further control dentin matrix modeling, not by regulating the synthesis of type I or III collagens as previously believed, but rather by differentially regulating each MMPs and TIMPs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T19:43:57Z : No. of bitstreams: 1 lanza_crm_dr_arafo.pdf: 5945078 bytes, checksum: 092aa2094ca72bbfeb2e0b5301a1b69e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo avaliou a difusão transdentinária e a toxicidade de sistemas adesivos autocondicionantes de diferentes valores de pH sobre células odontoblastóides MDPC-23. Sessenta discos de dentina (0,4 mm de espessura) foram obtidos de terceiros molares humanos hígidos e divididos em 6 grupos após a mensuração de sua condutância hidráulica pelo Flodec. Os discos foram montados em câmaras pulpares in vitro, onde 30.000 células foram plantadas no seu lado pulpar (área dentina exposta 0,28 cm2) e mantidas em cultura por 48 h. Após este período, os sistemas adesivos Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond, Adper Prompt e Xeno III foram aplicados no lado oclusal dos discos. O sistema adesivo Single Bond foi usado como controle positivo e a solução tampão fosfato como controle negativo. A citotoxicidade foi avaliada após 24 horas pelo teste MTT e a morfologia celular por MEV. A difusão transdentinária foi qualificada por CG/EM. Os valores de MTT para os sistemas autocondicionantes, analisados pelos testes de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney, foram estatisticamente diferentes do grupo controle negativo. Houve redução da viabilidade celular de 47,8%; 46,5%; 42,1% e 28,0% para o Clearfil SE Bond, Xeno III, Clearfil Protect Bond e Adper Prompt L-Pop, respectivamente. A redução da viabilidade celular foi inferior ao Single Bond (53,1%) para todos os sistemas. A análise por CG/MS identificou o HEMA como principal componente químico difundido pela dentina. Foi possível concluir que todos os sistemas adesivos autocondicionantes avaliados apresentaram difusão transdentinária resultando em redução do metabolismo celular, a qual não foi relacionada a sua capacidade de dissolução da smear layer e desmineralização da dentina subjancente. / This study evaluated the transdentinal diffusion and cytotoxicity of self-etching adhesive systems with different pH on the odontoblast cell line MDPC-23. Sixty dentin disks were cut from the crowns of extracted human permanent molar teeth with 0.4 mm thickness and were divided into 6 groups of similar hydraulic conductance (Flodec). The dentin disks were placed in an in vitro pulp chamber and 30.000 cells were planted on their pulpal side (area of exposed dentin 0.28 cm2). After 48 hours, the adhesive systems Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond, Adper Prompt or Xeno III were applied on the occlusal side and light-cured for 10s. Single Bond was used as positive and phosphate buffer solution (PBS) as negative control group. The cytotoxicity was measured by MTT assay and cell characteristics were assessed by SEM, after 24 h. The transdentinal diffusion was qualified by GC/MS. Kruskall-Wallis and Mann-Whitney tests demonstrated a significant difference among the adhesives and PBS (p<0.05). The cellular viability reduction promoted by the self-etching systems was lower than that of Single Bond (53,1%). Cell metabolism was reduced in 47,8%; 46,5%; 42,1% and 28,0% for Clearfil SE Bond, Xeno III, Clearfil Protect Bond and Adper Prompt, respectively. HEMA was identified as the main diffused component. It was concluded that all investigated self-etching adhesives demonstrated transdentinal diffusion resulting in reduction of the cellular metabolism, which was not related to their capacity to dissolve the smear layer and demineralize the underlying dentin.

Orientador: Josemeri Hebling / Banca: Roberval de Almeida Cruz / Banca: José Carlos Pereira / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Carlos Alberto dos Santos Cruz / Resumo: Este estudo avaliou a difusão transdentinária e a toxicidade de sistemas adesivos autocondicionantes de diferentes valores de pH sobre células odontoblastóides MDPC-23. Sessenta discos de dentina (0,4 mm de espessura) foram obtidos de terceiros molares humanos hígidos e divididos em 6 grupos após a mensuração de sua condutância hidráulica pelo Flodec. Os discos foram montados em câmaras pulpares in vitro, onde 30.000 células foram plantadas no seu lado pulpar (área dentina exposta 0,28 cm2) e mantidas em cultura por 48 h. Após este período, os sistemas adesivos Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond, Adper Prompt e Xeno III foram aplicados no lado oclusal dos discos. O sistema adesivo Single Bond foi usado como controle positivo e a solução tampão fosfato como controle negativo. A citotoxicidade foi avaliada após 24 horas pelo teste MTT e a morfologia celular por MEV. A difusão transdentinária foi qualificada por CG/EM. Os valores de MTT para os sistemas autocondicionantes, analisados pelos testes de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney, foram estatisticamente diferentes do grupo controle negativo. Houve redução da viabilidade celular de 47,8%; 46,5%; 42,1% e 28,0% para o Clearfil SE Bond, Xeno III, Clearfil Protect Bond e Adper Prompt L-Pop, respectivamente. A redução da viabilidade celular foi inferior ao Single Bond (53,1%) para todos os sistemas. A análise por CG/MS identificou o HEMA como principal componente químico difundido pela dentina. Foi possível concluir que todos os sistemas adesivos autocondicionantes avaliados apresentaram difusão transdentinária resultando em redução do metabolismo celular, a qual não foi relacionada a sua capacidade de dissolução da smear layer e desmineralização da dentina subjancente. / Abstract: This study evaluated the transdentinal diffusion and cytotoxicity of self-etching adhesive systems with different pH on the odontoblast cell line MDPC-23. Sixty dentin disks were cut from the crowns of extracted human permanent molar teeth with 0.4 mm thickness and were divided into 6 groups of similar hydraulic conductance (Flodec). The dentin disks were placed in an in vitro pulp chamber and 30.000 cells were planted on their pulpal side (area of exposed dentin 0.28 cm2). After 48 hours, the adhesive systems Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond, Adper Prompt or Xeno III were applied on the occlusal side and light-cured for 10s. Single Bond was used as positive and phosphate buffer solution (PBS) as negative control group. The cytotoxicity was measured by MTT assay and cell characteristics were assessed by SEM, after 24 h. The transdentinal diffusion was qualified by GC/MS. Kruskall-Wallis and Mann-Whitney tests demonstrated a significant difference among the adhesives and PBS (p<0.05). The cellular viability reduction promoted by the self-etching systems was lower than that of Single Bond (53,1%). Cell metabolism was reduced in 47,8%; 46,5%; 42,1% and 28,0% for Clearfil SE Bond, Xeno III, Clearfil Protect Bond and Adper Prompt, respectively. HEMA was identified as the main diffused component. It was concluded that all investigated self-etching adhesives demonstrated transdentinal diffusion resulting in reduction of the cellular metabolism, which was not related to their capacity to dissolve the smear layer and demineralize the underlying dentin. / Doutor

O propósito do presente estudo foi avaliar o comportamento de células pulpares humanas expostas ao TGFβ1 e ao aFGF, em cultura, nas seguintes concentrações: TGFβ1 a 1ng/mL, TGFβ1 a 5ng/mL, TGFβ1 a 1ng/mL + aFGF a 5ng/mL, TGFβ1 a 5ng/mL + aFGF a 5ng/mL e aFGF a 5ng/mL. Foi avaliada a morfologia celular, a atividade da fosfatase alcalina, através de ensaio com pNPP como substrato e a expressão das proteínas osteocalcina, sialoproteína óssea e sialofosfoproteína de dentina, através de RT-PCR. Após quatro dias, verificou-se que a média do número de nucléolos no grupo tratado com TGFβ1 a 1ng/mL foi significativamente maior que no grupo tratado com aFGF a 5ng/mL. A média da atividade da fosfatase alcalina no grupo tratado com TGFβ1 a 1ng/mL foi significativamente maior que no grupo tratado com TGFβ1 a 5ng/mL + aFGF a 5ng/mL. Foi observada a expressão de osteocalcina em todas as células pulpares humanas que proliferaram em cultura. Entretanto, no grupo em que foi utilizado o aFGF a 5ng/mL houve diminuição da expressão da osteocalcina. A exposição dos fatores não induziu a expressão de componentes da matriz de dentina tais como BSP e DSPP. Sugere-se que as células expostas ao TGFβ1 1ng/mL foram estimuladas, apresentando uma maior atividade celular e as células expostas ao aFGF 5ng/mL foram inibidas, apresentando uma menor atividade celular. / The aim of the present work was to evaluate the behavior of human dental pulp cells exposed to TGFβ1 and aFGF in culture, at the following concentrations: TGFβ1 1ng/mL, TGFβ1 5ng/mL, TGFβ1 1ng/mL + aFGF 5ng/mL, TGFβ1 5ng/mL + aFGF 5ng/mL e aFGF 5ng/mL. We assessed the cellular morphology, alkaline phosphatase activity, using pNPP as substrate, and expression of osteocalcin, bone sialoprotein, dentin sialophosphoprotein proteins by RT-PCR. After four days, the nucleolus media in the group treated with TGFβ1 1ng/mL was significantly higher than the group treated with aFGF 5ng/mL The alkaline phosphatase activity in the TGFβ1 1ng/mL treated group was significantly higher than the media observed in TGFβ1 5ng/mL + aFGF 5ng/m treated group. Osteocalcin expression was observed in all human dental pulp cell cultures. However, in the aFGF 5ng/mL treated group the osteocalcin expression decreased. The exposure to growth factors did not induced the expression of dentin matrix components such as BSP or DSPP. Our data suggest that the cells exposed to TGFβ1 1ng/mL were stimulated and had a higher cell activity, and that cells exposed to aFGF 5ng/mL were inhibited having a cell activity decrease.

O propósito do presente estudo foi avaliar o comportamento de células pulpares humanas expostas ao TGFβ1 e ao aFGF, em cultura, nas seguintes concentrações: TGFβ1 a 1ng/mL, TGFβ1 a 5ng/mL, TGFβ1 a 1ng/mL + aFGF a 5ng/mL, TGFβ1 a 5ng/mL + aFGF a 5ng/mL e aFGF a 5ng/mL. Foi avaliada a morfologia celular, a atividade da fosfatase alcalina, através de ensaio com pNPP como substrato e a expressão das proteínas osteocalcina, sialoproteína óssea e sialofosfoproteína de dentina, através de RT-PCR. Após quatro dias, verificou-se que a média do número de nucléolos no grupo tratado com TGFβ1 a 1ng/mL foi significativamente maior que no grupo tratado com aFGF a 5ng/mL. A média da atividade da fosfatase alcalina no grupo tratado com TGFβ1 a 1ng/mL foi significativamente maior que no grupo tratado com TGFβ1 a 5ng/mL + aFGF a 5ng/mL. Foi observada a expressão de osteocalcina em todas as células pulpares humanas que proliferaram em cultura. Entretanto, no grupo em que foi utilizado o aFGF a 5ng/mL houve diminuição da expressão da osteocalcina. A exposição dos fatores não induziu a expressão de componentes da matriz de dentina tais como BSP e DSPP. Sugere-se que as células expostas ao TGFβ1 1ng/mL foram estimuladas, apresentando uma maior atividade celular e as células expostas ao aFGF 5ng/mL foram inibidas, apresentando uma menor atividade celular. / The aim of the present work was to evaluate the behavior of human dental pulp cells exposed to TGFβ1 and aFGF in culture, at the following concentrations: TGFβ1 1ng/mL, TGFβ1 5ng/mL, TGFβ1 1ng/mL + aFGF 5ng/mL, TGFβ1 5ng/mL + aFGF 5ng/mL e aFGF 5ng/mL. We assessed the cellular morphology, alkaline phosphatase activity, using pNPP as substrate, and expression of osteocalcin, bone sialoprotein, dentin sialophosphoprotein proteins by RT-PCR. After four days, the nucleolus media in the group treated with TGFβ1 1ng/mL was significantly higher than the group treated with aFGF 5ng/mL The alkaline phosphatase activity in the TGFβ1 1ng/mL treated group was significantly higher than the media observed in TGFβ1 5ng/mL + aFGF 5ng/m treated group. Osteocalcin expression was observed in all human dental pulp cell cultures. However, in the aFGF 5ng/mL treated group the osteocalcin expression decreased. The exposure to growth factors did not induced the expression of dentin matrix components such as BSP or DSPP. Our data suggest that the cells exposed to TGFβ1 1ng/mL were stimulated and had a higher cell activity, and that cells exposed to aFGF 5ng/mL were inhibited having a cell activity decrease.