Polimorfismos em genes de receptores Toll-like (TLR) podem modular o risco de desenvolvimento de infecção, inflamação crônica e câncer. O objetivo deste estudo foi investigar a associação de polimorfismos em TLR ao risco aumentado de desenvolvimento de câncer de cabeça e pescoço, o carcinoma epidermóide (CEC) de boca e de laringe, e lesões bucais com potencial de transformação maligna, como o líquen plano oral (LPO), incluindo lesões idiopáticas e lesões liquenóides (LLO). Para tal foi conduzido um estudo caso-controle com 40 pacientes com CEC de boca, 35 com CEC de laringe, 175 com LPO (129 idiopático e 46 LLO) e 89 controles saudáveis, todos de origem basca. Oito SNP nos TLR1, TLR2, TLR4, TLR6, TLR9 e TLR10 foram genotipados por ensaios TaqMan® ou pirosequenciamento. A análise estatística por meio do teste qui-quadrado mostrou que a variante A, para o SNP TLR2-rs4696480 aumentou significativamente o risco para o desenvolvimento de CEC de boca (p=0.03) e LLO (p=0.0223). O genótipo AT representa risco de desenvolvimento de CEC de boca aumentado em 5.3 vezes quando comparado ao genótipo TT (OR=5.3, IC95%=1.19-13.63), e genótipo AA em 6.6 vezes (OR=6.6, IC95%=1.30-33.89). Quanto ao desenvolvimento de LLO, o genótipo AT representa um aumento no risco de 4.6 vezes comparado ao genótipo TT (OR=4.6, IC95%=1.55-13.38) e o genótipo AA em 4.1 vezes (OR=4.1, IC95%=1.33-12.88). Embora os genótipos AT e AA ocorram com significativa frequência no grupo LPO idiopático (p=0.045), este SNP não foi correlacionado estatisticamente à susceptibilidade de desenvolvimento deste. O SNP TLR2-rs4696480 pode ser relevante para o risco de desenvolvimento de CEC de boca e LLO nesta população, incentivando novos estudos sobre a possível associação destes grupos de doenças e SNP no gene do TLR2, colaborando com a demonstração de polimorfismos de TLR como marcadores úteis do prognóstico e prevenção do câncer de boca. / Polymorphisms in toll-like receptor (TLR) genes may modulate the risk of infection, chronic inflammation and cancer. This study investigated whether TLR polymorphisms were associated with an increased risk of head and neck cancer, including oral (OSCC) and laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC); and oral premalignant disorders such as oral lichenoid disease (OLD), including oral lichen planus (OLP) and oral lichenoid lesions (OLL). This case-control study included 40 OSCC, 35 LSCC, 175 OLD (129 OLP and 46 OLL) patients and 89 healthy controls, all of them from the Basque Country. Genetic polymorphisms in TLR1, TLR2, TLR4, TLR6, TLR9, and TLR10 were genotyped by TaqMan® assays or pyrosequencing. Chi-square analysis showed that the variant A for the SNP TLR2-rs4696480 increased OSCC (p=0.03) and OLL (p=0.0223) risk significantly. AT genotype increases the risk of developing an OSCC by 5.3 times compared with TT genotype (OR=5.3, 95%CI=1.19-13.63), and the AA by 6.6 times (OR=6.6, 95%CI=1.30-33.89). AT genotype increases the risk of developing OLL by 4.6 times compared with TT genotype (OR=4.6, 95%CI=1.55-13.38) and the AA by 4.1 times (OR=4.1, 95%CI=1.33-12.88). Although these mutated genotypes were significantly frequent in the OLP group (p=0.045), this SNP was not correlated with OLP susceptibility. TLR2-rs4696480 polymorphism may be relevant to OSCC and OLL susceptibility in this population; encouraging further studies to assess the possible association of this group of potentially malignant disorders and oral cancer with TLR2 SNP, which may help to demonstrate that TLR polymorphisms may be useful markers to prognosis and cancer prevention.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoabeSP.pdf: 1318134 bytes, checksum: 051d3ab3425024319d41e93c3e0af738 (MD5) Previous issue date: 2010-03-15 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / T regulatory cells have the function of controlling immune responses and maintaining self-tolerance. The FoxP3 has been considered the most specific marker for Treg cells. The aiming of this paper was to evaluate the immunoexpression of FoxP3 in the inflammatory infiltrate from oral lichen planus (OLP) and to compare it with the infiltrate in fibrous inflammatory hyperplasia (FIH) and then, between reticular and erosive forms of OLP. The samples were composed by 32 cases of OLP (17 reticular and 15 erosive) beyond 10 cases of FIH that were submitted to immunohistochemistry staining for FoxP3. Localization of the staining was classified in underepithelial and intraepithelial and the amount of FoxP3+ cells was evaluated through cells counting in 10 consecutive fields, at 400x power magnification. The values were expressed in mean ? standart deviation, and submitted to statistical tests with 5% of significance level. It was observed a statistical significant difference in the amount of FoxP3+ Treg cells between the two combined forms of OLP (1,6 ? 2,2) and the FIH (0,5 ?0,4) (P<0,05). This maybe could be explained by immunological mechanism of OLP, which involves a permanent antigenic induction likely with consequent perpetuation of lesion, eliciting the proliferation and constant recruitment of Treg cells. Otherwise, FIH presents a different etiopathogenesis, in which there is also generation of a variable inflammatory infiltrate, however qualitatively distinct from that seen in OLP. The erosive form of OLP exhibited a greater number (1,7 ? 2,4) of FoxP3+ Treg cells than reticular form (1,5 ? 2,1). These alterations could have relation with the great disease activity verified in erosive OLP, or also, with abnormalities in the regulatory function of Treg cells that could cause the increase observed. Considering the capacity already well established in the literature, both about Treg cells in modulating immune responses, as in the oral mucosa in showing great potential for regeneration, it is suggested that the possibility of development and implantation of immunotherapeutic strategies that regulate the frequency and function of these cells, may help in future treatment of immune-mediated inflammatory diseases such as OLP / As c?lulas T regulat?rias (Treg) possuem a fun??o de controlar respostas imunes e manter a autotoler?ncia. O FoxP3 tem sido considerado o marcador mais espec?fico para c?lulas Treg. O objetivo deste estudo foi avaliar a imunoexpress?o do FoxP3 no infiltrado inflamat?rio do l?quen plano oral (LPO) comparado ao da hiperplasia fibrosa inflamat?ria (HFI) e posteriormente entre as formas reticular e erosiva do LPO. A amostra foi composta por 32 casos de LPO (17 reticulares e 15 erosivos) al?m de 10 casos de HFI que foram submetidos ? marca??o imunoistoqu?mica para o FoxP3. A localiza??o da marca??o foi classificada em justaepitelial ou intraepitelial e a quantidade das c?lulas FoxP3+ foi avaliada atrav?s da contagem destas em 10 campos consecutivos, com aumento de 400x. Os valores foram expressos em m?dia ? desvio-padr?o, e submetidos aos testes estat?sticos com n?vel de signific?ncia de 5%. Observou-se uma diferen?a estatisticamente significativa na quantidade de c?lulas Treg FoxP3+ entre os dois tipos de LPO reunidos (1,6 ? 2,2) e a HFI (0,5 ? 0,4) (P<0,05). Isto talvez possa ser explicado pelo mecanismo imunol?gico do LPO, que envolve uma prov?vel indu??o antig?nica permanente com conseq?ente perpetua??o da les?o, suscitando a prolifera??o e recrutamento constante das c?lulas Treg. Em contrapartida, a HFI apresenta uma etiopatogenia diferente, na qual tamb?m h? gera??o de um infiltrado inflamat?rio vari?vel, por?m qualitativamente distinto do verificado no LPO. A forma erosiva do LPO exibiu um maior n?mero (1,7 ? 2,4) de c?lulas Treg FoxP3+ que a forma reticular (1,5 ? 2,1). Estas altera??es podem ter rela??o com a maior atividade da doen?a verificada no LPO erosivo, ou ainda, com anormalidades na fun??o reguladora das c?lulas Treg que ocasionariam o aumento observado. Considerando-se a capacidade j? bem estabelecida na literatura, tanto das c?lulas Treg modularem as respostas imunol?gicas, quanto da mucosa oral em exibir um grande potencial de regenera??o, sugere-se que a possibilidade de desenvolvimento e implanta??o de estrat?gias imunoterap?uticas que regulem a freq??ncia e a fun??o destas c?lulas, possa futuramente auxiliar no tratamento de doen?as inflamat?rias mediadas imunologicamente, como o LPO

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucianaESCN_DISSERT.pdf: 3458864 bytes, checksum: 6b06fb94520d3a026b77d84075a303b2 (MD5) Previous issue date: 2014-02-20 / Oral lichen planus and pemphigus vulgaris are chronic diseases mucous membrane immune of unknown aetiology that can be observed affecting to the oral mucous. A relevant as regards neoplasies the role angiogenesis in the inflammatory chronic disease pathogenesis as it provides a substancial interest can be considered as being an activity diseases marker; besides being through specialised research of this angiogenic process to improve of understanding pathogenic mechanism. This research proposes to assess angiogenic active through of antibody immunohistochemistry expression antiCD34 antibody in 26 OLP of reticular cases, 14 OLP erosives cases, 18 of PV cases and 15 specimens of normal oral mucosa. The result was submitted non-parametric tests of 5% significance level. It is not statistically significant correlacion was seen regarding between average vessels. However, only be effectively observed the median of OLP cases was larger than pemphigus vulgaris in fact proved average larger than oral normal mucosa (p=0,280). Regarding the microvascular count of CD34 concerning clinic form oral lichen planus (reticular and erosion) increased emphasis is more cross-border average for the form erosion clinic. Despite of the statistic tests could not be more effective (p=0,720). Even though, the results of the research is not sufficient to enable to consider of angiogenic process in the pathogenesis and lesions progression of oral lichen planus and pemphigus vulgaris, we suggest this process is present in both forms lesion, however, more studies must be made in the near future in order to prepare a well-founded proposal / O L?quen Plano Oral e o P?nfigo Vulgar s?o doen?as imunol?gicas cr?nicas mucocut?neas de etiologias desconhecidas que podem acometer a mucosa oral. T?o importante quanto em neoplasias o papel da angiog?nese na patogenia das doen?as inflamat?rias cr?nicas ? de apreci?vel interesse, podendo ser considerado um marcador da atividade da doen?a; al?m de atrav?s da investiga??o desse processo angiog?nico aprimorar o entendimento do mecanismo patog?nico das mesmas. Este trabalho se prop?s a avaliar a atividade angiog?nica atrav?s da express?o imunoistoqu?mica do anticorpo anti-CD34 em 26 casos de LPO reticulares, 14 casos de LPO erosivos e em 18 casos de PV. Os resultados deste experimento foram submetidos a testes estat?stico n?o-param?tricos com n?vel de signific?ncia de 5%. N?o foram observadas diferen?as estatisticamente significativas entre o n?mero m?dio de vasos obtidos pela MVC nas les?es. Todavia, foi observado que a mediana dos casos de l?quen plano oral foi maior que no grupo de p?nfigo vulgar, que por sua vez revelou mediana maior que nos casos de mucosa oral normal (p=0,280). No tocante a contagem microvascular de CD34 em rela??o ? forma cl?nica dos l?quens planos orais (reticular e erosivo), verificou-se uma mediana ligeiramente maior para a forma cl?nica erosiva. Apesar de os testes estat?sticos utilizados n?o demonstrarem diferen?a significativa (p=0,720). Ainda que os resultados do presente estudo n?o permitam a afirma??o contundente da participa??o do processo angiog?nico na patog?nese e progress?o das les?es de l?quen plano oral e p?nfigo vulgar, sugerimos que este processo est? presente em ambas as les?es, por?m outros estudos devem ser realizados a fim de que essa hip?tese seja fundamentada

O objetivo do presente estudo foi diferenciar reações liquenóides de contato (RLC) de lesões de líquen plano oral (LPO) em pacientes do nosso ambulatório. De um total de 45 pacientes (36 mulheres e 9 homens; média idade = 48,7 anos) com lesões sugestivas de LPO, 18 apresentavam características clínicas compatíveis com RLC, ou seja, lesões próximas ou em contato direto com restaurações em amálgama. Estes pacientes foram classificados em classe I (discreta relação da lesão com amálgama), classe II (moderada relação) e classe III (intensa relação). Todos os pacientes com RLC foram encaminhados para realização de teste epicutâneo padrão (alérgenos \"standard\", Grupo Brasileiro de Dermatites de Contato) e específico (materiais odontológicos, Trolab, Hermal, Alemanha). A substituição do amálgama foi indicada para pacientes classe II e III; em pacientes classe I o tratamento foi indicado somente quando apresentavam teste epicutâneo positivo. Dois pacientes foram excluídos deste estudo por não comparecimento às consultas e 1 por não apresentar resultado anátomo-patológico compatível com LPO. Em pacientes classe I (3 casos), apenas um caso apresentou teste epicutâneo positivo, sendo que a substituição da restauração não resultou em melhora clínica da lesão. Em pacientes classe II (9 casos), teste epicutâneo positivo em 8 casos, a substituição resultou em melhora parcial em 7 casos e total em 2 caso. Em pacientes classe III (3 casos), teste epicutâneo positivo em 2 casos, a substituição resultou em melhora total de todos os casos. Existe um número representativo de pacientes com RLC em nosso meio, sendo que estas lesões podem apresentar associação discreta, moderada ou intensa com o amálgama. Pacientes com associação discreta (classe I) não têm benefício após substituição do material restaurador, enquanto pacientes classe II e III beneficiam-se após substituição do amálgama, obtendo resolução parcial ou total das lesões. A caracterização clínica de lesões LPO associada ao amálgama seguida da substituição do material restaurador tem valor superior aos testes epicutâneos em termos de diagnóstico de RLC. / The purpose of this study was to characterize oral lichenoid reactions (OLR) in our clinic. In a group of 45 patients (36 female and 9 male; mean age = 48.7) with oral lichen planus (OLP), 18 were identified as having OLR because these patients had their OLR lesions related to amalgam fillings. These OLR lesions were clinically graded according to their proximity with the amalgam fillings: class I (weak association with amalgam fillings), class II (moderate association), and class III (strong association). All patients were skin patch tested for both standard allergens (Standard - Brazilian Group of Contact Dermatitis, Brazil) and specific allergens (Dental material - TROLAB, Hermal, Germany). Amalgam restoration was replaced in all class II and III patients and in class I only when patients were positive skin patch test. Two patients were excluded from the study because they missed follow ups and one because histopathological analysis does not show OLP features. From 3 cases class I only 1 had positive skin patch test, but did not have improvement of the oral lesions after amalgam replacement. Class II patients (9 cases) positive skin patch test in 8 cases, resulted in substantial improvement in 7 cases and complete resolution in 2 case after amalgam replacement. Class III patients (3 cases) positive patch test in 2 cases, result in complete improvement in all cases after amalgam replacement. We can conclude that there are a representative number of patients with ORL in our clinic showing either a weak, moderate or strong association with amalgam fillings. Patients with a weak association (class I) did not have benefit after amalgam replacement, while patients with a moderate and strong association (class II and III) had benefit after amalgam replacement with substantial improvement or complete resolution of the lesions. Clinical characterization of the association between OLP lesions and amalgam filling, followed by its replacement, outperformed skin patch testing for diagnosing ORL lesions.

O Líquen Plano Oral (LPO) é uma doença inflamatória crônica que pode apresentar quadros sintomáticos por longos períodos, afetando a qualidade de vida dos portadores desta doença. Sua etiologia ainda é desconhecida, desse modo os tratamentos disponíveis atualmente se restringem ao controle dos períodos sintomáticos. Acredita-se que a patogênese do LPO possa estar relacionada com alterações imunológicas e genéticas que levam a uma aberrante ativação das vias de sinalização dos receptores Toll-like (TLR). O objetivo deste estudo foi verificar a expressão do TLR2 e duas variantes genéticas deste receptor (rs1898830 e rs4696480) em estudo caso-controle envolvendo 91 amostras de pacientes com LPO e 83 amostras de indivíduos controles, pareados por sexo e idade. Não foram observadas diferenças na expressão do TLR2 entre grupo caso e controle, e nenhuma das variantes avaliadas foi relacionada com relação de risco para o desenvolvimento de LPO. Poucos estudos avaliaram os TLR no LPO, e os dados da literatura sugerem que a cronicidade da lesão e alterações na tolerância oral poderiam estar associadas a resposta imunológica via TLR2, que apresenta sua expressão inalterada no LPO, de forma que estudos mais aprofundados são necessários para se confirmar a real participação deste grupo de receptores no LPO. / Oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease, which can be symptomatic for long periods, affecting the patient quality of life. LPO etiology still unknown, thus the treatments currently available are limited to symptomatic period. Probably the pathogenesis of OLP is related to immunological and genetic changes that provide aberrant Toll-like receptors (TLR) signaling. The aim of this study was to investigate the expression of TLR2 and two genetic variants of this receptor (rs1898830 and rs4696480) in a case-control study involving 91 samples from OLP patients and 83 samples from control subjects, matched for age and sex. No differenc es were observed in TLR2 expression between case and control groups, and neither of the variants was associated with an increased risk ratio for LPO development. Few studies have been conducted on TLR and OLP, and the literature suggests that the chronicity of the lesion in addition to the changes in oral tolerance may be associated with immune response through TLR2 stimulation, which shows unchanged expression in LPO. Further studies are required to confirm the actual participation of this group of receptors in OLP.

Oral lichen planus (OLP) är en idiopatisk kronisk inflammatorisk sjukdom som drabbar munslemhinnan hos ca 2 % av den svenska befolkningen. Amalgamfyllningar kan framkalla lichenoida kontaktlesioner (cOLL), som kliniskt kan vara svåra att särskilja från OLP. Det är dessutom inte möjligt att skilja mellan OLP och cOLL histologiskt. Det är viktigt att kunna särskilja OLP och cOLL då behandlingen av dem skiljer sig.Toll-like receptorer (TLR) finns på flera av kroppens celler. De är en del av det medfödda immunförsvaret men de har också kopplats till autoimmuna sjuksomar. En ökad förekomst av TLR i skivepitel har påvisats vid OLP.Syftet med denna studie är att undersöka variationer i uttrycket av TLR4 och TLR9 i OLP och cOLL. Vår hypotes är att en histologisk skillnad i OLP och cOLL ska kunna observeras p.g.a. skillnader i patogenesen mellan OLP och cOLL.Metod: Vävnadsprov med histologiskt verifierad lichenoid reaktion valdes från Biobanken, Oral Patologi, Malmö från patienter med de kliniskt ställda diagnoserna OLP (10) och cOLL (12). TLR4 och TLR9 identifierades med hjälp av immunhistokemisk färgning varefter reaktionens lokalisation och intensitet jämfördes mellan de två grupperna.Resultat: En signifikant skillnad observerades i infärgningen av TLR4 hos fibroblaster, lymfocyter och makrofager, där TLR4 var mer positiv i cOLL. Uttrycket av TLR9 hos lymfocyter var starkare vid OLP än cOLL.Slutsats: Våra resultat visade att det finns en skillnad i uttrycket av TLR4 och TLR9 i cOLL och OLP. Resultaten bekräftar att OLP och cOLL har olika patogenes, men ytterligare studier behövs för att klargöra hur. / Oral lichen planus (OLP) is an idiopathic chronic inflammatory disease that affects the oral mucosa in approximately 2% of the Swedish population. Amalgam fillings may induce contact oral lichenoid lesions (cOLL) that can be difficult to clinically distinguish from OLP. It is not possible to histologically distinguish between OLP and cOLL. As their treatments differ, the correct diagnosis is vital.Toll-like receptors (TLR) are expressed by most of the body's cells and are part of the innate immune system, however they have also been linked to certain autoimmune diseases. OLP exhibits an increased amount of TLR in the epithelium.The purpose of this study is to investigate the variations in the expression of TLR4 and TLR9 in OLP and cOLL. Our hypothesis is that a histological difference in OLP and cOLL can be observed due to TLRs different roles in maintaining the immune response.Method: Tissue samples with histologically confirmed lichenoid reactions were chosen from Biobank, Oral Pathology, Malmö, from patients with the clinical diagnosis OLP (10 subjects) and cOLL (12 subjects). TLR4 and TLR9 were identified by immunohistochemical staining and compared between the two groups.Results: A significant difference was observed in TLR4 staining of fibroblasts, lymphocytes and macrophages where the antibody was less expressive in OLP. In TLR9 staining lymphocytes were stronger expressed in OLP compared to cOLL.Conclusion: Our results showed that there was a difference in the expression of TLR4 and TLR9 in cOLL and OLP, this could be a result of OLP being an autoimmune disorder. Further studies on this subject are recommended on this subject. MeSH: "Dental Amalgam", "Dermatitis, Allergic Contact", "Immunohistochemistry", "Lichen Planus, Oral", "Toll-Like Receptor 4", "Toll-Like Receptor 9"

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma das maiores causas de mortalidade e morbidade pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas. A DECH, em sua manifestação crônica (DECHc), ainda não tem sua fisiopatologia totalmente esclarecida; entretanto, o envolvimento do sistema imunológico, por meio de respostas imunes inatas e adaptativas é bem estabelecido na literatura. A DECHc afeta múltiplos órgãos, incluindo as glândulas salivares, o que tem, como causa imediata, a xerostomia. Essas alterações são largamente desconhecidas e sub-relatadas. Assim, esse estudo indagou se o sintoma de xerostomia na DECHc é decorrente de alterações morfológicas e funcionais das glândulas salivares. Para responder essa pergunta analisamos de forma qualitativa e por meio da morfometria, espécimes de biopsias de glândulas salivares labiais de pacientes com DECHc e com sintoma de xerostomia. Foram utilizados como controles, espécimes de biopsias de glândulas salivares de pacientes diagnosticados com Síndrome de Sjögren (SSp) (que é um modelo clássico de xerostomia) e de pacientes com líquen plano oral (LPO) (cujas manifestações clínicas orais podem se assemelhar às da DECHc) e queixa de xerostomia. Também foram analisadas, por meio de ensaio multiplex, as citocinas relacionadas à resposta imune Th17 (importante via imunológica na patogenia da DECHc) na saliva de 21 pacientes de DECHc, 27 de SSp, 10 de LPO e 15 voluntários saudáveis. Os principais achados morfológicos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc foram a extensa fibrose, fibroplasia periductal, atrofia ductal e acinar; alterações vasculares representadas pela congestão e formação de trombos hialinos; e infiltrado inflamatório intersticial difuso de aspecto leve a moderado. As glândulas salivares de SSp, entretanto, apresentaram um infiltrado inflamatório na forma de focos de linfócitos ao redor dos ductos excretores de intensidade moderada a severa; os ductos excretores apresentaram-se atróficos, ectásicos, exibindo metaplasia oncocítica e fibroplasia periductal; as alterações vasculares, por sua vez, se apresentaram em maior proporção na forma de vasculite. No LPO as alterações teciduais foram menos intensas. Quando analisadas as concentrações das citocinas, na DECHc, foram encontradas maiores concentrações de IL-17A, IL-4, IL-17F e IL-10, em relação aos grupos controles, essas citocinas estão envolvidas em mecanismos prófibróticos, o que permitiu a correlação dessa expressão aos eventos escleróticos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc. Entre elas, a IL-17F apresentou uma tendência de aumento em relação a proporção da área de fibrose nas glândulas salivares destes pacientes. A CD40L, que também esteve presente em maior concentração nos pacientes de DECHc, é uma molécula de ligação capaz de amplificar a resposta imunológica no mecanismo de rejeição do enxerto no hospedeiro, além de regular o mecanismo de apoptose e ativar o endotélio para a formação de trombos. As citocinas IL-31, IL-23 e IL-22, também apresentaram relevância na saliva dos pacientes de DECHc, sendo participantes do mecanismo das alterações liquenóides no LPO. Através das análises comparativas foi possível correlacionar a presença de citocinas envolvidas na resposta Th17 com as alterações glandulares e consequente xerostomia nos pacientes de DECHc. / The graft versus host disease (GVHD) is one of the biggest causes of mortality and morbidity after hematopoietic stem cells transplantation. The pathophysiology in the chronical manifestation of the disease (cGVHD), is not entirely elucidated, however the involvement of the immunological system, by means of the innate and adaptive responses are depicted in the literature concerning the disease development. The cGVHD affects multiple organs, including the salivary glands, leading to xerostomia. These alterations are under reported and mostly unknown. Therefore, this study investigated if the symptom of xerostomia in cGVHD is triggered by functional e morphological changes in minor salivary glands. To answer this inquiry specimens of biopsied labial salivary glands from patients of cGVHD and xerostomia were analyzed qualitatively and through morphometry. Specimens of biopsied salivary glands from patients with Sjögren\'s Syndrome (SS) (which is a classic model of xerostomia) and from patients with oral lichen planus (OLP) (whose clinical oral manifestations resemble the cGVHD lesions) were used as controls. Also, the cytokines related to the immunological response Th17 (important immune pathway in cGVHD pathophysiology) in the saliva of 21 cGVHD patients, 27 of SS, 10 patients of OLP and 165 healthy individuals were analyzed using the multiplex assay. The major morphological findings revealed on the salivary glands of cGVHD patients were the extensive fibrosis, periductal fibrosis, ductal and acinar atrophy. Congestion and hyaline thrombi formation were the most important vascular changes shown among these specimens. A diffuse interstitial inflammatory infiltrate was observed, with varied intensity. The SS salivary glands, however, portrayed a focal inflammatory infiltrate, with moderate to severe intensity around the excretory ducts. These ducts exhibited atrophy, ectasia, periductal fibrosis and oncocytic metaplasia. The main vascular change presented in these patients was the manifestation of vasculitis. The salivary glands from the OLP patients showed a lesser amount of alterations. The multiplex assay revealed a higher concentration of the cytokines IL-17A, IL-4, IL-17F and IL-10 in the cGVHD samples, when compared to the other groups. These cytokines are involved within the promotion of fibrosis, which endorsed the association of these secretions with the salivary glands sclerotic mechanisms. The secretion of CD40L was higher in cGVHD samples; this membrane protein is capable of amplifying the immunological response in graft rejection, besides the capacity to regulate apoptosis and activate the endothelium in thrombi formation. The cytokines IL-31, IL-23 and IL-22, also presented a higher concentration in cGHVD patients\' saliva, these secretions are actively involved in the mechanisms of lichenoid lesions in OLP, corroborating the perceived morphological changes. The comparative analysis of the morphological and salivary changes in cGVHD confirmed the correlation of Th17 immunological response within the minor salivary glands injuries and consequent xerostomia in these patients.

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma das maiores causas de mortalidade e morbidade pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas. A DECH, em sua manifestação crônica (DECHc), ainda não tem sua fisiopatologia totalmente esclarecida; entretanto, o envolvimento do sistema imunológico, por meio de respostas imunes inatas e adaptativas é bem estabelecido na literatura. A DECHc afeta múltiplos órgãos, incluindo as glândulas salivares, o que tem, como causa imediata, a xerostomia. Essas alterações são largamente desconhecidas e sub-relatadas. Assim, esse estudo indagou se o sintoma de xerostomia na DECHc é decorrente de alterações morfológicas e funcionais das glândulas salivares. Para responder essa pergunta analisamos de forma qualitativa e por meio da morfometria, espécimes de biopsias de glândulas salivares labiais de pacientes com DECHc e com sintoma de xerostomia. Foram utilizados como controles, espécimes de biopsias de glândulas salivares de pacientes diagnosticados com Síndrome de Sjögren (SSp) (que é um modelo clássico de xerostomia) e de pacientes com líquen plano oral (LPO) (cujas manifestações clínicas orais podem se assemelhar às da DECHc) e queixa de xerostomia. Também foram analisadas, por meio de ensaio multiplex, as citocinas relacionadas à resposta imune Th17 (importante via imunológica na patogenia da DECHc) na saliva de 21 pacientes de DECHc, 27 de SSp, 10 de LPO e 15 voluntários saudáveis. Os principais achados morfológicos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc foram a extensa fibrose, fibroplasia periductal, atrofia ductal e acinar; alterações vasculares representadas pela congestão e formação de trombos hialinos; e infiltrado inflamatório intersticial difuso de aspecto leve a moderado. As glândulas salivares de SSp, entretanto, apresentaram um infiltrado inflamatório na forma de focos de linfócitos ao redor dos ductos excretores de intensidade moderada a severa; os ductos excretores apresentaram-se atróficos, ectásicos, exibindo metaplasia oncocítica e fibroplasia periductal; as alterações vasculares, por sua vez, se apresentaram em maior proporção na forma de vasculite. No LPO as alterações teciduais foram menos intensas. Quando analisadas as concentrações das citocinas, na DECHc, foram encontradas maiores concentrações de IL-17A, IL-4, IL-17F e IL-10, em relação aos grupos controles, essas citocinas estão envolvidas em mecanismos prófibróticos, o que permitiu a correlação dessa expressão aos eventos escleróticos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc. Entre elas, a IL-17F apresentou uma tendência de aumento em relação a proporção da área de fibrose nas glândulas salivares destes pacientes. A CD40L, que também esteve presente em maior concentração nos pacientes de DECHc, é uma molécula de ligação capaz de amplificar a resposta imunológica no mecanismo de rejeição do enxerto no hospedeiro, além de regular o mecanismo de apoptose e ativar o endotélio para a formação de trombos. As citocinas IL-31, IL-23 e IL-22, também apresentaram relevância na saliva dos pacientes de DECHc, sendo participantes do mecanismo das alterações liquenóides no LPO. Através das análises comparativas foi possível correlacionar a presença de citocinas envolvidas na resposta Th17 com as alterações glandulares e consequente xerostomia nos pacientes de DECHc. / The graft versus host disease (GVHD) is one of the biggest causes of mortality and morbidity after hematopoietic stem cells transplantation. The pathophysiology in the chronical manifestation of the disease (cGVHD), is not entirely elucidated, however the involvement of the immunological system, by means of the innate and adaptive responses are depicted in the literature concerning the disease development. The cGVHD affects multiple organs, including the salivary glands, leading to xerostomia. These alterations are under reported and mostly unknown. Therefore, this study investigated if the symptom of xerostomia in cGVHD is triggered by functional e morphological changes in minor salivary glands. To answer this inquiry specimens of biopsied labial salivary glands from patients of cGVHD and xerostomia were analyzed qualitatively and through morphometry. Specimens of biopsied salivary glands from patients with Sjögren\'s Syndrome (SS) (which is a classic model of xerostomia) and from patients with oral lichen planus (OLP) (whose clinical oral manifestations resemble the cGVHD lesions) were used as controls. Also, the cytokines related to the immunological response Th17 (important immune pathway in cGVHD pathophysiology) in the saliva of 21 cGVHD patients, 27 of SS, 10 patients of OLP and 165 healthy individuals were analyzed using the multiplex assay. The major morphological findings revealed on the salivary glands of cGVHD patients were the extensive fibrosis, periductal fibrosis, ductal and acinar atrophy. Congestion and hyaline thrombi formation were the most important vascular changes shown among these specimens. A diffuse interstitial inflammatory infiltrate was observed, with varied intensity. The SS salivary glands, however, portrayed a focal inflammatory infiltrate, with moderate to severe intensity around the excretory ducts. These ducts exhibited atrophy, ectasia, periductal fibrosis and oncocytic metaplasia. The main vascular change presented in these patients was the manifestation of vasculitis. The salivary glands from the OLP patients showed a lesser amount of alterations. The multiplex assay revealed a higher concentration of the cytokines IL-17A, IL-4, IL-17F and IL-10 in the cGVHD samples, when compared to the other groups. These cytokines are involved within the promotion of fibrosis, which endorsed the association of these secretions with the salivary glands sclerotic mechanisms. The secretion of CD40L was higher in cGVHD samples; this membrane protein is capable of amplifying the immunological response in graft rejection, besides the capacity to regulate apoptosis and activate the endothelium in thrombi formation. The cytokines IL-31, IL-23 and IL-22, also presented a higher concentration in cGHVD patients\' saliva, these secretions are actively involved in the mechanisms of lichenoid lesions in OLP, corroborating the perceived morphological changes. The comparative analysis of the morphological and salivary changes in cGVHD confirmed the correlation of Th17 immunological response within the minor salivary glands injuries and consequent xerostomia in these patients.

Abstract Oral lichen planus (OLP) is a chronic immune-mediated mucosal disease with unknown etiology. According to the current view, the pathogenesis of OLP involves activation of T-cell mediated immunity against the epithelial keratinocytes. A proportion of OLP patients are affected by painful symptoms, and the risk of oral cancer is increased in OLP. There is no curative treatment for OLP. Topical corticosteroids are used most commonly in the management of OLP. However, the evidence base for the effectiveness of any therapy is weak. The objective of this thesis was to study novel aspects of OLP etiopathogenesis and management. An epidemiologic, retrospective case-control study was conducted to determine whether systemic diseases, in particular thyroid diseases, are associated with OLP. In addition, a randomized controlled trial comparing the effectiveness of topical tacrolimus, triamcinolone acetonide and placebo in symptomatic OLP was carried out. Furthermore, immunohistochemical expression of toll-like receptors 4 and 9, hyaluronan and its principal receptor CD44 antigen, hyaluronan synthases 1-3, hyaluronidases 1-2 and cathepsin K was studied in OLP tissue samples and in healthy oral mucosa. The effect of topical tacrolimus on the expression of these molecules in OLP was also studied. The results of the present study showed that a history of hypothyroidism was associated with an approximately twofold risk of having OLP. Furthermore, both tacrolimus and triamcinolone acetonide were more efficient than placebo in reducing the signs and symptoms of OLP. No statistically significant differences were noted in the efficacy between tacrolimus and triamcinolone acetonide. In addition, the expression of the studied molecules was altered in the epithelium or stroma in OLP compared to healthy oral mucosa. Tacrolimus treatment decreased the expression of CD44 antigen in the stroma and the expression of cathepsin K in the epithelium in OLP. In conclusion, the present study extends our knowledge about systemic associated factors and management of OLP. In addition, the results improve our understanding of molecular level changes that occur in OLP. / Tiivistelmä Suun punajäkälä on krooninen immuunivälitteinen limakalvotauti, jonka etiologia on tuntematon. Taudin syntymekanismiin liittyy tämän hetkisen näkemyksen mukaan T-soluvälitteisen immuniteetin aktivoituminen epiteelin keratinosyyttejä vastaan. Suun punajäkälä aiheuttaa osalle potilaista kivuliaita oireita ja lisää suusyövän riskiä. Parantavaa hoitoa tautiin ei ole. Yleisimmin suun punajäkälän oireiden hoidossa käytetään paikallisia kortikosteroidivalmisteita. Kuitenkin eri hoitomuotojen tehosta on vain heikkoa näyttöä. Tämän väitöskirjatyön tarkoituksena oli tutkia uusia näkökohtia liittyen suun punajäkälän etiopatogeneesiin ja hoitoon. Epidemiologisessa tapaus-verrokkitutkimuksessa selvitettiin, liittyvätkö yleissairaudet, erityisesti kilpirauhassairaudet, suun punajäkälään. Lisäksi satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa verrattiin paikallisen takrolimuusin, triamsinoloniasetonidin ja lumelääkkeen tehoa oireisesta suun punajäkälästä kärsivillä potilailla. Tutkimuksessa selvitettiin myös tollin kaltaisten reseptorien 4 ja 9, hyaluronaanin ja sen pääasiallisen reseptorin CD44-antigeenin, hyaluronaanisyntaasien 1–3, hyaluronidaasien 1–2 sekä katepsiini K:n immunohistokemiallista ilmentymistä suun punajäkälänäytteissä ja terveessä suun limakalvossa. Lisäksi tutkittiin takrolimuusihoidon vaikutusta näiden molekyylien ilmentymiseen suun punajäkälässä. Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että kilpirauhasen vajaatoimintaan liittyi noin kaksinkertainen riski sairastaa suun punajäkälää. Lisäksi havaittiin, että suun punajäkälässä sekä takrolimuusi että triamsinoloniasetonidi ovat tehokkaampia kuin lumelääke oireiden ja kliinisen taudinkuvan lievittämisessä. Takrolimuusin ja triamsinoloniasetonidin tehossa ei todettu tilastollisesti merkitseviä eroja. Lisäksi suun punajäkälänäytteissä tutkittujen molekyylien ilmentyminen oli muuttunut joko epiteelissä tai stroomassa verrattuna terveeseen limakalvoon. Takrolimuusihoito vähensi CD44-antigeenin ilmentymistä stroomassa ja katepsiini K:n ilmentymistä epiteelissä suun punajäkälässä. Yhteenvetona voidaan todeta, että tämä tutkimus lisää tietoa suun punajäkälään liittyvistä systeemisistä tekijöistä ja suun punajäkälän hoidosta. Lisäksi löydökset lisäävät ymmärtämystä suun punajäkälässä tapahtuvista molekyylitason muutoksista.