Resumo: Orquídeas estão entre as plantas mais distribuídas pelo mundo e mais cultivadas, sendo muito apreciadas por sua diversidade de cores e formas. Entretanto, estudos acerca de desenvolvimento e nutrição deste grupo de plantas são incipientes. Este trabalho teve como objetivo estudar o desenvolvimento e o acúmulo de nutrientes de 2 espécies de orquídeas cultivadas em condições de ambiente protegido, em vaso: i) Dendrobium nobile Lindl, ii) Miltonia flavescens Lindl. var. stellata Regel. As plantas foram adubadas semanalmente com 100 mL da solução nutritiva de Sarruge a 75% da concentração. Foi coletada mensalmente, durante 12 meses, de forma aleatória, 1 planta/repetição (totalizando 4). Estas foram avaliadas quanto ao número de folhas, área foliar, número, comprimento e diâmetro de pseudobulbos, número de brotos. Depois de lavadas e secas, determinaram-se a massa de matéria seca e os nutrientes nas diferentes partes. Até a fase do florescimento (240 DAPA), ambas as espécies já haviam acumulado mais de 50% do total de matéria seca verificado ao final das avaliações. A ordem de absorção e a quantidade de nutrientes absorvidos, ao final do ensaio foram: i) Dendrobium - macronutrientes, em mg planta-1, K (701,07) > N (339,44) > Ca (289,03) > Mg (135,44) > P (118,83) > S (23,56); micronutrientes, em Vg planta-1, Fe (14122,35) > Zn (5277,82) >Mn (3216,87) > B (1253,02) > Cu (271,25). ii) Miltonia - macronutrientes, em mg planta-1, K (316,93) > Ca (177,55) > N (143,48) > Mg (72,23) > P (66,65) > S (8,83); micronutrientes, em Vg planta-1, Fe (8939,8) > Zn (4938,1) > Mn (2571,7) > B (802,26) > Cu (208,96). / Abstract: Orchids are among the plants more distributed throughout the world and more cultivated. They are very appreciated for their diversity of colors and forms. However, studies concerning the development and nutrition of this group of plants are incipient. This work had as objective to study the development and the accumulation of nutrients of 2 species of orchids, cultivated in conditions of greenhouse, in vase: i) Miltonia flavescens Lindl. var. stellata Regel; ii) Dendrobium nobile Lindl.. The plants were weekly fertilized with 100 mL of the nutritive solution of Sarruge at 75% of concentration. It was collected monthly, for 12 months, in a random way, 1 plant/repetition (totalizing 4). The number of leaves; the leaf area; number, length and diameter of pseudobulbs and the number of sprouts were evaluated. After washing and drying the plants, the mass of dry matter and the nutrients in the different parts were determined. Until the period of the flowering (240 DAPA), both species had already accumulated more than 50% of the total dry matter verified at the end of the evaluations. The absorption order and the amount of absorbed nutrients, at the end of the experiment were: i) Dendrobium - macronutrients, in mg plant-1 K (701.07)> N (339.44)> Ca (289.03)> Mg (135.44)> P (118.83)> S (23.56); micronutrients, Vg plant-1, Fe (14122.35)> Zn (5277.82)> Mn (3216.87)> B (1253.02)> Cu (271.25). ii) Miltonia - macronutrients, in mg plant-1, K (316.93)> Ca (177.55)> N (143.48)> Mg (72.23)> P (66.65)> S (8.83); micronutrients, Vg plant-1, Fe (8939.8)> Zn (4938.1)> Mn (2571.7)> B (802.26)> Cu (208.96). / Orientador: Kathia Fernandes Lopes Pivetta / Coorientador: Roberto Lyra Villas Bôas / Coorientador: Ricardo Tadeu de Faria / Banca: Roberto Jun Takane / Banca: Maria Esmeralda Soares Payão Dematte / Mestre

Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Banca: Kathia Fernandes Lopes Pivetta / Banca: Ricardo Tadeu de Faria / Resumo: A rizosfera favorece a colonização radicular por rizobactérias promotoras do crescimento de plantas (RPCPs), as quais podem oferecer importantes benefícios para a hospedeira. Este estudo teve o objetivo de isolar e identificar bactérias produtoras de auxinas das espécies Cattleya walkeriana, Cyrtopodium paludicolum, Ionopsis utricularioides, Oeceoclades maculata, Phalaenopsis amabilis e Vanilla planifolia e avaliar a inoculação de sementes e plântulas da orquídea brasileira Cattleya walkeriana. Ao total, foram isolados 85 bactérias, 67 delas produtoras de auxinas (quantificados por ensaios colorimétrico e detectados por CLAE) e 26 foram identificadas pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. Seis isolados produtores de auxinas foram inoculados em bioensaios. Para a inoculação in vitro, sementes foram inoculadas com os isolados Burkholderia RzW32, Enterobacter Endw37, Curtobacterium Endw57, Bacilllus EndW60 e testemunha representada por água destilada autoclavada em meio nutritivo Knudson-C e mantidas em câmara de incubação com luminosidade e temperatura controladas. Após 120 dias, a germinação do tratamento controle apresentou-se bem desenvolvida, ao contrário de sementes dos tratamentos inoculados. No experimento de bacterização ex vitro, plântulas germinadas em cultivo assimbiótico in vitro foram inoculadas com os isolados Burkholderia RzW32, Curtobacterium RzW35, Enterobacter EndW37, Bacillus EndW48 e testemunha. Após 90 dias de cultivo em condições de casa de vegetação, foram avaliados porcentagem de sobrevivência, área foliar, número de raízes, comprimento das raízes, massa de matéria seca da parte radicular e da parte aérea, índice de aumento da área foliar e índice de aumento da massa seca total. Curtobacterium sp. e Burkholderia sp. proporcionaram a menor eficiência para o crescimento enquanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The rhizosphere promotes root colonization by Plant growthpromoting rizobacteria (PGPR), which may offer significant benefits to the host . This study aimed to isolate and identify auxin-producing bacteria of the species Cattleya walkeriana, Cyrtopodium paludicolum, Ionopsis utricularioides, Oeceoclades maculata, Phalaenopsis amabilis and Vanilla planifolia, and evaluate seeds and seedlings innoculation of the Brazilian orchid Cattleya walkeriana. In total, 85 bacteria were isolated, 67 of them produce auxins (quantified by colorimetric assays and detected by HPLC) and 26 were identified by partial sequencing of 16S rRNA gene. Six-producing isolates were inoculated in auxin bioassays. For in vitro inoculation, seeds were inoculated with isolates Burkholderia RzW32, Enterobacter Endw37, Curtobacterium Endw57, Bacilllus EndW60 and control represented by distilled autoclaved water in nutrient medium Knudson-C and kept in an incubation chamber with controlled temperature and luminosity. After 120 days, the germination of the control treatment presented was well developed, unlike seeds of inoculated treatments. In the experiment of bacterization ex vitro, asymbiotic in vitro germinated seedlings were inoculated with isolates Burkholderia RzW32, Curtobacterium RzW35, Enterobacter EndW37, Bacillus EndW48 and control. After 90 days of cultivation in a greenhouse, were evaluated for survival percentage, leaf area, number of roots, root length, dry matter of the root and shoot, rate of increase in leaf area index and increase in total dry mass. Curtobacterium sp. RzW35 and Burkholderia sp. RzW32 provided the lowest efficiency for growth while Bacillus sp. EndW48 and Enterobacter sp. EndW37 to encourage growth in all parameters investigated and may be recommended for growth and survival during ex vitro acclimatization of seedlings of Cattleya walkeriana. / Mestre

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-12T14:09:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kellen Cristhina Inácio Sousa - 2012.pdf: 5012340 bytes, checksum: 5d359d0996e1d7af5f7a16ae553d8b85 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-12T14:26:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kellen Cristhina Inácio Sousa - 2012.pdf: 5012340 bytes, checksum: 5d359d0996e1d7af5f7a16ae553d8b85 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-12T14:26:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kellen Cristhina Inácio Sousa - 2012.pdf: 5012340 bytes, checksum: 5d359d0996e1d7af5f7a16ae553d8b85 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In Brazil, 2500 to 3000 species of orchids have been reported to occur, of which 300 are found in the “cerrado” region. The orchids Cyrtopodium saintlegerianum (epiphyte) and Epidendrum nocturnum (rupicola) occur in areas anthropized of cerrado and cerrado rupestre, respectively. The orchids posses mycorrhizal association with rhizoctonia-like and endophytic fungi. The identification of these fungi can be done by microscopic and morphological characters. Root infecting fungi also are utilized for in vitro symbiotic germination of orchid seeds, aiming the conservation of plant species and fungi. The objective of the present investigation was isolation and morphological characterization of mycorrhizal and endophytic fungi originating from roots of C. saintlegerianum and E. nocturnum, as well as symbiotic in vitro seed germination. Three isolates of Epulorhiza sp. from each one of C. saintlegerianum, and E. nocturnum and two of Rhizoctonia sp. from E. nocturnum were obtained. Also, two isolates of Xylaria sp. were obtained from roots of C. saintlegerianum. There were, however, differences among isolates Epulorhiza sp. of C. saintlegerianum and of the E. nocturnum, in relation to morphological and enzymatic characters. The fungus was localized in root tissues of both species by optical and scanning electronic microscopes. The seed viability was tested by tetrazolium chloride and found 80.3 and 32.33% viable embryos of C. saintlegerianum and E. nocturnum, respectively. There was no in vitro symbiotic germination of E. nocturnum due to low seed viability. Two experiments of symbiotic germination of C. saintlegerianum seeds were conducted, both under photoperiods of 16/8 h (light/dark) at 26°C ± 2°C. The treatments were two isolates of Xylaria sp., three plant pathogens (Rhizoctonia solani of common beans and R. oryzae of rice ), and three mycorrhiza of C. saintlegerianum, two of Cyrtopodium vernum, and one ofE. nocturnum. Of three culture media tested, germination was obtained only in oat meal agar culture. The isolate En07 of Rhizoctonia sp. from E. nocturnum was found better for seed germination with 81.64 and 90.73% of germination of experiments 1 and 2, respectively. One non-specific isolate, two plant pathogenic isolates and one specific isolate were efficient for seed germination of C. saintlegerianum. On the other hand, for symbiotic in vitro seed germination of C. saintlegerianum, there was no specificity between this orchid and only one rhizoctonia-like fungus. These results showed that C. saintlegerianum can be propagated utilizing different root infecting fungi, which facilitates future programs of reintroduction and commercialization of species. / O Brasil possui entre 2500 e 3000 espécies de orquídeas, das quais cerca de 300 são encontradas em áreas de Cerrado. Cyrtopodium saintlegerianum (epífita) e Epidendrum nocturnum (rupícola) ocorrem em áreas antropizadas de Cerrado e Cerrado Rupestre, respectivamente. As orquídeas possuem associação micorrízica com fungos rizoctonioides, e fungos endofíticos também podem ser encontrados nessas plantas. Os fungos rizoctonioides são utilizados para a germinação simbiótica in vitro de sementes de orquídeas, tendo em vista a conservação das espécies vegetais e fúngicas. O presente trabalho objetivou o isolamento e a caracterização morfológica de fungos oriundos do sistema radicular de C. saintlegerianum e E. nocturnum, visando a germinação simbiótica in vitro de suas sementes. Foram obtidos três isolados de Epulorhiza sp. para C. saintlegerianum, e para E. nocturnum obteve-se três de Epulorhiza sp. e dois de Rhizoctonia sp. Das raízes de C. saintlegerianum também foram obtidos dois isolados de Xylaria sp. Houve diferença entre os isolados de Epulorhiza sp. oriundos de C. saintlegerianum e os originários de E. nocturnum quanto as características morfológicas e enzimáticas. Os fungos micorrízicos foram histolocalizados, por microscopia óptica e eletrônica de varredura, em raízes de ambas as espécies. A viabilidade de sementes foi realizada pelo teste do cloreto de tetrazólio e verificou-se 80,3 e 32,33% de embriões viáveis para C. saintlegerianum e para E. nocturnum, respectivamente. Não houve germinação simbiótica in vitro de E. nocturnum devido a baixa viabilidade das sementes. Para as sementes de C. saintlegerianum foram realizados dois experimentos de germinação simbiótica, ambos em fotoperíodo de 16/8 h (Luz/Escuro) a 26°C ± 2°C. Os tratamentos foram dois isolados de Xylaria sp., três fitopatogênicos (Rhizoctonia solani de feijão e R. oryzae de arroz), e três micorrízicos de C. saintlegerianum, dois de Cyrtopodium vernum Rchb.f. & Warm., e um de E. nocturnum. Foram testados três meios de cultivo, mas somente o meio agar aveia padrão proporcionou a germinação. Verificou-se que o isolado En07 de Rhizoctonia sp. oriundo de E. nocturnum foi o melhor para germinar as sementes com 81,64 e 90,73% de germinação nos experimentos 1 e 2, respectivamente. Observou-se que um isolado não específico, dois isolados fitopatogênicos e um específico foram eficientes em germinar as sementes de C. saintlegerianum. Portanto, para a germinação simbiótica in vitro de C. saintlegerianum não houve especificidade entre esta orquídea e um único fungo rizoctonioide. Estes resultados indicam que C. saintlegerianum pode ser propagada utilizando fungos rizoctonioides, o que facilita futuros programas de reintrodução e comercialização da espécie.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2016-08-09T13:49:45Z No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-08-09T14:42:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T14:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacristinaatalaalves.pdf: 6650791 bytes, checksum: 635340f2a060916599b1c5e7d0a1e1c2 (MD5) Previous issue date: 2015-12-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A anatomia ecológica vegetal investiga estratégias adaptativas das plantas quanto ao local que habitam. As folhas são os órgãos vegetativos com maior plasticidade fenotípica em resposta aos fatores ambientais: radiação solar, temperatura, umidade relativa do ar e velocidade do vento. As flores apresentam pistas de como ocorrem interações químicas com seus polinizadores. O Parque Estadual do Ibitipoca (PEIB), Minas Gerais, Brasil, apresenta um mosaico de fitofisionomias, e suas respectivas condições edafoclimáticas podem influenciar na adaptação das Orchidaceae, família de plantas mais representativa do parque, quanto à estrutura e química das folhas e dos recursos florais. Objetivou-se verificar: 1- A estrutura do elaióforo e a composição química de sua secreção em Oncidium donianum Bateman ex W.H.Baxter e O. warmingii Rchb.f.; 2- As adaptações morfo-anatômicas, fisiológicas e químicas das folhas das orquídeas Hadrolaelia coccinea (Lindl.) Chiron, Pleurothallis rubens Lindl. e Prosthechea pachysepala (Klotzsch) Chiron & V.P. Castro no interior (I) e na borda (B) da nanofloresta nebular; 3- As adaptações morfo-anatômicas, fisiológicas e químicas das folhas das orquídeas Zygopetalum maculatum (Kunth) Garay e Epidendrum secundum Jacq. em duas cotas altimétricas, à 1200 e 1784m. Aferições climáticas foram realizadas com o termohigrógrafo Instrutherm Thall 300 em todas as fitofisionomias estudadas nas quatro estações do ano. Elaióforos de flores jovens, maduras e senescentes de O. donianum e de O. warmingii foram coletados para análises morfo-anatômicas, microscópicas de varredura, confocal de varredura à laser, transmissão e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Para as análises morfo-anatômicas foram coletadas folhas de H. coccinea, P. rubens, P. pachysepala no I e B; e folhas de Z. maculatum e E. secundum, em diferentes altitudes. Quantificação de clorofilas, testes histoquímicos e análises químicas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de fotodiodo (CLAEDAD) foram realizadas em três folhas coletadas de três indivíduos de cada espécie por fitofisionomia. O índice de plasticidade fenotípica (IPF) foi calculado para cada variável morfológica, anatômica e fisiológica. Para avaliar as diferenças de cada variável entre as duas fitofisionomias utilizou-se teste t-student ou teste não paramétrico de Mann-Whitney. A radiação solar global (µmmolm-2s-1) foi maior na B em comparação ao I. Os elaióforos de O. donianum e de O. warmingii são do tipo epidermal e secretam material lipídico representado quimicamente por hidrocarbonetos de cadeia longa. Hadrolaelia coccinea e P. pachysepala apresentaram respostas morfo-anatômicas semelhantes, configurando tipos funcionais similares. Pleurothallis rubens apresentou diferenças significativas apenas para três variáveis no inverno e duas no verão. Maiores teores de flavonoides foram produzidos por P. pachysepala e P. rubens na B, como resposta fotoprotetora. Diferenças significativas para produção de flavonoides foram observadas apenas nas estações verão e inverno, com maiores produções no I e B, respectivamente, para P. pachysepala e o contrário para P. rubens, o que provavelmente esteja relacionado à defesa constitutiva na primeira e fotoproteção na segunda. Hadrolaelia coccinea foi a orquídea de maior IPF, o que possibilita maiores sobrevivência às oscilações climáticas e amplitude de distribuição geográfica. A umidade relativa do ar e a velocidade do vento foram maiores na alta altitude. Zygopetalum maculatum e E. secundum apresentaram respostas adaptativas diferenciadas quanto às cotas altimétricas. Maiores teores de flavonoides foram produzidos por Z. maculatum na baixa altitude como resposta ao maior estresse hídrico. Epidedrum secundum obteve maior IPF. Este trabalho gerou contribuições para a compreensão da dinâmica das adaptações das orquídeas no PEIB e para adoção de medidas preventivas à sua conservação e ao ecossistema no qual elas se encontram. / Plant ecological anatomy investigates plants adaptive strategies as to the place they inhabit. The leaves are the vegetative organs of higher phenotypic plasticity in response to environmental factors: solar radiation, temperature, relative humidity and wind speed. The flowers have important clues as occurring chemical interactions with their pollinators. The Ibitipoca State Park (PEIB), MG, Brazil, presents a mosaic of vegetation types, and their soil and weather conditions may influence the adaptation of Orchidaceae, family most representative plants of the park. The goals were to assess: 1- The structure of the elaiophore and the chemical composition of its secretion in Oncidium donianum Bateman ex W.H.Baxter and O. warmingii Rchb.f. of the PEIB; 2- The morphological, anatomical, physiological and chemical leaves adaptations of orchids Hadrolaelia coccinea (Lindl.) Chiron, Pleurothallis rubens Lindl. and Prosthechea pachysepala (Klotzsch) Chiron & VP Castro inside and on the edge of nebular nanofloresta of PEIB; 3- The morphological, anatomical, physiological and chemical leaves adaptations of orchids Zygopetalum maculatum (Kunth) Garay and Epidendrum secundum Jacq. in two elevations, the 1200 and 1784m, of PEIB. Climate measurements were performed with Instrutherm Thal 300 thermohygrograph, in all vegetation types studied in the four seasons. Elaiophores of young, mature and senescent flowers of O. donianum and O. warmingii were collected for morphological and anatomical analysis, as well as for analyses with scanning confocal microscope, laser scanning microscope, transmission microscope and gas chromatography-mass spectrometry (GCMS). For morphological and anatomical analyzes were collected H. coccinea, P. rubens, P. pachysepala leaves in the nebular nanofloresta and edge; and Z. maculatum e E. secundum leaves at different altitudes. Quantification of chlorophylls, histochemical tests and chemical analysis by high-performance liquid chromatography coupled with photodiode array detector (HPLC-DAD) were conducted in three leaves collected from three individuals of each species per vegetation type. The phenotypic plasticity index (IPF) was calculated for each morphological, anatomical and physiological variable. To assess the significant difference of each variable between the two vegetation types we used Student t test or nonparametric Mann-Whitney.The global solar radiation (µmmolm-2s-1) was higher at the edge compared to nanofloresta nebular. The elaiophores of O. donianum and O. warmingii are epidermal and secrete lipid material chemically represented by long chain hydrocarbons. Higher flavonoid content was produced by P. pachysepala and P. rubens at the edge, as photoprotective response. The flavonoid synthesis was statistically significant only in the summer and winter seasons, with higher yields and inside edge, respectively, for P. pachysepala and the opposite to P. rubens, which is probably related to the constitutive defense in the first and the second photoprotection. Hadrolaelia coccinea was the most IPF, so most likely to survive the environmental fluctuations and shows greater geographical distribution. The relative humidity and wind speed were higher at 1784m. Zigopetalum maculatum and E. secundum showed different adaptive responses regarding altitudes. Higher average content of flavonoids was produced by Z. maculatum at the 1200m. Epidendrum secundum detected the higher IPF. This work led to contributions to the understanding of the dynamics of adaptations of orchids in PEIB and to adopt preventive measures for its conservation and ecosystem in which they operate.

The orchid family covers 90 percent of the rarest plants under protection all over the world. The ecological and economic value of orchids has aroused public awareness. Since vegatitve propagation methods are available, development of in vitro methods are essential for conservation and commercialization of plants. Purposes work was elaboration progress of vegetative multiplication for tropical orchid Macodes petola in conditions in vitro. At research were proof 4 methods, which distinguish in using desinfection, in operating time and in using different nutritive mediums.

Cette thèse aborde l’écologie et l’évolution des relations qu’entretiennent les orchidées du genre Ophrys avec leurs pollinisateurs. L’approche comparative et la combinaison (i)<p>d’analyses chimiques de phéromones sexuelles et de parfums floraux, (ii) d’analyses génétiques avec des outils moléculaires, et (ii) de tests de comportement réalisés sur les insectes in situ nous ont permis d’éclairer certains aspects méconnus de ces interactions inter-spécifiques. La pollinisation des orchidées du genre Ophrys est assurée par des mâles d'abeilles ou de guêpes solitaires qui opèrent une tentative d’accouplement (pseudocopulation) sur le labelle des fleurs. L'attraction des pollinisateurs est généralement hautement spécifique, régie par un mimétisme des signaux (chimiques, visuels, tactiles) des femelles des espèces d'insectes concernés. Malgré cette spécificité, des hybrides se forment occasionnellement en conditions naturelles, témoignant de la perméabilité partielle des barrières d'isolement reproductif entre espèces. Au cours de<p>ce programme de recherche, nous avons entrepris l’étude des interactions Ophryspollinisateurs en mettant l’accent sur trois aspects spécifiques, à savoir (i) la sélection des caractères floraux par les pollinisateurs, (ii) l'isolement reproductif entre espèces d'Ophrys sympatriques, et enfin (iii) l'évolution des caractères floraux au sein d'un complexe d'espèces-soeurs d'Ophrys associées à différents pollinisateurs. Les principaux<p>résultats de ce travail sont repris ci-dessous, ponctués de références aux articles qui rassemblent l’intégralité des études réalisées. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Na natureza, as orquídeas são totalmente dependentes de fungos micorrízicos para germinar. Estes fungos podem penetrar nas células das raízes e formar pélotons, os quais, quando digeridos pela planta, providenciam açúcares simples para o embrião. Durante a fase aclorofilada de desenvolvimento da plântula, orquídeas são obrigatoriamente dependentes dos fungos; algumas continuam assim por toda vida enquanto outras se tornam facultativamente responsivas à colonização. O objetivo deste trabalho foi identificar quantos clados de fungos podem estabelecer associação micorrízica com Coppensia doniana (sin. Oncidium donianum), uma orquídea amplamente distribuída nos arredores de Campos do Jordão e, demonstrar como as características morfológicas dos isolados, quando analisadas com ferramentas de estatística multivariada, podem ser úteis para a taxonomia destes fungos. Dez plantas foram amostradas em um sítio com vegetação típica de campos de altitude, junto ao Parque Estadual de Campos do Jordão. Fungos foram isolados pela transferência asséptica de cortes de raízes contendo pélotons para meios de cultura BDA modificados. Três clados de fungos foram formados, tanto analisando as características qualitativas das culturas quanto as quantitativas. Os clados foram identificados como dois morfotipos do gênero Ceratorhiza (fase anamórfica de Ceratobasidium) e uma Rhizoctonia-uninucleada. O sequenciamento da região ITS produziu resultados idênticos a estes, mostrando os mesmos três clados. Todas as sequências tiveram alta correlação com sequências de Ceratobasidium depositadas no Genbank, o que sugere uma alta afinidade de Coppensia doniana com este gênero. Também ficou demonstrado que os dados morfológicos, quando associados à estatística multivariada são uma ferramenta útil na taxonomia polifásica de Rhizoctonia spp. As sequências dos isolados de Coppensia doniana também foram comparadas com as de isolados de outras orquídeas, dentro da subtribo Oncidiinae, incluindo: Ionopsis utricularioides e Psygmorchis pussila, coletadas na região do Valle del Cauca Colômbia e isolados de 10 Ionopsis utricularioides, Oncidium altissimum e Tolumnia variegata, estudados por Otero (2002, 2004, 2007), em diferentes regiões de Porto Rico, Costa Rica, Cuba e Panamá. Esta última análise veio a comprovar a preferência de orquídeas da subtribo Oncidiinae por fungos do gênero Ceratobasidium, apesar de que os clados obtidos no Brasil e na Colômbia foram distantes filogeneticamente dos clados previamente estudados na América Central. Representantes dos três clados obtidos de C. doniana em Campos do Jordão foram também testados quanto à capacidade de induzir germinação em suas sementes. Todos isolados testados tiveram sucesso na germinação das sementes, levando as plântulas a estádios avançados de desenvolvimento após 30 dias, o que indica um alto potencial para utilização biotecnológica destes isolados para a germinação das sementes destas orquídeas, tanto para a floricultura comercial quanto para programas de reintrodução de espécies de orquídeas ameaçadas de extinção. / In nature, orchids are fully dependent on mycorrhizal fungi for germination. These fungi can penetrate root cells and form pelotons, whose digestion provides simple sugars for the embryo. During the achlorophyllous seedling stage, orchids are obligatory dependent on the fungi, and some species remain so through life, while others become facultatively responsive to fungal infection. The aim of this study was to identify how many fungal clades can establish mycorrhizal associations with Coppensia doniana, a widespread orchid from Campos do JordãoBrazil, and to demonstrate how their morphological features, analyzed with multivariate statistics, can be useful for classification. Ten plants were sampled in an Araucaria forest near Campos do Jordão. Fungi were isolated by transferring surface disinfected root segments containing pelotons to PDA culture medium. Three main fungal clades were formed by qualitative and quantitative morphological data. They were identified as two morphotypes of Ceratorhiza (anamorphic stage of Ceratobasidium) and one uninucleated Rhizoctonia. The ITS sequencing corroborates this identification, since the same three clades were found. All sequences were highly correlated to Ceratobasidium ITS data deposited at the Genebank, suggesting a high affinity between this species of Oncidiinae and Ceratobasidium. It also could be shown that morphological data associated with multivariate statistics can be a useful tool in fungal multi-level taxonomy. C. doniana sequences were also compared to sequences obtained from isolates of other orchids, belonging to the sub-tribe Oncidiinae, including: Ionopsis utricuarioides and Psygmorchis pussila, collected in Valle del Cauca Colombia and isolated from I. utricularioides, Oncidium altissimum and Tolumnia variegata, studied by Otero (2002, 2004, 2007) in different regions of Puerto Rico, Costa Rica and other Caribbean islands. This last analysis confirmed the preference of this Oncidiinae sub-tribe for Ceratobasidium, although isolates obtained in Brazil or Colombia belong to different clades from those previously studied in Puerto Rico, Costa Rica, Panama and Cuba. 12 Fungi representing the three clades obtained from C. doniana in Campos do Jordão were also tested for their ability to induce germination of C. doniana seeds, with a positive response for all of them, being able to bring the seedlings to advanced development stages in 30 days. These results suggest a high biotechnological potential of these isolates, to be used in orchid symbiotic germination for commercial flower production or for the reintroduction of endangered Brazilian orchid species.

Epiphytic species are a key component of the structure and dynamics of tropical forests. Although frequently found in mature forests, these species have difficulty reestablishing in young forests (forest restoration plantings and secondary forests). Recent assessments of young forests shows that there has been success in carbon recovery, mainly because of the success in survival and development of tree species, which produce a forest structure similar to that found in mature forests. However, the species richness is much lower than the original one, especially when comparing the epiphyte species. The objective of this thesis was to answer questions essential to the enrichment of young forests, through the artificial transplantation of epiphytic species, mainly the effect of planting age, the place of transplant, the size of the seedlings and the host species used in the survival and development of the species transplant epiphytes. Eight epiphytic species (Araceae, Bromeliads, Cacti and Orchids) were studied. We evaluated potendial seed storage, seed germination, abiotic factors (Water, Light and Nutrients) that affect seedling production and transplant methods for young forests using seedlings and direct seeding. All epices are orthodox maintaining germination potential higher than 80% after 16 months of storage. Two species of cactus are positive photobatic, germinating only in the presence of light. The growth of the seedlings in greenhouse is strongly influenced by the nutrient supply. Both the fixation site and the size of seedlings do not interfere in the survival and development of the transplanted epiphyte species. The age of the forest is also not an important factor in the success of the transplanted epiphytes, being possible to use young forests (12-15 years). Direct sowing may be a promising method to enrich young plantations, but adjustments need to be made to provide higher survival rates for the seedlings. The transplantation of epiphytic species into young forests is a viable strategy to overcome the natural limitations of recolonization that these forests present. Future research and monitoring of transplanted epiphytes may determine the generality of our observations. / Espécies epífitas são um componente fundamental da estrutura e dinâmica das florestas tropicais. Apesar de ser frequentemente encontrada em florestas maduras, essas espécies possuem dificuldade para se restabelecer em florestas jovens (plantios de restauração floresal e florestas secundárias). Avaliações recentes de florestas jovens demonstram que houve sucesso na recuperação de carbono, principalmente pelo sucesso na sobrevivência e desenvolvimento das espécies arbóreas, que produzem uma estrutura florestal semelhante à encontrada nas florestas maduras. Entretanto a riqueza de espécies é muito inferior a original, principalmente quando comparamos as epécies epífitas. Os objetivos desta tese foram responder questões essenciais ao enriquecimento de florestas jovens, através do transplante artificial de espécies epífitas, principalmente o efeito da idade do plantio, o local de transplante, o tamnho das mudas e da espécie hospedeira utilizada na sobrevivência e desenvolvimento das espécies epífitas transplantdas. Oito espécies epífitas (Araceae, Bromélias, Cactus e Orquídeas) foram selecionadas. Nós estudamos o armazenamento de sementes, a germinação de sementes, os fatores abióticos (Água, Luz e Nutrientes) que afetam a produção de mudas e os métodos de transplante para florestas jovens, utilizando mudas e semeadura direta. Todas as epécies são ortodoxas mantendo pontencial de germinação superior a 80% após 16 meses de armazenameto. Duas espécies de cactus são fotobásticas positivas, germinando somente com presença de luz. O crescimento das mudas em casa de vegetação é fortemente influênciado pela oferta de nutrientes. Tanto o local de fixação quanto o tamanho das plantas utilizadas não interfere na sobrevivência e desenvolvimento das espécies epífitas transplantadas. A idade da floresta também não é um fator importante no sucesso das epífitas transplantadas, sendo possível utilizar florestas jovens (12-15 anos). A semeadura direta pode ser um método promissor pra enriquecer plantios jovens, porém ajustes precisam ser realizados para proporcionar maiores índices de sobrevivência das plantuas. O transplante de espécies epífitas para florestas jovens é uma estratégia viável para superar as limitações naturais de recolonização que essas florestas apresentam. Pesquisas futuras e monitoramento podem comprovar o sucesso no estabelecimento de espécies epífitas transplantadas para determinar a generalidade de nossas observações.

O gênero Burkholderia é composto por bactérias de elevada diversidade fisiológica e genética, sendo alvo para uma série de aplicações biotecnológicas. A linhagem Burkholderia seminalis TC3.4.2R3 foi capaz de controlar fungos e bactérias patogênicas, bem como produzir antibióticos. A análise de perfil fisiológico da planta hospedeira indica que não há a elicitação de respostas de defesa no controle dos sintomas da podridão mole por B. seminalis. Foi observado que o sucesso do controle depende do contato direto do agente de biocontrole e o patógeno B. gladioli, e que B. seminalis possui atividade antimicrobiana in vitro contra com a formação de um halo de inibição e redução de 40% da densidade de B. gladioli em co-cultura líquida com B. seminalis. A análise do mutante M01 defectivo no controle da podridão mole, que apresenta a região intergênica da patatina-ferritina nocauteada pelo transposon, não mostrou diferenças significativas comparado ao isolado selvagem para os mesmos ensaios. / The genus Burkholderia is composed of bacteria with high physiological and genetic diversity, and it is being goal for a number of biotechnological applications. The Burkholderia seminalis TC3.4.2R3 strain was able to control fungal and bacterial pathogens as well as produce antibiotics. The physiological profile analysis of the host plant indicates that there is no defense responses elicitation induced by B. seminalis involved in controlling symptoms of soft rot. It was observed that the success of control depends on the full contact of the biocontrol agent and the pathogen B. gladioli. B. seminalis has an antimicrobial activity in vitro showing a inhibition halo and reducing the density of B. gladioli in co-culture with B. seminalis by 40%. The M01 mutant, wich is defective in control of soft rot and showing a insertion of transposon in a intergenic region between patatin-ferritin, presented no significant differences compared to the wild strain for the same assays.

The Orchidaceae is characterized by a remarkably diverse range of life forms and some of the most highly specialized interactions with soil fungi and insect pollinators found in the flowering plants. Many species are rare or threatened with extinction either directly through loss of habitat or over-collection or, indirectly through debilitation or loss of mycorrhizal association or pollinator capacity. Australian temperate terrestrial orchids represent one of the most threatened groups in the Australian flora with many taxa clinging to existence in urban and rural bushland remnants, road verges and unprotected bushland. The aim of this study is to research and develop integrated conservation based on critical aspects of terrestrial orchid biology and ecology, towards the recovery of the rare and endangered Western Australian terrestrial orchid Caladenia huegelii. This study identified key aspects involved in an integrated conservation approach and research focused on conservation genetics, mycorrhizal interactions and in situ and ex situ conservation strategies for this species. Using polymorphic microsatellite molecular markers, high levels of genetic diversity were found within remnant populations of C. huegelii, while weak differentiation was observed among populations over the species geographic range. These results indicate historic genetic exchange between C. huegelii populations, a possible consequence of the sexually deceptive pollination strategy and the capacity for widespread seed dispersal. Symbiotic germination studies revealed compatibility barriers to C. huegelii germination with the orchid possessing a highly specific orchid-mycorrhizal association relative to common sympatric congeners. These results were reflected in a phylogenetic analysis of DNA sequences, revealing C. huegelii associates with only one endophyte species within the fungal family Sebacinaceae across its geographic range. Large scale in situ seed baiting demonstrated that endophytes compatible with C. huegelii were limited in distribution relative to common and widespread orchid species, a feature for C. huegelii that may be a major contributing factor in limiting the distributional range of the species. Detailed, within site seed baiting methods identified hotspots for mycorrhizal fungus compatible with C. huegelii that were unoccupied by the orchid. These mycorrhizal hotspots where used to investigate the effect of endophyte presence on survival of transplanted mature plants and seedling outplants. The in situ survival of glasshouse propagated seedlings was further optimized by incubating seedlings in growth containers before transfer to soil and outplanting seedlings in their second growing season. The findings of this study will substantially advance the recovery of C. huegelii and provide benchmark knowledge for similar projects with other rare and threatened terrestrial orchid species.