Diss. (sammanfattning). Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

La compréhension de la régulation de l’AMH et de son récepteur spécifique, l’AMHR2, par les BMPs a amené un éclairage nouveau sur leur rôle dans le développement folliculaire et la régulation du taux d’ovulation. Nos résultats se basent sur l’étude de 4 modèles ovins porteurs de mutations Fec, mutations qui affectent des membres de la famille des BMPs, à savoir leur ligand BMP15 ou leur récepteur. Ces mutations se traduisent phénotypiquement par une baisse de l’expression de l’AMH ou de son récepteur dans les cellules folliculaires, et des ovulations multiples chez les brebis porteuses. D’un point de vue mécanistique, nos résultats ont mis en évidence une régulation de l’AMH et de l’AMHR2 par les BMPs in vivo et in vitro, passant par le récepteur BMPR1B, et s’exerçant sur l’activité transcriptionnelle du promoteur de l’AMH via SMAD1 et SF1. Cette régulation a également été en partie mise en évidence dans l’espèce porcine avec une observation supplémentaire dans ce modèle : un taux d’ovulation naturellement très élevé est associé à une faible production ovarienne d’AMH. Ces observations mettent en exergue le rôle possible de l’AMH dans la régulation du taux d’ovulation. / The understanding of the regulation of AMH and its specific receptor, AMHR2, by the BMPs, brought a new highlight on their role in the regulation of follicular development and the control of ovulation rate. Our results are based on the study of 4 sheep models carrying Fec mutations which affect different members of the BMPs family, namely their ligand BMP15 or their receptor, Mutations result phenotypically in a low expression of AMH or AMHR2 in the granulosa cells of ovarian follicles, and multiple ovulations in carrier ewes.. From a mechanistic point of view, the results demonstrated the in vivo and in vitro regulation of AMH and AMHR2 by BMPs, acting through the BMPR1B receptor and enhancing the transcriptional activity of the AMH promoter via SMAD1 and SF1. This regulation has also been partially demonstrated in swine with an additional observation in this model: a naturally high ovulation rate is associated with a low ovarian production of AMH. In conclusion, these observations show a possible role of the AMH in the regulation of ovulation rate.

The ovarian surface epithelium (OSE) is a monolayer of cells surrounding the ovary that is ruptured during ovulation. After ovulation the wound is repaired, however this process, and the mechanisms to maintain OSE homeostasis after the wound is repaired are poorly understood. We have shown the mouse OSE (mOSE) contains a stem cell population that is expanded by Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFB1), a factor present in follicular fluid. These data suggest that components in the follicular fluid such as TGFB1 may promote wound repair and OSE homeostasis through maintenance of the OSE stem cell population. Additionally, TGFB1 may promote wound repair through induction of an epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and activation of pro-survival pathways, as seen in other tissues. To elucidate the mechanism for TGFB1-mediated ovulatory wound repair, mOSE cells were treated with TGFB1, which induced an EMT seen with increased Snai1 expression and cell migration. Snai1 overexpression also increased cell migration and sphere formation (a stem cell characteristic). RNA sequencing results suggest this is at least in part through elevated collagen deposition in SNAI1 overexpressing cells. A TGFB signalling targets array identified Cox2 induction following TGFB1 treatment. Constitutive Cox2 expression did not promote an EMT, but enhanced sphere formation and cell survival. Finally, TGFB1 treatment decreased Brca1 expression, which when deleted from mOSE cells also increased sphere formation. RNA sequencing results suggest that Brca1 deletion promotes stemness through activation of the stem cell genes Ly6a and Lgr5. RNA sequencing was also used to compare mOSE cells cultured as monolayers and as spheroids, with and without TGFB1. These results validate our findings that TGFB1 promotes an EMT partially through Snail induction and the upregulation of Cox2. mOSE cells cultured as spheroids acquire a mesenchymal transcriptional profile that is further enhanced with TGFB1 treatment. These data suggest that TGFB1 may promote ovulatory wound repair and maintain OSE homeostasis through the induction of an EMT, maintenance of the stem cell population and activation of a pro-survival pathway. Interestingly, mOSE spheroids also decrease Brca1 expression and upregulate cancer associated genes such as Pax8 and Greb1. The induction of survival pathways, while simultaneously increasing stemness and repressing Brca1 could render cells more susceptible to transformation. This work provides novel insights as to why ovulation is the primary non-hereditary risk factor for ovarian cancer.

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Luiz Fernando de Souza Rodrigues / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Foram realizados 20 programas de superovulação e colheita de embriões em ovelhas Santa Inês, com objetivo de testar a hipótese que a adição de LH ao final do protocolo de superovulação causa incremento nas taxas de ovulação e de produção de embriões. Para tanto, o experimento foi delineado em cross-over, sendo o estro sincronizado com CIDR™ por 14 dias. No D7, substituiu-se o implante por um novo, e administrou-se 37,5 μg de d-cloprostenol, IM. Para superestimulação, 256 mg de FSHp foram administradas em 8 doses decrescentes, iniciando no D12. No D14, as fêmeas receberam 200 UI de eCG e 37,5 μg de d-cloprostenol. No grupo controle (G-C) a taxa FSH/LH foi constante, enquanto no G-LH o protocolo preconizava o acrescido de 7,5 mg de LH, administrado 24 h após a retirada do implante (D15). As fêmeas foram inseminadas com sêmen congelado, por laparoscopia, as 42 e 48 h após a retirada do implante, concomitantemente, as estruturas ovarianas foram avaliadas. No D21, os embriões foram cirurgicamente colhidos e avaliados. Os resultados demonstraram que o LH administrado ao final do tratamento superovulatório não incrementou de maneira significativa a taxa de ovulação e o número de embriões viáveis (78,7% ± 22,72 e 3,77 ± 4,29, respectivamente, G-C; 84,75 ± 10,13 e 4,22 ± 5,19, G-LH). Quanto ao período das ovulações, observou-se grande distribuição nos grupos, sendo possivelmente correlacionado ao grande número de estruturas não fecundadas e embriões degenerados encontrados. A ausência de diferença estatística no número de corpos lúteos, de embriões recuperados e viáveis pode ser associada à grande variabilidade individual. / Abstract: Twenty superovulation programs and embryos recovery were accomplished in Santa Inês sheep, with objective to test the hypothesis that addition of LH at the end of the superovulatory regimen causes an increase in the ovulation rate and of embryos production. For so much, the experiment was delineated in cross-over, being the estrus synchronized with CIDR, for 14 days. On D7, the implant was substituted by a new one, and 37.5 μg of d-cloprostenol were administered. Then, 256 mg of FSHp were administered in 8 decreasing doses, starting on D12. On D14, all females received 200 IU of eCG and 37.5 μg of d-cloprostenol. In control group (G-C), the FSH/LH ratio was constant, while in G-LH 7.5 mg of LH, administered 24 h after implant withdrawal (D15). The laparoscopic inseminations occurred 42 and 48 h after implant withdrawal, concomitantly, the evaluated ovarian structures. On D21, the embryos were surgically collected and evaluated. Overall, the results showed that LH administration at the end of the FSH treatment did not significant increase the ovulation rate and number of viable embryos (78.7% ± 22.72 and 3.77 ± 4.29, respectively, G-C; 84.76 ± 10.14 and 4.22 ± 5.22, G-LH). For the period of the ovulations, a great distribution was observed inside of the groups, being correlated possibly to the great number of unfertilized oocytes and degenerated embryos. The no statistical difference in the number of corpus luteum, embryos recovery and viability can be associated the great individual variability. / Mestre

In this M. Sc. thesis, the influence of selected commercially available hormonal preparations based on hCG (Pregnyl, Chorulon) and GnRH-a with dopamin inhibitor (Ovopel, Dagin, Ovaprim) and their benefits were studied, compared with homogenate of carp pituitary (CPE), during controlled reproduction of weatherfish (Misgurnus fossilis, Linnaeus, 1758) in artificial conditions on the quality of the produced fry. The goal of this thesis was assess the suitability of individual commercially produced hormonal preparations for controlled reproduction of weatherfish and the possibility to replace with them unstandardized use of homogenate of carp pituitary. It was found that use of various hormonal preparations and dosage may to in some extent affect hatchability and survival rate of larvae (fry), the size of the yolk sac of larvae, and the amount of energy deposited in body tissues of larvae. However, demonstrable difference in studied parameters for the application of different preparations on the different hormonal basis (hCG versus GnRH) was not reported. The highest rate of hatching larvae (93.3 ? 3.8%) was observed in the groups treated with preparation Pregnyl 3000 IU - kg-1. In terms of overall survival of the larvae (from deployment of hatched eggs until the end of the experiment) have proven to be the most effective medication Pregnyl 3000 IU - kg-1 (69.9 ? 12.1 %) and Dagin (60.56 ? 11.71 %). Within the thesis has been demonstrated no relationship between hormonal treatment used and the growth of larvae (in terms of achieved total length of body and dry weight). The amount of energy deposited into the body tissues of larvae (gross calorific value) was comparable in all groups, except Dagin preparation, which was recorded impairment losses. For the best, most effective and commendable for control of reproductive hormone preparation carp pituitary homogenate replacing the terms of the assessed indicators can be seen the preparation based on hCG and that is Pregnyl at a dose of 3000 IU - kg-1.

As biotécnicas da reprodução na espécie equina avançaram na última década e os criadores de equinos começaram a questionar as possibilidades de interferência na determinação do sexo dos potros. A determinação do sexo é importante, pois o sexo do potro possui grande influência no valor comercial do mesmo. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência do momento da cobertura em relação ao momento da ovulação no sexo dos potros e outros fatores como: idade da égua e garanhão; indutor da ovulação; ovário em que ocorreu a ovulação e o diâmetro do folículo pré-ovulatório também foram avaliados. O estudo foi realizado em Haras na região de Bagé e Aceguá (RS) – Brasil (31°24'06.1''S 54°07'47.5''W) e (31°30'16.0''S 54°07'45.5''W) nas estações de monta de 2011 a 2015. Utilizou-se 259 ciclos reprodutivos de 160 éguas e 22 garanhões da raça Puro Sangue de Corrida. Informações como agente indutor de ovulação utilizado (Deslorelina; n = 187 ou hCG; n = 72); data da cobertura (n = 259); momento da ovulação em relação a cobertura (+ 24 horas; n = 69 e - 24 horas; n = 190); idade da égua (G1: até 8 anos; n = 123, G2: 9 até 14 anos n = 110 e G3: >14 anos; n = 26); idade do garanhão (Até 14 anos; n = 11 e >15 anos; n = 11) ; ovário em que a ovulação ocorreu (Direito; n = 122 e Esquerdo; n = 137); foram registrados e avaliados No total de potros nascidos, 136 foram machos (52,51%) e 123 foram fêmeas (47,49%). O tempo decorrido após a cobertura não influenciou o sexo dos produtos, nas éguas que ovularam com – 24h após a indução da ovulação: 104 potros (54,74%) eram machos e 86 (45,26%) eram fêmeas, enquanto que nas éguas que ovularam com + 24h, 32 potros (46,38%) eram machos e 37 (53,62%) eram fêmeas. A porcentagem de fêmeas nascidas em relação a idade da égua foi de 46,34% (n=57), 47,27% (n=52) e 46,15% (n=12) nos grupos G1, G2 e G3 respectivamente. Garanhões com idade até 15 anos tiveram 44,14% (n=49) de fêmeas e com mais de 15 anos 49,66% (n=73) eram fêmeas. Não houve diferença no sexo dos produtos quanto ao agente indutor da ovulação (Deslorelina x hCG) e ovário em que ocorreu a ovulação. O presente estudo concluiu que nenhum dos fatores estudados alterou a proporção macho:fêmea dos potros nascidos. / The biotechnologies of reproduction in equine species have been improved in the last decade and the horse breeders started to inquire about the possibility of intervention regarding to the sex determination in foals. Sex determination is important because the sex of the foal has a great influence on the commercial value of the foal. The aim of the present study is was to evaluate the influence of the time of the breeding in relation to time of ovulation in the sex of the foals, besides analyzing other factors such as: the age of the mare and the stallion; ovulation inductor, ovary and the diameter of the preovulatory follicle. The study was accomplished in studs located Bagé/RS and Aceguá/RS – Brazil (31°24'06.1''S 54°07'47.5''W) and (31°30'16.0''S 54°07'45.5''W) during the breeding seasons from 2011 to 2015, using 259 reproductive cycles of 160 mares and 22 stallions of Thoroughbred breed. Information like the induction of ovulation agent that was used (Deslorelin; n = 187 or hCG; n = 72); date of breeding (n = 259); time of ovulation in relation to the breeding (+24 hours; n = 69 and -24 hours; n = 190); age of the mare (G1: up to the age of 8; n = 123 G2: from the age of 9 to the age of 14; n = 110 and G3: >14 years old; n = 26); age of the stallion (up to the age of 14; n = 11 and >15 years old; n = 11); ovary in which the ovulation occurred (Right; n = 122 and Left; n = 137) were catalogued and evaluated As result, 136 (52,51%) were born colts and 123 (47,49%) were born fillies. The elapsed time from breeding to ovulation did not influence on the sex of the product, on mares that ovulated in less than 24 hours after the ovulation induction: 104 foals (54,74%) were male and 86 (45,26%) were female, whereas in the mares that ovulated in more than 24 hours, 32 foals (46,38%) were male and 37 (53,62%) were female. The percentage of born females regarding to the age of the mare was 46,34% (n = 57), 47,27% (n = 52) and 46,15% (n = 12) in the groups G1, G2 and G3, respectively. From stallions up to the age of 15 years, 44,14% (n = 49) were females and from those which were older than 15 years old, 49,66% (n = 73) were females. There was no difference regarding the sex of the product in relation to the ovulation inducer agent (Deslorelin x hCG) and ovary in which the ovulation occurred. None of the factors studied modified the male:female proportion of the born foals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T19:32:29Z : No. of bitstreams: 1 simoes_ral_me_botib.pdf: 373207 bytes, checksum: 81fc46acebb89383a1fee98db6390faf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com o presente trabalho verificar a relação entre diâmetro folicular, taxa de ovulação e a expressão gênica das isoformas do receptor de LH em vacas da raça Nelore. O experimento 1 foi realizado para verificar a dose mínima de LH capaz de induzir ovulação em folículos com diâmetro entre 10 e 11 mm. Vacas Nelore (n=20) foram submetidas à sincronização da ovulação e o crescimento folicular passou a ser acompanhado diariamente por ultrassonografia (US). Quando os folículos atingiram diâmetro entre 10 e 11 mm, os animais foram divididos em quatro grupos para receber diferentes doses de LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada; IM): 1,56; 3,12; 6,25 e 12,5 mg. Os dados foram analisados pelo Teste Exato de Fisher (PROC FREQ, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectivamente, ocorrendo diferença significativa entre o grupo 1,56 mg e os demais (p<0,02). No experimento 2, foram utilizados 6,25 mg de LH para induzir ovulação em vacas Nelore (n=53) submetidas a sincronização da ovulação e divididas em cinco grupos de acordo com o diâmetro folicular (mm) no momento da administração de LH: Grupo 1 (7,0 a 7,5); Grupo 2 (7,6 a 8,0); Grupo 3 (8,1 a 8,5); Grupo 4 (8,6 a 9,0) e Grupo 5 (9,1 a 10,0). Os resultados foram analisados por Regressão Logística (PROC GENMOD, do SAS). As taxas de ovulação foram 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G5 e os demais grupos (p<0,01). Ao associar G1+G2 (7,0 a 8,0 mm), G3+G4 (8,1 a 9,0 mm) e G5 (9,1 a 10,0 mm) as taxas de ovulação foram 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10), respectivamente. Houve diferença significativa entre G1+G2 vs G5 (p<0,01), G3+G4 vs G5 (p<0,02) e G1+G2 vs G3+G4 (p<0,03). Após a administração de LH, o diâmetro do menor folículo capaz de ovular foi 7,65 mm. No experimento... / The aim of the present experiment was to verify the relationship between follicular diameter, ovulation rate and gene expression of LH receptor isoforms, in Nellore cows. Experiment 1 was performed to determine the lowest LH dose necessary to induce ovulation in follicles with 10 to 11 mm in diameter. Nellore cows (n=20) had their ovulation induced by hormonal treatment, and afterwards follicular growth was daily observed by ultrasonography (US). When the follicles reached 10 to 11 mm diameter, the cows were randomly allocated in four groups and treated with different doses of LH (Lutropin-V®, Bioniche, Ontario, Canada): Groups 1.56; 3.12; 6.25 and 12.5 mg. The data were analyzed by Fisher’s Exact Test (PROC FREQ, SAS). The ovulation rates were 0 (0/5), 80 (4/5), 80 (4/5) e 80% (4/5), respectively, and it was lower in group 1.56 when compared to the others (P<0.02). In experiment 2, the 6.25 mg LH dose was chosen to induce ovulation in Nellore cows (n=53), submitted to the same hormonal treatment used in experiment 1, and randomly allocated in five groups according to follicular diameter (mm) at the time of LH administration: Group 1 (7.0-7.5); Group 2 (7.6-8.0); Group 3 (8.1-8.5); Group 4 (8.6-9.0) and Group 5 (9.1-10.0). The results were analyzed by Logistic Regression (PROC GENMOD, SAS). The ovulation rates were 0 (0/11), 20 (2/10), 36 (4/11), 36 (4/11) and 90% (9/10), respectively, for G1, G2, G3, G4 and G5. There was significant difference between G5 and the others groups (P<0.01). When data from two groups (except Group 5) were combined G1+G2 (7.0-8.0 mm), G3+G4 (8.1-9.0 mm) and G5 (9.1-10.0) ovulation rates were, respectively, 9 (2/21), 36 (8/22) e 90% (9/10). There were significant differences when comparing G1+G2 v. G5 (P<0.01), G3+G4 v. G5 (P<0.02) and G1+G2 v. G3+G4 (P<0.03). After LH application, the smallest follicle that ovulated had a diameter of 7.65 mm. In ... (Complete abstract click electronic access below)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Angiotensin II (AngII), progesterone (P4) and prostaglandins (PGs) are essential for ovulation of a fertile oocyte. This study sought to understand how these factors are linked together during the ovulatory process. To this end, first we characterized the pattern of expression of genes of interest to the renin-angiotensin system in follicular cells and AngII concentration in the fluid during the periovulatory period. Cows were ovariectomized at various times after GnRH injection to obtain pre (at the time of GnRH treatment) and periovulatory follicles (3, 6, 12, and 24 h after GnRH treatment). Theca and granulosa cells were separated and processed to real time RT-PCR Herein we demonstrated that the gonadotropin surge stimulates the follicular secretion of AngII and theca cells expression of mRNA for AGTR2 receptors. Next, we assessed whether AngII can modulate the secretion of steroids and PGs by follicular cells using in vitro culture of theca and granulosa cells of bovine ovaries from abattoir. In this study we found that AngII in synergism with LH stimulates the synthesis of PGE2 and PGF2α and P4 by granulosa cells. The role of AngII and PGs as mediators of nuclear maturation of oocytes in ruminants induced by gonadotropins had already been demonstrated. However, a similar action performed by P4 is still controversial in cattle. In this work, using in vitro and in vivo models, we evidenced that P4 not only participates in this process, but it is also an intermediate factor between AngII and PGs in the cascade of events. With the present work is possible to conclude that AngII, P4 and PGs are "linked" mediators of the preovulatory gonadotropin surge. These data allowed us to propose a unified model for both, ovulation and the resumption of nuclear maturation of oocytes. In this model the preovulatory gonadotropin surge up regulates the production of AngII and follicular expression of AGTR2 receptors, stimulating the secretion of P4 and the release of PGE2 and PGF2α, culminating with the ovulation of a fertile gamete. / A angiotensina II (AngII), progesterona (P4) e prostaglandinas (PGs) são fatores essenciais para que ocorra a ovulação de um oócito fértil. Este trabalho buscou entender se esses fatores interagem durante o processo de ovulação e maturação oocitária. Para tanto, primeiramente caracterizamos a expressão de genes de interesse para o sistema renina angiotensina em células foliculares e a concentração de AngII no fluido folicular durante o período periovulatório. Para tanto, folículos pré-ovulatórios de vacas foram coletados em diversos momentos após a administração intramuscular de GnRH. Após a coleta, o líquido folicular e as células da teca e granulosa foram separadas para realização da técnica de RT-PCR em tempo real. Neste estudo, foi observado que o pico de gonadotrofinas estimula a secreção folicular de AngII e a expressão de RNAm para receptores do tipo AGTR2 nas células da teca. Em seguida, avaliamos se a AngII é capaz de modular a secreção de esteróides e PGs pelas células foliculares. Células foliculares bovinas obtidas a partir de ovários de abatedouro foram cultivadas in vitro na presença de LH, AngII e/ou saralasina. Com este experimento, foi verificado que a AngII em sinergismo com LH estimula a síntese de P4, PGE2 e PGF2α pelas células da granulosa. O papel da AngII e PGs como mediadoras da maturação nuclear de oócitos em ruminantes induzida por gonadotrofinas já havia sido demonstrado. No entanto, uma ação similar realizada pela P4 ainda possuía caráter questionável em bovinos. No presente trabalho, utilizando modelos in vitro e in vivo, foi evidenciado que a P4 não só participa desse processo, mas também é um fator intermediário entre AngII e PGs na cascata de eventos. Ao final deste trabalho foi possível concluir que AngII, P4 e PGs são mediadores conectados da ação do pico pré-ovulatório de gonadotrofinas. Esses dados nos permitem propor um modelo unificado de eventos tanto para a ocorrência da ovulação quanto para a retomada da maturação nuclear do oócito. Neste modelo, o pico pré-ovulatório de gonadotrofinas aumenta a secreção folicular de AngII e a expressão de receptores AGTR2, os quais estimulam a secreção de P4 e por consequência de PGE2 e PGF2α, culminando com a ovulação de um gameta fértil.

Submitted by GABRIEL MAKSOUD GRECO null (gabrielmaksoud@gmail.com) on 2016-08-01T16:57:15Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Maksoud Greco - Tese de Doutorado.pdf: 942153 bytes, checksum: 3897e01a5d02d842516f84f5662d1905 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-02T19:54:49Z (GMT) / Submitted by GABRIEL MAKSOUD GRECO null (gabrielmaksoud@gmail.com) on 2016-08-05T20:05:46Z No. of bitstreams: 1 Gabriel Maksoud Greco - Tese de Doutorado com Ficha Catalográfica.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-09T16:43:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 greco_gm_dr_bot.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T16:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 greco_gm_dr_bot.pdf: 1246379 bytes, checksum: abd353a17deff1c72be3554b66dfb1c3 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / A manipulação farmacológica do ciclo estral é rotineiramente utilizada na égua, pelo fato desta apresentar grande variação na duração do estro e no intervalo entre o seu início e a ovulação. Como maiores taxas de concepção decorrem da deposição do sêmen no trato reprodutivo feminino próximo à ovulação, diversos agentes foram empregados objetivando sua indução e sincronização, em especial a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o acetato de deslorelina. O mecanismo de ação destes fármacos envolve o hormônio luteinizante (LH), sendo que o hCG mimetiza suas ações e o acetato de deslorelina estimula sua liberação pela adenohipófise. Incremento semelhante às concentrações circulantes de LH tem sido observado em vacas com o uso de cipionato de estradiol (ECP), o qual é usualmente empregado na indução e sincronização de ovulações na espécie pelo seu baixo custo. A fim de auxiliar na escolha do protocolo ideal para a indução de ovulação em éguas, o presente estudo objetivou avaliar o efeito do tratamento com o hCG e/ou com o acetato de deslorelina, nas doses preconizadas ou em subdoses, sobre as concentrações plasmáticas de LH, a indução e a sincronização de ovulação, o grau de edema endometrial, o diâmetro folicular e a sua taxa de desenvolvimento. Ainda, buscou-se verificar o resultado da aplicação de ECP sobre a indução e sincronização da ovulação e as concentrações plasmáticas de LH, bem como a existência de uma correlação entre a taxa de crescimento, o diâmetro folicular e o edema endometrial sobre a fertilidade pós-indução com a dose preconizada de hCG. Os resultados obtidos através do presente trabalho nos permitiram concluir que: a) os protocolos propostos com o hCG e/ou o DES induziram e sincronizaram a ovulação de forma eficaz, estimulando sua ocorrência de folículos pré-ovulatórios menores; b) o DES estimulou maior liberação de LH que o hCG após 24 horas; c) a adição do hCG ao tratamento com DES não promoveu um incremento nas concentrações circulantes de LH, seja nas doses preconizadas ou em subdoses; d) o tratamento com ECP não resultou em aumento nas concentrações circulantes de LH, tendo inibido sua liberação em alguns animais, pré-dispondo ao surgimento de folículos anovulatórios e atresia folicular; e) o uso de subdoses de hCG e/ou DES levaram a um maior incremento nas concentrações circulantes de LH após 48 horas, por um provável mecanismo de “down-regulation” que ocorre após o uso das doses recomendadas destes hormônios; f) os tratamentos com o hCG e/ou o DES não impediram o desenvolvimento folicular ou reduziram o diâmetro folicular após 24 horas; g) a indução de ovulação levou a uma redução no grau de edema endometrial após 24 horas; o qual persistiu à ovulação; h) o grau máximo de edema endometrial, bem como seu escore à detecção da ovulação não influenciaram a fertilidade pós-indução com 2.000 UI de hCG; i) o tamanho e a taxa de desenvolvimento folicular pós-indução com 2.000 UI de hCG tenderam a uma correlação positiva com a taxa de fertilidade pós-inseminação artificial. / Pharmacological manipulation of the equine estrous cycle is routinely applied, due to the fact that mares show great disparity on estrous duration and in the interval between its onset and ovulation. Since higher pregnancy rates are obtained when semen is deposited in the female reproductive tract at a time close to ovulation, several ovulation inducting agents have been used, specially human chorionic gonadotropin (hCG) and deslorelin acetate (DES). The mechanism of action of these drugs involves the luteinizing hormone (LH), for hCG mimics its actions and DES stimulates endogenous adenohypophyseal secretion. Similar increment in circulating LH concentrations has been observed in cows treated with estradiol cypionate (ECP), which is usually administrated as an interesting and cheaper alternative to induce and synchronize ovulations in the bovine species. In order to aid recognition of the ideal ovulation induction and synchronization protocol in the mare, the present study evaluated the effect of treatment with hCG and/or DES, using the recommended or a subdose, on ovulation induction and synchronization, plasmatic LH concentrations, grade of endometrial edema, follicular growth and diameter. Thus, this experiment intended to verify the effect of ECP administration on ovulation induction, synchronization and plasmatic LH concentrations, as well as the existence of a correlation between follicular growth, pre-ovulatory diameter and endometrial edema with fertility of mares induced using the recommended hCG dose. The obtained results led to the following conclusions: a) protocols using hCG and/or DES successfully induced and synchronized ovulations, stimulating smaller pre-ovulatory follicles to ovulate; b) DES stimulated a higher LH secretion than hCG 24 hours post-injection; c) combining hCG to DES treatment did not favor LH secretion; d) estradiol cypionate treatment did not induce ovulation or favor plasmatic LH concentrations, but, instead, lead to a substantial anovulation and follicular atresia rate, possibly due to its decrease in some animals; e) subdoses of hCG and DES stimulated a higher LH increase after 48 hours, possibly due to a down-regulation mechanism upon administration of the recommended dose; f) treatment with hCG and/or DES did not impair follicular development after 24 hours; g) ovulation induction decreased endometrial edema after 24 hours, which persisted at ovulation; h) fertility of mares treated with 2,000 IU of hCG was not influenced by the maximum endometrial edema score observed during estrous or the grade of edema the day an ovulation was detected; i) follicle size and growth rate post-induction with 2,000 IU of hCG tend to bear a positive correlation with fertility.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:38:43Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_mef_me_jabo.pdf: 336192 bytes, checksum: 77d86e689ffb1318c70bbddf98867151 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Foram realizados 20 programas de superovulação e colheita de embriões em ovelhas Santa Inês, com objetivo de testar a hipótese que a adição de LH ao final do protocolo de superovulação causa incremento nas taxas de ovulação e de produção de embriões. Para tanto, o experimento foi delineado em cross-over, sendo o estro sincronizado com CIDR™ por 14 dias. No D7, substituiu-se o implante por um novo, e administrou-se 37,5 μg de d-cloprostenol, IM. Para superestimulação, 256 mg de FSHp foram administradas em 8 doses decrescentes, iniciando no D12. No D14, as fêmeas receberam 200 UI de eCG e 37,5 μg de d-cloprostenol. No grupo controle (G-C) a taxa FSH/LH foi constante, enquanto no G-LH o protocolo preconizava o acrescido de 7,5 mg de LH, administrado 24 h após a retirada do implante (D15). As fêmeas foram inseminadas com sêmen congelado, por laparoscopia, as 42 e 48 h após a retirada do implante, concomitantemente, as estruturas ovarianas foram avaliadas. No D21, os embriões foram cirurgicamente colhidos e avaliados. Os resultados demonstraram que o LH administrado ao final do tratamento superovulatório não incrementou de maneira significativa a taxa de ovulação e o número de embriões viáveis (78,7% ± 22,72 e 3,77 ± 4,29, respectivamente, G-C; 84,75 ± 10,13 e 4,22 ± 5,19, G-LH). Quanto ao período das ovulações, observou-se grande distribuição nos grupos, sendo possivelmente correlacionado ao grande número de estruturas não fecundadas e embriões degenerados encontrados. A ausência de diferença estatística no número de corpos lúteos, de embriões recuperados e viáveis pode ser associada à grande variabilidade individual. / Twenty superovulation programs and embryos recovery were accomplished in Santa Inês sheep, with objective to test the hypothesis that addition of LH at the end of the superovulatory regimen causes an increase in the ovulation rate and of embryos production. For so much, the experiment was delineated in cross-over, being the estrus synchronized with CIDR, for 14 days. On D7, the implant was substituted by a new one, and 37.5 μg of d-cloprostenol were administered. Then, 256 mg of FSHp were administered in 8 decreasing doses, starting on D12. On D14, all females received 200 IU of eCG and 37.5 μg of d-cloprostenol. In control group (G-C), the FSH/LH ratio was constant, while in G-LH 7.5 mg of LH, administered 24 h after implant withdrawal (D15). The laparoscopic inseminations occurred 42 and 48 h after implant withdrawal, concomitantly, the evaluated ovarian structures. On D21, the embryos were surgically collected and evaluated. Overall, the results showed that LH administration at the end of the FSH treatment did not significant increase the ovulation rate and number of viable embryos (78.7% ± 22.72 and 3.77 ± 4.29, respectively, G-C; 84.76 ± 10.14 and 4.22 ± 5.22, G-LH). For the period of the ovulations, a great distribution was observed inside of the groups, being correlated possibly to the great number of unfertilized oocytes and degenerated embryos. The no statistical difference in the number of corpus luteum, embryos recovery and viability can be associated the great individual variability.