Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A tolerância ao lipopolissacarídeo (LPS) ocorre quando animais e células expostas ao LPS tornam-se hiporesponsivas a uma subseqüente dose de LPS. Acredita-se que esse mecanismo esteja envolvido na diminuição da resposta celular observada em pacientes com sepse grave e choque séptico. O objetivo do estudo foi avaliar a indução da tolerância em monócitos de voluntários sadios, em sangue total, após a exposição in vitro ao LPS, medido pela detecção de citocina intracelular e espécies reativas de oxigênio (EROs). Material e métodos: As células do sangue periférico foram condicionadas com pequenas dses de LPS por 18h e desafiadas com diferentes agonistas dos Toll-like receptors (lipopeptídeo ativador de macrófagos (MALP-2), flagelina e LPS) e bactérias gram-negativa (Pseudomonas aeruginosa) e gram-positiva (Staphylococcus aureus) mortas por calor ou condicionadas com pequenas doses de MALP-2 por 18h e desafiadas com MALP-2 ou LPS. Para detecção da interleucina-6 (IL-6) intracelular, amostras de sangue total foram estimuladas por 6h. Os monócitos foram identificados pelos parâmetros de dispersão frontal e dispersão lateral e positividade para CD14. As amostras foram marcadas para a verificação da produção de IL-6 intracelular nos monócitos por citometria de fluxo. Para indução de EROs, o sangue total foi estimulado por 30 minutos com LPS, P. aeruginosa, S. aureus. A produção de espécies reativas de oxigênio foi medida por citometria de fluxo pela detecção do 2’,7’ diclorofluoresceína-diacetato. Resultados: O condicionamento com doses crescentes de LPS resultou em menor detecção de IL-6 intracelular nos monócitos após desafio com LPS. Efeito similar foi observado com MALP-2, P. aerugionosa, S. aureus, mas não com a flagelina. O condicionamento com MALP-2 e desafio com MALP-2 ou LPS não resultou em menor detecção de IL- 6 intracelular nos monócitos. O condicionamento com 15ng/mL de LPS, por outro lado, resultou numa produção de EROs preservada ou aumentada nos monócitos após o desafio com LPS, P. aeruginosa, S. aureus. Conclusão: O fenômeno da tolerância envolve uma regulação complexa, na qual a produção de citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, está diminuída, enquanto a produção de EROS está preservada ou até aumentada. / Tolerance to lipopolyssacharide (LPS) occurs when animals or cells exposed to LPS become hyporesponsive to a subsequent challenge of LPS. This mechanism is believed to be involved in the down-regulation of cellular responses observed in patients with severe sepsis and septic shock. The aim of this investigation was to evaluate the induction of tolerance in monocytes of healthy volunteers, in whole blood, after LPS-exposition in vitro, assessed by intracellular cytokine detection and reactive oxygen species (ROS) generation. Material and Methods: Peripheral blood cells were conditioned with small doses of LPS for 18h and challenged with different agonists of Toll like receptors (Macrophage-activating lipopeptide-2 (MALP-2), Flagellin and LPS) and whole gram-negative (Pseudomonas aeruginosa) and gram-positive (Staphylococcus aureus) killed bacteria or conditioned with small doses of MALP-2 for 18h and challenged with MALP-2 or LPS. For detection of intracellular interleukin-6 (IL-6) samples of whole blood were stimulated for 6h. Monocytes were identified by forward scatter and side scatter parameters and CD14 positive staining. The samples were stained to verify the intracellular production of IL-6 on monocytes by flow cytometry. For induction of ROS, whole blood was stimulated for 30 minutes with LPS, P. aeruginosa and S. aureus. ROS production was measured by flow cytometry, using 2’,7’- dichlorfluorescein-diacetate detection. Results: The conditioning with increasing doses of LPS resulted in lower intracellular detection of IL-6 in monocytes after the challenge with LPS. Similar effect was observed with MALP-2, P. aeruginosa, and S. aureus, but not with Flagellin. The conditioning with MALP-2 and challenge with MALP-2 or LPS did not result in lower intracellular detection of IL-6 in monocytes. LPS conditioning with 15ng/mL of LPS, on the other hand, resulted in preserved or increased production of ROS in monocytes after challenge with LPS, P. aeruginosa and S. aureus. Conclusion: The phenomenon of tolerance involves a complex regulation, in which the production of pro-inflammatory cytokines such as IL-6 is diminished, whereas the production of ROS is preserved or even increased. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Programa de Pós-Graduação em Saúde e Nutrição. Escola de Nutrição, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-05-20T21:01:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) Previous issue date: 2015 / Carcinogênese é um processo multipassos que pode ser induzido e/ou modulado por agentes químicos ou físicos, incluindo aqueles que induzem espécies reativas de oxigênio (EROs). Estas espécies são geradas a partir de uma grande variedade de processos como a respiração mitocondrial e a NADPH oxidase. A produção excessiva de EROs pode oxidar biomoléculas e facilitar processos relacionados com a carcinogênese. Em baixas doses, estas moléculas podem agir como importantes mediadores do crescimento celular, adesão, diferenciação e apoptose. As EROs podem, por exemplo, modular a via da PKC. PKC é uma família de serina-treonina cinases que regulam uma variedade de funções celulares. A ativação aberrante da PKC está relacionada a doenças como o câncer e o diabetes. A PKC pode ser ativada por EROs e a produção de EROs pode requerer a ativação da PKC porque essas cinases tem um papel na ativação da NADPH oxidase. Dessa forma, a ativação da PKC e da NADPH oxidase podem elevar os níveis de EROs, causando danos celulares. Estas reações potencialmente deletérias podem ser controladas por um sistema de antioxidantes enzimáticos (superóxido dismutase - SOD e catalase - CAT) e não enzimáticos (flavonóides e carotenóides). O licopeno é um carotenóide de coloração vermelha que está presente em vários vegetais e frutas. Trata-se de um dos antioxidantes mais potentes e tem demonstrado desempenhar um importante papel na prevenção de vários tipos de câncer, incluindo o hepatocarcinoma. Sendo assim, este estudo objetivou investigar o potencial antioxidante do licopeno e avaliar o efeito deste carotenóide na via da PKC, em células SK-Hep-1, uma linhagem de hepatocarcinoma altamente invasiva. O potencial antioxidante do licopeno foi examinado através da quantificação celular de EROs e das atividades das enzimas SOD e CAT. O efeito do licopeno na via da PKC foi examinado pela quantificação celular de EROs após estimulação com PMA e ionomicina. O papel da NADPH oxidase foi avaliado através da sua inibição com DPI, um inibidor desta enzima. Nossos resultados mostram que o DPI inibiu a produção de EROs, demonstrando a importância da enzima NADPH oxidase na geração de EROs na linhagem celular estudada. O licopeno diminuiu a produção basal de EROs e aumentou a atividade da SOD. Além disso, o licopeno inibiu a produção de EROs induzida por ionomicina e PMA. Estes resultados analisados em conjunto sugerem que um dos mecanismos antioxidantes do licopeno seja através da modulação da proteína cinase C. Entretanto, mais estudos são necessários para confirmar esta hipótese. _____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Carcinogenesis is a multistep process which can be induced and/ or modulated by chemical and physical agents, including those that induce reactive oxygen species (ROS).These species are generated by a wide variety of processes like mitochondrial respiration and NADPH oxidase. The excessive generation of ROS might oxidize cellular biomolecules and facilitate carcinogenesis-related processes. In lower doses, these molecules can act as important mediators of cell growth, adhesion, differentiation and apoptosis. ROS can, for example, modulate the PKC pathway. PKC is a family of serine/threonine kinases that regulates a variety of cell functions. Aberrant PKC activation is related to diseases such as cancer and diabetes. PKC can be activated by ROS and ROS production can require PKC activation because these kinases have a role in NADPH oxidase activation. On this way, the PKC and NADPH oxidase activation might elevate intracellular levels of ROS causing damage. These potentially deleterious reactions can be controlled by a system of enzymatic (SOD and CAT) and nonenzymatic antioxidants (flavonoids and carotenoids). Lycopene is a red colored carotenoid present in many vegetables and fruits. It‟s one of the most potent antioxidants and has been shown to play an important role in preventing from various types of cancer, including hepatoma. This study aimed to investigate the antioxidant potential of lycopene and evaluate the effect of this carotenoid on PKC pathway, in SK-Hep-1 cells, a highly invasive hepatoma cell line. The antioxidant potential of lycopene was examined by quantification of cellular ROS and of SOD and CAT activities. The effect of lycopene on PKC pathway was examined by quantification of cellular ROS after stimulation with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin. The role of NADPH oxidase was examined by its inhibition with DPI, an NADPH oxidase inhibitor. Our results show that DPI inhibited ROS production, demonstrating the importance of NADPH oxidase in ROS generation in SK-Hep-1cell. Lycopene decreased basal ROS production and increased SOD activity. Furthermore, lycopene inhibit ROS by ionomycin and PMA-induced. Taken together, these results suggest lycopene antioxidant mechanisms are through modulation of protein kinase C. However, more studies are needed to confirm this hypothesis.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:28Z : No. of bitstreams: 1 000855952.pdf: 1890967 bytes, checksum: a328487391f3e5f64c37aac8694f8b12 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido à necessidade de otimização dos métodos de determinação da capacidade anaeróbia, o objetivo da presente tese de doutorado foi validar a avaliação do déficit acumulado de oxigênio (AOD) por meio da técnica de retro extrapolação (AODRED). Para isso, 25 nadadores foram avaliados e quatro trabalhos foram desenvolvidos. O primeiro trabalho objetivou comparar o VO2Pico e a vVO2Pico de nadadores obtidos após esforço máximo de 400 m e teste incremental em nado livre. Onze nadadores realizaram esforço máximo de 400m e protocolo incremental para determinar ambas variáveis. Apesar de nenhuma diferença entre VO2Pico (3.86 ± 0.85 L∙min-1 vs. 4.09 ± 0.93 L∙min-1), a vVO2Pico (1.39 ± 0.12 m∙s-1 vs. 1.34 ± 0.13 m∙s-1) foi superior durante teste incremental. O segundo trabalho objetivou comparar o AODRED (i.e. soma dos metabolismos lático e alático) com o AOD após esforço máximo de 400m. Para isso seis atletas foram submetidos à quatro exercícios submáximos e um esforço máximo de 400m. O AOD foi considerado a diferença entre a demanda teórica (DT) e a contribuição aeróbia (Aer), enquanto o AODRED foi avaliado pela soma dos metabolismos anaeróbios. Nenhuma diferença entre AOD (3.29 ± 1.34 LO2) e AODRED (3.24 ± 1.56 L O2), correlações significantes (r = 0.95) e baixo erro médio de estimativa (0.04 L) foram encontrados entre as metodologias. Haja vista que nenhuma diferença foi encontrada, o terceiro estudo objetivou verificar a possibilidade de se estimar a Aer apenas pelo uso do AODRED. Seis nadadores foram submetidos à um esforço máximo de 400m com snórquel. A Aer estimada pela demanda retangular (i.e. VO2Pico·tempo de esforço; AerRD) não foi diferente da Aer (10.36 ± 1.56 L vs. 10.31 ± 1.48 L), além de apresentar baixo erro médio (-0.15 L). Dessa forma, como o AODRED é determinado pelas concentrações pico de lactato e cinética off do consumo de oxigênio, seria possível avaliar o... / Due to the need to optmize the methods of anaerobic capacity determination, the aim of the present doctor thesis was validate the evaluation of accumulated oxygen deficit (AOD) by the backward extrapolation technique (AODRED). For this, 25 swimmers were evaluated and four scientific works were developed. The first study aimed to compare VO2Peak and sVO2Peak of swimmers obtained after a maximal 400 m effort and free-swimming incremental test. Eleven swimmers performed a maximal 400m effort and an incremental protocol to determine both variables. Besides no difference between VO2Peak (3.86 ± 0.85 L∙min-1 vs. 4.09 ± 0.93 L∙min-1), the sVO2Peak 1.39 ± 0.12 m∙s-1 vs. 1.34 ± 0.13 m∙s-1) was higher in the incremental test. The second study aumed compare AODRED (i.e. sum of lactic and alactic metabolism) with the AOD after a maximal 400m effort. The AOD was considered as the difference between theoretical demand (TD) and aerobic contribution (Aer), while AODRED was evaluated by the sum of anaerobic metabolisms. No difference between AOD (3.29 ± 1.34 LO2) and AODRED (3.24 ± 1.56 L O2), significant correlation (r = 0.95), and low mean standard estimative error (0.04 L) were found between the methodologies. Since no difference was found, the third study aimed to verify the possibility to estimate Aer only by the use of AODRED. Six swimmers were submitted to a maximal 400m effort with snorkel. The Aer estimated by the rectangular demand (i.e. VO2Peak·effort time; AerRD) was not different from Aer (10.36 ± 1.56 L vs. 10.31 ± 1.48 L), and presented low mean error (-0.15 L). Thus, since AODRED is determined by peak lactate concentration and off transient oxygen kinetics, it would be possible the AODRED by the backward extrapolation technique. Thus, the forth study aimed to test the reliability and validity of free-swimming AODRED (i.e. backward extrapolation). For this, eight swimmers performed two 400m efforts without snorkel ... / FAPESP: 13/15322-31

Submitted by DANIEL ARGENTIM null (argentim7@yahoo.com.br) on 2016-01-15T17:49:32Z No. of bitstreams: 1 Argentim_Daniel Tese.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-01-15T19:26:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 argentim_d_dr_bot_int.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-15T19:26:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 argentim_d_dr_bot_int.pdf: 410283 bytes, checksum: 2fa331181b89525c9288c2d24005203d (MD5) Previous issue date: 2016-01-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adequada frequência alimentar pode proporcionar maior crescimento dos peixes, contudo a escolha da melhor estratégia pode variar de acordo com as condições ambientais. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da frequência alimentar e da temperatura da água no desempenho do bijupirá. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x3 com seis tratamentos e três repetições. Os tratamentos consistiram em ofertar a ração em quatro ou 24 refeições por dia aos juvenis de bijupirá (40 ±4,5 g) submetidos a três temperaturas da água, 24, 27 ou 30°C. Os resultados mostraram que houve interação da temperatura da água e frequência de alimentação sobre o desempenho dos peixes. Na água com temperatura de 24 e 27°C, os peixes alimentados quatro vezes ao dia apresentaram maior ganho de peso médio (GPM), maior taxa de crescimento específico (TCE) e melhor conversão alimentar (CAA) (p<0,05) do que aqueles alimentados 24 vezes ao dia, porém, esta diferença não foi significativa para os peixes mantidos a 30°C. No entanto, não houve diferença (p>0,05) para a conversão alimentar dos peixes criados na água com temperatura de 24, 27 e 30°C quando a ração foi distribuída com maior frequência (24vezes/dia). Portanto, quando criado em temperaturas de 24 e 27°C, o bijupirá deve ser alimentado quatro vezes ao dia, mas quando os peixes são criados na temperatura de 30°C as frequências de alimentação avaliadas (04 e 24 refeições/dia) não influenciam o desempenho do bijupirá. / The appropriate feeding frequency can provide the fastest fish growing performance; however the choice of the best feeding strategy may vary according to environmental conditions. The aim of this study was to evaluate the effect of feeding frequency and water temperatures in cobia performance. The experimental design was completely randomized in a 2x3 factorial design with six treatments and three replicates. The treatments consisted of the feed offering four or 24 meals a day to cobia juvenile (40 ± 4.5 g) and three water temperatures, 24, 27 or 30°C. The results showed that there was interaction between the water temperature and feeding frequency on fish performance. The fish fed four times a day, in water at 24 to 27°C, had higher average weight gain (AWG), specific growth rate (SGR) and feed conversion rate (FCR) (p <0.05) than those fed 24 times a day, however, this difference was not significant for fish raised in water at 30°C. However, there was no difference in feed conversion rate (p> 0.05) for fish raised at 24, 27 and 30°C when the feed was distributed more times per day (24 times/day). Therefore, when raised in temperature 24 and 27 ° C, the cobia must be fed four times a day, but when the fish are raised in temperature to 30 ° C the evaluated feeding frequency (04 and 24 meals / day) do not affect cobia performance. / FAPESP: 2013/02488-0

As nitrorredutases compreendem uma família de proteínas conservadas evolutivamente e originalmente identificadas em eubactérias. São enzimas capazes de catalisar a redução do grupo nitro e utilizam FMN (flavina mononucleotideo) ou FAD (flavina adenina dinucleotídeo oxidado) como grupo prostético e NADPH (nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato reduzido) ou NADH (nicotinamida adenina dinucleotídeo reduzido) como agentes redutores. As nitrorredutases podem ser encontradas em bactérias e em menor extensão em eucariotos. Dois subgrupos de nitrorredutases foram caracterizados em bactérias: oxigênio-insensível ou tipo I e oxigênio-sensível ou tipo II. Na levedura Saccharomyces cerevisiae duas prováveis nitrorredutases, Frm2p/Hbn1p foram identificadas. Em relação às enzimas pertencentes à família das nitrorredutases não se tem conhecimento sobre a sua função biológica, bem como em relação à sua posição filogenética. Tendo isso em vista, o objetivo deste trabalho é esclarecer a possível função das proteínas Frm2 e Hbn1 de Saccharomyces cerevisiae na resposta ao estresse oxidativo, bem como determinar a posição filogenética e a sua presença em outros organismos procariotos e eucariotos. Os resultados da análise filogenética mostram que bactérias possuem seqüências similares a Frm2p/Hbn1p (denominadas Nr1Ap) que formam um clado distinto dentro da família Frm2p/Hbn1p. Análises de agrupamentos hidrofóbicos (HCA) e modelagem tri-dimensional foram realizadas para comparar regiões conservadas entre proteínas Nr1Ap e Frm2p/Hbn1p. A nitrorredutase Frm2p possivelmente esteja atuando na via de sinalização lipídica, enquanto a função da Hbn1p é desconhecida. Entretanto, alguns estudos têm indicado que as nitrorredutases podem estar envolvidas na resposta a estresse oxidativo. Com o objetivo de esclarecer a função de Frm2p e Hbn1p, foi avaliada a sensibilidade de linhagens de levedura proficientes e deficientes em ambas proteínas ao estresse oxidativo, investigando a competência respiratória, as atividades de enzimas antioxidantes, a produção intracelular de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a peroxidação lipídica. Os resultados mostram uma menor atividade basal de superóxido dismutase (SOD) e elevada sensibilidade a óxido de 4-nitroquinolina (4-NQO) e Nnitrosodietilamina (NDEA), indução de mutantes citoplasmáticos (petites), produção intracelular de EROs e peroxidação lipídica quando expostas a estes agentes geradores de superóxido nas linhagens frm2 , hbn1 e frm2 hbn1 . Ainda podemos observar elevada atividade basal de catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e conteúdo de glutationa (GSH) nas linhagens frm2 e frm2 hbn1. Estas linhagens possuem menor produção de EROs e peroxidação lipídica quando expostas aos agentes geradores de peróxidos H2O2 e t-BOOH. Isso sugere que a ausência da Frm2p é o fator responsável por estas alterações vistas. Portanto, neste trabalho foi mostrada a influência das nitrorredutases Frm2 e Hbn1 na resposta ao estresse oxidativo em S. cerevisiae, pela modulação da atividade das enzimas antioxidantes, SOD, CAT e GPx, bem como do conteúdo de GSH. Adicionalmente também foi constatado que as nitrorredutases Frm2p e Hbn1p provavelmente não atuam na metabolização de nitrocompostos. Estes resultados são consistentes com os dados encontrados na análise filogenética, que apontam estas proteínas como constituindo uma nova família de prováveis nitrorredutases ainda não caracterizada, encontrada em bactérias e fungos. / The nitroreductase family comprises a group of FMN (flavine mononucleotide) ou FAD (flavine adenine dinucleotíde oxidade)-dependent enzymes able to metabolize nitrosubstituted compounds using the reducing power of NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide fosfate reduzide) or NADH (nicotinamide adenine dinucleotide reduzide). The nitroreductases can be found within bacterial species and, in a less extend, in eukaryotes. Two types of nitroreductase subgroups were characterized in bacteria: oxygen-insensitive or type I and oxygen sensitive or type II. In the yeast Saccharomyces cerevisiae two putative nitroreductase proteins, Frm2p and Hbn1p, were described. A feature of the nitroreductase family is our lack of knowledge about its biological function and evolutionary history. Taking into account these considerations, the purpose of this work was to elucidate the possible participation of these enzymes in response to oxidative stress as well as to determine the phylogenetic position of Frm2p and Hbn1p and the presence of homologous sequences in other prokaryotic and eukaryotic species. In order to obtain data about the phylogenetic position of Frm2p/Hbn1p, we performed an in-depth phylogenetic analysis of these proteins. The phylogenetic analysis of these proteins showed that bacterial cells have a Frm2p/Hbn1p-like sequences (termed NrlAp) which form a distinct clade within the fungal Frm2p/Hbn1p family. Hydrophobic cluster analysis (HCA) and three-dimensional protein modeling allowed us to compare conserved regions among NrlAp and Frm2/Hbn1p proteins. While Frm2p appears to act in the lipid signaling pathway, the function of Hbn1p is unknown. However, some works suggests a possible involvement from the nitroreductases in response the stress oxidative. In order to elucidate the functions of Frm2p and Hbn1p, we evaluate the sensitivity of proficient and deficient yeast strains for both proteins for oxidative stress, considering the respiratory competence, antioxidant enzyme activities, intracellular reactive oxygen species (ROS) production and lipid peroxidation. The results showed a weaker basal activity of superoxide dismutase (SOD) and higher sensitivity for 4-nitroquinoline-oxide (4-NQO) and NNitrosodiethylamine (NDEA), induction of petites, ROS production and lipid peroxidation when exposed the these superoxide generating agents. The results showed a higher basal activity of catalase (CAT), glutathione peroxidase (Gpx) and reduced glutathione (GSH) content in the single and double mutant strains frm2 and frm2 hbn1 . These strains were less ROS-producing and lipid peroxidation when exposed to peroxides-generating agents H2O2 and t-BOOH. Thus, the absence of Frm2p may be the event responsible for these alterations. Considering the data gathered in this work, we showed the influence of nitroreductases Frm2p and Hbn1p in response to oxidative stress in S. cerevisae yeast by modulation of antioxidant enzymes activities, such as SOD, CAT, GPx and GSH content. Additionally, it was showed that the nitroreductases Frm2p and Hbn1p are not envolved in the activation of nitrocompounds. Theses results are consistent with those found in the filogenetic analysis that indicated that theses proteins belong to the new bacterial and fungal Frm2p/Hbn1p nitroreductase-like family.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Geociências, Programa de Pós-Graduação em Geologia, 2017. / Submitted by Gabriela Lima (gabrieladaduch@gmail.com) on 2017-12-06T12:58:55Z No. of bitstreams: 1 2017_JudironSantosSantiago.pdf: 8418693 bytes, checksum: 0475c51cf19ec6c34d9bed263a664d31 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-02-05T16:51:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_JudironSantosSantiago.pdf: 8418693 bytes, checksum: 0475c51cf19ec6c34d9bed263a664d31 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-05T16:51:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_JudironSantosSantiago.pdf: 8418693 bytes, checksum: 0475c51cf19ec6c34d9bed263a664d31 (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / A região da Fazenda Bonfim situa-se na Faixa de Dobramentos Seridó, um importante domínio metalognético da Província Borborena, no qual são registradas mineralizações de W-Mo-Bi ± Au, Be-Ta-Li, Sn-Ta e gemas associadas ao magmatismo Brasiliano. Apesar de inúmeros trabalhos, muito pouco se sabe sobre corpos graníticos mineralizados intrusivos no embasamento gnáissico migmatítico, sua origem, fontes, profundidades da intrusão e posicionamento na história evolutiva da Província Borborema. Contudo, recentes ocorrências de esmeraldas associadas a corpos félsicos intrusivos no embasamento caracterizam uma nova fronteira prospectiva no âmbito na riqueza mineral da Província Borborema. A gênese da esmeralda Fazenda Bonfim envolveu um clássico processo de metassomatismo decorrente da interação de corpos félsicos ricos em Be com rochas máfica-ultramáficas, porém fortemente influenciada movimentos tectônicos. Estudos de inclusões fluidas nas esmeraldas relevaram a presença de fluidos essencialmente aquosos (sistema tipo H2O-NaCl), porém com algum percentual de contribuição de fluidos aquo-carbônicos. Enquanto que os valores de composição isotópica (δ18O = 6,8 - 7,4 ‰) são consistentes com os dados isotópicos conhecidos para as esmeraldas do Brasil (δ18O= 6,8 ± 0,4 ‰), bem como para esmeraldas conhecidas em todo o mundo, geneticamente ligadas à interação de fluidos com rochas geoquímica e isotopicamente contrastantes, tipo pegmatito ácido e rochas ultramáficas. A mineralização ocorreu durante o estágio sin- deformacional associado ao pico da orogênese Brasiliana, controlada por zonas de cisalhamento dúctil, atribuida a fácie anfibolito médio, associado a intervalo de temperatura de 325 e 370ºC e pressões entre 2200 e 2800 bars. O processo metassomático responsável pela formação da esmeralda da Fazenda Bonfim possui idade de 553 Ma, a qual pode ser considerada como uma das idades mais antiga, até então registradas, relacionadas mineralização em corpos graníticos intrusivos da Faixa Seridó. / The region of Fazenda Bonfim is located in the Seridó Belt, an important metallogenic domain of the Borborena Province, there are no mining records of W-Mo-Bi ± Au, Be-Ta-Li, Sn-Ta and gems associated with magmatism Brasiliano. Even though numerous work, very little known about intrusive mineralized acid-granitic non-basement, their origin, sources, depths of intrusion and an age of positioning in the evolutionary history of Borborema Province. However, recent occurrences of emeralds associated with intrusive non-basement felsic bodies characterize a new prospective frontier in the field of Borborema Province mineral wealth. The genesis of the emerald Fazenda Bonfim involved a classical process of metassomatism due to the interaction of felsic bodies rich in Be with mafic-ultramafic rocks, but strongly influenced tectonic movements. Fluid insufflation studies in the emeralds reveal a presence of essentially aqueous fluids (H2O-NaCl type system), however with some contribution percentage of aqueous-carbonic fluids. While the isotopic composition values (δ18O = 6.8 - 7.4 ‰) are consistent with the known isotopic data for the emeralds of Brazil (δ18O = 6.8 ± 0.4 ‰), as well as for emeralds known in all over the world, genetically linked to the interaction of fluids with geochemical and isotopically contrasting rocks, type pegmatite acid and ultramafic rocks. The mineralization occurred during the stage sin- deformational, associated to the peak of the Brasiliana Orogenesis, controlled by shear zones, attributed to medium amphibolite facies, associated to a temperature range of 325 and 370ºC and pressures between 2200 and 2800 Bars. The metassomatic process carried out in the formation of the Fazenda Bonfim emerald has an age of 553 M.a., can be considered as one of the oldest ages, hitherto recorded, related to mineralization in intrusive granitic of the Seridó Belt.

Orientador: Marcelo Papoti / Banca: Paulo Roberto Pereira Santiago / Banca: Julio Wilson dos Santos / Banca: Gustavo Gomes de Araújo / Banca: Adelino Sanchez Ramos da Silva / Resumo: Devido à necessidade de otimização dos métodos de determinação da capacidade anaeróbia, o objetivo da presente tese de doutorado foi validar a avaliação do déficit acumulado de oxigênio (AOD) por meio da técnica de retro extrapolação (AODRED). Para isso, 25 nadadores foram avaliados e quatro trabalhos foram desenvolvidos. O primeiro trabalho objetivou comparar o VO2Pico e a vVO2Pico de nadadores obtidos após esforço máximo de 400 m e teste incremental em nado livre. Onze nadadores realizaram esforço máximo de 400m e protocolo incremental para determinar ambas variáveis. Apesar de nenhuma diferença entre VO2Pico (3.86 ± 0.85 L∙min-1 vs. 4.09 ± 0.93 L∙min-1), a vVO2Pico (1.39 ± 0.12 m∙s-1 vs. 1.34 ± 0.13 m∙s-1) foi superior durante teste incremental. O segundo trabalho objetivou comparar o AODRED (i.e. soma dos metabolismos lático e alático) com o AOD após esforço máximo de 400m. Para isso seis atletas foram submetidos à quatro exercícios submáximos e um esforço máximo de 400m. O AOD foi considerado a diferença entre a demanda teórica (DT) e a contribuição aeróbia (Aer), enquanto o AODRED foi avaliado pela soma dos metabolismos anaeróbios. Nenhuma diferença entre AOD (3.29 ± 1.34 LO2) e AODRED (3.24 ± 1.56 L O2), correlações significantes (r = 0.95) e baixo erro médio de estimativa (0.04 L) foram encontrados entre as metodologias. Haja vista que nenhuma diferença foi encontrada, o terceiro estudo objetivou verificar a possibilidade de se estimar a Aer apenas pelo uso do AODRED. Seis nadadores foram submetidos à um esforço máximo de 400m com snórquel. A Aer estimada pela demanda retangular (i.e. VO2Pico·tempo de esforço; AerRD) não foi diferente da Aer (10.36 ± 1.56 L vs. 10.31 ± 1.48 L), além de apresentar baixo erro médio (-0.15 L). Dessa forma, como o AODRED é determinado pelas concentrações pico de lactato e cinética off do consumo de oxigênio, seria possível avaliar o... / Abstract: Due to the need to optmize the methods of anaerobic capacity determination, the aim of the present doctor thesis was validate the evaluation of accumulated oxygen deficit (AOD) by the backward extrapolation technique (AODRED). For this, 25 swimmers were evaluated and four scientific works were developed. The first study aimed to compare VO2Peak and sVO2Peak of swimmers obtained after a maximal 400 m effort and free-swimming incremental test. Eleven swimmers performed a maximal 400m effort and an incremental protocol to determine both variables. Besides no difference between VO2Peak (3.86 ± 0.85 L∙min-1 vs. 4.09 ± 0.93 L∙min-1), the sVO2Peak 1.39 ± 0.12 m∙s-1 vs. 1.34 ± 0.13 m∙s-1) was higher in the incremental test. The second study aumed compare AODRED (i.e. sum of lactic and alactic metabolism) with the AOD after a maximal 400m effort. The AOD was considered as the difference between theoretical demand (TD) and aerobic contribution (Aer), while AODRED was evaluated by the sum of anaerobic metabolisms. No difference between AOD (3.29 ± 1.34 LO2) and AODRED (3.24 ± 1.56 L O2), significant correlation (r = 0.95), and low mean standard estimative error (0.04 L) were found between the methodologies. Since no difference was found, the third study aimed to verify the possibility to estimate Aer only by the use of AODRED. Six swimmers were submitted to a maximal 400m effort with snorkel. The Aer estimated by the rectangular demand (i.e. VO2Peak·effort time; AerRD) was not different from Aer (10.36 ± 1.56 L vs. 10.31 ± 1.48 L), and presented low mean error (-0.15 L). Thus, since AODRED is determined by peak lactate concentration and off transient oxygen kinetics, it would be possible the AODRED by the backward extrapolation technique. Thus, the forth study aimed to test the reliability and validity of free-swimming AODRED (i.e. backward extrapolation). For this, eight swimmers performed two 400m efforts without snorkel ... / Doutor

Resumo não disponível

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As nitrorredutases compreendem uma família de proteínas conservadas evolutivamente e originalmente identificadas em eubactérias. São enzimas capazes de catalisar a redução do grupo nitro e utilizam FMN (flavina mononucleotideo) ou FAD (flavina adenina dinucleotídeo oxidado) como grupo prostético e NADPH (nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato reduzido) ou NADH (nicotinamida adenina dinucleotídeo reduzido) como agentes redutores. As nitrorredutases podem ser encontradas em bactérias e em menor extensão em eucariotos. Dois subgrupos de nitrorredutases foram caracterizados em bactérias: oxigênio-insensível ou tipo I e oxigênio-sensível ou tipo II. Na levedura Saccharomyces cerevisiae duas prováveis nitrorredutases, Frm2p/Hbn1p foram identificadas. Em relação às enzimas pertencentes à família das nitrorredutases não se tem conhecimento sobre a sua função biológica, bem como em relação à sua posição filogenética. Tendo isso em vista, o objetivo deste trabalho é esclarecer a possível função das proteínas Frm2 e Hbn1 de Saccharomyces cerevisiae na resposta ao estresse oxidativo, bem como determinar a posição filogenética e a sua presença em outros organismos procariotos e eucariotos. Os resultados da análise filogenética mostram que bactérias possuem seqüências similares a Frm2p/Hbn1p (denominadas Nr1Ap) que formam um clado distinto dentro da família Frm2p/Hbn1p. Análises de agrupamentos hidrofóbicos (HCA) e modelagem tri-dimensional foram realizadas para comparar regiões conservadas entre proteínas Nr1Ap e Frm2p/Hbn1p. A nitrorredutase Frm2p possivelmente esteja atuando na via de sinalização lipídica, enquanto a função da Hbn1p é desconhecida. Entretanto, alguns estudos têm indicado que as nitrorredutases podem estar envolvidas na resposta a estresse oxidativo. Com o objetivo de esclarecer a função de Frm2p e Hbn1p, foi avaliada a sensibilidade de linhagens de levedura proficientes e deficientes em ambas proteínas ao estresse oxidativo, investigando a competência respiratória, as atividades de enzimas antioxidantes, a produção intracelular de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a peroxidação lipídica. Os resultados mostram uma menor atividade basal de superóxido dismutase (SOD) e elevada sensibilidade a óxido de 4-nitroquinolina (4-NQO) e Nnitrosodietilamina (NDEA), indução de mutantes citoplasmáticos (petites), produção intracelular de EROs e peroxidação lipídica quando expostas a estes agentes geradores de superóxido nas linhagens frm2 , hbn1 e frm2 hbn1 . Ainda podemos observar elevada atividade basal de catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e conteúdo de glutationa (GSH) nas linhagens frm2 e frm2 hbn1. Estas linhagens possuem menor produção de EROs e peroxidação lipídica quando expostas aos agentes geradores de peróxidos H2O2 e t-BOOH. Isso sugere que a ausência da Frm2p é o fator responsável por estas alterações vistas. Portanto, neste trabalho foi mostrada a influência das nitrorredutases Frm2 e Hbn1 na resposta ao estresse oxidativo em S. cerevisiae, pela modulação da atividade das enzimas antioxidantes, SOD, CAT e GPx, bem como do conteúdo de GSH. Adicionalmente também foi constatado que as nitrorredutases Frm2p e Hbn1p provavelmente não atuam na metabolização de nitrocompostos. Estes resultados são consistentes com os dados encontrados na análise filogenética, que apontam estas proteínas como constituindo uma nova família de prováveis nitrorredutases ainda não caracterizada, encontrada em bactérias e fungos. / The nitroreductase family comprises a group of FMN (flavine mononucleotide) ou FAD (flavine adenine dinucleotíde oxidade)-dependent enzymes able to metabolize nitrosubstituted compounds using the reducing power of NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide fosfate reduzide) or NADH (nicotinamide adenine dinucleotide reduzide). The nitroreductases can be found within bacterial species and, in a less extend, in eukaryotes. Two types of nitroreductase subgroups were characterized in bacteria: oxygen-insensitive or type I and oxygen sensitive or type II. In the yeast Saccharomyces cerevisiae two putative nitroreductase proteins, Frm2p and Hbn1p, were described. A feature of the nitroreductase family is our lack of knowledge about its biological function and evolutionary history. Taking into account these considerations, the purpose of this work was to elucidate the possible participation of these enzymes in response to oxidative stress as well as to determine the phylogenetic position of Frm2p and Hbn1p and the presence of homologous sequences in other prokaryotic and eukaryotic species. In order to obtain data about the phylogenetic position of Frm2p/Hbn1p, we performed an in-depth phylogenetic analysis of these proteins. The phylogenetic analysis of these proteins showed that bacterial cells have a Frm2p/Hbn1p-like sequences (termed NrlAp) which form a distinct clade within the fungal Frm2p/Hbn1p family. Hydrophobic cluster analysis (HCA) and three-dimensional protein modeling allowed us to compare conserved regions among NrlAp and Frm2/Hbn1p proteins. While Frm2p appears to act in the lipid signaling pathway, the function of Hbn1p is unknown. However, some works suggests a possible involvement from the nitroreductases in response the stress oxidative. In order to elucidate the functions of Frm2p and Hbn1p, we evaluate the sensitivity of proficient and deficient yeast strains for both proteins for oxidative stress, considering the respiratory competence, antioxidant enzyme activities, intracellular reactive oxygen species (ROS) production and lipid peroxidation. The results showed a weaker basal activity of superoxide dismutase (SOD) and higher sensitivity for 4-nitroquinoline-oxide (4-NQO) and NNitrosodiethylamine (NDEA), induction of petites, ROS production and lipid peroxidation when exposed the these superoxide generating agents. The results showed a higher basal activity of catalase (CAT), glutathione peroxidase (Gpx) and reduced glutathione (GSH) content in the single and double mutant strains frm2 and frm2 hbn1 . These strains were less ROS-producing and lipid peroxidation when exposed to peroxides-generating agents H2O2 and t-BOOH. Thus, the absence of Frm2p may be the event responsible for these alterations. Considering the data gathered in this work, we showed the influence of nitroreductases Frm2p and Hbn1p in response to oxidative stress in S. cerevisae yeast by modulation of antioxidant enzymes activities, such as SOD, CAT, GPx and GSH content. Additionally, it was showed that the nitroreductases Frm2p and Hbn1p are not envolved in the activation of nitrocompounds. Theses results are consistent with those found in the filogenetic analysis that indicated that theses proteins belong to the new bacterial and fungal Frm2p/Hbn1p nitroreductase-like family.