Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27Bitstream added on 2014-06-13T20:07:22Z : No. of bitstreams: 1 penna_mah_dr_rcla.pdf: 3149372 bytes, checksum: c0ff1245fef00ae9478342001dbbe584 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O estudo das características microscópicas dos pêlos de mamíferos tem sido desenvolvido com o propósito de utilizá-las como critério taxonômico, especialmente para a identificação de restos presentes em fezes, conteúdos estomacais e bolotas de regurgitação de predadores. Os pêlos são menos danificados no processo digestivo, e são freqüentemente a única prova para identificação da presa em estudos de hábito alimentar, já que ossos e dentes sofrem intensa fragmentação durante a mastigação apresentando baixo valor diagnóstico, portanto um conhecimento maior da estrutura do pêlo facilita esses estudos e oferece uma base para estudos mais completos de predação e seus efeitos sobre as espécies de presa. Assim, os objetivos do presente projeto foram o desenvolvimento de técnicas de preparação de lâminas de pêlos para coleções e observações diretas; o desenvolvimento de uma chave de identificação de alguns roedores de mata atlântica baseada em pêlos; e a análise morfométrica dos pêlos de algumas espécies de roedores para a comparação com dados biométricos. Foram desenvolvidas 3 novas técnicas para a preparação de lâminas para a observação da medula de pêlos e outras 3 para a observação do padrão cuticular. Essas técnicas proporcionam um maior índice de sucesso na preparação de lâminas, aumentando também a visibilidade dos padrões e consequentemente as possibilidades de pesquisas na área. / The mammal hair identification has been used across the world for studies in forensics, in the field of public health, in textile fibers research, and in mammals feeding ecology, being useful on the identification of leftovers on feces and stomach contents. Hairs are the less damaged structures by digestive processes and nonetheless are the only clue for the identification of the prey in studies of feeding ecology of predators, since bones and tooth suffer heavy damage during the chewing process, being of a low diagnostic value. These factors show the importance of a better knowledge of the hair structure for prey or predator ecology studies. Also the hair trapping and identification has a important value in animal research bioethics, since the mammal surveys can be developed with hair-traps or scats/pellets without any harm or interference for the animals which have no risk to get addicted to the bait, which usually bias surveys, and minimizing the stress for being caught. The aim of the present thesis were the development of better techniques for the preparation of hair plates for collections and direct observations; the development of a identification key for Rain Forest rodents; and the morphometrical analysis of those mammals hairs for further comparison and analysis with biometrical data. There were developed 6 new techniques, being 3 for medulla pattern observation, and another 3 for cuticular impressions. Those techniques showed a higher success index on plate preparation, enabling the development of high level research on this field.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000395749-Texto+Completo-0.pdf: 1423043 bytes, checksum: ca56d3788b6dc3481d9aed7040fc6130 (MD5) Previous issue date: 2007 / O melanismo em mamíferos decorre principalmente da atividade de dois genes: MC1R (Melanocortin-1 Receptor), cujo produto induz a produção de eumelanina (pretomarrom); e ASIP (Agouti Signaling Protein), que codifica um peptídeo antagonista que promove a produção de feomelanina (pigmento claro). A combinação do efeito destes dois locos faz com que o pêlo cresça escuro com bandas subapicais amarelas. No presente estudo investigamos a diversidade nucleotídica e os padrões de variabilidade presentes no gene ASIP, principalmente nas regiões codificadoras dos éxons 2 e 3 e em regiões não codificadoras dos íntrons 2 e 3 em alguns mamíferos, com ênfase em felídeos (Mammalia, Carnivora, Felidae). Através do alinhamento entre as espécies analisadas nesse estudo foi possível construir três bases de dados que foram divididas em diferentes blocos conforme as regiões de alinhamento. A análise comparativa de seqüências permitiu a caracterização de diferentes blocos de seqüência conservada, assim como a identificação de uma inserção SINE presente apenas no gato doméstico, de uma região repetitiva hipervariável em todos os felídeos analisados, e também de variantes moleculares (SNPs) em Felis catus e Leopardus geoffroyi. Nenhum dos polimorfismos identificados nesta espécie estava localizado em regiões exônicas ou apresentou associação a fenótipos de coloração, indicando que as regiões analisadas não estão envolvidas na indução do melanismo nesta espécie.

Os Bichos-Preguiça são mamíferos (Classe Mammalia) da ordem Xenarthra (ou Edentata) Utilizamos nesta pesquisa preguiças-de-coleira (Bradypus torquatus) sendo seis machos e uma fêmea de diferentes faixas etárias. Estes animais foram cedidos para o Laboratório de Anatomia do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (FMVZ -USP) pela Reserva Zoobotânica - Matinha Ilhéus/Bahia (Registro Ibama nº 02006.001.348/98-31), nos quais utilizamos as técnica de injeção vascular de látex (Neopreme® 650) e a injeção intra muscular de solução aquosa de formaldeido à 10%, posteriormente analisados por microscopia de luz. Os resultados mostraram que a presença da coleira nos animais adultos permite diferenciar machos de fêmeas. O períneo é encontrado extra cavitário com formato oval, delimitado pelo osso interpubiano, púbico e sacrococcigeo; divide-se em três regiões: aponeurotica, gordurosa e muscular. Os músculos perineais são representados através dos músculos: levantador do ânus, esfíncter uretral, retrator do pênis e o músculo esfíncter anal. Os órgãos reprodutores masculinos da preguiça de coleira (Bradypus torquatus) estão representados: por um par de testículos; pelos epidídimos, compostos de cabeça, corpo e cauda, por dois pares de glândulas genitais acessórias; sendo um par de vesiculares e um par composto pela próstata; pela uretra masculina e o pênis / Sloths are mammals (Class: Mammalia) from Order Xenarthra (or Edentata). We used in this research three-toed sloth (Bradypus torquatus) being six males and one female at different ages. These animals had been yielded to the Anatomy Laboratory of Surgery Department at College of Veterinary Medicine and Zootecny of São Paulo University (FMVZ/USP) from the Matinha Zoo botanic Reserve, Ilhéus/Bahia (IBAMA Register nº 02006.001.348/98-31). We used the technique of vascular latex injection (Neopreme® 650) and the muscular injection of watery formaldehyde solution to 10%, later analyzed by light microscopy. The results shown the presence of the necklace in adult animals allows to differentiate males from females. The perineal region is found extra cavity with oval shape, delimited by the interpubic, pubic bone and socrococcigeo; it is divided in three regions: aponeurotic, fatty and muscular. The perineal muscles are represented through the muscles: elevator of the anus, sphincter urethral, penis retractor and the muscle sphincter anal. The male reproductive organs of three-toed sloth sloth (Bradypus torquatus) are represented: for a pair of testis; epididimus, composed of head, body and tail, two pairs of accessory genital glands; one composed by a pair of vesicular glands and another pair, the prostate; for male urethra and penis.

O objetivo do presente estudo foi determinar as concentrações de testosterona no pêlo de cães domésticos, testar dois protocolos diferentes de extração hormonal, comparar os níveis séricos e avaliar as possíveis diferenças de concentração de testosterona no pêlo de acordo com: o sexo; animais castrados e inteiros; região de colheita; tipo e tempo de armazenamento do extrato e coloração da pelagem. Foram utilizados 31 animais adultos, sendo 25 machos e 6 fêmeas, da raça poodle provenientes de canis particulares. O pêlo foi colhido com auxílio de tesoura ou máquina de tosa e armazenados em temperatura ambiente, juntamente com colheita da amostra de sangue. Os protocolos de extração utlizaram 3mL de metanol como solvente por 2 ou 48 horas, os extratos foram secos em ar comprimido, ressuspendidos e armazenados na geladeira ou freezer por até 30 dias. As concentrações foram determinadas por radioimunensaio (RIE). Os testes estatísticos foram realizados utilizando-se o programa computadorizado Statistical Analysis System (SAS). Os resultados mostraram que é possível determinar as concentrações do hormônio testosterona no pêlo de cães. Os dois protocolos de extração de testosterona no pêlo demonstraram-se eficientes, porém o segundo apresenta maior recuperação hormonal do que o primeiro. É possível determinar as concentrações do hormônio testosterona no pêlo de cães. Não há correlação positiva entre os níveis hormonais de testosterona encontrados no sangue e no pêlo. Há diferença estatística significativa entre as concentrações de testosterona no pêlo de acordo com o sexo: entre fêmeas e machos inteiros (p=0,0074) e entre fêmeas e machos (castrados e inteiros) (p=0,0042). Não há diferença entre fêmeas e machos castrados (p=0,3610). Não há diferença significativa das concentrações de testosterona no pêlo entre animais machos inteiros ou castrados. Não há diferença estatística significativa das concentrações de testosterona no pêlo entre as regiões de colheita da amostra (cabeça, corpo ou membros), pois em todos os animais há correlação positiva entre essas áreas. Não há diferença significativa das concentrações de testosterona no pêlo de acordo com a coloração da pelagem (branca, cinza, marrom e preta). Não há diferença estatística significativa das concentrações de testosterona no armazenamento do extrato do pêlo ressuspendido por até 30 dias na geladeira ou freezer. / The objective of the present study was to determine the concentrations of testosterone in domestic dogs hair, to test two different protocols of hormonal extraction, to compare the levels and in accordance with to evaluate the possible differences of hair concentration of testosterone: the sex; castrated and intact animals; sampling areas; type and time of storage of the extract and hair color. 31 adult animals had been used, being 25 males and 6 females, of the poodle breeds proceeding from particular kennels. The hair was cut with of scissors help or machine and keep in ambient temperature, together with of the sample of blood. The extraction protocols added 3mL of methanol as solvent for 2 or 48 hours, the extracts were dried in compressed air, added in assay buffer and stored in the refrigerator or to freezer for up to 30 days. The concentrations had been determined by radioimmunoassay (RIA). The statistical tests were performed using the computer program Statistical Analysis System (SAS). The results had shown that it is possible to determine the concentrations of testosterone in dogs hair. The two protocols of extraction of testosterone in the hair had been demonstrated efficient, however as it presents greater hormonal recovery of what the first one. The sex has difference significant statistics in accordance with testosterone concentrations in the hair: between females and intact males (p=0,0074) and between females and males (castrated and intact) (p=0,0042). It does not have difference between females and castrated males (p=0,3610). It does not have significant difference of the concentrations of testosterone in the hair between intact or castrated male. It does not have difference significant statistics of the concentrations of testosterone in the hair in the sampling areas (head, body or members), therefore has positive correlation between these areas. The hair color does not have significant difference with concentrations of testosterone in the coat (white, gray, brown and black). It does not have difference significant statistics of the concentrations of testosterone in the storage of the extract added in assay buffer for up to 30 days in the refrigerator or freezer.

O objetivo do presente estudo foi determinar as concentrações de testosterona no pêlo de cães domésticos, testar dois protocolos diferentes de extração hormonal, comparar os níveis séricos e avaliar as possíveis diferenças de concentração de testosterona no pêlo de acordo com: o sexo; animais castrados e inteiros; região de colheita; tipo e tempo de armazenamento do extrato e coloração da pelagem. Foram utilizados 31 animais adultos, sendo 25 machos e 6 fêmeas, da raça poodle provenientes de canis particulares. O pêlo foi colhido com auxílio de tesoura ou máquina de tosa e armazenados em temperatura ambiente, juntamente com colheita da amostra de sangue. Os protocolos de extração utlizaram 3mL de metanol como solvente por 2 ou 48 horas, os extratos foram secos em ar comprimido, ressuspendidos e armazenados na geladeira ou freezer por até 30 dias. As concentrações foram determinadas por radioimunensaio (RIE). Os testes estatísticos foram realizados utilizando-se o programa computadorizado Statistical Analysis System (SAS). Os resultados mostraram que é possível determinar as concentrações do hormônio testosterona no pêlo de cães. Os dois protocolos de extração de testosterona no pêlo demonstraram-se eficientes, porém o segundo apresenta maior recuperação hormonal do que o primeiro. É possível determinar as concentrações do hormônio testosterona no pêlo de cães. Não há correlação positiva entre os níveis hormonais de testosterona encontrados no sangue e no pêlo. Há diferença estatística significativa entre as concentrações de testosterona no pêlo de acordo com o sexo: entre fêmeas e machos inteiros (p=0,0074) e entre fêmeas e machos (castrados e inteiros) (p=0,0042). Não há diferença entre fêmeas e machos castrados (p=0,3610). Não há diferença significativa das concentrações de testosterona no pêlo entre animais machos inteiros ou castrados. Não há diferença estatística significativa das concentrações de testosterona no pêlo entre as regiões de colheita da amostra (cabeça, corpo ou membros), pois em todos os animais há correlação positiva entre essas áreas. Não há diferença significativa das concentrações de testosterona no pêlo de acordo com a coloração da pelagem (branca, cinza, marrom e preta). Não há diferença estatística significativa das concentrações de testosterona no armazenamento do extrato do pêlo ressuspendido por até 30 dias na geladeira ou freezer. / The objective of the present study was to determine the concentrations of testosterone in domestic dogs hair, to test two different protocols of hormonal extraction, to compare the levels and in accordance with to evaluate the possible differences of hair concentration of testosterone: the sex; castrated and intact animals; sampling areas; type and time of storage of the extract and hair color. 31 adult animals had been used, being 25 males and 6 females, of the poodle breeds proceeding from particular kennels. The hair was cut with of scissors help or machine and keep in ambient temperature, together with of the sample of blood. The extraction protocols added 3mL of methanol as solvent for 2 or 48 hours, the extracts were dried in compressed air, added in assay buffer and stored in the refrigerator or to freezer for up to 30 days. The concentrations had been determined by radioimmunoassay (RIA). The statistical tests were performed using the computer program Statistical Analysis System (SAS). The results had shown that it is possible to determine the concentrations of testosterone in dogs hair. The two protocols of extraction of testosterone in the hair had been demonstrated efficient, however as it presents greater hormonal recovery of what the first one. The sex has difference significant statistics in accordance with testosterone concentrations in the hair: between females and intact males (p=0,0074) and between females and males (castrated and intact) (p=0,0042). It does not have difference between females and castrated males (p=0,3610). It does not have significant difference of the concentrations of testosterone in the hair between intact or castrated male. It does not have difference significant statistics of the concentrations of testosterone in the hair in the sampling areas (head, body or members), therefore has positive correlation between these areas. The hair color does not have significant difference with concentrations of testosterone in the coat (white, gray, brown and black). It does not have difference significant statistics of the concentrations of testosterone in the storage of the extract added in assay buffer for up to 30 days in the refrigerator or freezer.

Submitted by Rodolfo Lizcano Toledo (rodolfolizcano@gmail.com) on 2017-04-11T19:04:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Rodolfo_Lizcano_Toledo.pdf: 3969406 bytes, checksum: 2ef5dd577215fbca06ae57d5b3bd9983 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-11T19:16:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lizcanotoledo_r_me_jabo.pdf: 3969406 bytes, checksum: 2ef5dd577215fbca06ae57d5b3bd9983 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T19:16:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lizcanotoledo_r_me_jabo.pdf: 3969406 bytes, checksum: 2ef5dd577215fbca06ae57d5b3bd9983 (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / O experimento foi conduzido em casa de vegetação na FCAV/UNESP. Objetivou-se avaliar a caracterização os sintomas visuais de deficiência de micronutrientes em folhas; e avaliar os efeitos desses micronutrientes no estado nutricional do maracujazeiro amarelo. No experimento foi utilizado solução nutritiva, como substrato vermiculita em extrato úmido. Foram utilizadas mudas de maracujá (Passiflora edulis Sims.) do híbrido comercial BRS Gigante Amarelo do Cerrado. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado; com oito tratamentos (solução completa (Controle), omissão de B, omissão de Cu, omissão de Fe, omissão de Mn, omissão de Mo, omissão de Zn, solução completa + Ni); e 5 repetições. Utilizou-se como unidade experimental; vasos com 8 dm-3 de substrato com 1 planta/vaso e 2 vasos por unidade experimental. Após 60 dias do plantio, foi avaliada a matéria seca de cada tratamento, foi feito diagnóstico visual das deficiências nutricionais em folhas. Semanalmente foi avaliado o teor de clorofila para estabelecer regressão linear ou quadrática, entre os teores de clorofila e as deficiências nutricionais de cada tratamento; uma avaliação de variáveis fisiológicas como a transpiração, fotossíntese, condutância estomática e concentração interna e externa de CO2. Avaliaram-se características morfológicas como desenvolvimentos de pêlos radiculares e alterações no mesofilo foliar. A ordem de manifestação das deficiências no experimento foram as seguintes: Fe>Mn>Zn>Cu>Mo>B; a toxicidade de Níquel apareceu aos 40 dias após ao transplante, com sintomas de clorose nas folhas novas, logo um amarelecimento geral e algumas partes brancas. A omissão de B resultou em deformações no limbo foliar e perda da dominância apical, mostrando deformação dos pontos de crescimento; a omissão de Mn ocasionou redução do crescimento e clorose generalizada das folhas jovens com reticulo grosso, a omissão de Fe resultou em uma clorose internerval, com aparência de reticulado fino, sendo Fe e Mn os primeiros nutrientes cuja omissão resulta em sintomas de deficiência nas plantas de maracujá, seguidos pelo zinco e cobre, e por último o boro. O zinco e cobre apresentaram deformação e alongamento das folhas reduzindo consideradamente a altura e desenvolvimento radicular, o molibdênio apresentou uma clorose nas folhas velhas que posteriormente se espalho de forma geral. Os teores dos micros na parte aérea e raiz variaram de acordo ao tratamento, refletindo em problemas morfológicos e a nível ultra-estrutural na célula e fisiológicos, alterando variáveis como a transpiração, fotossíntese, condutância estomática e a relação entre a concentração de CO2 nos espaços intercelulares e a concentração de CO2 no ambiente. A omissão de ferro foi o elemento que mais refletiu problemas pela formação de pêlos radicais, observando-se maior formação destes em condições de deficiência do elemento possivelmente por sua relação com os hormônios etileno e auxinas. Todos os tratamentos apresentaram um desarranjo e desorganização a nível ultra-estrutural, nas organelas como os cloroplastos, parede celular, grânulos de amidos, grânulos de lipídeos, núcleo, afetando o funcionamento da célula e causando problemas fisiológicos que refletem em sintomas visuais e no desenvolvimento do maracujazeiro. / The experiment was conducted in a greenhouse at FCAV / UNESP. The objective was to evaluate the characterization of the visual symptoms of micronutrient deficiency in leaves; And to evaluate the effects of these micronutrients on the nutritional status of yellow passion fruit. In the experiment, a nutrient solution was used, with vermiculite as a substrate in a humid extract. Passion fruit (Passiflora edulis Sims.) Seedlings of commercial hybrid BRS Gigante Amarelo do Cerrado were used. The experimental design was completely randomized; With eight treatments (complete solution (Witness), omission of B, omission of Cu, omission of Fe, omission of Mn, omission of Mo, omission of Zn, complete solution + Ni); And 5 replicates. It was used as experimental unit; Vessels with 8 dm-3 of substrate with 1 plant / pot and 2 pots per experimental unit. After 60 days of planting, the dry matter of each treatment was evaluated, and the nutritional deficiencies were evaluated in leaves. The chlorophyll content was evaluated weekly to establish linear or quadratic regression between chlorophyll levels and nutritional deficiencies of each treatment; besides an evaluation of physiological variables such as transpiration, photosynthesis, stomatal conductance and internal and external CO2 concentration. Morphological characteristics were evaluated by means of optical microscope as were the development of root hair and by means of transmission electron microscopy, changes in leaf mesophyll. The order of manifestation of the deficiencies in the experiment were as follows: Fe> Mn> Zn> Cu> Mo> B; The toxicity of Nickel appeared at 40 days after the experiment was carried out in the vessels with symptoms of chlorosis in the new leaves, thus a general yellowing and some white parts. The omission of B resulted in deformations in the leaf limb and loss of apical dominance, showing deformation of the growth points; The omission of Mn caused reduction of growth and generalized chlorosis of the young leaves with thick reticulum, the omission of Fe resulted in an internerval chlorosis, with the appearance of fine crosslinking, with Fe and Mn being the first nutrients whose omission results in symptoms of plant deficiency Of passion fruit, followed by zinc and copper, and finally boron. The zinc and copper presented deformation and elongation of the leaves, reducing considerably the height and root development, the molybdenum presented a chlorosis in the old leaves that later spread in general form. The contents of the microspheres in the shoot and root varied according to the treatment, reflecting in morphological and ultrastructural problems in the cell and physiological, changing variables such as transpiration, photosynthesis, stomatal conductance and the relation between the concentration of CO2 in the spaces And the concentration of CO2 in the environment. The iron omission was the element that most reflected problems due to the formation of radical hair, being observed a greater formation of iron under conditions of deficiency of the element possibly due to its relation with the hormones ethylene and auxins. The observations in the transmission electron microscope showed in all the treatments a derangement and disorganization at the ultrastructural level, in the organelles as the chloroplasts, cell wall, starch granules, lipid granules, nucleus, affecting the functioning of the cell and causing physiological problems Which reflect on visual symptoms and the development of passion fruit.

Os Bichos-Preguiça são mamíferos (Classe Mammalia) da ordem Xenarthra (ou Edentata) Utilizamos nesta pesquisa preguiças-de-coleira (Bradypus torquatus) sendo seis machos e uma fêmea de diferentes faixas etárias. Estes animais foram cedidos para o Laboratório de Anatomia do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (FMVZ -USP) pela Reserva Zoobotânica - Matinha Ilhéus/Bahia (Registro Ibama nº 02006.001.348/98-31), nos quais utilizamos as técnica de injeção vascular de látex (Neopreme® 650) e a injeção intra muscular de solução aquosa de formaldeido à 10%, posteriormente analisados por microscopia de luz. Os resultados mostraram que a presença da coleira nos animais adultos permite diferenciar machos de fêmeas. O períneo é encontrado extra cavitário com formato oval, delimitado pelo osso interpubiano, púbico e sacrococcigeo; divide-se em três regiões: aponeurotica, gordurosa e muscular. Os músculos perineais são representados através dos músculos: levantador do ânus, esfíncter uretral, retrator do pênis e o músculo esfíncter anal. Os órgãos reprodutores masculinos da preguiça de coleira (Bradypus torquatus) estão representados: por um par de testículos; pelos epidídimos, compostos de cabeça, corpo e cauda, por dois pares de glândulas genitais acessórias; sendo um par de vesiculares e um par composto pela próstata; pela uretra masculina e o pênis / Sloths are mammals (Class: Mammalia) from Order Xenarthra (or Edentata). We used in this research three-toed sloth (Bradypus torquatus) being six males and one female at different ages. These animals had been yielded to the Anatomy Laboratory of Surgery Department at College of Veterinary Medicine and Zootecny of São Paulo University (FMVZ/USP) from the Matinha Zoo botanic Reserve, Ilhéus/Bahia (IBAMA Register nº 02006.001.348/98-31). We used the technique of vascular latex injection (Neopreme® 650) and the muscular injection of watery formaldehyde solution to 10%, later analyzed by light microscopy. The results shown the presence of the necklace in adult animals allows to differentiate males from females. The perineal region is found extra cavity with oval shape, delimited by the interpubic, pubic bone and socrococcigeo; it is divided in three regions: aponeurotic, fatty and muscular. The perineal muscles are represented through the muscles: elevator of the anus, sphincter urethral, penis retractor and the muscle sphincter anal. The male reproductive organs of three-toed sloth sloth (Bradypus torquatus) are represented: for a pair of testis; epididimus, composed of head, body and tail, two pairs of accessory genital glands; one composed by a pair of vesicular glands and another pair, the prostate; for male urethra and penis.

A acidez do solo é um dos principais fatores limitantes à produção vegetal. A toxicidade por alumínio, que ocorre apenas a pH baixo, tem sido extensamente investigada, enquanto o estresse causado pelo pH baixo tem recebido pouca atenção. Os estudos nesta área quase sempre presumem efeitos aditivos, e portanto independentes, da toxicidade por Al3+ e H+. Este provavelmente não é o caso, sendo que o pH baixo pode ser um fator de predisposição das células ao Al3+. As evidências indicam que o pH baixo causa desarranjos na parede de células em crescimento, gerando estresse que pode comprometer a sua funcionalidade e integridade. É provável que a susceptibilidade a este estresse deve ser dependente da pressão de turgor. Por sua vez, o metabolismo oxidativo e a geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) na parede celular podem modular a sua extensibilidade por romper ou criar ligações dentro ou entre cadeias de polissacarídeo. Há grande interesse em se conhecer se, à semelhança do que ocorre em leveduras, as células vegetais possuem um sistema de percepção e resposta a estresse da parede. Os pêlos radiculares em crescimento são sensíveis a pH baixo e estresse hipo-osmótico e constituem um bom modelo experimental para estes estudos. Os objetivos deste trabalho foram: a) Otimizar um sistema experimental para o estudo de pêlos radiculares de tomateiro (Solanum lycopersicum L. cv Micro-Tom); b) Avaliar as respostas dos pêlos radiculares ao estresse por pH baixo e hipo-osmolaridade; c) Examinar o papel da modulação oxidativa da parede celular nestas respostas; e d) Avaliar a resposta de diferentes mutantes hormonais de Micro-Tom a estes fatores de estresse. Os principais parâmetros avaliados foram a taxa de alongamento (µm.min-1) e a freqüência de rompimento dos pêlos. Tanto o estresse por pH baixo quanto choques hipo-osmóticos resultaram em taxas de alongamento significativamente diminuídos e o rompimento de pêlos radiculares, mas os efeitos dos tratamentos hipo-osmóticos foram mais marcantes. Uma curva de resposta frente à osmolaridade da solução externa revelou que a taxa de alongamento aumentou com a diminuição da osmolaridade até alcançar um limiar em que houve redução drástica da taxa de alongamento e começou-se a observar o rompimento de pêlos. Também se observou uma interação entre hipo-osmolaridade e pH baixo. O emprego do inibidor difenileno iodônio não forneceu evidências do envolvimento de NADPH oxidases da membrana plasmática na resposta de pêlos radiculares a choque hipo-osmótico ou pH baixo. Já no caso do inibidor ácido salicilhidroxâmico, encontrou-se evidências do envolvimento de peroxidases da parede. Nos mutantes hormonais dgt (pouco sensível a auxina) e epi (super produtor de etileno), mas não em not (deficiente em ácido abscísico), os pêlos radiculares apresentaram uma melhor resposta de ajustamento a choque hipo-osmótico do que Micro-Tom, reduzindo o alongamento e o rompimento dos pêlos. Este trabalho fornece fortes evidências de que os pêlos radiculares possuem um mecanismo de percepção e resposta a estresse da parede visando à manutenção de sua integridade e que apresentam bom potencial como sistema modelo nesta linha de pesquisa / Soil acidity is a major factor limiting plant growth worldwide. Aluminum toxicity, which occurs only at low pH, has been extensively studied, whereas low pH stress has received much less attention. Studies on Al3+ and H+ toxicity make the underlying assumption that the effects of these stress factors are additive, and, therefore independent of each other. However, this is most likely not the case and low pH may be a factor which increases susceptibility to further injury by Al3+. There is evidence that low pH causes disruption in cell wall structure of growing cells, which might jeopardize cell wall functionality and integrity. It is likely that turgor pressure plays an important role in cell wall stress caused by low pH. The apoplastic metabolism of reactive oxygen species (ROS) can modulate cell wall extensibility by making or breaking bonds within and between cell wall polysaccharides. A major question is whether, similarly to yeast, plant cells have a cell wall integrity signaling and response system. Growing root hairs are sensitive to low pH and hypo-osmotic stress and are potentially good experimental systems for such investigations. The objectives of this study were: a) Optimize an experimental system to examine tomato (Solanum lycopersicum L. cv Micro-Tom) root hairs; b) Examine the response of root hairs to low pH and hypo-osmotic stress; c) Examine the role of oxidative modulation of the cell wall in these responses; and d) Evaluate the response of different hormonal mutants of Micro-Tom to these stress factors. Root hair elongation rates (µm.min-1) and the frequency of cell bursting were the major experimental parameters which were evaluated. Both low pH and, more markedly, hypo-osmotic stress caused significant reductions in elongation rates and the bursting of root hair tips. In a response curve to varying osmolarities of the external medium, root hair elongation rates increased with decreasing osmolarities until a threshold was reached and elongation rates decreased drastically and the bursting of root hairs began to be observed. Interactions between low pH and hypo-osmolarity were observed. The use of the inhibitor diphenylene iodonium (DPI) did not provide evidence for the involvement of plasma membrane NADPH in the response of root hairs to low pH and hypo-osmotic shock. However, a role for cell wall peroxidases was provided by use of the inhibitor salicylhydroxamic acid (SHAM). Root hairs of the hormonal mutants dgt (low sensitivity to auxin) and epi (ethylene super producer), but not not (deficient in abscisic acid), displayed a more effective response to hypo-osmotic shock than Micro-Tom, by decreasing elongation rates and cell bursting to a greater degree. This study provides strong evidence to suggest that root hairs have a cell wall integrity response system and that root hairs are potentially good cell model systems for such research

A acidez do solo é um dos principais fatores limitantes à produção vegetal. A toxicidade por alumínio, que ocorre apenas a pH baixo, tem sido extensamente investigada, enquanto o estresse causado pelo pH baixo tem recebido pouca atenção. Os estudos nesta área quase sempre presumem efeitos aditivos, e portanto independentes, da toxicidade por Al3+ e H+. Este provavelmente não é o caso, sendo que o pH baixo pode ser um fator de predisposição das células ao Al3+. As evidências indicam que o pH baixo causa desarranjos na parede de células em crescimento, gerando estresse que pode comprometer a sua funcionalidade e integridade. É provável que a susceptibilidade a este estresse deve ser dependente da pressão de turgor. Por sua vez, o metabolismo oxidativo e a geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) na parede celular podem modular a sua extensibilidade por romper ou criar ligações dentro ou entre cadeias de polissacarídeo. Há grande interesse em se conhecer se, à semelhança do que ocorre em leveduras, as células vegetais possuem um sistema de percepção e resposta a estresse da parede. Os pêlos radiculares em crescimento são sensíveis a pH baixo e estresse hipo-osmótico e constituem um bom modelo experimental para estes estudos. Os objetivos deste trabalho foram: a) Otimizar um sistema experimental para o estudo de pêlos radiculares de tomateiro (Solanum lycopersicum L. cv Micro-Tom); b) Avaliar as respostas dos pêlos radiculares ao estresse por pH baixo e hipo-osmolaridade; c) Examinar o papel da modulação oxidativa da parede celular nestas respostas; e d) Avaliar a resposta de diferentes mutantes hormonais de Micro-Tom a estes fatores de estresse. Os principais parâmetros avaliados foram a taxa de alongamento (µm.min-1) e a freqüência de rompimento dos pêlos. Tanto o estresse por pH baixo quanto choques hipo-osmóticos resultaram em taxas de alongamento significativamente diminuídos e o rompimento de pêlos radiculares, mas os efeitos dos tratamentos hipo-osmóticos foram mais marcantes. Uma curva de resposta frente à osmolaridade da solução externa revelou que a taxa de alongamento aumentou com a diminuição da osmolaridade até alcançar um limiar em que houve redução drástica da taxa de alongamento e começou-se a observar o rompimento de pêlos. Também se observou uma interação entre hipo-osmolaridade e pH baixo. O emprego do inibidor difenileno iodônio não forneceu evidências do envolvimento de NADPH oxidases da membrana plasmática na resposta de pêlos radiculares a choque hipo-osmótico ou pH baixo. Já no caso do inibidor ácido salicilhidroxâmico, encontrou-se evidências do envolvimento de peroxidases da parede. Nos mutantes hormonais dgt (pouco sensível a auxina) e epi (super produtor de etileno), mas não em not (deficiente em ácido abscísico), os pêlos radiculares apresentaram uma melhor resposta de ajustamento a choque hipo-osmótico do que Micro-Tom, reduzindo o alongamento e o rompimento dos pêlos. Este trabalho fornece fortes evidências de que os pêlos radiculares possuem um mecanismo de percepção e resposta a estresse da parede visando à manutenção de sua integridade e que apresentam bom potencial como sistema modelo nesta linha de pesquisa / Soil acidity is a major factor limiting plant growth worldwide. Aluminum toxicity, which occurs only at low pH, has been extensively studied, whereas low pH stress has received much less attention. Studies on Al3+ and H+ toxicity make the underlying assumption that the effects of these stress factors are additive, and, therefore independent of each other. However, this is most likely not the case and low pH may be a factor which increases susceptibility to further injury by Al3+. There is evidence that low pH causes disruption in cell wall structure of growing cells, which might jeopardize cell wall functionality and integrity. It is likely that turgor pressure plays an important role in cell wall stress caused by low pH. The apoplastic metabolism of reactive oxygen species (ROS) can modulate cell wall extensibility by making or breaking bonds within and between cell wall polysaccharides. A major question is whether, similarly to yeast, plant cells have a cell wall integrity signaling and response system. Growing root hairs are sensitive to low pH and hypo-osmotic stress and are potentially good experimental systems for such investigations. The objectives of this study were: a) Optimize an experimental system to examine tomato (Solanum lycopersicum L. cv Micro-Tom) root hairs; b) Examine the response of root hairs to low pH and hypo-osmotic stress; c) Examine the role of oxidative modulation of the cell wall in these responses; and d) Evaluate the response of different hormonal mutants of Micro-Tom to these stress factors. Root hair elongation rates (µm.min-1) and the frequency of cell bursting were the major experimental parameters which were evaluated. Both low pH and, more markedly, hypo-osmotic stress caused significant reductions in elongation rates and the bursting of root hair tips. In a response curve to varying osmolarities of the external medium, root hair elongation rates increased with decreasing osmolarities until a threshold was reached and elongation rates decreased drastically and the bursting of root hairs began to be observed. Interactions between low pH and hypo-osmolarity were observed. The use of the inhibitor diphenylene iodonium (DPI) did not provide evidence for the involvement of plasma membrane NADPH in the response of root hairs to low pH and hypo-osmotic shock. However, a role for cell wall peroxidases was provided by use of the inhibitor salicylhydroxamic acid (SHAM). Root hairs of the hormonal mutants dgt (low sensitivity to auxin) and epi (ethylene super producer), but not not (deficient in abscisic acid), displayed a more effective response to hypo-osmotic shock than Micro-Tom, by decreasing elongation rates and cell bursting to a greater degree. This study provides strong evidence to suggest that root hairs have a cell wall integrity response system and that root hairs are potentially good cell model systems for such research