Stuttgart, Univ., Diss., 1999.

Thesis (M.Phil.)--Hong Kong University of Science and Technology, 2006. / Includes bibliographical references (leaves 144-152). Also available in electronic version.

Regensburg, Univ., Diss., 2004. / Erscheinungsjahr an der Haupttitelstelle: 2003

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T01:26:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295025.pdf: 2894933 bytes, checksum: 67593ffc68e4727beec377fc206b3a35 (MD5)

O adenocarcinoma colorretal é um dos tumores malignos mais freqüentes no mundo ocidental. Sua incidência varia mundialmente; nos Estados Unidos (EUA), é o terceiro câncer mais comum entre os homens e o segundo mais comum entre as mulheres, sendo a segunda causa de morte por câncer, superada apenas pelo tumor de pulmão. No Brasil, está entre as seis neoplasias mais freqüentes, ocupando a quarta posição em mortalidade. Os principais indicadores prognósticos do adenocarcinoma colorretal incluem a diferenciação histológica, profundidade de invasão e ocorrência de metástases. Recentemente, têm sido realizados diversos estudos usando técnicas de biologia molecular objetivando a identificação de novos parâmetros prognósticos. Entre estes, os fatores que regulam o ciclo celular influenciando no crescimento e mecanismo de apoptose têm demonstrado resultados promissores. O p53 é um gene supressor de tumores, localizado no braço curto do cromossomo 17; produz uma proteína chamada p53. Sua principal função é controlar pontos de checagem do ciclo celular, promover o reparo do DNA através do estímulo de outras proteínas (p21, por exemplo) e estimular a apoptose. Mutações deste gene produzem uma proteína p53 inativa que acumula nas células tumorais. A expressão desta proteína alterada é detectada em 30 a 70% dos tumores de reto e pode estar relacionada a mau prognóstico. O p53 é um dos genes mais comumente mutados no câncer humano. O objetivo deste estudo foi correlacionar a expressão imuno-histoquímica da proteína p53 com variáveis clínico-patológicas do adenocarcinoma de reto e sobrevida. Foram estudados 83 casos de pacientes operados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre entre 1985 e 1997 através de reação imunohistoquímica utilizando anticorpo monoclonal Pab-1801 em amostras biológicas fixadas em formalina e armazenadas em blocos de parafina. Com um ponto de corte de 5%, 44 pacientes (53%) demonstraram expressão imunohistoquímica da proteína p53 maior que 5% e, com um ponto de corte de 20%, 36 pacientes (43,4%) demonstraram a expressão maior que 20%. Não houve associação estatisticamente significativa entre a expressão de p53 e as variáveis idade, gênero, localização, tamanho do tumor e comprometimento circunferencial. Encontramos associação entre p53 e óbito, recidiva local, metástases e recidiva total quando utilizado o ponto de corte de 20%, indicando um pior prognóstico nos pacientes com p53 positivos. Na análise multivariada em relação à sobrevida, o p53 teve poder prognóstico independente em relação às variáveis da classificação Astler- Coller e grau de diferenciação histológica da neoplasia. / Colorectal carcinoma is one of the most prevalent solid tumours in the western world. In the United States is the third most frequent neoplasia in men and the second most frequent in women. In Brazil, it is among the six more common neoplasms; it is ranked fifth in mortality. The main prognostic indicators of colorectal adenocarcinoma are histological differentiation, depth of invasion and metastatic involvement. Recently, many studies in molecular biology have been carried out aiming the identification of new prognostic parameters. The factors that regulate cell cycle implicated in cell growth and apoptosis have been shown promising results. P53 is a suppressor gene, located on the short arm of chromossome 17; the product of the p53 gene is a protein also called p53. Its main function on cell proliferation includes regulation of the transition from G1 to S phase as a checkpoint control factor and promotion of the DNA repair through stimulation of another protein (p21) and indution of apoptosis. Mutation of this gene produces loss of p53 function and leads to accumulation into cell. P53 mutation is detected in 30% to 70 % of rectal tumors and it is related with poor prognosis. P53 is the most frequent mutated gene on human cancer. The aim of this study was to determine the correlation of the immunohistochemical p53 expression with clinical and pathological variables and to determine its prognosis value on rectal carcinoma. We study 83 patients operated on Hospital de Clínicas de Porto Alegre during 1985 to 1997. Pab-1801 monoclonal antibodies againts p53 was used in formaline samples fixed. A total of 44 (53%) cases showed p53 expression, wit a cutoff of 5% and 36 (43,4%) cases, with cutoff of 20%. We did not find any association of p53 expression with age, gender, tumour site, grade and mucus production at 5% cutoff. However, we did find association between p53 expression with survival and recurrence on 20% cutoff, clearly indicating poor prognosis in p53 positive patients. Multivariate analysis for survival, showed P53 expression a powerful prognosis independent factor in despite another variables like Astler-Coller system or differentiation tumors.

Resumo não disponível

OVCA is the most lethal gynecological cancer, due primarily to late diagnosis and chemoresistance (Canada, 2014; Society, 2014b). CDDP resistance is a major hurdle to successful therapy (MayoClinic, 2014). The mechanism of chemoresistance is multi-factorial including defects in apoptotic pathway and key tumor suppressor as well as dysregulation of metabolism (Borst et al., 2000; Galluzzi et al., 2012a; Siddik, 2003). Elevated aerobic glycolysis is a major source for fulfilling high energy demand of cancer, but the role of metabolic reprogramming and its regulatory mechanism in OVCA cells remain unknown. p53 is a key tumor suppressor involved in apoptosis and frequent defect of p53 (> 80%) exist in epithelial OVCA. HKII is a key metabolic enzyme involved in the first step of glycolysis and its frequent presence in the mitochondria (80% >) has been reported in multiple cancers. We demonstrate here that CDDP-induced, p53-mediated HKII down-regulation and mitochondrial p53-HKII interaction are determinants of chemosensitivity in OVCA. CDDP decreased HKII (mRNA abundance, protein level), altered its cellular localization and glycolysis in p53-wt chemosensitive OVCA cells, a response loss or attenuated in p53 deficient cells. HKII depletion sensitized chemoresistant cells to CDDP -induced apoptosis in a p53- dependent manner. In addition, p53 binds to HKII and facilitates its nuclear localization. Mechanistically, our data suggest that CDDP-activated p53 (phosphorylated p53; P-p53 Ser15) interacts with HKII in the nucleus for its regulation. Upon entry to the nucleus, P-p53(Ser15) transcriptionally regulates HKII by promoter binding, contributing to the regulation of HKII and aerobic glycolysis, eliciting apoptosis in chemosensitive OVCA cells. Conversely, this response is compromised in p53 defect chemoresistant cells. Using proximity ligation assay (PLA) in human OVCA cell lines and primary tumor cells and tumor sections from OVCA patients, we have demonstrated that nuclear HKII-P-p53(Ser15) intracellular trafficking is associated with chemosensitivity in vitro and in vivo. Furthermore, the nuclear HKII-P-p53(Ser15) interaction may be useful as a biomarker for chemosensitivity in multiple epithelial subtypes of OVCA.

LIMA, Diego Silva. Avaliação dos genes MLL, RB e TP53 em pacientes com síndrome mielodisplásica. 2011. 95 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:56:53Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) Previous issue date: 2011 / Myelodysplastic syndromes (MDS) represent a heterogeneous group of clonal disorders affecting the hematopoietic pluripotent cell, characterized by low cell counts in peripheral blood, dysplasia in one or more cell lines, inefficient hematopoiesis and increased risk of progression to acute myeloid leukemia. Although the disease can affect patients of other age groups, they are more frequent in those with advanced age with an average 60 to 75 years at diagnosis. Chromosomal abnormalities are observed in approximately 50% of all cases of MDS and are related with clinical and morphological findings. The aim of this study was to determine, through the technique of FISH (fluorescence in situ hybridization), the frequency of changes involving the MLL, RB, and TP53 genes in patients with MDS and associate these changes with cytogenetic findings. The cases included in the study were selected in the ambulatory of SMD from University Hospital Walter Cantídio. Thirty three patients were selected, 17 had aged over 60 years. 52% of patients were classified, according to WHO criteria, as refractory cytopenia with dysplasia in multiple lineages (RCDM) and 61% stratified, according to IPSS, as intermediate risk 1 (INT-1). 78% of patients had abnormalities detected by cytogenetics, among them 31% had complex karyotypes (more than 3 changes per metaphase). 18% of patients had changes at least in one of the three genes valued in this study by FISH. Three patients showed alterations of TP53 gene, being detected in two patients (records 31 and 6) the deletion of a single allele or both alleles of the gene, respectively, and in the third (record 2), we detected amplification of TP53 gene, all this changes were not detected by classical cytogenetics, because it is a less sensitive technique. 6% of patients (records 7 and 22) had rearrangement of MLL gene. In the first case, FISH discarded the gene deletion alleged by cytogenetic, proving that it was present in the genome of the patient, but in a rearranged form, and in the second case cytogenetics failed to demonstrate rearrangement of the gene. For the RB gene, FISH identified only one patient (3%) with deletion of one allele of the gene, and this change was also not detected by classical cytogenetics. During evaluating the TP53 gene, FISH allowed identification of two patients (records 5 and 10) presenting at least six extra copies of chromosome 17, probably representing a small hyperdiploid clone partially detected in the first patient and not detected in the second . In the six patients who showed abnormalities of the genes analyzed, FISH has provided information that added, changed or confirmed the result previously given by classical cytogenetics, which are a major application of this technique due to its high sensitivity compared to the traditional method. / As síndromes mielodisplásicas (SMD) representam um grupo heterogêneo de doenças clonais que acometem a célula precursora hematopoética pluripotente, caracterizando-se por baixa contagem de células no sangue periférico, displasia em uma ou mais linhagens celulares, hematopoese ineficiente, além do risco aumentado de progressão para leucemia mielóide aguda. Embora a doença possa acometer pacientes de outras faixas etárias, é mais frequente naqueles com idade avançada, com média ao diagnóstico de 60 a 75 anos. As anormalidades cromossômicas são observadas em aproximadamente 50% de todos os casos de SMD, estando, em alguns casos, relacionadas com achados clínicos e morfológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar, através da técnica de FISH (hibridização in situ por fluorescência), a frequência de alterações envolvendo os genes MLL, RB e TP53 em pacientes com SMD e associar estas alterações com os achados citogenéticos. Os casos inseridos no estudo foram oriundos do ambulatório de SMD do Hospital Universitário Walter Cantídio. Dos 33 pacientes selecionados, 17 pertenciam ao grupo com idade acima de 60 anos. 52% dos pacientes foram classificados, segundo a OMS, como citopenia refratária com displasia em múltiplas linhagens (CRDM) e 61% estratificados, segundo o IPSS, como de risco intermediário 1 (INT-1). Um total de 78% dos pacientes apresentaram alterações citogenéticas, dentre eles 31% possuíam cariótipos complexos (mais de 3 alterações por metáfase). A técnica de FISH permitiu identificar em 18% dos pacientes alterações envolvendo um dos três genes avaliados. Três pacientes apresentaram alteração do gene TP53, sendo detectada em dois deles (registros 31 e 6) a deleção de um único alelo ou de ambos os alelos do gene, respectivamente, e no terceiro (registro 2), detectou-se a amplificação do gene TP53, sendo estas alterações não visualizadas através da citogenética clássica, por se tratar de um técnica menos sensível. Detectou-se em 6% dos pacientes (registros 7 e 22) rearranjo do gene MLL, no primeiro a FISH descartou a suposta deleção do gene alegada pela citogenética, provando que o mesmo estava presente no genoma do paciente, porém de forma rearranjada e no segundo a citogenética não conseguiu demonstrar o rearranjo do gene. Quanto ao gene RB, a FISH permitiu identificar apenas um paciente (3%) com deleção de um dos alelos do gene, sendo esta alteração também não detectada pela citogenética clássica. A FISH possibilitou identificar, durante a avaliação do gene TP53, dois pacientes (registros 5 e 10) apresentando pelo menos 6 cópias extras do cromossomo 17, devendo essa alteração se tratar de um pequeno clone hiperdiplóide detectado parcialmente no primeiro paciente e não detectado no segundo. Nos seis pacientes que apresentaram alteração dos genes avaliados, a FISH proveu informações que adicionaram, confirmaram ou alteraram o resultado previamente emitido pela citogenética clássica, sendo estas uma das principais aplicações desta técnica devido sua alta sensibilidade quando comparada ao método clássico.

SOUZA, Walysson Alves Tocantins de. Análise imunohistoquímica da expressão das proteínas p53 e ki-67 em adenomas colorretais. 2010. 64 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia ) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T13:18:50Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T13:20:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-14T13:20:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) Previous issue date: 2010 / Ki-67 (p=0,02) expression between adenomas with high and low grade dysplasia, greater in the first group. There was greater expression of Ki-67 protein in the rectal adenomas than colic adenomas (p=0,02). There was no relation between the expression of the two proteins in the sample. / O objetivo deste estudo, é avaliar a expressão das proteínas p53 e Ki-67 em adenomas colorretais, suas relações com características clinico-patológicas e avaliar a relação entre as duas proteínas. A amostra consistiu de 50 pólipos adenomatosos encontrados em pacientes submetidos a exames colonoscópicos. Após a realização de polipectomia, os pólipos eram conservados em solução tamponada de formalina a 10% e submetidos à rotina de preparo de cortes e lâminas e coloração pela hematoxilina-eosina para confirmação da natureza adenomatosa. Realizou-se imunohistoquímica específica para as proteínas p53 e Ki-67 pelo método imunoenzimático da streptoavidina-biotina-peroxidase para cada adenoma. A proteína p53 foi positiva em 18% dos adenomas e a proteína Ki-67, expresso como índice (i.Ki-67), obteve média de 0,49. Houve diferença estatisticamente significante na expressão de p53 (p=0,0003) e Ki-67(p=0,02) entre os adenomas com alto e baixo grau de displasia, sendo maior no primeiro grupo. Encontrou-se, ainda maior expressão da proteína Ki-67 nos adenomas retais em relação aos de localização cólica (p= 0,02). Não houve relação entre a expressão das duas proteínas, na amostra

A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.