De todas as influências exógenas que possam alterar a microbiota intestinal, os antimicrobianos são capazes de causar as mais rápidas e drásticas mudanças. O impacto da exposição aos antimicrobianos na microbiota intestinal causa diminuição no número de microrganismos ou mesmo supressão, dependendo do antimicrobiano utilizado, da dose e do tempo de exposição. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar de forma comparativa alguns microrganismos que compõem a microbiota fecal de crianças com e sem antibioticoterapia em idade escolar; bem como avaliar a susceptibilidade aos antimicrobianos e os genes de resistência envolvidos. Foram coletadas amostras fecais não diarreicas de 30 crianças sem antibiótico (controle) e 31 de crianças com antibioticoterapia. Na análise quantitativa foi observada redução no número de cópias por g/fezes de: Bifidobacterium spp., B. fragilis, C. perfringens, E. coli, M. smithii e do filo Firmicutes nas amostras das crianças com antibióticos em relação ao grupo controle, exceto para Lactobacillus spp. e P. distasonis que apresentaram quantificação maior no grupo antibióticos quando comparados com o controle. E. coli foi isolada em 26 (86,7%) crianças controles e em 23 (74,2%) tratadas com antibióticos. A resistência foi verificada para diversas drogas no grupo controle exceto para ciprofloxacina, meropenem e tigeciclina; entretanto o grupo com antibioticoterapia apresentou elevada resistência para todas as drogas avaliadas, caracterizando os isolados desse estudo como MDR. Todos os isolados do grupo controle e antibióticos albergaram diversos genes de resistência, entretanto o gene blaKPC foi o único não detectado nos isolados do grupo controle. Desta forma, nossos dados demonstram que a antibioticoteria causa alterações qualitativas e quantitativas na microbiota intestinal; além disso, a elevada resistência as diversas classes de antimicrobianos das cepas de E. coli, bem como a presença de diversos genes de resistência ressalta a importância de cepas comensais serem MDR e albergarem esses genes. / Of all the exogenous influences that may alter the intestinal microbiota, antimicrobial agents are able to cause the more rapid and dramatic changes. The impact of exposure to antimicrobial agents on intestinal microbiota causes a decrease in the number of certain genera and species, depending on the antimicrobial agent used, dose and duration of exposure. Thus, the aim of this study was to analyze comparatively some microorganisms that composing the fecal microbiota of children with and without antibiotic therapy in school age; and evaluates the antimicrobial susceptibility and resistance genes involved. Stool samples (not diarrhea) were collected of 30 children without antibiotic (control) and 31 children with antibiotic therapy. In quantitative analysis was observed decrease in the number of copies per g/feces: Bifidobacterium spp., B. fragilis, C. perfringens, E. coli, M. smithii and the phylum Firmicutes in samples of children with antibiotic therapy in relation to control group, except Lactobacillus spp. and P. distasonis that showed a higher quantification in the antibiotics group when compared with control group. E. coli was isolated in 26 (86.7 %) children controls and in 23 (74.2 %) children treated with antibiotics. The resistance was verified for several drugs in the control group except for ciprofloxacin, meropenem and tigecycline; however the group with antibiotic therapy showed high resistance to all drugs evaluated, characterizing isolates of this study as MDR. All isolates from control group and antibiotics harbored several resistance genes, however blaKPC gene was the only one not detected in isolates from the control group. Thus, our data demonstrate that the antibiotic therapy cause qualitative or quantitative changes in intestinal microbiota leading to a decrease in the diversity and the elimination of microorganisms; in addition, the high resistance the various classes of antimicrobial of the strains of E. coli, as well as the presence of several genes of resistance highlights the importance of commensal strains are MDR and harboring these genes.

Procedimentos clínicos complementares realizados após o preparo químico-cirúrgico de canais radiculares visam potencializar a limpeza e desinfecção após a fase de preparo. O objetivo deste trabalho foi avaliar, por métodos moleculares baseados em rDNA e rRNA, a eficácia antimicrobiana de procedimentos complementares de primeira e de segunda sessão, realizados após o PQC em dentes com periodontite apical. Baseado em estudo piloto prévio, amostras microbiológicas dos canais radiculares de 20 dentes unirradiculares com periodontite apical foram coletadas na primeira sessão clínica: após a cirurgia de acesso (S1), após o PQC realizado com Sistema Reciproc e NaOCl 2,5% (S2), após a utilização do instrumento XP-endo Finisher (S3a), e após a ativação ultrassônica (S3b). Na segunda sessão clínica as amostras foram coletadas após medicação intracanal entre sessões por 14 dias (S4), e após o repreparo dos canais na segunda sessão de tratamento (S5). As amostras foram submetidas à extração de DNA e RNA. O RNA foi submetido à reação de transcrição reversa (RT-PCR) para confecção da fita dupla de DNA complementar (cDNA). DNA e cDNA foram submetidos a reações de qPCR, com iniciadores universais para a região 16S rRNA do domínio Bacteria. A atividade metabólica das bactérias foi verificada através da relação entre os níveis de rRNA e rDNA das amostras baseados nos dados dos ensaios de qPCR. Os dados foram analisados pelo teste de Wilcoxon para amostras pareadas (p < 0,05). Todas amostras S1 foram positivas para bactérias (mediana: 1,79 x 105 cópias de rDNA). Doze canais (60%) permaneceram infectados em S2, com uma redução significativa de rDNA (mediana: 7,58 x 103; P = 0,0001). Em S3a e S3b, o número de canais infectados reduziu para 11 (55%) e 10 (50%), respectivamente, e aumentou para 14 (70%) em S4; porém não houve diferenças significativas entre os níveis de rDNA bacteriano quando essas amostras foram comparadas às amostras S2 ou comparadas entre si (P > 0,05). A prevalência de canais infectados voltou a cair em S5 para 6 (30%) e o número cópias de rDNA bacteriano detectado reduziu de maneira significativa quando comparado às amostras S4 (p = 0,0061). Nas amostras positivas para os 2 métodos, os níveis de rRNA foram significativamente maiores do que os níveis de rDNA nas amostras S1 (p = 0,0007) e S4 (p = 0,0499), indicando um alto metabolismo bacteriano. A relação dos níveis de rRNA e de rDNA revelou uma redução do metabolismo de bactérias totais em S2, S3a e S3b e um aumento significativo do metabolismo bacteriano em S4 (p = 0,0173) quando comparado a S3b. Concluiu-se que: o PQC promoveu redução dos níveis e da atividade metabólica de bactérias nos canais radiculares; o uso do instrumento XP-endo Finisher e ativação ultrassônica não contribuiu para uma desinfecção adicional na primeira sessão; após o uso de Ca(OH)2 como medicação intracanal, houve um aumento no metabolismo de bactérias persistentes; o repreparo dos canais radiculares após medicação intracanal, na segunda sessão, promoveu maior desinfecção do que os procedimentos realizados na primeira sessão do tratamento de dentes com periodontite apical. / Supplementary procedures performed after the chemical-surgical preparation of root canals aim to enhance cleaning and disinfection in endodontic treatment. The objective of this clinical study was to evaluate using molecular microbiological techniques based on rDNA and rRNA, the antimicrobial efficacy of supplementary disinfection procedures performed in multiple sessions after the chemical-surgical preparation in teeth with apical periodontitis. Based on a previous pilot study, microbiological samples of the root canals of 20 unirradicular teeth with apical periodontitis were taken after the access surgery (S1), after the chemical-surgical preparation using Reciproc and 2,5% NaOCl (S2) after the XP-endo Finisher (S3a), after ultrasonic activation (S3b), after intracanal medication for 14 days (S4), and after re-preparation of the root canals in the second treatment appointment (S5). The samples were submitted to DNA and RNA extraction. The RNA was subjected to the reverse transcription reaction (RT-PCR) to make the complementary DNA double strand (cDNA). The effect of endodontic procedures on bacterial reduction was determined by rDNA-based qPCR using universal primers for the 16S rRNA region of the Bacteria domain. The metabolic activity of the bacteria was assessed by the rRNA/rDNA ratio based on qPCR assay data. Data were analyzed by the Wilcoxon signed-rank test (P < 0.05). All S1 samples were positive for bacteria (median 1.79 x 105 rDNA copies). Twelve root canals (60%) remained infected in S2, with a significant reduction of rDNA (median: 7.58 x 103; P = 0.0001). In S3a and S3b, the number of infected teeth decreased to 11 (55%) and 10 (50%), respectively, and increased to 14 (70%) in S4; however there were no significant differences between bacterial rDNA levels when these samples were compared to the S2 samples or compared to each other (P> 0.05). The prevalence of infected canals dropped back to 6 (30%) in S5 and the number of bacterial rDNA detected significantly reduced when compared to S4 samples (p = 0.0061). In samples with positive reactions for both methods, rRNA levels were significantly higher than the rDNA levels in S1 (p = 0.0007) and S4 (p = 0.0499), indicating a high metabolic activity of bacteria. The results of the rRNA/rDNA ratio revealed a reduction in the metabolism of total bacteria in S2, S3a and S3b and a significant increase in metabolic activity of bacteria in S4 (p = 0.0173) when compared to S3b. It was concluded that: PQC promoted reduction of the levels and metabolic activity of bacteria in the root canals; the use of XP-endo Finisher plus ultrasonic activation did not contribute to an additional disinfection in the first session; after the use of Ca(OH)2 as intracanal medication, there was an increase in the metabolismo of persistente bacteria; the repreparation of the root canals in the second session after the use of intracanal medication, promoted greater disinfection than the procedures performed in the first session of the treatment of teeth with apical periodontitis.

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O objetivo desse trabalho foi avaliar os níveis de expressão dos genes IL-10 e IL-4 relacionados ao perfil imunológico Th2 associado à susceptibilidade ao carrapato e os genes IL-2 e IFN- relacionados ao perfil imunológico Th1 associado à resistência ao parasito. Além destes genes, analisou-se o perfil de expressão do gene TLR-2, importante no processo de reconhecimento de patógenos e os genes IL-8 e TNF-α importantes no processo inflamatório inicial. Seis animais mais resistentes e seis animais mais susceptíveis de uma população F2 de 332 animais, originária do cruzamento de animais F1(½ Holandês: ½ Gir), foram selecionados baseado na contagem de carrapatos e valor genético. Amostras de tecido foram coletadas de pele no 5° e 12° dias após a infestação para extração de RNA total. As PCRs em tempo real foram realizadas usando o gene GAPDH como controle endógeno. Os animais resistentes e susceptíveis apresentaram aumento de expressão do gene IL-10 no 5° (p<0,01) e 12 ° dias após a infestação (p<0,05). O gene IL-2, nos animais resistentes e susceptíveis, no 5° dia após a infestação não apresentou alteração da expressão sendo que 12° dia, em ambos os grupos de animais, este gene passou a ser mais expresso em relação ao animal controle sugerindo um perfil de resposta imunológica do tipo de Th2 nos animais resistentes e susceptíveis nos primeiros dias após a infestação. O gene IL-4 apresentou uma tendência ao aumento de expressão nos animais resistentes e susceptíveis em relação ao controle, sendo o perfil Th2 sugerido atribuído a IL-10 produzida por linfócitos T regulatórios (p>0,05). O gene TNF- apresentou aumento de expressão nos animais susceptíveis no 5° dia após a infestação com posterior diminuição no 12° dia após a infestação (p<0,05). Nos animais resistentes não foi observada alteração da expressão deste gene, isto sugere que ele possa estar mais atuante no início do processo inflamatório, logo após a fixação do carrapato. A mesma observação estende-se para o gene IL-8, em que não foi verificada alteração de expressão nos animais resistentes, embora nos animais susceptíveis este gene apresentou diminuição da expressão no 12° dia após a infestação (p<0,05). Quanto ao gene IFN-, não houve diferença de expressão entre os animais resistentes e susceptíveis, sendo que este gene parece não estar relacionado ao mecanismo de resistência. O gene TLR-2 apresentou diminuição da expressão em ambos os grupos de animais. Estes resultados sugerem que a resposta imune adquirida avaliada neste trabalho não apresenta papel preponderante no mecanismo de resistência e que resposta imune inata poderia está envolvida no mecanismo de resistência ao carrapato. Portanto, avaliação da resposta imunológica horas após a fixação do carrapato poderia nos fornecer resultados mais conclusivos. / In tropical countries losses caused by tick infestation in cattle lead to a major impact on animal production systems. Recent studies have shown the importance of genetic factors linked to tick resistance in Bos indicus and Bos taurus as well as the critical role in the prevention or progression of diseases mediated by cytokines. The aim of this work was to evaluate gene expression of IL-10 and IL-4 in relation to tick susceptibility associated with the Th2 profile and gene expression of IL-2 and IFN- in relation to tick resistance associated with the Th1 profile. In addition, the expression of TLR-2, important in the process the recognition of pathogens, and TNF-α and IL-8 genes, important in the initial inflammatory process, were evaluated. Six tick-resistant and six tick-susceptible animals from a F2 population of 332 animals, originated from the cross of F1 animals (½ Holstein: ½ Gir), were selected based on tick count and breeding value for tick resistance. Skin biopsies were collected in the 5th and 12th days after tick infestation. The GAPDH was used as endogenous control to normalize the amount of starting cDNA target in the real-time PCR assay. Both resistant and susceptible animals showed increased gene expression of IL-10 in the 5th and 12th days after infestation in relation to control animal (p<0.05). The IL-2 gene showed no change of expression in the 5th day after infestation for the resistant and susceptible animals. In the 12th post infestation, both resistant and susceptible animals showed increased gene expression in relation to control animal. These results suggest an enhancement of Th2 profile through the increase of IL-10 mRNA levels and a possible inhibition of the Th1 pattern in both groups (resistant and susceptible) starting 5 days after infestation and return to normal by day 12. Despite our results suggest the occurrence of the Th2 profile, the susceptible and resistant animals did not show variation on gene expression for IL-4 in relation to control animal. The susceptible animals showed increased expression of TNF-α in the 5th day after infestation. However, in the 12th day post infestation it was noted a decrease in the gene expression level. The resistant animals showed no change in the expression of this gene in relation to control animals suggesting that TNF-α could be more actively expressed in the early steps of the inflammatory process. Similarly, the resistant animals showed no variation in the expression of IL-8 while the susceptible animals showed increased expression in the 12th day post infestation. There were no differences of expression between resistant and susceptible animals in relation to IFN-γ what suggests that this gene might not be involved in the resistance mechanism. The TLR-2 gene showed decreased expression in both resistant and susceptible animals (p<0.05). Finally, there was no difference in expression between susceptible and resistant animals in relation to all selected genes in the 5th and 12th days after infestation. These results suggest that the acquired immunity evaluated in this work might not have preponderant role in the resistance mechanism. The innate immunity might be playing a major role in the bovine tick resistance/susceptibility mechanism in early hours after infestation.