Made available in DSpace on 2015-03-26T13:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo - parte 1.pdf: 3041213 bytes, checksum: 0f7b215277ef0d17345b19ef1e019a4e (MD5) Previous issue date: 2011-12-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This objectives of this work were: (i) to statistically characterize turbidity datasets of 44 water treatment plants (WTP), (ii) to evaluate the performance these 44 WTPs in achieving drinking-water turbidity standards, and (iii) to estimate risks of infection associated Cryptosporidium and Giardia in drinking-water, in case study applied to the University of Viçosa WTP (UFV WTP). The analysis of turbidity databases of raw and treated water of the 44 WTP showed that the hypotheses of data randomness, independence, stationarity and homogeneity were, in general, rejected. With few exceptions, turbidity data of raw and treated water were characterized by positive asymmetry. Raw water data showed the highest coefficients of skewness and kurtosis. Statistical tests confirmed the non-normality of all turbidity datasets analyzed, and indicated that most of them could be described by lognormal distribution. The standard of 0,15 NTU for filtered water was very rarely achieved in most WTP. Although a few WTP showed a high proportion of data with turbidity below 0,30 NTU, the actual percentage of WTP that met this standard was low. In turn, the standard of 0,50 NTU was achieved by half the WTP, often in more than 80% of data, and the 1,0 NTU standard was systematically attained in almost all WTP. Risks were estimated by stochastic modeling (Monte Carlo simulation), using the UFV WTP database, including information on the occurrence of Cryptosporidium and Giardia in the source water, and on turbidity removal. Models of Quantitative Microbiological Risk Assessment (AQRM) were constructed from these data and from literature information on: (i) dose-response models; (ii) recovery efficiency of the protozoa laboratory methods; (iii) relationships between (oo)cysts removal and turbidity, (ii) drinking-water consumption rates. Different AQRM models resulted in wide variations of risk estimates. Sensitivity analysis showed that the variables with the greatest impact on risk estimates were the (oo)cysts concentration in raw water, (oo)cysts removal by water treatment, and water consumption rates, indicating the need for a careful characterization these variables. / Esse trabalho objetivou: (i) caracterizar estatisticamente bancos de dados de turbidez de 44 estações de tratamento de água (ETAs); (ii) avaliar o atendimento dessas 44 ETAs aos padrões e critérios de turbidez de água tratada; e (iii) estimar riscos de infecção associados aos protozoários Cryptosporidium spp e Giardia spp. em água para consumo humano, em estudo de caso aplicado a ETA da Universidade Federal de Viçosa. A análise de bancos de dados de turbidez da água bruta e tratada (decantada e filtrada) das 44 ETAs, revelou que as hipóteses de aleatoriedade, independência, estacionariedade e homogeneidade dos dados foram, em geral, rejeitadas. Salvo poucas exceções, os dados de turbidez de água bruta e tratada foram caracterizados por assimetria positiva. Os dados referentes à água bruta apresentaram os maiores coeficientes de assimetria e de curtose. Testes estatísticos confirmaram a não normalidade de todas as séries de dados de turbidez analisadas e indicaram que a maioria destas poderia ser descrita por distribuição lognormal. O limite de 0,15 uT na água filtrada foi rarissimamente alcançado na maioria das ETAs avaliadas. Embora algumas ETAs tenham alcançado elevada margem de dados com turbidez abaixo de 0,30 uT, o percentual de ETAs que atendeu este limite foi baixo. Por sua vez, o padrão de 0,50 uT foi atingido por metade das estações com frequência superior a 80% dos dados, e o limite de 1,0 uT foi sistematicamente atendido pela quase totalidade das estações. A estimativa de riscos foi realizada por modelagem estocástica (simulação de Monte Carlo), utilizando o banco de dados da ETA UFV, incluindo informações sobre ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. na água bruta e remoção de turbidez. Modelos de Avaliação Quantitativa de Risco Microbiológico (AQRM) foram construídos a partir desses dados e informações de literatura sobre: (i) modelos dose-resposta; (ii) taxa de recuperação das técnicas laboratoriais de pesquisa de protozoários, (iii) modelos de estimativa de remoção de (oo)cistos em função da turbidez; (iv) estimativas de consumo de água. Os diferentes arranjos de modelos de AQRM resultaram em amplas variações nas estimativas de risco. Testes de análise de sensibilidade revelaram que as variáveis de maior impacto na estimativa de risco foram a concentração de (oo)cistos na água bruta, a remoção de (oo)cistos no tratamento da água e o consumo de água, indicando a necessidade de caracterização criteriosa dessas variáveis.

Objetivou-se, com o presente estudo, verificar a ocorrência de Cryptosporidium spp entre crianças do município de Taubaté-SP e realizar a genotipagem de isolados clínicos do parasito. Foram selecionadas 13 creches municipais, que atendiam crianças de 4 a 72 meses de idade, realizando-se implantação de um programa para busca ativa de casos de diarréia, com acompanhamento da população durante o ano de 2002. Para se conhecer o perfil coproparasitológico, realizou-se estudo transversal em quatro das 13 creches selecionadas. Foram examinadas 483 amostras fecais processadas pelo método de concentração em formalina-acetato de etila e, para a visualização de oocistos, esfregaços fecais foram corados pelo método de Kinyoun. No estudo prospectivo, Cryptosporidium spp foi encontrado em 11,1 % (3/27) das amostras, não se evidenciando outras espécies parasitárias. No estudo transversal, foram detectados oocistos em 0,2% (1/456) das amostras e a freqüência para outras espécies parasitárias foi de 30,5% (139/456). No estudo de genotipagem, foram analisadas 14 amostras de humanos, uma de bovino e uma de cão. Dentre os isolados de humanos, quatro eram de crianças de Taubaté-SP, cinco de crianças de uma favela de São Paulo-SP e cinco de pacientes HIV positivos, de Sorocaba-SP. O DNA extraído a partir das amostras fecais foi submetido a Nested-PCR, amplificando-se um segmento de 553pb de um gene que codifica proteína de parede de Cryptosporidium (COWP). Os produtos amplificados foram submetidos a processo de digestão enzimática (RPLP-PCR), e os perfis obtidos por eletroforese evidenciaram três espécies: Cryptosporidium hominis em oito amostras, Cryptosporidium parvum em quatro e Cryptosporidium meleagridis em duas. Dos isolados de Taubaté, dois foram correspondentes a C. hominis e dois a C. parvum. As amostras de bovino e de cão foram positivas para C. parvum. O genótipo dos isolados de Taubaté, humanos e de animais, foram confirmados por análise da sequência do fragmento de 553pb do gene COWP, comparando-se com as sequências disponíveis no GenBank. / The aims of this study were to investigate the occurrence of infection by Cryptosporidium spp in children living in Taubaté, São Paulo, Brazil, and to realize the molecular characterization of the parasite isolates. Thirteen day-care centers were selected and 4-72 months old children were involved in prospective study to detect diarrhea, during the 2002 year. In four of these day-care centers, a transversal study was performed in the beginning of the study to know the prevalence of intestinal parasites of children\'s community. A total of 483 stool samples were examined by the modified formalin-etil acetate concentration method, and the acid-fast Kinyoun stain was used to visualize oocysts. In the prospective study Cryptosporidium spp were detect in 11.1 % (3/27) of stool samples and no other parasites were found. In the transversal study oocysts were detected in 0.2% (1/456) of the samples and the frequency of infection by other parasites was 30.5% (139/456). In the genotyping study, 14 stool samples from humans and one sample from bovine and another from dog were analyzed. Among the human isolates, four were from children of Taubaté, five were from children living in a slum of São Paulo city and the other five from HIV-positive patients of Sorocaba, São Paulo. The animal samples were collected in Taubaté region. A DNA fragment of 553 pb of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene was amplified from stool samples by Nested-PCR, and Restriction Fragment Length Polymorphism analysis identified three species: Cryptosporidium hominis in eight samples, Cryptosporidium parvum in four samples and Cryptosporidium meleagridis in two samples. Among samples from Taubaté, two were positive for C. hominis and two for C. parvum. The bovine and dog samples were positive for C. parvum. The findings trom Taubaté were confirmed by sequence analysis of the 553bp amplicons and comparison of the COWP gene available in the GenBank.

Foram utilizados quatro Novilhos nelore, com peso vivo médio de 190 ± 32 kg, canulados no rúmen num experimento com delineamento Quadrado Latino 4x4, onde o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da levedura, monensina e salinomicina sobre os parâmetros ruminais e o aparecimento de protozoários ciliados ruminais.O experimento foi executado no Campus Administrativo de Pirassununga, na Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos da Universidade de São Paulo. A dieta oferecida aos animais foi composta por silagem de sorgo e concentrado (30:70), onde foram submetidos a quatro tratamentos diferidos de acordo com o aditivo usado, 5,0g de Levedura (Beef Sacc®), 0,42g de salinomicina (Coxistac®), 2,0g de monensina sódica (Rumensin®) e o controle sem aditivo. Os parâmetros avaliados foram degradabilidade ruminal, in situ do volumoso e da dieta total, concentração de ácidos graxos voláteis e nitrogênio amoniacal, pH ruminal, taxa de passagem líquida, turnover e volume ruminal, e identificação e contagem dos protozoários ciliados. O período experimental foi subdividido em vinte e um dias de adaptação e sete de colheita, totalizando vinte e oito dias por período experimental. Foram mensurados os coeficientes de degradabilidade nos períodos de incubação de 0, 3, 6, 12, 24, 48, 72 e 96 horas. Para a colheita de liquido ruminal foram utilizados os horários 0, 2, 4, 6, 8 horas; as colheitas de marcador de fase liquida (PEG) foram realizadas ás 0; 1,5; 3; 6; 12 e 24 horas após a alimentação. Houve aumento do valor para a fração “b” na MS, no tratamento levedura (p<0,05), e no tratamento salinomicina. Também houve uma tendência a aumentar a fração “b” no FDN. O tratamento levedura aumentou significativamente o número de protozoários ciliados no rúmen (p<0,05). Os valores referentes ao pH não foram afetados pelos tratamentos (p>0,05). A concentração de amônia e os valores encontrados para a cinética ruminal não foram afetados pelos tratamentos (p>0,05). O uso de ionóforos melhorou a proporção dos ácidos acético:propiônico, propiônico e butírico enquanto a levedura aumentou a concentração de acido acético (p<0,05). / Four Nelore Steers had been used, with average alive weight of 190 ± 32 kg, rumen cannulas, in an experiment with Squared delineation Latin 4x4, where the objective of the work was to evaluate the effect of the yeast culture, monensin and salinomycin on the rumen parameters and the appearance of ciliates protozoa. The experiment was executed in the Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos of the Universidade de São Paulo. The diet offered to the animals was composed for ensilage and concentrated (30:70), where the four differed treatments had been submitted in accordance with the used additive, 5,0g of yeast culture (Beef Sacc), 0,42g of salinomycin (Coxistac), 2,0g of monensin (Rumensin) and the control without additive. The evaluated parameters had been ruminal degradability “in situ” of voluminous and the total diet, the concentration of volatile fatty acid concentration and ammoniac nitrogen concentration, pH ruminal, liquid passage, turnover and ruminal volume, and number and specie of ciliates protozoa. The experimental period was subdivided in twenty and one days of adaptation and seven of harvest, having totalized twenty and eight days for experimental period. The coefficients of degradability in the incubation periods of 0, 3, 6, 12, 24, 48, 72 and 96 hours had been measure. For the harvest of I eliminate ruminal had been used schedules 0, 2, 4, 6, 8 hours; the harvests of phase marker eliminate (PEG) had been carried through ace 0; 1,5; 3; 6; 12 and 24 hours after the feeding. It had increase of the value for fraction "b" in the MS, the treatment yeast culture, and the salinomycin treatment (p<0,05). Also it had a trend to increase fraction "b" in the FDN. The treatment yeast culture significantly increased the number of ciliates protozoa in rumen (p<0,05). The referring values to pH had not been affected by the treatments (p>0,05). The ammonia concentration and the values found for the kinetic ruminal had not been affected by the treatments (p>0,05). The use of ionophores improved the acid ratio of the acetic:propionic, propionic and butiric while the yeast culture increased the acids concentration of acetic (p<0,05).

Estima-se que a malária seja responsável por um milhão de mortes anuais, atingindo principalmente crianças. O sistema imune participa tanto na proteção contra a infecção pelo plasmódio, como no desenvolvimento das síndromes associadas à malária (anemia, malária cerebral, acidose metabólica e choque sistêmico). Recentemente, tem sido mostrado que a imunidade inata é capaz de detectar sinais liberados por células ou tecidos danificados como o ATP e o ácido úrico. Esses sinais de perigo parecem ser importantes para promover a regulação da inflamação após o trauma ou injúrias ocasionadas pelos patógenos. Porém, a relevância fisiológica desses sinais na resposta imune e seu mecanismo de ação ainda não estão claros. Na malária, é provável que o ATP seja liberado no momento da ruptura dos eritrócitos, a partir de células danificadas do endotélio vascular ou de células do sistema imune mortas por ativação. Assim, neste estudo nós avaliamos o papel do ATP na ativação do sistema imune e no desenvolvimento da doença durante a infecção com P. chabaudi. Nossos resultados sugerem que, a concentração de ATP no soro e permeabilização de linfócitos do sangue é maior após a ruptura dos eritrócitos. Durante a infecção, as células T e as células dendríticas possuem uma capacidade exacerbada de resposta ao ATP, que pelo menos em parte depende do P2X7R. Além disso, a presença funcional de receptores purinérgicos parece ser importante para a fase inicial da resposta imune ao P. chabaudi. A inibição farmacológica do receptor reduziu o número de células, produção de IFN-<font face=\"Symbol\">g e injúria hepática. Desta forma a utilização do antagonistas do P2X7R poderia ser benéfico na resolução de problemas ocasionados pelo aumento acentuado do sistema imune. / It is estimated that malaria accounts for one million deaths annually, affecting mainly children. The immune system participates in both the protection against infection by the plasmodium, as in the development of the syndromes associated with malaria (anemia, cerebral malaria, metabolic acidosis and systemic shock). Recently, it has been shown that innate immune is able to detect signals released by damaged cells or tissues as ATP and uric acid. These danger signals appear to be important to promote the regulation of inflammation after trauma or injuries caused by pathogens. However, the physiological relevance of these signals in the immune response and its mechanism of action remain unclear. In malaria, it is likely that ATP is released upon rupture of erythrocytes, vascular endothelial cells damaged or dead cells of the immune system activation. In this study we evaluated the role of ATP in the activation of the immune system and the development of disease during infection with P. chabaudi. Our results suggest that ATP concentration serum and permeabilization of blood lymphocytes is higher after the rupture of erythrocytes. During infection T cells and dendritic cells have a heightened ability to respond to ATP which is partly dependent on P2X7R. Moreover, the presence of functional purinergic receptors appears to be important for the initial phase of the immune response to P. chabaudi. The pharmacological inhibition of the receptor reduced the number of cells, liver damage and IFN-<font face=\"Symbol\">g, thus the use of the P2X7 receptor antagonists could be beneficial in solving problems caused by the sharp increase in the immune system.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-13T11:25:32Z No. of bitstreams: 1 marianafonsecarossi.pdf: 3622749 bytes, checksum: 75680c20f0af5b48589dec0954c64298 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T20:09:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianafonsecarossi.pdf: 3622749 bytes, checksum: 75680c20f0af5b48589dec0954c64298 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T20:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianafonsecarossi.pdf: 3622749 bytes, checksum: 75680c20f0af5b48589dec0954c64298 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A dissertação está dividida em três seções. A Seção 1 apresenta um estudo morfológico e taxonômico detalhado, no qual 36 espécies de ciliados do rúmen de bovino e ovino foram inventariadas, com base na observação dos ciliados in vivo, corados com preparações semipermanentes, impregnados pela técnica do carbonato de prata amoniacal e visualizados por microscopia eletrônica de varredura. Esta seção traz novas informações sobre os caracteres morfométricos importantes para a taxonomia deste grupo, com a descrição da infraciliatura e a importância do uso de técnicas ciliatológicas pouco usadas na caracterização de ciliados ruminais. Na Seção 2, com intuito de revelar a infraciliatura oral e somática para amplo espectro de gêneros e espécies de ciliados ruminais foram realizadas modificações nos protocolos existentes para a técnica do carbonato de prata amoniacal com piridina e estabelecido um protocolo modificado que permitiu a impregnação da infraciliatura oral e do aparato nuclear de todas as 36 espécies de ciliados do rúmen de bovino e ovino alimentados com cana-de-açúcar. O protocolo proposto é simples, rápido e fácil de ser reproduzido, sendo vantajoso para taxonomistas interessados em realizar estudos de levantamento de biota ruminal e para zootecnistas e ecólogos interessados em entender a estrutura da taxocenose de protistas ciliados ruminais. A Seção 3 apresenta um estudo filogenético da família Ophryoscolecidae com base em informações do gene 18S-rDNA, incluindo cinco novas sequências. Os principais resultados obtidos foram: ¹evidenciação da monofilia das subfamílias Entodiniinae e Ophryoscolecinae; ²a subfamília Diplodiniinae é considerada parafilética; ³os padrões de infraciliatura oral refletem divergência evolutiva na família Ophryscolecidae; 4evidenciação da monofilia dos padrões de ciliatura oral padrão-Entodinium, padrão Ostracodinium (Ostracodinium gracile e Ostracodinium mammosum), padrão-Epidinium e padrão-Ophryoscolex; 5a condição ancestral do padrão-Entodinium sugerida por alguns autores não pôde ser comprovada usando informações do gene 18S-rDNA. As incongruências observadas entre os dados morfológicos e moleculares refletem a necessidade de se ampliar o número de sequências do gene 18S-rDNA para representantes da família Ophryoscolecidae e investigar a evolução deste grupo usando outros marcadores moleculares. / The dissertation is divided into three sections. Section 1 provides a detailed taxonomic and morphological study, in which 36 species of rumen ciliates in cattle and sheep were inventoried, based on live observation, semipermanent preparations, pyridinated silver carbonate impregnation and scanning electron microscopy. This section provides new information on important morphometric characters for the taxonomy of this group, with the description of infraciliature and the importance of using techniques ciliatológicas underused in the characterization of rumen ciliates. In Section 2 aiming to reveal the somatic and oral infraciliature for wide spectrum of genera and species of rumen ciliates, were made modifications to existing protocols for the pyridinated silver carbonate impregnation and established a modified protocol that allowed allowed impregnation of infraciliatura oral and nuclear apparatus of all 36 species of rumen ciliates of cattle and sheep fed with cane sugar bagasse. The proposed protocol is simple, quick and easy to be reproduced, being advantageous for taxonomists interested in perform survey studies of ruminal biota and animal scientists and ecologists interested in understanding the taxocenose and structure of the rumen ciliates. Section 3 presents a phylogenetic study of the family Ophryoscolecidae based on 18S-rDNA gene information, including five new sequences. The main results were: ¹ confirmation of the monophyly of the Entodiniinae and Ophryoscolecinae subfamilies; 2 Diplodiniinae subfamily is considered paraphyletic; 3 oral infraciliature patterns reflect evolutionary divergence in the family Ophryscolecidae; 4 confirmation of monophyly of oral ciliature patterns Entodinium-type, Ostracodinium-type (Ostracodinium gracile and Ostracodinium mammosum), Epidinium-type and Ophryoscolex-type; 5 the ancestral condition of Entodinium-type suggested by some authors could not be verified using information from 18S-rDNA gene. The inconsistencies observed between the morphological and molecular data reflect the need to increase the number of 18S rDNA gene sequences to family Ophryoscolecidae representatives and investigate the evolution of this group using other molecular markers.

Os objetivos desse estudo foram avaliar a transmissão transplacentária por N. caninum em diferentes fases da gestação (Exp I) e avaliar diferentes tecidos de bovinos como meio de transmissão de N. caninum em cães jovens e adultos (Exp II). No Exp I, Três cadelas foram inoculadas com 108 taquizoítos de N. caninum na 3ª semana de gestação, três na 6ª semana e uma permaneceu como controle. Todas as cadelas infectadas, e pelo menos um de seus filhotes, apresentaram soroconversão a anticorpos anti-N. caninum pela Reação de Imunofluorescência Indireta. Verificou-se presença do parasita pela coloração de Hematoxilina-Eosina em Sistema Nervoso Central e pela PCR ITS-1 e RFLP em linfonodo, cérebro, coração e fígado. No Exp II, cães jovens e adultos receberam diferentes tecidos de bovinos naturalmente infectados com N. caninum, sendo coração, cérebro, masseter e fígado. Não houve soroconverteu. Apenas os cães jovens eliminaram oocistos de N. caninum ao ingerirem masseter (2 cães, 40%), coração (2 cães, 40%), fígado (1 cão, 33%) e cérebro (3 cães, 75%). / The objectives of this study were to evaluate transplacental transmission of N. caninum in different stages of pregnancy (Exp I) and evaluate different bovine tis.sues as means of transmission of N. caninum in young dogs and adults (Exp II). In Exp I, Three dogs were inoculated with 108 tachyzoites of N. caninum in the third week of gestation, three at 6 sixth week and one remained as a control. All infected dogs, and at least one of their offspring, seroconverted to anti-N. caninum antibodies by Immunofluorescence Assay. There was presence of the parasite by Hematoxylin- Eosine exam in Central Nervous System and by PCR and RFLP ITS-1 in lymph node, brain, heart and liver. In Exp II, young and adult dogs received different tissues of cattle naturally infected with N. caninum: heart, brain, liver and masseter. None seroconverted. Only the young dogs shed oocysts of N. caninum by eating masseter (2 dogs, 40%), heart (2 dogs, 40%), liver (one dog, 33%) and brain (3 dogs, 75%).

Esta pesquisa comparou a incorporação de iodeto de propídio (IP) com a avaliação simultânea de corantes indicativos de danificação em membrana e atividade enzimática (Live/Dead Cell Assay&#174;) para a estimar a viabilidade de cistos de Giardia muris e oocistos de Cryptosporidium parvum. Além disso, foram testados métodos de recuperação de (oo)cistos em amostras de lodo e água de lavagem de filtros (ALF) geradas em escala de bancada, simulando tratamento de água por ciclo completo com decantação. Dentre os métodos estudados para a detecção de G. muris e C. parvum inoculados em amostras de lodo, destacou-se a floculação com sulfato férrico, seguida de separação imunomagnética (IMS). Realizou-se, portanto, ensaio de qualidade analítica com ColorSeedTM, para este método, tendo atendido ao requerido pelo Método 1623.1 da USEPA (2012) para Giardia spp. (32,25%; CV=9,00%), mas não tendo sido suficiente para Cryptostoridium spp. (11,00%; CV=47,67%). O teste com ColorSeedTM em amostras de ALF reproduziu o procedimento de filtração em membrana (FM) com raspagem utilizando Tween&#174; 80 (45&#176;C, 0,1%) seguido de IMS, tendo atendido ao Método 1623.1 para Giardia spp. (13,00%, CV=19,61%), mas não tendo sido suficiente para Cryptostoridium spp. (2,00%; CV=93,54%). Optou-se por este procedimento na avaliação de qualidade analítica, pois o inóculo prévio de suspensões comerciais seguido de recuperação por FM sem IMS superou 100% para C. parvum, devido à utilização de fator de multiplicação. O desempenho do Live/Dead Cell Assay&#174; sobre suspensões comerciais de (oo)cistos foi subjetivo, sobretudo para visualização de organismos enzimaticamente ativos, de modo que optou-se pela inclusão de IP como parâmetro para estimar o efeito dos métodos de recuperação sobre a viabilidade. Em função da baixa recuperação e fluorescência de G. muris, a incorporação de IP foi avaliada apenas em C. parvum. Os resultados reiteraram a dificuldade na recuperação de protozoários em lodo e ALF e o fato de que as particularidades destes procedimentos analíticos podem prejudicar a interpretação de dados de viabilidade. / This study compared the incorporation of propidium iodide (PI) with the simultaneous evaluation of dyes that indicate both membrane damage and enzymatic activity (Live/Dead Cell Assay&#174;) to assess the viability of Giardia muris cysts and Cryptosporidium parvum oocysts. In addition, methods of recovering protozoan cysts and oocysts from sludge and filter backwash water (FBW) samples generated on bench scale, simulating conventional water treatment with decantation, were tested. Among the studied methods for detection of G. muris and C. parvum spiked into sludge samples, ferric sulphate flocculation followed by immunomagnetic separation (IMS) lead to higher recoveries. An analytical quality assay was therefore carried out with ColorSeedTM having met the USEPA Method 1623.1 (2012) recommendation for Giardia spp. (32.25%, CV=9.00%) but not for Cryptostoridium spp. (11.00%, CV = 47.67%). The quality assay test for FBW samples replicated the membrane filtration (MF) procedure using Tween&#174; 80 (45 °C, 0.1%) followed by IMS, having complied with Method 1623.1 for Giardia spp. (13.00%, CV=19.61%) but again not for Cryptostoridium spp. (2.00%; CV=93.54%). This procedure was chosen for the analytical quality exam, since the previous inoculum of commercial suspensions followed by MF without IMS exceeded 100% recovery for C. parvum, due to the use of a multiplication factor. The Live/Dead Cell Assay&#174; performance on commercial suspensions of cysts and oocysts was subjective, especially for visualizing enzymatically active organisms, thus PI inclusion was chosen as the parameter to estimate the effect of recovery methods on the organisms\' viability. Due to the low recovery and poor fluorescence of G. muris, IP inclusion was evaluated only in C. parvum. The results reiterated the difficulty in the recovery of protozoa from sludge and FBW and the possibility of these analytical procedures hinder the interpretation of cysts and oocysts viability.

Os oocistos de Cryptosporidium spp. e os cistos de Giardia spp. podem gerar doenças de veiculação hídrica associadas a problemas de saúde pública. Os (oo)cistos são de difícil remoção e inativação durante o tratamento de água, principalmente devido ao tamanho reduzido e à resistência ao processo de cloração. Além disso, os métodos de detecção de protozoários na água apresentam elevado custo e estão sujeitos à grande variabilidade e à baixa reprodutibilidade, especialmente em águas de elevada turbidez. Com água de estudo com turbidez de aproximadamente 110 uT, ensaios de tratabilidade com cloreto de polialumínio foram feitos em jarteste para a obtenção da água de lavagem dos filtros (ALF) e do resíduo sedimentado. O método escolhido para detecção de (oo)cistos foi a centrifugação direta com adição de solução de dispersão ICN 7X seguido de IMS com duas dissociações ácidas (CD + ICN 7X). O tratamento dos resíduos objetivou a inativação dos (oo)cistos, por meio de danos à estrutura celular dos parasitos, identificada pela incorporação do corante iodeto de propídio no microrganismo. Para o método CD + ICN 7X, menor interferência na viabilidade dos (oo)cistos foi observada em relação à floculação em carbonato de cálcio e melhor recuperação do que a centrifugação direta. O controle de qualidade analítica desse método, feito com suspensão do kit EasySeed&#174;, apresentou recuperação de 2,8&#177;0,8% de oocistos e 7,8&#177;2,9% de cistos para a ALF e de 3,3&#177;2,0% e 24,8&#177;8,0%, para oocistos e cistos no resíduo sedimentado. Apenas a recuperação de cistos de Giardia spp. no resíduo sedimentado atendeu aos padrões recomendados pelo Método 1623.1 da USEPA. A presença de microesferas magnéticas aderidas aos (oo)cistos foi observada nos poços de leitura após a IMS, indicando limitações desse método de purificação. Para o tratamento alcalino do resíduo sedimentado, a dosagem de 27mg/100mL foi testada para os tempos de 3 e 5 dias e, respectivamente, foram obtidos 1,85 e 3,0 log de inativação de oocistos e 2,05 e 2,14 log de inativação para cistos. Para o processo de ozonização da ALF, avaliado apenas para oocistos, as inativações de 2,83 log e 3,44 log foram obtidas para as dosagens de 7,5 mg O3 L-1 por 10 min e 10 mg O3 L-1 por 5 min, respectivamente. / Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts are infectious forms and can cause public health problems due to associated waterborne diseases. (Oo)cysts are difficult to remove and inactivate during water treatment, mainly because of reduced size and resistance to chlorination. In addition, protozoan detection methods in water are expensive and subject to high variability and low reproducibility, especially in high turbidity water. In jartest treatability tests, 110 uT study water was treated with polyaluminium chloride to obtain backwashing water (BW) and sedimented residue. The method chosen for detection of (oo)cysts was direct centrifugation with addition of 7X ICN dispersion solution followed by IMS with two acid dissociations. Treatment of residuals objectified inactivation of (oo)cysts by damages on parasites cellular structure, identified by inclusion of propidium iodide as an indicator. The method of detection chosen showed less interference in the viability of (oo)cysts in comparison to flocculation in calcium carbonate and better recovery than direct centrifugation. The analytical quality control of this method, performed with EasySeed® suspension, obtained recovery of 2.8&#177;0.8% oocysts and 7.8&#177;2.9% cysts for BW and of 3.3&#177;2.0% and 24.8&#177;8.0%, for oocysts and cysts in sedimented residue. Only Giardia spp. recovery in sedimented residue complied with the standards recommended by USEPA Method 1623.1. Magnetic microspheres were found attached to (oo)cysts in microscope slides after IMS, indicating limitations of this purification method. For the alkaline treatment of sedimented residue, dosage of 27mg / 100mL was tested for 3 and 5 days and respectively 1.85 and 3.0 log inactivation were obtained for oocysts while 2.05 and 2.14 log of. For ozonation of BW, evaluated only for oocysts, 2.83 log and 3.44 log inactivation were obtained for dosages of 7.5 mg O3 L-1 for 10 min and 10 mg O3 L-1 for 5 min, respectively.

Neste estudo são comparados os níveis de citocinas plasmáticas circulantes e as populações periféricas de células Treg CD4+CD25+, com base na expressão de FOXP3 e CTLA-4, e de células dendríticas (DCs) em indivíduos infectados por P. falciparum, P.vivax ou co-infectados por ambas as espécies e em controles saudáveis, porém expostos à malária, provenientes de uma área de transmissão instável na Amazônia brasileira. Amostras sangüineas de 76 pacientes infectados e de 18 controles expostos foram coletadas e processadas para a obtenção de células mononucleares. As populações celulares foram avaliadas por citometria de fluxo e os níveis de citocinas circulantes, pela técnica de ELISA de captura. A infecção aguda induziu aumento no percentual de células CD4+CD25+FOXP3+CTLA-4+ (p=0,0029; teste de Kruskal-Wallis) e redução no número absoluto de DCs (p=0,0008; teste de Kruskal-Wallis); mas esses efeitos ocorreram independente da espécie do parasito infectante. Entre os pacientes com malária vivax, 35-40% apresentaram baixa proporção de DCs que expressam a molécula co-estimulatória CD86. A única variável associada à baixa proporção de DCs CD86+ foi a proporção de células CD4+CD25+FOXP3+ que expressam CTLA-4. Em relação aos níveis de citocinas circulantes observou-se aumento nos níveis de IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 na infecção por P. falciparum (p=0,0050; teste de Kruskal-Wallis). Apesar da concentração de IL-10 estar elevada em todos os indivíduos infectados em relação aos controles expostos (p<0,0001; teste de Kruskal-Wallis) esses níveis foram bem mais expressivos em indivíduos com malária vivax. Plasmodium falciparum e P. vivax parecem estimular diferentes padrões de resposta imune no hospedeiro, mesmo quando a comparação envolve somente indivíduos com malária não-complicada expostos a níveis semelhantes de transmissão de malária. / This study compares levels of circulating cytokines and peripheral-blood populations of CD4+CD25+ Treg cells, based on the expression of FOXP3 and CTLA-4, and dendritic cells (DCs) in individuals infected with P. falciparum, P. vivax or co-infected with both species and in healthy controls living in an area of unstable transmission of malaria in the Brazilian Amazon. Blood samples from 76 malaria patients and 18 malaria-exposed but non-infected controls were collected and processed to obtain mononuclear cells. Cell populations were characterized by flow cytometry and levels of circulating cytokines were measured by capture ELISA. Acute infection induced an increase in the proportion of CD4+CD25+FOXP3+CTLA-4+ cells (p= 0.0029, Kruskal-Wallis) and a decrease in the absolute number of DCs (p= 0.0008, Kruskal-Wallis), being both effects independent of the infecting parasite species. 35-40% of the P. vivax-infected subjects (but none in the other groups of subjects) had few circulating DCs expressing the co-stimulatory molecule CD86, a putative marker of DC activation. The only variable associated with a low proportion of CD86+ DCs was the proportion of CD4+CD25+FOXP3+ expressing CTLA-4. Analysis of circulating cytokine levels revealed increased levels of IFN- <font face=\"Symbol\">&#947 in P. falciparum infection (p= 0.0050, Kruskal-Wallis); although IL-10 levels were high in all infected individuals, compared with exposed controls (p<0.0001, Kruskal-Wallis), the increase was much more pronounced in vivax malaria. Plasmodium falciparum and P. vivax</i. appear to stimulate different patterns of immune response in humans, even when comparisons are limited to individuals with uncomplicated malaria exposed to similar levels of malaria transmission.

Os principais marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda ou recente são os anticorpos IgM específicos e anticorpos IgG de baixa avidez. Entretanto em alguns pacientes, anticorpos IgM e baixa avidez de anticorpos IgG podem persistir, ultrapassando o período da fase recente aguda contribuindo para erros de interpretação diagnóstica. No presente estudo, a eficiência diagnóstica do ensaio imunoenzimático foi avaliada, com o uso de frações antigênicas ou peptídeos sintéticos originados do antígeno ESA de T.gondii, denominados de SAG-1, GRA-1 e GRA-7. Foram estudadas frações isoladas e combinadas em múltiplos peptídeos antigênicos (MAP), visando estabelecer um perfil confiável para definição sorológica de toxoplasmose recente aguda em amostra única de soro. A melhor eficiência diagnóstica do ensaio foi encontrada com o uso da combinação de peptídeos SAG- 1,GRA-1 e GRA-7, denominada MAP1. A detecção de anticorpos IgG e IgM anti- MAP1 apresentou a melhor definição entre a fase recente aguda da fase recente não aguda na toxoplasmose. Nossos resultados mostraram que IgM anti-MAP1 poderá se constituir um marcador sorológico importante no aumento da eficiência diagnóstica da toxoplasmose recente aguda / The main serological marker for the diagnosis of recent toxoplasmosis is the specific IgM antibody, along with IgG antibodies of low avidity. However, in some patients these antibodies may persist long after the acute/recent phase, contributing to misdiagnosis in suspected cases of toxoplasmosis. In the present study, the diagnostic efficiency of ELISA was evaluated, with the use of peptides derived from T. gondii ESA antigens, named SAG-1, GRA-1 and GRA-7. In the assay referred to, we studied each of these peptides individually, as well as in four different combinations, as Multiple Antigen Peptides (MAP), aiming to establish a reliable profile for the acute/recent toxoplasmosis with only one patient serum sample. The diagnostic performance of the assay using MAP1, with the combination of SAG-1, GRA-1 and GRA-7 peptides, demonstrated better discrimination of the acute/recent phase from non acute/recent phase of toxoplasmosis. Our results show that IgM antibodies to MAP1 may be useful as a serological marker, enhancing the diagnostic efficiency of the assay for acute/recent phase of toxoplasmosis