Orientadores: Elias Basile Tambourgi, Ana Lucia Figueiredo Porto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-16T02:11:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_EdgarSilveira_D.pdf: 8809758 bytes, checksum: 0005b20be087b28b91ebffb9ef5f140c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Aproximadamente, 10.000 corantes e pigmentos diferentes são utilizados industrialmente, representando um consumo anual por volta de 7 x 105 toneladas mundialmente, com 26.500 só no Brasil. Em sua maioria, corantes são substâncias recalcitrantes e tóxicas, os quais são resistentes a degradação biológica. Na região metropolitana de São Paulo, três quatros dos efluentes industriais têxteis possuem resposta mutagênica positiva, o que torna a contaminação por corantes não só um problema ambiental, mas também um problema de saúde pública. Este trabalho tem como objetivo a seleção e avaliação de Pseudomonas para a descoloração de efluentes têxteis. Quatros espécies de Pseudomonas foram testadas, P. oleovorans, P. cepacia, P. putida e P. aeruginosa, com 14 corantes industriais, onde a P. oleovorans mostrou-se mais promissora, pois foi capaz de metabolizar 12 dos corantes testados. Posteriormente, a descoloração de corantes por P. oleovorans foi otimizada através de dois planejamentos experimentais consecutivos, onde foi possível reduzir o tempo de descoloração foi reduzido pela metade. As melhores condições para a P. oleovorans foram atingidas em condições de anoxia (zero RPM); pH inicial de 8,5; 32°C; uso de 25% do volume total do reator; tamanho da cultura inicial de 0,16 g l-1; e uma concentração de corantes de 50 mg l-1. Após a otimização, foi realizada descoloração de corante em cultura Fed-Batch, o que aumentou a massa de corante degradado em 10 vezes. Por conseguinte, a P. oleovorans foi imobilizada em espumas de poliuretano (PUF) e estas empacotadas em um reator anóxico para a descoloração de efluente sintético. A P. oleovorans foi capaz de descolorir efluente sintético contendo corantes em reator anóxico empacotado com PUF em apenas 24 horas, o que aumentou a produtividade em mais de seis vezes quando comparado a fermentação em Fed-Batch / Abstract: Approximately, different 10,000 dyes and pigments are for industrial use, representing an annual consumption of around 7 x 105 worldwide, 26,500 only in Brazil. In overall, dyes are toxic and recalcitrant substances, which are resistant to biological degradation. At the Sao Paulo's metropolitan region, three out of four textile industrial effluents have a positive mutagenic response, which makes dye contamination not only an environmental problem, but also a public health one. This work aims the selection and evaluation of Pseudomonas for textile effluent decolourization. Four Pseudomonas species were tested, P. oleovorans, P. cepacia, P. putida e P. aeruginosa, against 14 industrial dyes, where P. oleovorans showed to be the most promising one, it was capable to metabolize 12 dyes tested. Afterwards, P. oleovorans dye decolourization was optimized through two consecutive experimental designs, in which was possible to reduce the decolourization in half. The best conditions to P. oleovorans were achieved in anoxic conditions (0 RPM); initial pH of 8.5; 32°C; usage of 25% of total reactor; culture initial size of 0.16 g l-1; and dye concentration of 50 mg l-1. After the optimization, dye decolourization was performed in Fed-Batch, which increased the degraded dye mass 10-fold. At last, P. oleovorans was immobilized in Poly Urethane Foam (PUF), and packed in an anoxic reactor to the decolourization of a synthetic effluent. P. oleovorans was capable of decolourize the dye containing synthetic effluent in an anoxic reactor packed with PUF in only 24 hours, which increased the productivity in over than 6-fold when compared with Fed-Batch decolourization / Doutorado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Doutor em Engenharia Química

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Neste trabalho avaliamos a atividade biolÃgica de lectinas de sementes de Erythrina fusca e velutina, de algas marinhas Hypnea musciformes, Bryothamnion seaforthii e triquetrum e do diterpeno casbano, um produto natural isolado de Croton nepetaefolius, sobre Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145. Foi comparada a aÃÃo in vitro das 5 lectinas e do diterpeno casbano, sobre colÃnias de P. aeruginosa, em placas de poliestireno. Investigada a aÃÃo das lectinas de alga marinha H.musciforme, de sementes de Erythrina velutina, e do diterpeno casbano, no processo de formaÃÃo do biofilme bacteriano de P.aeruginosa, em placas de poliestireno; e identificado entre as lectinas de E.velutina, H.musciforme e diterpeno casbano, aquele com maior potencial de aplicaÃÃo no controle do crescimento de colÃnias de P. aeruginosa. As lectinas testadas nÃo foram capazes de inibir o crescimento e a formaÃÃo de biofilme de Pseudomonas aeruginosa nas condiÃÃes experimentadas. Por outro lado, diterpeno casbano, na concentraÃÃo de 500 μg/mL em 18 horas, foi capaz de inibir o crescimento de P. aeruginosa em 40%, comparado ao controle positivo. Esta inibiÃÃo foi observada atà uma concentraÃÃo de 125 μg/mL. Entretanto, nÃo foi observada inibiÃÃo da formaÃÃo do biofilme da P. aeruginosa nas concentraÃÃes utilizadas neste estudo. / In this study the biological activity of seeds lectins from Erythrina velutina and fusca, marine algae Hypnea musciformis, Bryothamnion seaforthii and triquetrum and the diterpene casbane, a natural product isolated from Croton nepetaefolius was evaluated upon Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145. We compared the in vitro effect of lectins and diterpene casbane on colonies of P. aeruginosa in microtiter plates. Investigated the action of lectins from marine algae H. musciforme of seeds of Erythrina velutina, and diterpeno casbano in the process of formation of P. aeruginosa biofilm on polystyrene plates, and identified among lectins: E. velutina, H. musciforme and diterpene casbane, the one with greater potential for application in controlling the growth of colonies of P. aeruginosa. The lectins tested were able to inhibit growth and biofilm formation of P. aeruginosa in the studied conditions. Moreover, diterpene casbane at a concentration of 500 mg/mL in 18 hours, was able to inhibit the growth of P. aeruginosa in 40%, compared to positive control. This inhibition was observed until a concentration of 125 mg/mL. However, the inhibition of biofilm formation of P. aeruginosa there was no observed at the concentrations used in this study.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Este trabalho mostra as atividades biolÃgicas de lectinas isoladas de sementes de Vatairea macrocarpa e de Vatairea guianensis e do composto vegetal diterpeno casbano, isolado do Croton nepetaefolius, sobre o crescimento de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), causadora de otite externa. Comparou-se a aÃÃo in vitro das duas lectinas e do composto vegetal diterpeno casbano sobre culturas de P. aeruginosa em placas de poliestireno. As cÃlulas bacterianas foram testadas tanto em sua forma planctÃnica como na de biofilme. As lectinas testadas nÃo foram capazes de inibir o crescimento da forma planctÃnica e a formaÃÃo de biofilme da P. aeruginosa nas condiÃÃes experimentais. Por outro lado, o diterpeno casbano foi capaz de inibir o crescimento de P. aeruginosa na forma planctÃnica, nas concentraÃÃes de 500, 250 e 125 Âg/mL. Entretanto, nÃo foi observada inibiÃÃo da formaÃÃo do biofilme da P. aeruginosa nas concentraÃÃes utilizadas neste estudo. O diterpeno casbano isolado de Croton nepetaefolius poderà ser utilizado, apÃs a realizaÃÃo de outros estudos, como ferramenta biotecnolÃgica antimicrobiana sobre as formas planctÃnicas de P. aeruginosa / This work shows the biological activities of lectins isolated from Vatairea macrocarpa and Vatairea guianensis seeds and the vegetable compound diterpen casban, isolated from Croton nepetaefolius on the growth of Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) that causes otites externa. The in vitro activity of the two lectins and vegetable compound casbane diterpene were compared on cultures of P. aeruginosa in polystyrene microplates. The bacterial cells were tested such in planktonic as in biofilm forms. The lectins tested were not capable to inhibit the growth and biofilm production of P. aeruginosa in the experimental conditions. On the other hand, the casbane diterpene was capable to inhibit the growth of planctonic forms of P. aeruginosa at the concentrations of 500, 250 and 125 Âg/mL. However, the inhibition of biofilm production was not observed at the same concentrations. The casbane diterpene isolated from Croton nepetaefolius can be used, after the realization of other studies, as an antibiotic biotechnological tool on planktonic forms of P. aeruginosa

A presença de plasmídeos conjugativos como IncP, IncU e IncFII carreando genes de resistência em Pseudomonas aeruginosa é de grande importância, pois podem ser trocados entre diferentes bactérias gram-negativas, disseminando a resistência aos antibióticos. Conhecer estes genes de resistência bem como os elementos genéticos que os carreiam é importante para entender os fatores que contribuem para a disseminação da resistência, auxiliando no controle da disseminação da resistência aos antibióticos. Ainda hoje não existe esquema para a tipagem de plasmídeos de P. aeruginosa, e são encontrados poucos trabalhos sobre estes plasmídeos. O objetivo deste estudo foi identificar os genes de resistência a antibióticos, o ambiente genético em que estes genes estão inseridos e a clonalidade dos isolados produtores de genes bla. No período do estudo, foram estudados 293 isolados de P. aeruginosa resistentes às cefalosporinas de 3ª e/ou 4ª gerações e/ou aos carbapenêmicos isoladas de pacientes de hospitais de Ribeirão Preto-SP, Belo Horizonte-MG, Franca-SP, Cuiabá-MT, de Barretos-SP e de Rio Branco-AC. Genes de resistência foram pesquisados por PCR. O perfil clonal dos isolados produtores de genes bla foi determinado por PFGE e MLST. A tipagem de plasmídeos foi feita por PFGE-S1 nuclease, hibridações com sondas específicas e tipagem de replicons (PBRT). Foram identificados 12 isolados carreando o gene blaSPM-1, 16 isolados carreando o gene blaCTX-M-2 e 3 isolados carreando o gene blaKPC-2. Em todos os 12 isolados produtores de SPM-1 foram identificadas duas cópias do elemento de inserção ISCR4, sendo uma cópia upstream e uma cópia downstream ao gene blaSPM-1 inseridos no cromossomo bacteriano. Em 13 dos 16 isolados produtores de CTX-M-2 o gene blaCTX-M-2 foi encontrado associado ao elemento de inserção ISCR1 e em 3 ao elemento de inserção ISEcp1 também inseridos no cromossomo bacteriano. Em 2 isolados o gene blaKPC-2 é carreado por um plasmídeo de ~3kb não tipável por PBRT e um em está inserido no cromossomo bacteriano. O ambiente genético do gene blaKPC-2 nos isolados estudados é diferente daqueles encontrados na literatura. Os isolados produtores de genes bla citados apresentaram diversidade clonal, tanto por PFGE quanto MLST demonstrando que vários clones estão envolvidos na disseminação desses genes. Este trabalho identificou e caracterizou 31 isolados produtores de ?-lactamases, o ambiente genético destes genes e a clonalidade de isolados de várias cidades do Brasil e em períodos diferenciados, demonstrando a disseminação desses genes em diferentes hospitais brasileiros. Esses dados auxiliam no conhecimento dos fatores que estão envolvidos na disseminação da resistência aos antibióticos e podem auxiliar as CCIHs dos hospitais a definirem estratégias para controlar a disseminação desses microrganismos prevenindo surtos de bactérias multirresistentes. / The presence of conjugative plasmids as IncP, IncU and Inc FII carrying resistance genes in Pseudomonas aeruginosa is very important because t these plasmids can be shared among different bacteria, spreading antibiotic resistance. Knowledge of these genes as well as genetic elements carrying these genes it is important to understend the factors that contribute to the spread of resistance, helping to control the spread of antibiotic resistance. Today there is no plasmid typing scheme to P. aeruginosa and few papers are found about this subject. The purpose of this study was to investigate resistance genes, genetic environment of these genes and clonal relationship of the isolates carrying these resistance genes. In the period of this study was studied 293 P. aeruginosa resistant to third and fourth generations of cephalosporins and/or carbapenens isolated of patients from hosptital from Ribeirão Preto, Belo Horizonte-MG, Franca-SP, Cuiabá-MT, Barretos-SP and Rio Branco-AC. Resistance genes were investigated by PCR. Twelve isolates were identified carrying blaSPM-1 gene, 16 isolates carrying blaCTX-M-2 gene and 3 isolates carrying blaKPC-2 gene. Clonal profiles of isolates producing resistance genes were investigated by PFGE and MLST. Plasmid typing was performed by PFGE-S1 nuclease, specific hybridizations and PCR replicon typing (PBRT). Two isolates presented a 3kb plasmid non-typeable by PBRT carrying blaKPC-2 gene. In all isolates SPM-1-producers were identified two copies of insertion sequence ISCR4, a copy upstream and a copy downstream to blaSPM-1 gene inserted in chromosomal DNA. In 13 of 16 isolates CTX-M-2-producers the blaCTX-M-2 gene was found associated to insertion sequence ISCR1 and in 3 isolates was associated to insertion sequence ISEcp1 also inserted in chromosomal DNA. Genetic environment of blaKPC-2 gene in the isolates studied it is different from those found in the literature. Isolates producing bla genes are clonally diversified using both PFGE and MLST showing that various clones are responsible to spread these resistance genes. This work identified and characterized 31 P. aeruginosa-?-lactamase-producing, the genetic environment of these genes and the clonal relationship of isolates collected from different periods from different cities of Brazil. These data can help us to understand the factors that are involved in the spread of antibiotics resistance and to help the Hospital Infection Control Committee to define strategies to control the spread of these microorganisms preventing outbreaks of resistant.

O objetivo deste trabalho foi a seleção de bactérias capazes de biodegradar os pesticidas organoclorados dieldrin, DDD e PCP. Inicialmente, foram realizados os ensaios de tolerância visando à seleção das bactérias degradadoras; posteriormente foram realizados os ensaios de biodegradação em meio liquido utilizando a bactéria selecionada. Dentre as 14 linhagens bacterianas isoladas testadas, selecionou-se a linhagem Pseudomonas aeruginosa L2-1 por apresentar maior tolerância a todos os pesticidas. Os ensaios de biodegradação foram realizados em diferentes meios de cultura, variando-se a concentração de glicose, a fonte de nitrogênio e a presença de ramnolipídeo. Os ensaios de biodegradação foram realizados determinando-se a concentração de pesticida, a concentração de glicose, o número de células viáveis, e o pH. O meio de cultura que mais favoreceu a biodegradação dos três pesticidas foi o meio com nitrato de sódio e 0,5% de glicose, obtendo-se biodegradação de aproximadamente 50% para cada pesticida após três dias de incubação. Na ausência de glicose, o meio com nitrato de amônio e 0,1% de ramnolipídeo, favoreceu a biodegradação, obtendo-se após 14 dias de incubação 36,8% de biodegradação de dieldrin; 33,7% de DDD e 42,8% de PCP. De uma forma geral, as taxas de biodegradação pela P. aeruginosa L2-1 foram maiores em menores concentrações de glicose e na presença de ramnolipídeo. Ao alterar a fonte de nitrogênio foram observados resultados diversos sobre a taxa de biodegradação: na ausência de glicose, o nitrato de sódio favoreceu a biodegradação de PCP, enquanto o nitrato de amônio favoreceu a biodegradação de dieldrin, na presença de glicose observou-se o inverso. A taxa de biodegradação do DDD não foi significativamente alterada ao variar a fonte de nitrogênio. A bactéria selecionada P. aeruginosa L2-1 apresentou potencial para biodegradação de pesticidas organoclorados, sendo que as condições nutricionais do meio influenciaram diretamente a biodegradação. / The objective of this work was the selection of bacteria capable of biodegrading the organochloride pesticides dieldrin, DDD and PCP. Initially tolerance tests were conducted in order to select degrading bacteria subsequently, biodegradation tests were carried out in liquid medium using the selected bacteria. Among the 14 bacterial isolated strains, Pseudomonas aeruginosa L2-1 was selected due to its greater tolerance to all pesticides. The biodegradation tests were conducted on different culture media, varying the concentrations of glucose, nitrogen source and presence of rhamnolipid. Biodegradation studies were performed by measuring the concentration of pesticide, the concentration of glucose, the number of viable cell and pH during time. The best medium for the biodegradation of all three pesticides was composed of sodium nitrate and 0.5% glucose, giving approximately 50% yield after three days of incubation. In the absence of glucose, the medium containing ammonium nitrate and 0.1% rhamnolipid improved biodegradation yielding, after 14 days of incubation, 36.8% biodegradation of dieldrin; 33.7% DDD and 42.8% of PCP. In general, the biodegradation rates of pesticides by P. aeruginosa L2-1 were greater at lower concentrations of glucose and in the presence of rhamnolipid. Nitrogen source had different effects on the rate of biodegradation: in the absence of glucose, sodium nitrate favored the biodegradation of PCP, whereas ammonium nitrate favored the biodegradation of dieldrin; and in the presence of glucose, it was observed the opposite. The biodegradation rate of the DDD was not significantly altered by the nitrogen source tested. The selected bacteria, P. aeruginosa L2-1, showed potential for the biodegradation of organochloride pesticides demonstrating that nutritional conditions has a direct effect on degradation yields.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lariane_Souza_da_Silva.pdf: 1189397 bytes, checksum: 1e10edda08abaad18f95d44a9235040e (MD5) Previous issue date: 2015-09-10 / Fundação Araucária / The growing demand of milk to supply the population has promoted the evolution of this chain, especially with regard to aspects related to food safety. Thus, this study traced psychrotrophic and proteolytic microorganisms, which are responsible for the separation of the main milk protein, k-casein, with emphasis on identifying and preserving Pseudomonas and Pseudomonas aeruginosa. This species presents high virulence, thus, it is very important to public health and to produce biofilm on several surfaces. The tracing samples were collected from the milking phases and were collected with hand swabs on udder, bucket, cooler, blower, raw milk collection and of milking water. The nonparametric Kruskal-Wallis analysis was used to screening of microorganisms in milking phases, while CMP evaluation results were obtained by the Principal Component Analysis. The results indicated that as the psychrotrophic bacteria counting increased (p <0.05), CMP values decreased. This has indicated lower levels of proteolysis, and it could possibly be related to the fact that psychrotrophic microorganisms present in samples did not have the proteolytic ability. The highest point of contamination indicated in tracing was the surface of the animals udder due to the adopted management, since most producers did not carry out a correct hygiene during this phase / A crescente demanda por leite para a abastecimento da população promoveu a necessidade de evolução dessa cadeia, principalmente no que diz respeito aos aspectos relacionados à segurança dos alimentos. O presente estudo rastreou microrganismos psicrotróficos e proteolíticos que realizam a quebra da principal proteína leiteira, a k-caseína, com destaque para a identificação e preservação de Pseudomonas e Pseudomonas aeruginosa. Essa espécie é de alta virulência, com importância em saúde pública e também em formação de biofilmes em superfícies diversas. As amostras coletadas para rastreamento provieram das etapas de ordenha e foram coletadas com swabs de mão, em teto, balde, resfriador, insuflador, e a coleta do leite cru e da água da ordenha. Utilizou-se a análise não paramétrica de Kruskal-Wallis para o rastreamento dos microrganismos nas etapas de ordenha e os resultados da avaliação do CMP foram obtidos pela Análise de Componentes Principais. Os resultados indicaram que: à medida que a contagem de bactérias psicrotróficas aumentou (p<0,05), diminuíram-se os valores para o CMP, indicando menor nível de proteólise, o que possivelmente poderia estar relacionado ao fato dos microrganismos psicrotróficos presentes nas amostras não possuíam a capacidade proteolítica. O ponto de maior contaminação indicado no rastreamento foi a superfície de teto dos animais, devido ao manejo adotado, pois a maioria dos produtores não realizavam a higienização correta

A análise de fluxos metabólicos para a produção de PHAMCL por Pseudomonas sp. LFM046 revelou que a baixa eficiência de conversão de carboidratos em PHA (60-70% do valor máximo teórico) deve estar associada à utilização principal da via das pentoses (VP) para o metabolismo de carboidratos. Eficiências significativamente maiores poderiam ser obtidas se uma parcela maior da glicose fosse metabolizada pela via Entner-Doudoroff (ED). Assim, neste trabalho foi realizada a análise de fluxos metabólicos utilizando glicose marcada (C13) e o melhoramento genético de Pseudomonas sp. LFM046 utilizando estratégia de engenharia metabólica. Experimentos com glicose marcada confirmaram um maior fluxo de carboidratos pela VP em relação a ED. A superexpressão de genes específicos de ED em Pseudomonas sp. LFM046 demonstrou apenas pequenos aumentos na eficiência de conversão de carboidratos em PHA pelas linhagens recombinantes. / The metabolic flux analysis for PHAMCL production by Pseudomonas sp. LFM046 revealed that the low efficiency of carbohydrates conversion into PHA (60-70% of the maximum theoretical value) should be associated with the main use of pentose phosphate pathway (PP) for the carbohydrate metabolism. Significantly higher efficiencies could be obtained if a larger portion of the glucose was metabolized via the Entner-Doudoroff (ED). Therefore, the metabolic fluxes analysis was performed in this work using labeled glucose (13C) and the genetic improvement of Pseudomonas sp. LFM046 by using metabolic engineering approach. Experiments with labeled glucose confirmed an increased flow of carbohydrates by PP compared to ED. The overexpression of specific genes from ED in Pseudomonas sp. LFM046 showed only small increases in the efficiency of carbohydrates conversion into PHA by recombinant strains.

Ramnolipídios (RHLs) são biossurfactantes produzidos por Pseudomonas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de produção de ramnolipídios por isolados de Pseudomonas considerando os efeitos das fontes de carbono ou nitrogênio tanto na concentração de ramnolipídios produzida como na composição deste. De 47 isolados bacterianos, cinco foram selecionados qualitativamente para avaliação da produção de ramnolipídios, analisando 48 combinações diferentes de meio mineral. A produção de polihidroxialcanoatos (PHAs) também foi avaliada. Glicose e óleos de canola e linhaça foram as fontes de carbono que promoveram a maior formação de RHLs. Nitrato de sódio se mostrou a melhor fonte de nitrogênio para produção desse tensoativo. A análise do PHA e do RHL purificados revelou a presença de 3-hidroxi-6-dodecenoato (3HDd<font face=\"Symbol\">D6), um composto proveniente exclusivamente da <font face=\"Symbol\">b-oxidação do ácido linoleico. Esses resultados indicam que a <font face=\"Symbol\">b-oxidação de ácidos graxos também contribui com intermediários metabólicos para a biossíntese de RHLs, ao contrário ao reportado na literatura. / Ramnolipids (RHLs) are biosurfactants produced by Pseudomonas. The aim of this study was to evaluate the production of rhamnolipids by Pseudomonas isolates, considering the effects of carbon and nitrogen sources on their concentration and composition. From 47 bacterial isolates, five were selected qualitatively for to evaluate the RHLs production, analyzing 48 different combinations of mineral medium. The production of polyhydroxyalkanoates (PHAs) was also evaluated. Linseed oil, canola oil and glucose were the carbon sources that promoted formation the largest amounts of RHLs. From plant oils, sodium nitrate proved to be the best nitrogen source for RHLs production. The analysis of purified PHA and RHL revealed the presence of the 3-hydroxy-6-dodecenoate, a compound derived exclusively from <font face=\"Symbol\">b-oxidation of linoleic acid. These results indicate that the <font face=\"Symbol\">b-oxidation of fat acids, contributes with intermediates for the biosynthesis of RHLs, unlike literature reports.

Orientador: Carlos Emilio Levy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:09:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mauch_RenanMarrichi_M.pdf: 2012702 bytes, checksum: 947bbc196f2331b0a48b9596a06effdc (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética decorrente da disfunção da proteína reguladora da condutância transmembrana (CFTR), essencial para o transporte de íons e água pela membrana celular, sendo a doença pulmonar a mais preponderante das manifestações, havendo colonização bacteriana seguida de infecções, principalmente por Pseudomonas aeruginosa, bactéria de maior relevância para pacientes com FC. Neste estudo, buscamos padronizar e avaliar o valor diagnóstico e prognóstico de um teste de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) para pesquisa de anticorpos séricos IgG anti-P. aeruginosa, comparando os resultados com a cultura microbiológica de material respiratório (padrão-ouro atual). Os níveis de anticorpos foram avaliados primeiramente em um estudo transversal, com 117 pacientes com FC atentidos no HC-Unicamp, buscando determinar a acurácia do teste, e paralelamente em um estudo longitudinal, com 78 pacientes inicialmente sem infecção crônica por P. aeruginosa, buscando monitorar a variação dos níveis de anticorpos em diferentes períodos de coleta de amostras. Observamos que a taxa de soropositividade e a mediana dos níveis de IgG anti-Pseudomonas foram significativamente maiores em pacientes cronicamente infectados pela bactéria, tendo o teste sensibilidade de 96,8%, especificidade de 98,1%, valor preditivo positivo de 96,8% e valor preditivo negativo de 98,1% para a detecção da infecção crônica. Houve aumento progressivo dos níveis de anticorpos dos pacientes ao longo do tempo, com maior significância em dois períodos de coleta, entre pacientes que apresentaram evolução no perfil de colonização/infecção por P. aeruginosa. Foi possível, pela pesquisa de anticorpos, a detecção da bactéria até 15 meses antes do primeiro isolamento positivo em cultura e pacientes com níveis de anticorpos elevados no início do estudo apresentaram maior risco de posterior evolução no perfil de colonização/infecção por P. aeruginosa. Concluímos que a sorologia pode ser um recurso diagnóstico de grande utilidade para a detecção precoce da infecção pulmonar P. aeruginosa em pacientes com FC, complementando resultados da cultura microbiológica. Introduzindo-a na rotina de acompanhamento dos pacientes, será possível a terapia antimicrobiana precoce, o que poderá ajudar a melhorar a função pulmonar dos pacientes e sua qualidade de vida / Abstract: Cystic Fibrosis (CF) is a genetic disease, resulting from disfunction of the CFTR protein, which is essential for the transportation of ions and water across the cell membrane, being the pulmonary disease the most prominent manifestation, where there is bacterial colonization followed by infections, mainly caused by Pseudomonas aeruginosa, the most relevant bacterium for CF patients. The aim of this study was to standardize and to evaluate the diagnostic and prognostic values of an ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) test for detection of serum anti-P. aeruginosa IgG antibodies, comparing the results with the microbiological respiratory culture (current gold standard). The antibody levels were first evaluated in a cross sectional study, with 117 CF patients attended at the HC-Unicamp, seeking to evaluate the accuracy of the test, and in a parallel longitudinal study, with 78 patients initially without P. aeruginosa chronic infection, seeking to monitor the variation in the antibody levels in different periods of sample collection. We observed that the seropositivity rate and the median of the anti-Pseudomonas IgG antibody levels were significantly higher in chronically infected patients, with the serological test presenting a sensitivity of 96.8%, specificity of 98.1%, positive predictive value of 96.8% and negative predictive value of 98.1% for detection of chronic infection. There was a progressive increase of the antibody levels in the patients over time, with greater significance, in two collection periods, among patients who presented evolution in the P. aeruginosa colonization/infection status. Through antibody measurement, we could detect the bacterium until 15 months before the first positive isolation in microbiological culture and the patients with elevated antibody levels in the baseline showed higher risk for later evolution in the P. aeruginosa colonization/infection status. We conclude that serology can be a very useful diagnostic resource for early detection of P. aeruginosa pulmonary infection, complementing microbiological results. By introducing it on the follow-up routine, the early antimicrobial therapy will be possible, which will help to improve the patients¿ lung function and quality of life / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Ciências

Orientador: Selma Giorgio, Luciana Maria de Hollanda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia. / Made available in DSpace on 2018-08-18T19:40:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_FlaviaLuna_M.pdf: 5109370 bytes, checksum: b5d1a1158570ae39829ed8ec9ff682e5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Pseudomonas aeruginosa é um dos principais patógenos oportunistas responsáveis pelas infecções nosocomiais. Essas infecções representam um grave problema de saúde para pessoas com feridas graves e queimaduras, sendo responsável por altas taxas de mortalidade nos pacientes. Os tecidos cronicamente lesados apresentam microáreas de hipóxia, pouco vascularizadas, que são extremamente difíceis de serem tratadas, diminuem e alteram os efeitos dos medicamentos propiciando que linhagens multiresistentes desse patógeno infectem e sobrevivam. Assim, torna-se imprescindível o desenvolvimento de tratamentos que sejam eficazes tanto no combate do patógeno, como na regeneração do tecido destruído. A terapia com oxigenação hiperbárica (HBO) promove a regeneração tecidual pela formação de novos vasos, apresenta propriedades bacteriostáticas e bactericidas e pode atuar de forma sinérgica com antibióticos. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o papel da HBO no crescimento de P. aeruginosa, na ação de imipenem e em macrófagos e peles artificiais infectadas com esse patógeno. Nossos resultados mostraram que a exposição de seis cepas de P. aeruginosa a HBO (100% de O2 a 3 ATA pressão) diminui o crescimento bacteriano, além de potencializar o efeito de imipenem/cilastatina no combate a esta bactéria. A exposição a HBO durante 90 minutos protegeu macrófagos peritoneais da lise causada pela infecção bacteriana. Quando peles artificiais infectadas com P. aeruginosa foram expostas a HBO a carga bacteriana destes tecidos diminuiu. Os nossos resultados evidenciam a importância do tratamento hiperbárico no controle de infecções causadas por este patógeno / Abstract: Pseudomonas aeruginosa is a major opportunistic pathogens responsible for nosocomial infections. These infections represent a serious health problem for people with severe wounds and burns and are responsible for high mortality rates in these patients. The chronically injured tissues have small areas of hypoxia, these areas, low vascularization, are extremely difficult to treat, reduce and alter the effects of medicines providing that multiresistant strains of this pathogen to infect and survive in these places. Thus, it is essential to develop a treatment that is effective both in combating the pathogen, as in the regeneration of damaged tissue. Therapy with hyperbaric oxygen (HBO) promotes tissue regeneration by new vessel formation, has bacteriostatic and bactericidal properties and can act synergistically with antibiotics. The aim of this study was to evaluate the role of HBO on the growth of P. aeruginosa, in the imipenem action and infected macrophages and artificial skin infected with this pathogen. Our results show that exposure of six strains of P. aeruginosa to hyperbaric conditions (100% O2 at 3 ATA pressure) reduces bacterial growth, and maximize the effect of imipenem/ cilastatina against this bacterium. Exposure to HBO for 90 minutes protected macrophages from lysis caused by bacterial infection. Artificial skins infected with P. aeruginosa and exposed to HBO showed a decrease in bacterial load. These results support the importance of hyperbaric oxygen therapy in control infections caused by this pathogen / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular