Adipöse Patienten und Typ-2-Diabetiker zeigen ein erhöhtes Risiko für Harnwegsinfekte. Die Ursache der höheren Prävalenz ist noch nicht nachhaltig geklärt. Bekannt ist, dass Typ-2-Diabetiker erhöhte Konzentrationen freier Fettsäuren im Blut aufweisen. Der veränderte Fettstoffwechsel könnte neben bakteriellen Ursachen ein möglicher Grund für abakterielle Entzündungsreaktionen der Harnblase sein. Zur Prüfung dieser Hypothese wurden zeit- und konzentrationsabhängig kultivierte humane Detrusormyozyten im Vergleich zur Lipopolysaccharid (LPS) induzierten Entzündungsreaktion mit Palmitat stimuliert. Es wurde geprüft, ob eine autokrine und/oder endokrine Regulation des IL-6-Signalwegs vorliegt. Im Fokus standen insbesondere die IL-6- und MCP-1-Expression und deren möglichen regulatorischen Proteine gp80, gp130, NF-κB, STAT3, SOCS3 und MEK1. Die Stimulationsversuche mit LPS und Palmitat zeigen einen differenten zeit- und konzentrationsabhängigen Effekt auf die IL-6- und MCP-1-Expression in den humanen Detrusormyozyten. LPS und Palmitat induzieren eine zeitabhängige autokrine Regulation der IL-6-Signalkaskade über phosphoryliertes STAT3 und Feedback-mechanismen via SOCS3. Sowohl LPS als auch Palmitat bewirken über 48h eine mögliche endokrine Regulation des IL-6-Signalwegs. Zusammenfassend zeigt die Palmitatstimulation zeit- und konzentrationsabhängig einen stärkeren Effekt auf die IL-6-Signalwirkung als die Stimulation mit LPS. / Background: Urinary tract infections (UTI) are more frequent in type-2 diabetes mellitus patients than in subjects with normal glucose metabolism. The mechanisms underlying this higher prevalence of UTI are unknown. However, cytokine levels are altered in diabetic patients and may thus contribute to the development of UTI. Increased levels of free fatty acids (FFA), as observed in obese patients, can induce IL-6 production in various cell types. Therefore we studied the effects of the free fatty acid palmitate and bacterial lipopolysaccharide (LPS) on interleukin-6 (IL-6) and monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) expression and secretion in cultured human bladder smooth muscle cells (hBSMC). Methodology/Principal Findings: Biopsies were taken from patients undergoing cystectomy due to bladder cancer. Palmitate or LPS stimulated hBSMC were analysed for the production and secretion of the IL-6, gp80, gp80soluble, gp130, MCP-1, pSTAT3, SOCS3, NF-kB and SHP2 by quantitative PCR, ELISA, Western blotting, and confocal immunofluorescence. In signal transduction inhibition experiments we evaluated the involvement of NF-kB and MEK1 in IL-6 and MCP-1 regulation. Palmitate upregulates IL-6 mRNA expression and secretion via NF-kB dependent pathways in a concentration- and timedependent manner. MCP-1 was moderately upregulated by palmitate but was strongly upregulated by LPS involving NF-kB and MEK1 dependent pathways. Soluble IL-6 receptor (gp80soluble) was downregulated by palmitate and LPS, while membrane-bound gp80 was moderately upregulated. LPS increased SOCS3 and SHP2, whereas palmitate only induced SOCS3. Secondary finding: most of the IL-6 is secreted. Conclusions/Significance: Bacterial infection (LPS) or metabolic alterations (palmitate) have distinct effects on IL-6 expression in hBSMC, (i) short term LPS induced autocrine JAK/STAT signaling and (ii) long-term endocrine regulation of IL-6 by palmitate. Induction of IL-6 in human bladder smooth muscle cells by fatty acids may represent a pathogenetic factor underlying the higher frequency and persistence of urinary tract infections in patients with metabolic diseases.

Diets high in saturated fatty acids are associated with the development of circadian dysregulation, obesity, and type 2 diabetes mellitus. Conversely, unsaturated fatty acids are now known to improve insulin sensitivity, reduce weight gain, and alleviate obesity-induced inflammation. The aforementioned effects of saturated and unsaturated fatty acids have also been identified in the hypothalamus; however, there is a paucity of studies regarding the role of unsaturated fatty acids in circadian rhythms. Therefore, a novel cell model was established to examine the effects of omega-3 fatty acids on circadian rhythms in hypothalamic neurons. The mHypoE-37 cell line expresses Bmal1, Per2, and Rev-erbα in a circadian manner. The saturated fatty acid, palmitate, was found to induce circadian dysregulation of the mHypoE-37 neurons, whereas the unsaturated fatty acid, docosahexaenoic acid, protected against palmitate-induced circadian changes. These studies are the first to identify the potential for unsaturated fatty acids to protect the circadian system.

Diets high in saturated fatty acids are associated with the development of circadian dysregulation, obesity, and type 2 diabetes mellitus. Conversely, unsaturated fatty acids are now known to improve insulin sensitivity, reduce weight gain, and alleviate obesity-induced inflammation. The aforementioned effects of saturated and unsaturated fatty acids have also been identified in the hypothalamus; however, there is a paucity of studies regarding the role of unsaturated fatty acids in circadian rhythms. Therefore, a novel cell model was established to examine the effects of omega-3 fatty acids on circadian rhythms in hypothalamic neurons. The mHypoE-37 cell line expresses Bmal1, Per2, and Rev-erbα in a circadian manner. The saturated fatty acid, palmitate, was found to induce circadian dysregulation of the mHypoE-37 neurons, whereas the unsaturated fatty acid, docosahexaenoic acid, protected against palmitate-induced circadian changes. These studies are the first to identify the potential for unsaturated fatty acids to protect the circadian system.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-22Bitstream added on 2014-06-13T18:50:46Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_pl_me_arafcf.pdf: 2094182 bytes, checksum: 926895d5e73c0de69bc13d5a0444ffcd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As hipóteses mais modernas baseiam o processo de envelhecimento cutâneo em duas teorias: o intrínseco (ou cronológico) e o extrínseco (ou fotoenvelhecimento). Tanto no envelhecimento intrínseco como no extrínseco, as principais alterações da pele são caracterizadas por formação de rugas, flacidez e perda da elasticidade. O palmitato de retinol (PR) é um análogo sintético da vitamina A indicado topicamente para prevenir ou retardar algumas mudanças estruturais e funcionais da pele associadas ao processo de envelhecimento cutâneo, porém é um princípio ativo que apresenta estabilidade química limitada frente à umidade, oxigênio, ácidos, metais e exposição à luz. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um sistema líquido-cristalino à base de silicone para a liberação prolongada e maximização da estabilidade do palmitato de retinol. Utilizando-se o método de titulação da fase aquosa, foram construídos dois diagramas ternários de fases, ambos constituídos por Procetyl AWS® (tensoativo) e água e por silicone DC 5330® (fase oleosa no diagrama 1) ou silicone DC 5329® (fase oleosa no diagrama 2). Nos estudos de estabilidade preliminar, as formulações do diagrama 1 (A, B, C e D) e do diagrama 2 (E, F, G e H) foram avaliadas nos seguintes estudos: microscopia de luz polarizada, centrifugação, pH, condutividade eletrolítica, índice de refração e reologia. Dentre estas formulações estudas preliminarmente, a formulação GPR foi selecionada para ser conduzida aos estudos posteriores após a incorporação de 1% do princípio ativo, pois demonstrou a formação de fases líquido-cristalinas evidenciadas sob luz polarizada no microscópio óptico, apresentou-se compatível com o pH fisiológico da pele, apresentou pequeno coeficiente de variação das medidas realizadas referentes aos parâmetros físico- químicos e menor capacidade de desestruturar... / Current hypotheses based on the process of skin aging in two theories: the intrinsic (or chronological) and extrinsic (or photoaging). Both in the extrinsic as intrinsic aging, the main skin disorders are characterized by wrinkles, flaccidity and loss of elasticity. Retinyl palmitate (RP) is a synthetic analogue of vitamin A given topically to prevent or delay some structural and functional changes of the skin associated with aging, but is an active principle that has limited chemical stability against moisture, oxygen, acids , metals and exposure to light. Thus, the aim of this study was to develop liquid crystalline system silicon-based for extended release and maximizing the stability of retinyl palmitate in order to optimize the use of topically active principle in the prevention and / or mitigation of aging skin. Using the method of titration of the aqueous phase, was built two ternary phase diagrams, both consist of Procetyl AWS ® (surfactant) and water and silicone DC 5330 ® (oil phase diagram 1) or silicone DC 5329 ® (phase oil in diagram 2). In preliminary studies of stability, the formulations of the diagram 1 (A, B, C and D) and the formulations of the diagram 2 (E, F, G and H) were evaluated in the following studies: polarized light microscopy, centrifugation, pH, electrolitic conductivity, refraction index and rheology. Among these formulations studied preliminarily, the formulation G RP-loaded was selected to be conducted to further studies, since it showed the formation of liquid crystalline phases evidenced by polarized light in an optical microscope, presented consistent with the physiological pH of skin, had a small coefficient of variation of measurements related to the physicochemical and less ability to disrupt the lipid bilayer of the skin due to have a lower concentration of surfactant. The validated analytical methodology for chemical quantification of retinyl... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-03Bitstream added on 2014-06-13T18:43:04Z : No. of bitstreams: 1 chorilli_m_dr_arafcf.pdf: 6828214 bytes, checksum: e7f3732e2e09e7a3c509d1c9cc6b1d5e (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O estudo de sistemas nanoestruturados tem chamado a atenção de um número cada vez maior de pesquisadores das áreas farmacêutica e cosmética, devido às inúmeras vantagens conferidas, como aumento da estabilidade e eficácia de princípios ativos. Os efeitos desses sistemas na pele são dificilmente relatados na literatura científica. Os objetivos deste trabalho foram: desenvolver e caracterizar fisico-quimicamente sistemas nanoestruturados contendo palmitato de retinol (PR); realizar os testes de estabilidade preliminares (TEP) para as formulações selecionadas; realizar o controle microbiológico bem como o teste de desafio para eficácia conservante para as formulações empregadas; verificar o efeito irritativo das formulações segundo escala de Draize e por análise histológica, além de avaliar a eficácia das formulações no tratamento do envelhecimento cutâneo. As formulações preparadas com silicone fluido de co-polímero glicol (SFCG), poliéter funcional siloxano (PFS) e água (S1) e com adipato de diisopropila, PFS e água (S4) apresentaram fases líquido-cristalinas do tipo lamelar. Os TEPs evidenciaram que as formulações F1, F2 e F3 de todos os sistemas desenvolvidos se mantiveram estáveis durante o período do estudo. As formulações do sistema S1 apresentaram maior formação e estabilidade de cristais líquidos no decorrer do experimento, sendo selecionadas para incorporação de PR. As formulações F1, F1v, F4 e F4v do sistema S1 e a formulação F5 do sistema S4 apresentaram-se como fluidos pseudoplásticos não–Newtonianos. A formulação F5 foi a mais tixotrópica, seguido pelas formulações F1v e F1. As condições de armazenamento, de acordo com os ensaios de escoamento e mecânicodinâmicos, interferem na estruturação do sistema. As formulações F1, F1v, F4 e F4v não apresentaram contaminação microbiana... / The study of nanostructured systems has interested an inreasing number of pharmaceutical and cosmetic areas researchers, due to the great advantage, as increase of the stability and effectiveness of active substances. The effects of those systems in the skin poorly reported on the scientific literature. The aims of this work were: to develop and to characterize physicochemically nanostructured systems containing retynil palmitate (RP); to carry out a preliminary stability tests (PST) for the selected formulations; to carry through the microbiological control as well the challenge test for preservative effectiveness for the used formulations; to evaluate the irritation effect of the formulations according to Draize scale and histological analysis, besides to evaluate the effectiveness of the formulations in the treatment of the cutaneous aging. The formulations prepared with silicon glycol copolymer (SGC), polyether functional siloxane (PFS) and water (S1) and with diisopropyl adipate, PFS and water (S4) presented liquid-crystalline phases with lamellar arrangement. The PST evidenced that the formulations F1, F2 and F3 of all the developed systems remained stable throughout the period of study. The formulations of the S1 system presented higher formation of liquid crystals and better stability, being selected for incorporation of RP. The formulations F1, F1v, F4 and F4v of the S1 system and the formulation F5 of the S4 system presented as not- Newtonian pseudoplastic fluids. The formulation F5 was the most thixotropic, followed by the formulations F1v and F1. The storage conditions, in accordance with draining and mechanicdynamic assays, interfere with the structure of the system. The formulations F1, F1v, F4 and F4v did not present microbiological contamination, evidenced by the estimate of the number of viable microorganisms and by the presence... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O estudo de sistemas nanoestruturados tem chamado a atenção de um número cada vez maior de pesquisadores das áreas farmacêutica e cosmética, devido às inúmeras vantagens conferidas, como aumento da estabilidade e eficácia de princípios ativos. Os efeitos desses sistemas na pele são dificilmente relatados na literatura científica. Os objetivos deste trabalho foram: desenvolver e caracterizar fisico-quimicamente sistemas nanoestruturados contendo palmitato de retinol (PR); realizar os testes de estabilidade preliminares (TEP) para as formulações selecionadas; realizar o controle microbiológico bem como o teste de desafio para eficácia conservante para as formulações empregadas; verificar o efeito irritativo das formulações segundo escala de Draize e por análise histológica, além de avaliar a eficácia das formulações no tratamento do envelhecimento cutâneo. As formulações preparadas com silicone fluido de co-polímero glicol (SFCG), poliéter funcional siloxano (PFS) e água (S1) e com adipato de diisopropila, PFS e água (S4) apresentaram fases líquido-cristalinas do tipo lamelar. Os TEPs evidenciaram que as formulações F1, F2 e F3 de todos os sistemas desenvolvidos se mantiveram estáveis durante o período do estudo. As formulações do sistema S1 apresentaram maior formação e estabilidade de cristais líquidos no decorrer do experimento, sendo selecionadas para incorporação de PR. As formulações F1, F1v, F4 e F4v do sistema S1 e a formulação F5 do sistema S4 apresentaram-se como fluidos pseudoplásticos não-Newtonianos. A formulação F5 foi a mais tixotrópica, seguido pelas formulações F1v e F1. As condições de armazenamento, de acordo com os ensaios de escoamento e mecânicodinâmicos, interferem na estruturação do sistema. As formulações F1, F1v, F4 e F4v não apresentaram contaminação microbiana... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study of nanostructured systems has interested an inreasing number of pharmaceutical and cosmetic areas researchers, due to the great advantage, as increase of the stability and effectiveness of active substances. The effects of those systems in the skin poorly reported on the scientific literature. The aims of this work were: to develop and to characterize physicochemically nanostructured systems containing retynil palmitate (RP); to carry out a preliminary stability tests (PST) for the selected formulations; to carry through the microbiological control as well the challenge test for preservative effectiveness for the used formulations; to evaluate the irritation effect of the formulations according to Draize scale and histological analysis, besides to evaluate the effectiveness of the formulations in the treatment of the cutaneous aging. The formulations prepared with silicon glycol copolymer (SGC), polyether functional siloxane (PFS) and water (S1) and with diisopropyl adipate, PFS and water (S4) presented liquid-crystalline phases with lamellar arrangement. The PST evidenced that the formulations F1, F2 and F3 of all the developed systems remained stable throughout the period of study. The formulations of the S1 system presented higher formation of liquid crystals and better stability, being selected for incorporation of RP. The formulations F1, F1v, F4 and F4v of the S1 system and the formulation F5 of the S4 system presented as not- Newtonian pseudoplastic fluids. The formulation F5 was the most thixotropic, followed by the formulations F1v and F1. The storage conditions, in accordance with draining and mechanicdynamic assays, interfere with the structure of the system. The formulations F1, F1v, F4 and F4v did not present microbiological contamination, evidenced by the estimate of the number of viable microorganisms and by the presence... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Virgínia Scarpa / Coorientador: Gislaine Ricci Leonardi / Banca: Stanisçuaski Guterres / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Telma Mary Kaneko / Banca: Leila Aparecida Chiavacci / Doutor

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Ana Paula Tasquetto da Silva.pdf: 1732740 bytes, checksum: 47edd54cda91b699dcfb391a5d278658 (MD5) Ana Paula Tasquetto da Silva.pdf.jpg: 3416 bytes, checksum: 36b42ef9fce8470da16904c695c43fe1 (MD5) Previous issue date: 2012-03-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aging is a natural occurring process in our body, resulting in a series of structural changes in our skin, such as transepidermal water loss, senile xerosis (dry skin) and hyperpigmentation disorders. Vitamin C is a powerful antioxidant and have ability to inhibit melanogenesis, and skin bleaching agent. However, his low stability is a serious limitation. Thus, ascorbyl palmitate (AP), lipid-soluble derivative, appears as a promising agent for incorporation in topical formulations. Thus, this study aim to develop, characterize and determine the physical-chemical stability of topical semisolid formulations containing nanocapsules of the ascorbyl palmitate, with the oily nucleus of the Rosehip oil. Associated to this, the safety of the active in vivo by non-invasive biophysical analysis was verified. Suspensions containing the PA associated to the nanocapsules (NCPA) and suspensions without the active (NCBC) were developed and characterized, and stability was evaluated for 90 days (25 °C ± 2 °C and 3 °C ± 2 °C). Inicially, the NCPA suspensions presented content equal to 82,95 %, pH 4,21, average particle diameter of 269,7 nm, polydispersity index of around 0,2 and zeta potential of -47,03 mV. After, the active in the free form (GPA) and associated to the nanocapsules (GNCPA) were incorporated in semi-solid basis of Carbopol® gel and stored, for 90 days, for stability studies, by determination of the pH, active content quantification, organoleptic characteristics determination, viscosity determination and spreadability. All formulations presented slightly acidic pH and a homogeneous aspect. We obtained a higher concentration of active GNCPA, suggesting that nanocapsules may exert a greater protection of the PA. However, in both formulations in different temperatures, after 90 days analysis a decrease was observed and the GNCPA remain with a higher concentration of PA. Regarding to the rheological behavior, independently of drug dispersion, all formulations showed a non-Newtonian character and pseudoplastic behavior together with an adequate spreadability during the analysis period. For the bioengineering skin measurements, twenty healthy volunteers were selected, and during 90 days, every week, were performed biometric skin tests including stratum corneum water content (hydration), pH, transepidermal water loss, color and erythema. According to the results observed in relation to the determination of skin hydration, there was pronounced reduction (24 %) of the values of the stratum corneum water content in the areas treated with GPA, while GNCPA obtained an increased in hydration (21 %). The skin pH values not change significant during the experiment for both formulations, and this values are into the satisfactory limits for the use in topical products. We observed an increase in transepidermal water loss for both gels, however, to the GPA, this increased was slightly larger (39 %). Thus, it was evident that the nanocapsules have a tendency to avoid the transepidermal water loss, favoring the skin hydration degree and maintain the integrity of the stratum corneum. In the results obtained for melanin content, there was a decrease in this parameter during the experiment for both formulations, being more pronounced in GNCPA (23 %). The GNCPA and GPA did not cause erythema, configuring security in the use of these formulations. / O envelhecimento é um processo que ocorre naturalmente em nosso organismo, resultando em uma série de mudanças estruturais em nossa pele, como a perda transepidérmica de água, aparecimento de xerose senil (pele seca) e distúrbios de hiperpigmentação. A vitamina C é um poderoso antioxidante e possui comprovada capacidade de inibição da melanogênese, torna-se um agente clareador cutâneo. Entretanto, sua baixa estabilidade é uma séria limitação. Assim, o palmitato de ascorbila (PA), seu derivado lipossolúvel, surge como um promissor agente para incorporação em formulações tópicas. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e determinar a estabilidade físico-química de formulações tópicas semissólidas contendo nanocápsulas de palmitato de ascorbila, tendo como núcleo oleoso o óleo de rosa mosqueta. Associado a isso, foi verificada a segurança do ativo in vivo, através de ensaios de biometria cutânea. Foram desenvolvidas e caracterizadas suspensões contendo PA associado à nanocápsulas (NCPA) e uma suspensão de nanocápsulas sem o ativo (NCBC), sendo que a estabilidade foi avaliada durante 90 dias (25 ºC ± 2 ºC e 3 ºC ± 2 ºC). As suspensões de NCPA apresentaram inicialmente um teor de 82,95 %, pH 4,21, diâmetro de partícula de 269,7 nm, índice de polidispersão em torno de 0,2 e potencial zeta de -47,03 mV. Posteriormente, foram incorporados em bases semissólidas de gel de Carbopol® o ativo na forma livre (GPA) e associado à nanocápsulas (GNCPA), sendo armazenados, por 90 dias, para estudo de estabilidade, através das determinações de pH, quantificação do teor de ativo, determinação das características organolépticas, determinação da viscosidade e espalhabilidade. Todas as formulações apresentaram inicialmente um pH levemente ácido e um aspecto homogêneo. Obteve-se uma maior concentração de ativo no GNCPA, sugerindo que as nanocápsulas possam estar exercendo uma maior proteção do PA. Contudo, foi possível observar uma diminuição em ambas as formulações, nas diferentes temperaturas, após 90 dias de análise; sendo que, ao final deste período, o GNCPA permaneceu com uma maior concentração de PA. Quanto aos aspectos reológicos, independente da forma de dispersão do fármaco, as formulações apresentaram um caráter não-newtoniano e comportamento pseudoplástico, e uma espalhabilidade adequada durante todo o período de análise. Para o ensaio de biometria cutânea, foram selecionados vinte voluntários saudáveis, sendo que a cada semana foram realizados testes de avaliação do conteúdo aquoso do estrato córneo (hidratação), pH, perda transepidérmica de água, melanina e eritema, durante 90 dias. De acordo com os resultados observados com relação à determinação da hidratação cutânea, observou-se uma redução mais pronunciada (24 %) dos valores do conteúdo aquoso do estrato córneo nas regiões tratadas com GPA, enquanto que com o GNCPA obteve-se um aumento na hidratação (21 %). Os valores de pH cutâneo não sofreram alterações significativas durante o experimento para ambas formulações, sendo que estes valores encontram-se dentro dos limites considerados satisfatórios para o uso de produtos tópicos. Foi observado um aumento na perda transepidérmica de água para ambos os géis, entretanto, para o GPA este aumento foi um pouco maior (39 %). Desta forma, evidenciou-se que as nanocápsulas apresentam uma tendência para evitar a perda transepidérmica de água, o que favorece o grau de hidratação cutânea e mantêm a integridade do estrato córneo. Nos resultados obtidos para conteúdo de melanina, verificou-se uma redução deste parâmetro no decorrer do experimento para ambas as formulações, sendo mais pronunciado no GNCPA (23 %). Os GNCPA e GPA não causaram eritema, configurando a segurança na utilização destes produtos.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Carla Fontoura Ferreira.pdf: 1524660 bytes, checksum: f2627eb8bff1b2efacf130f3ea886cab (MD5) Carla Fontoura Ferreira.pdf.txt: 136087 bytes, checksum: 01a470496da5934a73509102fa059e17 (MD5) Carla Fontoura Ferreira.pdf.jpg: 3323 bytes, checksum: a5e51d047568f2121c8ad80ee83f6f23 (MD5) Previous issue date: 2013-04-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Depression and anxiety are psychiatric disorders and present psychological, behavioral and physiological symptoms. As for anxiety and depression treatment, the major problem found is the deficiency on drugs that associate the high effectiveness, high bioavailability and low side effects. Therefore, the L-ascorbil-6-palmitato (PA) associated with nanoparticles could be an inovative alternative for these disorders treatment. In this context, the objective of this study was to evaluate the antidepressant- and anxiolytic-like effects of AP-loaded nanocapsules in different depression and anxiety models on mice. Moreover, we verified the involvement of Na+, K+ -ATPase activity in brain. Animals were divided in 3 groups; group I: control; group II: nano and group III: free. Animals were pretreated intragastrically (i.g) by 24, 48, 72 or 96 hours before of behavioral tests. Group I were pretreated with suspensions containing blank nanocapsules, group II received AP-loaded nanocapsules (30 mg/kg) and group III received free PA (30 mg/kg). In order to evaluate animals locomotor and exploratory activity it was taken the open field test. The forced swimming and tail suspension tests ware used in order to evaluate the antidepressive-type effect, while the elevated plus maze and light/dark box tests were used in order to verify the anxiolytic-type effect. After behavioral tests, animals were killed and brains were removed to determinate Na+, K+ -ATPase activity. Results showed that pretreatment of 24 from 96 hours with AP-loaded nanocapsules reduced the immobility time in forced swim, while free PA in reduced the immobility time with 24 and 48 hours of pretreatment. In the tail suspension tests, AP-loaded nanocapsules and free form reduced the immobility time of 24 to 96 hours of pretreatment. In the elevated plus maze, there was an increase of the number of jump in the pretreated of 48 hours with AP-loaded nanocapsules. No change was observed in the other parameters and groups in this test. In the light/dark box test, all time of pretreatment with AP-loaded nanocapsules increased the latency time for the first entry in the dark compartment and time that the animal remained in the light compartment. Furthermore, no change was found in the Na+, K+-ATPase activity in brains of mice. In the open field test there was no change in animals locomotor and exploratory activity in any of the times tested and groups analyzed. Therefore, we concluded that the AP-loaded nanocapsules showed anxiolytic-like effect. Moreover, AP-loaded nanocapsules and free form presented antidepressant-like effect, but the effect of nanocapsules was more prolonged. Na+, K+-ATPase activity was not involved in the pharmacological effects. / A depressão e a ansiedade são transtornos psiquiátricos que apresentam sintomas psicológicos, comportamentais e fisiológicos. Quanto ao tratamento da ansiedade e da depressão, o maior problema encontrado é a deficiência de fármacos que associem alta eficácia, alta biodisponibilidade e baixos efeitos colaterais. Assim, o L-ascorbil-6-palmitato (PA) associado às nanopartículas poderia ser uma alternativa inovadora para o tratamento desses transtornos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito tipoantidepressivo e ansiolítico de nanocápsulas contendo PA, em diferentes modelos de depressão e ansiedade em camundongos. Além disso, foi verificado o envolvimento da atividade da enzima Na+, K+-ATPase cerebral no efeito farmacológico. Os animais foram divididos em 3 grupos: grupo I: controle; grupo II: nano e grupo III: livre. Os pré-tratamentos dos animais foram 24, 48, 72 ou 96 h antes da realização dos testes comportamentais, pela via intragástrica (i.g). Os animais do grupo I foram pré-tratados com suspensões contendo nanocápsulas brancas, do grupo II receberam PA nanoencapsulado (30 mg/kg) e do grupo III foram pré-tratados com o PA na forma livre (30 mg/kg). Para avaliar a atividade locomotora e exploratória dos animais foi realizado a teste do campo aberto. Os testes do nado forçado e da suspensão da cauda foram utilizados para avaliar o efeito tipo-antidepressivo, enquanto os testes do labirinto em cruz elevada e do claro/escuro foram utilizados para verificar o efeito tipo-ansiolítico. No final dos testes comportamentais, os animais foram sacrificados e os cérebros removidos para verificar a atividade da enzima Na+, K+-ATPase. Os resultados desse estudo demonstraram uma redução do tempo de imobilidade no teste do nado forçado nos animais pré-tratados com nanocápsulas de PA nos tempos de 24 a 96 h, enquanto o PA na forma livre reduziu o tempo de imobilidade apenas nos pré-tratamentos de 24 e 48 h. Enquanto que no teste da suspensão da cauda, tanto o fármaco nanoencapsulado quanto na forma livre apresentaram uma redução no tempo de imobilidade de 24 a 96 h. No teste da cruz elevada, houve um aumento no número de espiadas nos animais pré-tratados 48 h com as nanocápsulas de PA. Os outros parâmetros e os demais grupos analisados neste teste não apresentaram alterações. No teste do claro-escuro, as nanocápsulas de PA aumentaram o tempo de latência para a primeira entrada do animal no compartimento escuro em todos os tempos de pré-tratamentos e também aumentaram o tempo que o animal permaneceu no compartimento claro. No teste do campo aberto não houve modificação na atividade locomotora e exploratória dos animais, em nenhum dos tempos testados e grupos analisados.Além disso, nenhuma diferença significativa foi encontrada na atividade Na+, K+-ATPase em nenhum dos tempos de pré-tratamento no cérebro dos camundongos. Com isso, pode-se concluir que as nanocápsulas contendo PA apresentaram efeito tipo-ansiolítico, enquanto o PA na forma livre não apresentou esse efeito. Além disso, tanto o PA na forma livre quanto o encapsulado apresentaram efeito tipo-antidepressivo, porém o efeito das nanocápsulas de PA foi mais prolongado. Também, descartou-se o envolvimento da Na+, K+-ATPase nos efeitos farmacológicos obtidos.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T18:25:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RaquelMarchettiSparemberger.pdf: 3279182 bytes, checksum: 40d4f846480eed6bf16844f3bd8e0216 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T18:25:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RaquelMarchettiSparemberger.pdf: 3279182 bytes, checksum: 40d4f846480eed6bf16844f3bd8e0216 (MD5) Previous issue date: 2013-09-26 / industry for the topical treatment of acne, and also skin aging. Several scientific studies confirm the effectiveness of PR in alleviating the signs of skin aging such as softening of wrinkles and improving the appearance of sagging skin. However, retinoids have serious adverse symptoms for topical use such as reduced skin hydration, prurience and local irritation. Apart from these adverse effects PR is a vitamin chemical unstable and may undergo changes in its chemical structure when exposed to ultraviolet radiation (UV) and heat. With the aim of reducing the adverse effects of topical application of Vitamin A and at the same time protecting it against chemical degradation. Nanoencapsulation is a possibility to stabilize and increase the efficiency of PR. The polymeric nanoparticles (NP) are vesicles formed by a nanometric biodegradable polymeric wall and anoily core, they allow the reduction of the dosing and also allow vitamin to act on lower layers of the skin and not just the surface as in ordinary formulations, this is because they act as drug delivery vehicles. The objective of this research was the development of NP quality and high stability they can overcome the superficial layers of the skin and reach the deeper skin tissues so that stimulates the synthesis of structural proteins, which during the process of skin aging present physiologically less activity and are responsible for the signs of skin aging . However, for the NP synthesized with these characteristics was conducted an experimental testing various formulations varying the amounts of surfactant, polymer and oil. After choosing the most stable formulation of smaller diameter and smaller size polydispersity of the NP containing the PR results were summarized and presented in diameter, polydispersity, and zeta potential similar to previously synthesized NP without the PR. The morphology of the NP containing the PR were evaluated by scanning electron microscopy visualizing spherical nanoparticles with size distribution close to the values obtained in measurements of light scattering . The level of encapsulation was of the order of 97.5% of the total PR used in the preparation of the NP. Moreover, these NP showed physical and chemical stability for a period of 120 days of storage after synthesis, and the testing of the NP permeation managed to overcome the layers of the skin and releasing the PR in the deep layers of the skin. Thus, it is concluded that the NP produced in this work have properties that allow for the possibility of use for the treatment of aging skin , but would require some toxicity tests to ensure product safety. / O palmitato de retinila (PR) é uma das formas químicas da vitamina A utilizado na indústria de cosméticos para o tratamento tópico da acne e também do envelhecimento cutâneo. Vários estudos científicos confirmam a eficácia do PR na atenuação dos sinais do envelhecimento cutâneo, como a amenização das rugas e a melhoria do aspecto de flacidez da pele. Contudo, os retinóides apresentam sintomas adversos para a utilização tópica como a diminuição da hidratação cutânea, o prurido e a irritação local. Além destes efeitos adversos o PR é uma substância química instável e pode sofrer alterações na sua estrutura química quando exposta a radiação ultra violeta (UV) e ao calor. Com a finalidade de diminuir os efeitos adversos da aplicação tópica da vitamina A e ao mesmo tempo protegê-la da degradação química a nanoencapsulação é uma possibilidade de estabilizar e aumentar a eficácia do PR. As nanocápsulas poliméricas (NP) são vesículas nanométricas formadas por uma parede polimérica biodegradável e um núcleo oleoso e elas possibilitam a diminuição da dosagem e também permitem que a vitamina atue nas camadas mais inferiores da pele e não somente na superfície como ocorre em formulações comuns, isto porque elas atuam como veículos de entrega de fármacos. O objetivo desta pesquisa foi o desenvolvimento de NP de qualidade e de alta estabilidade que consigam ultrapassar as camadas superficiais da pele e atingir os tecidos mais profundos cutâneos para que assim estimule a síntese de proteínas estruturais, as quais durante o processo de envelhecimento cutâneo apresentam-se fisiologicamente menos atuantes e são responsáveis pelos sinais do envelhecimento cutâneo. Contudo, para que as NP sintetizadas tenham estas características foi realizado um planejamento experimental testando diversas formulações variando as quantidades de surfactantes, de óleo e de polímero. Após a escolha da formulação mais estável, de menor diâmetro e menor polidispersão de tamanho, as NP contendo o PR foram sintetizadas e apresentaram resultados de diâmetro, polidispersividade e potencial zeta similares as NP sem o PR sintetizadas previamente. A morfologia das NP contendo o PR foram avaliadas em microscopia eletrônica de varredura visualizando nanopartículas de formato esférico com distribuição de tamanhos próximos aos valores obtidos nas medidas de espalhamento de luz. O teor de encapsulação do PR foi da ordem de 97,5% do total de PR utilizado na preparação das NP. Além disso, estas NP apresentaram estabilidade físico-química por um período de até 120 dias após a síntese e quanto aos testes de permeação cutânea as NP conseguiram ultrapassar as camadas da pele e liberando o PR nas camadas profundas da pele. Desta forma, conclui-se que as NP produzidas neste trabalho apresentam propriedades que viabilizam a possibilidade de utilização para o tratamento do envelhecimento cutâneo, contudo seriam necessários alguns testes de toxicidade para garantir a segurança do produto.

The prevalence of type 2 diabetes is increasing dramatically worldwide. Type 2 diabetes is a major health and socio-economic burden. Genetic predisposition and the obesity epidemic, due to sedentary life style and high caloric food intake, are associated with development of type 2 diabetes. Circulating free fatty acids (FFAs), in particular saturated FFAs, are linked with insulin resistance and β cell dysfunction. Following this background we performed RNA sequencing of human pancreatic islets treated with the saturated FFA palmitate to acquire a global image of the islet response to this insult. We identified several stress pathways induced by palmitate with a major induction of the endoplasmic reticulum (ER) stress response. The ER stress response, in particular the PKR-like ER kinase (PERK) branch, has been shown to be induced by saturated FFA. It leads to increased β cell apoptosis both in fluorescence activated cell sorter (FACS) purified rat β cells and human islets. We further clarified the role of this pathway by studying the involvement of the constitutive repressor of eIF2α phosphorylation (CReP) in a monogenic form of diabetes. CReP is a repressor of eukaryotic translation initiation factor 2α (eIF2α) phosphorylation. A direct target of PERK, eIF2α is involved in translational attenuation and induction of apoptosis. We have shown that CReP loss-of-function leads to a new syndrome of young onset diabetes, intellectual disability and microcephaly. The identified R658C mutation abrogated CReP activity leading to increased eIF2α phosphorylation and β cell apoptosis. To further demonstrate the importance of eIF2α dysregulation in β cell demise, we used guanabenz, a chemical inhibitor of growth arrest DNA damage inducible 34 (GADD34). GADD34 is an ER stress-induced repressor of eIF2α phosphorylation. Guanabenz potentiated FFA-mediated ER stress and apoptosis in clonal and primary rat β cells and in human islets through the activation of CCAAT/enhancer binding protein homologous protein (CHOP), downstream of eIF2α. Guanabenz administration in mice impaired glucose tolerance and led to β cell dysfunction. In ex vivo experiments guanabenz also induced β cell dysfunction in mouse and rat islets.In conclusion our data demonstrate that the dysregulation of signaling in the PERK/eIF2α pathway is crucial for β cell demise. Together with previously reported monogenic diabetes caused by loss-of-function mutations in PERK in man and the eIF2αS51A mutation in mice, our findings suggest that a narrow regulation of PERK/eIF2α signaling is central for proper β cell function and survival. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished