Objective: To review evidence on the efficacy of HPV vaccines in the prevention of non-cancer lesions (anogenital warts [AGW], recurrent laryngeal papillomatosis and oral papillomatosis). Materials and methods: We conducted a systematic review of randomized trials. We performed random effect models and effects were reported as relative risks (RR) and their confidence intervals (95%CI) following both intention to treat (ITT) and per protocol (PP) analyses. Results: We included six studies (n=27 078). One study was rated as high risk of bias. One study could not be included in the meta-analysis because it provided combined results. We found that quadrivalent vaccine reduced the risk of AGW by 62% (RR: 0.38, 95%CI:0.32-0.45, I2:0%) in the ITT analysis and by 95% (RR: 0.05, 95%CI:0.01-0.25, I2:66%) in the PP analysis. Subgroup analyses of studies in women or with low-risk of bias provided similar results. Conclusion: HPV quadrivalent vaccine is efficacious in preventing AGW in men and women. / HPV quadrivalent vaccine is efficacious in preventing AGW in men and women. / Revisión por pares

For more than a decade, community groups, scientific organizations and government agencies have collaborated to repopulate the endangered western barred bandicoot (Perameles bougainville). While initially successful, the unexpected discovery of a papillomatosis and carcinomatosis syndrome in captive and wild populations of P. bougainville exposed a dearth of knowledge regarding their diseases. This dissertation addresses this issue through study of the clinical pathology, immunology, parasitology, and virology of P. bougainville. To facilitate the detection and understanding of diseases in P. bougainville, guidelines for interpreting haematology and clinical chemistry results were developed, including calculated species-specific reference intervals for plasma aspartate transaminase activity (20–283 U/L), haemoglobin (122-165 g/L), haematocrit (0.36-0.49 L/L), total leukocytes (2.9-14.9 x10^9/L), monocytes (0-0.6 x10^9/L), eosinophils (0-0.9 x10^9/L) and total protein (47-63 g/L) estimated by refractometry. P. bougainville immunoglobulin was also fractionated from plasma and inoculated into sheep to derive antiserum for serological screening assays. Arthropods, helminths and protozoa parasitic on P. bougainville were catalogued and Eimeria kanyana n. sp. was formally described. The pathogenic and zoonotic potential of bacteria detected in ticks parasitic on P. bougainville was also considered. The association between bandicoot papillomatosis carcinomatosis virus type 1 (BPCV1) and the western barred bandicoot papillomatosis and carcinomatosis syndrome was investigated using PCR, in situ hybridization and virus isolation. Optimized in situ hybridization techniques demonstrated BPCV1 DNA within keratinocyte and sebocyte nuclei, and BPCV1 mRNA within the cytoplasm. BPCV1 virions were isolated by ultracentrifugation and visualized with negative stain transmission electron microscopy revealing icosahedral, non-enveloped viral capsids ~47 nm in diameter, comparable to viruses classified within Papillomaviridae and Polyomaviridae. A novel virus, tentatively named bandicoot papillomatosis carcinomatosis virus type 2 (BPCV2) was discovered in papillomatous lesions from a southern brown bandicoot (Isoodon obesulus). It had a circular double-stranded DNA genome of 7277 bp, and encoded two papillomavirus-like structural proteins, L1 and L2, and two polyomavirus-like putative transforming proteins, large T antigen and small t antigen. DNA and RNA in situ hybridization confirmed the presence of BPCV2 nucleic acids within lesion biopsies. The discovery of the bandicoot papillomatosis carcinomatosis viruses has provoked reassessment of the established virus taxonomy paradigm, theories of virus-host co-speciation and bandicoot population management strategies.

Orientador: Regina Helena Garcia Martins / Resumo: Mercuri G. Incidência e Prevalência da Papilomatose Laríngea no Estado de São Paulo [dissertação]. Botucatu, SP: Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista; 2019. Introdução: A papilomatose respiratória recorrente ou papilomatose laríngea recorrente é a neoplasia benigna da laringe causada pelo Papiloma Vírus Humano, caracterizando-se pela presença de lesões proliferativas exofíticas recorrentes. A ausência de tratamento curativo, os custos relacionados ao diagnóstico, prevenção e tratamento das doenças causadas pelo HPV apresentam importante impacto econômico em todo mundo. No entanto, a falta de dados epidemiológicos nacionais, quanto à incidência e prevalência da papilomatose laríngea no Brasil não nos permite analisar o comportamento da doença em nossa população, bem como os benefícios da vacinação. Objetivo: Estimar a incidência e a prevalência da Papilomatose Laríngea no Estado de São Paulo. Métodos: Estudo populacional que objetivou levantar todos os casos diagnosticados de Papilomatose Laríngea do Estado de São Paulo, considerando os principais centros de diagnóstico desta enfermidade. Foram mapeados e selecionados os principais serviços de residência e especialização em Otorrinolaringologia do Estado de São Paulo, a partir dos dados fornecidos pela Associação Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Cérvico-Facial (ABORL-CCF). Através do preenchimento de um questionário obtivemos os dados para estimar a prevalência e a incidência mínimas p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mercuri G. Incidence and Prevalence of Laryngeal Papillomatosis in São Paulo State [thesis]. Botucatu, SP: Faculty of Medicine of Botucatu, Universidade Estadual Paulista; 2019. Introduction: Recurrent respiratory papillomatosis or recurrent laryngeal papillomatosis is a benign laryngeal neoplasm caused by Human Papilloma Virus, characterized by the presence of recurrent exophytic proliferative lesions. Without curative treatment, costs related to the diagnosis, prevention, and treatment of HPV-related diseases have a significant economic impact worldwide. However, the lack of national epidemiological data on the incidence and prevalence of laryngeal papillomatosis in Brazil does not allow us to analyze the behavior of the disease in our population, as well as the benefits of vaccination. Objective: To estimate the incidence and prevalence of Laryngeal Papillomatosis in the State of São Paulo. Methods: A population study was conducted aiming to raise all the diagnosed cases of Laryngeal Papillomatosis of the State of São Paulo, considering the main centers of diagnosis of this disease. The main services of residence and specialization in Otorhinolaryngology of the State of São Paulo were mapped and selected, based on the data provided by the Brazilian Association of Otorhinolaryngology and Cervical-Facial Surgery (ABORL-CCF). By completing a questionnaire we obtained the data to estimate the minimum prevalence and incidence for the State in 2017. Results: The questionnaire wa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.

Submitted by Vivian Narana Ribeiro El Achkar null (vivian.narana@gmail.com) on 2018-03-13T17:45:45Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Vivian Narana Ribeiro El Achkar 2018.pdf: 2729366 bytes, checksum: 456859c4eee05d53290891b79a9d2732 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-03-20T20:39:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elachkar_vnr_dr_sjc.pdf: 2729366 bytes, checksum: 456859c4eee05d53290891b79a9d2732 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-20T20:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elachkar_vnr_dr_sjc.pdf: 2729366 bytes, checksum: 456859c4eee05d53290891b79a9d2732 (MD5) Previous issue date: 2018-01-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A papilomatose laríngea (PL) é uma doença rara e grave, dividida em dois grupos: juvenil (PLJ) e adulta (PLA), ambas causadas pelo papilomavírus humano (HPV). Seu curso pode ser agressivo, com inúmeras recidivas, risco de malignização, disseminação pulmonar e obstrução das vias aéreas. Para identificar os casos mais agressivos e nortear os tratamentos foram desenvolvidas escalas laringoscópicas, dentre elas; a escala desenvolvida por Derkay et al. (1998). O objetivo deste projeto foi caracterizar a PL e correlacionar suas características clínico-patológicas com com a escala laringoscópica de Derkay. Os dados e biópsias de 36 pacientes com PLJ e 56 com PLA foram coletados e analisados por meio da microscopia de luz. Os pacientes foram separados em grupos de acordo com os índíces de Derkay: ≥20 para os mais agressivos e <20 para os casos menos agressivos. Foram realizadas reações de imuno-histoquímicas anti- Fator XIIIa, CD3, CD4, CD8, CD15, CD20, CD68, FoxP3 e MUM-1. As células inflamatórias foram quantificadas. Todas as características clínico-patológicas e os resultados da reação imuno-histoquímica encontrados foram comparados entre os grupos propostos através do teste estatístico de Qui-Quadradro e correlacionados através do teste de correlação de Spearman. O nível de significância considerado foi de 5%. Ao comprar a severidade entre os grupos PLJ e PLA, o grupo PLJ foi considerado mais agressivo (P=0,02). Os pacientes entre as amostras com score ≥20 apresentaram maior incidência de traqueostomia e dificuldade respiratória grave. As displasias de alto grau foram associadas à presença de células FatorXIII+ e CD68+ (P<0,05) e tanto para PLJ quanto para PLA não houve associação destas displasias com a severidade (P=0,55 e P=0,87, respectivamente). A média do índice de Derkay para as amostras com mitoses acima da camada basal e atípicas foi 10,65 (± 5,93), maior do que a média das amostras que não apresentavam esta característica (8,02 ± 4,64), sendo estatisticamente significante (P=0,03). Amostras de PLA apresentaram maior quantidade de células CD3+. CD8+ e MUM1+ (P<0,05). A presença de CD15+ é diretamente proporcional ao índice de Derkay (P<0,05), enquanto MUM-1 é inversamente proporcional (P=0,01). Baseados nestes resultados, conclui-se que a PL é mais severa no pacientes jovens; mitoses atípicas e nas camadas mais superiores do epitélio foram mais frequentes na PLJ e estas foram correlacionadas com a maior severidade. As células inflamatórias também foram relacionadas a severidade e diferiram entre os grupos PLJ e PLA. / Laryngeal papillomatosis (LP) is a rare and serious disease, divided into two groups: juvenile (JLP) and adult (ALP), both caused by the human papillomavirus (HPV). Its course can be aggressive, with numerous relapses, risk of malignancy, pulmonary dissemination and airway obstruction. To identify the most aggressive cases and guide the treatments, laryngoscopic scales were developed, among them; the scale developed by Derkay et al. (1998). The objective of this project was to characterize LP and to correlate its clinical-pathological characteristics with Derkay's laryngoscopic scale. The data and biopsies of 36 patients with JLP and 56 patients with ALP were collected and analyzed by light microscopy. The patients were separated into groups according to the Derkay indices: ≥20 for the most aggressive and <20 for the less aggressive cases. Anti-Factor XIIIa, CD3, CD4, CD8, CD15, CD20, CD68, FoxP3 and MUM-1 immunohistochemical reactions were performed and the inflammatory cells were quantified. All the clinical-pathological characteristics and the results of the immunohistochemical reaction were compared between the groups proposed using the Chi-Square test and correlated through the Spearman correlation test. The significance level considered was 5%. When comparing aggressivity between the JLP and ALP groups, the JLP group was considered more aggressive (P = 0.02). Patients among the samples with score ≥20 had a higher incidence of tracheostomy and severe respiratory distress. High-grade dysplasias were associated with the presence of Factor XIII+ and CD68+ cells (P <0.05), and for both JLP and ALP there was no association of these dysplasias with aggressivity (P = 0.55 and P = 0.87, respectively). The mean of the Derkay index for the samples with mitoses above the basal and atypical layer was 10.65 (± 5.93), higher than the mean of the samples that did not show this characteristic (8.02 ± 4.64), (P = 0.03) being statistically significant. The ALP samples showed higher quantities of CD3+ cells, CD8+ and MUM1+ (P <0.05). The presence of CD15+ is directly proportional to the Derkay index (P <0.05), while MUM-1 is inversely proportional (P = 0.01). Based on these results, it is concluded that LP is more aggressive in young patients; atypical mitoses and in the uppermost layers of the epithelium were more frequent in JLP and these were correlated with aggressivity. Inflammatory cells were also related to aggressiveness and differed between the groups PLJ e PLA. / FAPESP: 2016/24019-0

Submitted by MARIANA HERMAN null (marianaherman@hotmail.com) on 2016-06-17T05:48:51Z No. of bitstreams: 1 Boneco Dissertação Mestrado versão impressão Mariana Herman.pdf: 876889 bytes, checksum: 79d967c24bf0e8b487ccc7174438f22f (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-06-21T20:43:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 herman_m_me_bot.pdf: 876889 bytes, checksum: 79d967c24bf0e8b487ccc7174438f22f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T20:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 herman_m_me_bot.pdf: 876889 bytes, checksum: 79d967c24bf0e8b487ccc7174438f22f (MD5) Previous issue date: 2016-04-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As papilomatoses ocupam uma posição de destaque na medicina humana e veterinária uma vez que são enfermidades virais dermatológicas com potencial para desenvolver malignidade tumoral. Nos equinos os papilomas estão associados às seguintes enfermidades: papilomatose clássica, associada ao EcPV1; carcinoma de células escamosas associado ao EcPV2; Massas tumorais em mucosas genitais (EcPV2 e EcPV7); placa aural, associado ao EcPV3, 4, 5 e 6; sarcóide equino, associado ao papilomavírus bovino 1 e 2 (BPV1 e 2). Dessas, a que está em estudo nesse trabalho é a placa aural, caracterizada por lesões puntiformes de poucos milímetros, despigmentadas e queratinizadas na face interior do pavilhão auricular, podendo evoluir e coalescer em lesões maiores e por vezes se estendendo por todo pavilhão auricular. Visando obter um teste de diagnóstico específico, sensível e rápido para identificação destes vírus, foi padronizada a técnica de PCR em tempo real (qPCR) para o EcPV3, 4, 5 e 6. E com a finalidade de avaliar a incidência dessa enfermidade no rebanho nas cinco regiões do país e estabelecer a prevalência de cada tipo viral a partir da técnica padronizada, foram coletadas 104 amostras das regiões Nordeste, Norte, Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Como resultado obteve-se a padronização da técnica. Na análise das amostras a prevalência de pelo menos um tipo viral na lesão foi 90,39%, com as seguintes prevalências por tipo: EcPV3 36,54%, EcPV4 81,73%, EcPV5 0,96% e EcPV6 10,58%, apresentando variação entre as diferentes regiões. O presente estudo traz uma evolução no que se refere às pesquisas relacionadas a Placa Aural e também levanta novos questionamentos para estudos futuros. / Papillomatosis occupy a prominent position both in human and veterinary medicine, since they are viral skin diseases with potential to develop malignancy. In horses papillomas are associated with the following diseases: classical papillomatosis associated with EcPV1; squamous cell carcinoma associated with EcPV2; tumors in mucous membranes on the genital area (EcPV2 and EcPV7); aural plaque associated with EcPV3, 4, 5 and 6; equine sarcoid, associated with bovine papillomavirus (BPV1 and 2). Of all equine papillomatosis, aural plaque is the one analyzed in this work, which is characterized by small papules, with a few millimeters, hypochromic and keratinized on internal surface of the pinnae and can evolve and coalesce into larger lesions. To obtain a specific diagnostic test, also sensitive and quick to identify these viruses, a Real Time PCR was standardized for EcPV3, 4, 5 and 6. In order to evaluate the incidence of this disease in equine herds distributed in the five regions of Brazil and establish the prevalence of each viral type using the standardized technique, 109 samples were collected in the Northeast, North, South, Southeast and Midwest. The main result was the technique standardization of the technique. Applying the qPCR technique in the samples resulted in 90,39% of at least on viral type prevalence, the prevalence for each type was: EcPV3 36,54%, EcPV4 81,73%, EcPV5 0,96% e EcPV6 10,58%, with variation between different regions. This study represents an evolution in the area related to aural plaque and equine papillomatosis and raises new questions for future research.

Orientador: José Paes de Oliveira Filho / Resumo: As papilomatoses ocupam uma posição de destaque na medicina humana e veterinária uma vez que são enfermidades virais dermatológicas com potencial para desenvolver malignidade tumoral. Nos equinos os papilomas estão associados às seguintes enfermidades: papilomatose clássica, associada ao EcPV1; carcinoma de células escamosas associado ao EcPV2; Massas tumorais em mucosas genitais (EcPV2 e EcPV7); placa aural, associado ao EcPV3, 4, 5 e 6; sarcóide equino, associado ao papilomavírus bovino 1 e 2 (BPV1 e 2). Dessas, a que está em estudo nesse trabalho é a placa aural, caracterizada por lesões puntiformes de poucos milímetros, despigmentadas e queratinizadas na face interior do pavilhão auricular, podendo evoluir e coalescer em lesões maiores e por vezes se estendendo por todo pavilhão auricular. Visando obter um teste de diagnóstico específico, sensível e rápido para identificação destes vírus, foi padronizada a técnica de PCR em tempo real (qPCR) para o EcPV3, 4, 5 e 6. E com a finalidade de avaliar a incidência dessa enfermidade no rebanho nas cinco regiões do país e estabelecer a prevalência de cada tipo viral a partir da técnica padronizada, foram coletadas 104 amostras das regiões Nordeste, Norte, Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Como resultado obteve-se a padronização da técnica. Na análise das amostras a prevalência de pelo menos um tipo viral na lesão foi 90,39%, com as seguintes prevalências por tipo: EcPV3 36,54%, EcPV4 81,73%, EcPV5 0,96% e EcPV6 10,58%, apresentando var... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Papillomatosis occupy a prominent position both in human and veterinary medicine, since they are viral skin diseases with potential to develop malignancy. In horses papillomas are associated with the following diseases: classical papillomatosis associated with EcPV1; squamous cell carcinoma associated with EcPV2; tumors in mucous membranes on the genital area (EcPV2 and EcPV7); aural plaque associated with EcPV3, 4, 5 and 6; equine sarcoid, associated with bovine papillomavirus (BPV1 and 2). Of all equine papillomatosis, aural plaque is the one analyzed in this work, which is characterized by small papules, with a few millimeters, hypochromic and keratinized on internal surface of the pinnae and can evolve and coalesce into larger lesions. To obtain a specific diagnostic test, also sensitive and quick to identify these viruses, a Real Time PCR was standardized for EcPV3, 4, 5 and 6. In order to evaluate the incidence of this disease in equine herds distributed in the five regions of Brazil and establish the prevalence of each viral type using the standardized technique, 109 samples were collected in the Northeast, North, South, Southeast and Midwest. The main result was the technique standardization of the technique. Applying the qPCR technique in the samples resulted in 90,39% of at least on viral type prevalence, the prevalence for each type was: EcPV3 36,54%, EcPV4 81,73%, EcPV5 0,96% e EcPV6 10,58%, with variation between different regions. This study represents an evolut... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T14:36:17Z No. of bitstreams: 1 Gustavo Alves do Nascimento.pdf: 1681544 bytes, checksum: acfb4a02e8653a17d32122ce9e6a41e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T14:36:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gustavo Alves do Nascimento.pdf: 1681544 bytes, checksum: acfb4a02e8653a17d32122ce9e6a41e5 (MD5) Previous issue date: 2011-11-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The bovine papillamatosis is a disease caused by papillomavirus that can generate damage for producers and farmers. In extreme cases it can affect all the herd. Diagnostic methods for bovine papillomavirus are essential to the sector because traditional methods of morphological observations are not very effective. The use of devices technological to recognize specific biological molecules may help treatment and prevention of bovine viral diseases. The biosensor incorporates a biological recognition element through electrochemical reactions that generate electrical signals that can be quantified and interpreted. Thus, this work aimed to develop molecular diagnostic methods for detection of bovine viral diseases through the construction of biosensors. One of the biosensor was constructed from pencil graphite type 4B and the other model biosensor was composed to three screen-printed electrodes. In both biosensors proposed, a DNA probe specific for the BPV was immobilized on the working electrode by electrodeposition or by adsorption and then a target sequence was hybridized with the probe immobilized. The hybridization redox signals were analyzed using differential pulse voltammetry. The results showed that biosensors could differentiate hybridization of non-hybridization. The hybridization occurrence showed decrease on the redox signal and represented the positive diagnostic for BPV infection. The two biosensors (pencil graphite and screen-printed electrodes) showed high sensitivity which detection limits were 3.84 nM and 4.35 nM, respectively. The biosensor also detected viral DNA extracted from bovine blood using screen-printed electrodes. The data obtained with the biosensors showed viability for the diagnosis of various bovine papillomavirus types, thereby allowing the development of a new portable detection system for viruses. / Enfermidades virais bovina, com destaque para o papilomatose bovina, trazem prejuízos para os produtores, podendo acometer todo o rebanho. Métodos de diagnósticos para o papilomavírus bovino (BPV) vêm sendo indispensáveis para o setor, pois os métodos tradicionais de observação morfológica são pouco eficazes. O uso de dispositivos capazes de reconhecerem moléculas biológicas específicas, como os biossensores, pode auxiliar no tratamento e prevenção de doenças virais bovina. O presente trabalho visou o desenvolvimento de métodos diagnósticos para detecção molecular de enfermidades bovinas de origem viral através da construção de biossensores. Um dos biossensores foi construído a partir de lápis grafite tipo 4B e outro modelo de biossensor foi constituído por eletrodos impressos. Nos dois biossensores propostos, um sonda de DNA específica para o BPV foi imobilizada no eletrodo de trabalho por eletrodeposição ou por adsorção e em seguida uma sequência alvo foi hibridizada com a sonda imobilizada. Os sinais redox da hibridização foram analisados pela técnica de voltametria de pulso diferencial. Os resultados mostraram que os biossensores puderam diferenciar a hibridização da não-hibridização. A ocorrência da hibridização apresentou diminuição no sinal redox e representou a positividade para a infecção do BPV. Os dois biossensores propostos (lápis grafite e eletrodos impressos) apresentaram elevada sensibilidade cujos limites de detecção foram 3,84 nM e 4,35 nM, respectivamente. O biossensor detectou também DNA viral extraído a partir de sangue bovino utilizando os eletrodos impressos. Os dados obtidos com os biossensores mostraram viabilidade para o diagnóstico de vários tipos de papilomavírus bovino, permitindo com isso o desenvolvimento de um novo sistema de detecção portátil para os vírus.