Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3670_1.pdf: 805127 bytes, checksum: 81880f8507596b7cf1777659e6161060 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus (PV) são vírus de DNA dupla fita que infectam o epitélio escamoso da pele e mucosa. O papilomavírus bovino (BPV) apresenta 10 diferentes tipos (BPV-1 a 10) e causam doenças em rebanhos de corte ou leiteiro, gerando grandes prejuízos econômicos aos criadores. A presença de BPV já foi detectada em tecidos reprodutivos e fluídos corporais, tais como sangue periférico, plasma sanguíneo, oócitos, ovário, útero, células do cúmulus, fluídos uterinos, sêmen e espermatozóide, placenta e líquido amniótico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença do BPV, através da técnica PCR, em sêmen de touros (Bos taurus) fresco e comercializado no Estado de Pernambuco. Para isso, foram utilizados primers de detecção geral para PV e específicos para os tipos de BPV-1 a 6 em amostras de sêmen fresco e sêmen comercial de touros da raça Gir Leiteiro. Foi detectada a presença de DNA de BPV em 100% das amostras de sêmen analisadas. O tipo viral mais freqüente foi o BPV-2 em 100% das amostras analisadas, seguido por BPV-3 em 48% das amostras e BPV- 4 presente em 6,9% das amostras avaliadas. Houve detecção simultânea de mais um tipo de BPV em 51% das amostars de sêmen analisadas. Estes resultados demonstram a importância do estudo e de um melhor detalhamento da relação entre BPV e sêmen. Dada a grande utilização, a inseminação artificial com sêmen contaminado com BPV pode ter importância similar à via sexual para a dispersão viral entre o rebanho

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T12:39:53Z No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T12:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES; CNPq; FACEPE / Os métodos de diagnósticos clínicos convencionais, para detecção de infecções virais, geralmente demandam tempo, alto custo, reagentes e equipamentos laboratoriais. Os biossensores voltamétricos são excelentes alternativas de detecção viral, pois apresentam grande praticidade, rapidez, portabilidade, baixo custo e alta sensibilidade. Eletrodos quimicamente modificados (EQM) por polímeros condutores (poliacetileno, polianilina, polipirrol e politiofeno), são bastante sensíveis, com grande potencial de aplicação, constituindo excelentes alternativas para melhorar o desempenho de um sensor. Tais polímeros são constituídos por ligações duplas conjugadas que são responsáveis pelo aumento de condutividade. O objetivo deste estudo foi o desenvolver métodos diagnósticos label-free para detecção dos vírus papilomavírus bovino (BPV) e dengue (DENV), fabricados em eletrodos quimicamente modificados por Polianilina (PANI) e polipirrol (PPy) respectivamente. Foi utilizado como método para detecção viral de BPV um sistema genossensor elaborado a partir de eletrodos baseados em membranas de alumina anódica (AAO), polimerizadas quimicamente por Polianilina. Sondas de oligonucleotídeos de alta seletividade, alinhadas por bioinformática, foram imobilizadas no suporte proposto e, em seguida, a hibridização dos ácidos nucléicos complementares e amostras biológicas (positivas) foram avaliadas. A caracterização do perfil eletroquímico foi realizada e o sinal de oxidação da guanina verificado por voltametria de pulso diferencial (VPD) e as superfícies das membranas (AAO) foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O sistema exibiu uma resposta rápida, sensível e seletiva com detecção limite de 51 nM. Outro sistema para detecção da proteína NS1 do DENV (imunossensor), foi desenvolvido em eletrodos de carbono impresso, eletropolimerizados por polipirrol/polipirrol-2-ácido carboxílico (PPy-PPa) e nanobastões de ouro (AuNR). Análises do bioconjugado foram realizadas por espectroscopia UV-Vis, microscopia eletrônica de transmissão (MET) e a caracterização eletroquímica por voltametria cíclica (VC). Os resultados demonstraram uma detecção limite de 0.0079 μgml−1. Os dois sistemas de detecção desenvolvidos demonstraram grande potencial eletroquímico no diagnóstico de infecções virais.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T13:30:04Z No. of bitstreams: 2 Tese ANDRE LUIZ S JESUS.pdf: 4654280 bytes, checksum: 03100a85f4b9571c1491b58a29a7f395 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T13:30:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese ANDRE LUIZ S JESUS.pdf: 4654280 bytes, checksum: 03100a85f4b9571c1491b58a29a7f395 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-05-03 / CAPES; CNPq / Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões em tecidos epiteliais em uma variedade de animais. Em bovinos, as doenças associadas ao papilomavírus bovino (BPV) geram perdas econômicas para os criadores. Até agora não existem vacinas ou tratamentos eficazes contra BPV. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver estratégias vacinais contra doenças associadas ao BPV. Para a produção de vacinas de subunidade, a levedura Pichia pastoris tem sido utilizada com sucesso para a produção de várias proteínas recombinantes. Os genes L1 de BPV1, 2 e 4 foram clonados em vetor de expressão, sob regulação do promotor induzível por metanol AOX1. Os recombinantes produziram proteína viral, mas em níveis baixos. Para aumentar a produção, foi utilizada a estratégia de otimização dos códons aliada ao uso de bioreator. Alem disso, o gene L1 de BPV1 foi clonado em vetor não comercial, sob controle do promotor constitutivo PGK1. A proteína L1 foi detectada por imunoblot no sobrenadante da cultura dos recombinantes. Como abordagem terapêutica, a imunização genética tem sido empregada com alguns produtos disponíveis no mercado. Os genes L2 e E5 de BPV1 foram clonados em vetor de expressão pCI-neo e as construções foram utilizadas para transfectar células HEK293. A expressão gênica foi detectada por RT-PCR e a produção das proteínas virais foi confirmada por Western blot. O presente estudo apresenta resultados promissores para o desenvolvimento de uma plataforma vacinal contra infecções pelo BPV.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-29T20:51:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Paula Ferreira Campos.pdf: 2091702 bytes, checksum: 206e041438756822063cb0f534cef65e (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-10T19:33:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Paula Ferreira Campos.pdf: 2091702 bytes, checksum: 206e041438756822063cb0f534cef65e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T19:33:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Paula Ferreira Campos.pdf: 2091702 bytes, checksum: 206e041438756822063cb0f534cef65e (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / CAPES / Os papilomavírus incluem vírus de DNA circular, geralmente envolvidos em lesões benignas do epitélio e mucosas. No entanto, alguns papilomavírus apresentam potencial oncogênico levando ao desenvolvimento de doenças como a papilomatose bovina. Atualmente, é sabido que a proteína L2 que compõe a estrutura do capsídeo, e alguns de seus epítopos são capazes de induzir a produção de anticorpos neutralizantes. Além disso, a oncoproteína E5 é responsável pelo crescimento e transformação celular, sendo o principal gene de transformação em bovinos. Entretanto, não existe disponível vacina comercial eficaz contra a infecção pelo BPV. Dessa forma, o presente trabalho consiste na construção de candidatos vacinais por meio de vacina de DNA contra a infecção por BPV. Para tal, tivemos como objetivo específico a construção de vetores vacinais a partir do plasmídeo pCI-neo e avaliamos in vitro a expressão dos respectivos antígenos em células de mamíferos. Os genes escolhidos para o estudo, L2 selvagem e o seu epítopo contido entre os aminoácidos 11 a 200, além do oncogene E5 selvagem, foram amplificados por PCR, clonados individualmente no vetor plasmidial pGEM-T easy e propagados em Escherichia coli (linhagem DH5α). Em seguida, os genes de trabalho foram previamente digeridos e subclonados no vetor pCI-neo para expressão em células de mamífero, incluindo o gene E5 sintético códon otimizado. Ambas as sequências foram avaliadas por digestão enzimática e por sequenciamento. A avaliação da funcionalidade das construções foi realizada pela expressão das mesmas em cultura de células embrionárias do Rim Humano (HEK-293 - Human embrionic kidney cell) seguida por análise da expressão gênica via RT-PCR e dos extratos proteicos por SDS-PAGE e Western-Blot. Os resultados obtidos apresentaram a expressão dos genes L2ʷᵗ, L2¹¹⁻²⁰⁰ e E5ᵒᵗⁱᵐⁱᶻᵃᵈᵒ confirmada por RT-PCR. No entanto, a produção das respectivas proteica não foi detectada pela análise via immunoblotting, demonstrando que melhorias no protocolo são necessárias. / Papillomaviruses are circular DNA viruses, generally involved in benign lesions of the epithelium and mucous membranes. However, some papillomaviruses present oncogenic potential leading to the development of diseases such as bovine papillomatosis. Currently, it is known that the viral capsid L2 protein and some of its epitopes are capable of inducing the production of neutralizing antibodies. In addition, the E5 oncoprotein is responsible for cell growth and transformation, being the main transformation gene in cattle. However, no effective commercial vaccine against BPV infection is available. Thus, the present work consists of the construction of vaccine candidates by means of DNA vaccine against BPV infection. For this propose, we specifically aimed to construct vaccine vectors from the plasmid pCI-neo and evaluated the expression of the respective antigens in vitro in mammalian cells. The genes chosen for the study, the entire L2 sequence and its epitope contained between the amino acids 11 to 200 and the wild-type E5 oncogene, were amplified by PCR, individually cloned into the pGEM-T easy vector and propagated in Escherichia coli (strain DH5α). Then, the working genes were pre-digested and subcloned into the pCI-neo vector for expression in mammalian cells, including the synthetic codon optimized E5 gene. Both sequences were evaluated by enzymatic digestion and sequencing. The evaluation of the functionality of the constructs was performed by gene expression in Human Kidney embryo cell (HEK-293) followed by analysis of the gene transcription via RT-PCR and of protein extract via SDS-PAGE and Western Blot. The results obtained showed the expression of the genes L2ʷᵗ, L2¹¹⁻²⁰⁰ and E5ᵒᵖᵗⁱᵐⁱᶻᵉᵈ confirmed by RT-PCR. However, production of the respective proteins was not detected by immunoblotting analysis, demonstrating that improvements in the protocol are required.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo901_1.pdf: 1845029 bytes, checksum: d92b20c269bd82c05d835c3ca4ccee60 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus constituem um grupo de pequenos vírus de DNA de dupla fita caracterizados por induzirem a formação de lesões que são em geral benignas, podendo regredir naturalmente ou se transformar em tumores malignos, gerando importantes perdas econômicas aos criadores. Os BPVs tipo 1 e 2 são carcinogênicos e estão relacionados com o câncer da bexiga urinária e o tumor sarcóide em eqüino. Como existem muitos animais já infectados e afetados pela doença, uma estratégia vacinal terapêutica torna-se necessária e muito aguardada pelos criadores. A imunização genética é uma estratégia bastante eficaz na indução de imunidades humoral e celular em grande número de modelos animais. O foco deste trabalho foi realizar a construção e avaliação funcional in vitro do vetor vacinal pCIE5sintB1/B2, usando o gene E5 otimizado para expressão em célula de mamífero. As sequências do gene E5 dos BPVs 1 e 2 foram obtidas do GeneBank e analisadas quanto a suas diferenças e ao uso preferencial de códons, sendo então construída uma sequência otimizada a qual foi sintetizada (E5sintB1/2), contendo um epitopo AU1 na região N-terminal. O gene E5sint foi então clonado no vetor de expressão pCI-neo usando sítios de restrição inseridos no gene sintético. A construção pCIE5sintB1/2 foi seqüenciada para confirmação. Para análise da funcionalidade o vetor pCIE5sintB1/2 foi utilizado para transfectar em células 293, usando o Kit TransFast. Após 48 horas de cultivo, as células foram coletadas e os extratos celulares processados para preparação do extrato protéico celular e de RNA total. A expressão gênica foi avaliada por meio de RT-PCR, SDS-PAGE, Dot Blot e Western Blot (usando anticorpo contra o epítopo AU1). Os resultados obtidos mostraram que apenas as células transfectadas com a construção pCIE5sintB1/B2 apresentaram transcrição do gene E5 e conseqüente produção da proteína. Estes resultados confirmam a expressão do antígeno vacinal em células de mamífero

A papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, que assola o rebanho brasileiro, sem qualquer atitude efetiva de controle, e que tem como enfermidades associadas a tumores de bexiga hematúria enzoótica e tumores de trato digestório superior caraguatá, responsáveis por sensíveis perdas para a pecuária. Várias tentativas vacinais têm sido empreendidas com finalidades profiláticas ou terapêuticas, porém sem resultados eficazes. Esta situação se deve a aspectos relacionados à estrutura viral que dificultam uma manipulação eficiente para produção de produtos vacinais. Para que tais dados possam ser obtidos, faz-se necessário uma melhor compreensão da ação das proteínas recombinantes. A clonagem em vetores bacterianos para a expressão e purificação dessas proteínas serve a diferentes propósitos. Entre eles, a produção de insumos imunológicos, como testes diagnósticos ou mesmo vacinas. O presente projeto visou à expressão e purificação da proteína de capsídeo recombinante L2 de BPV-2. A proteína foi expressa em bactéria e tentou-se a purificação por coluna de afinidade; entretanto, problemas na purificação não possibilitaram a conclusão deste objetivo. Todas as abordagens e protocolos utilizados nesse trabalho são discutidos para contribuição ao conhecimento do processo. / The bovine papillomatosis is an infectious disease of worldwide occurrence, plaguing the Brazilian herd, without any effective attitude control, and whose illnesses associated with bladder tumors \"enzootic hematuria\" and upper digestive tract tumors \"caraguatá\" sensitive responsible for losses to livestock. Several attempts have been undertaken vaccine with prophylactic or therapeutic purposes, but without effective results. This is due to issues related to viral structure that hinder efficient manipulation for production of vaccine products. In order to obtain such information, it is necessary better understanding of the action of recombinant proteins. The bacterial cloning vectors for the expression and purification of such proteins serve different purposes. Among them, the production of immune inputs, such as diagnostic tests or vaccines. This project aimed the expression and purification of recombinant L2 capsid protein of BPV-2. The protein was expressed in bacteria and purification was carried out by affinity column. However, difficulties in the purification process, impaired the full completion of this objective. All the attempted approaches and protocols were discussed and potential solutions proposed.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T18:49:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-ElydaLima.pdf: 2803583 bytes, checksum: 5b93b96556bc230adb5bb7ca5a4fb423 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T18:49:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-ElydaLima.pdf: 2803583 bytes, checksum: 5b93b96556bc230adb5bb7ca5a4fb423 (MD5) Previous issue date: 2011-03-16 / A bovinocultura é um dos principais destaques do agronegócio brasileiro no cenário mundial. No entanto, algumas doenças vêm causando prejuízos consideráveis entre elas está a papilomatose bovina, uma doença infectocontagiosa, de caráter tumoral, com etiologia relacionada a infecção pelo papilomavírus bovino (BPV) que se caracteriza pela formação de tumores em tecidos da pele e mucosa. Hoje se conhecem 11 tipos diferentes de Papilomavírus bovino, sendo os BPvs tipos 1, 2 e 4 oncogênicos. Até o momento não existe vacinas para o controle ou tratamento das papilomaviroses. Diferentes estudos vêm demonstrando que a proteína L2 pode ser uma candidata ao desenvolvimento de estratégias vacinais profiláticas contra o BPV. Neste trabalho, tivemos como objetivo construir um vetor vacinal a partir do plasmídeo pCINeo (Promega®) e do gene L2 de BPV1, avaliando in vitro a expressão do antígeno L2 em células de mamíferos. O gene L2 foi amplificado pela técnica de PCR a partir do genoma completo de BPV1, com uso de oligonucleotídeos específicos contendo um epítopo AU1 no primer forwarde posteriormente clonado em vetor de passagem pGEM-T Easy (Promega®) e subclonado no vetor de expressão pCIneo, gerando a construção pCIL2B1. O plasmídeo foi transfectado in vitroem células 293 para análise funcional da expressão de L2. Os resultados obtidos confirmaram a construção pCIL2B1 por PCR e sequenciamento. A capacidade desta construção expressar o gene L2 e produzir a respectiva proteína em células de mamífero foi confirmada por RT-PCR e western blot (usando anticorpo contra o epítopo AU1). / The cattle industry is one of the main highlights of the Brazilian agribusiness on the international stage. However, some diseases have caused considerable damage including bovine papillomatosis which is an infectious tumorous disease related to bovine papillomavirus (BPV) etiology and characterized by the formation of tumors in tissues of the skin and mucosa. Currently we know 11 different types of bovine papillomavirus, among which the BPv types 1, 2 and 4 are oncogenic. So far there is no vaccine or treatment for the papilomaviroses control. Different studies have reported that the L2 protein may be a candidate for the development of prophylactic vaccine strategies against BPV. The L2 protein has a potential cross-reaction with different BPVs and HPV (HumanPapillomavirus). On this paper, our objective was to construct a vector vaccine from pCINeo plasmid (Promega ®) and the gene of BPV1 L2, evaluating in vitro L2 antigen expression in mammalian cells.The L2 gene was amplifiedby PCR from thecomplete genome ofBPV1, using specifico ligo nucleotidescontainingan AU1epitopein the for wardprimerand subsequently cloned intop GEM-T Easyvector(Promega ®)and subclonedin expression vector pCIneo, pCIL2B1generatingbuilding. The plasmid was transfectedinto 293 cellsin vitrofunctional analysisforthe expression ofL2. ObtainingconstructionpCIL2B1was confirmed by PCRand sequencing.The capacityof this construction to express the geneand produce their L2 protein inmammalian cellswas confirmed by RT-PCR and western blot (usinganti body against the epitopeAU1). The results confirmed the L2 gene expression in mammalian cellsand the consequent production of the protein L2 BPV-1.

A papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, que assola o rebanho brasileiro, sem qualquer atitude efetiva de controle, e que tem como enfermidades associadas a tumores de bexiga hematúria enzoótica e tumores de trato digestório superior caraguatá, responsáveis por sensíveis perdas para a pecuária. Várias tentativas vacinais têm sido empreendidas com finalidades profiláticas ou terapêuticas, porém sem resultados eficazes. Esta situação se deve a aspectos relacionados à estrutura viral que dificultam uma manipulação eficiente para produção de produtos vacinais. Para que tais dados possam ser obtidos, faz-se necessário uma melhor compreensão da ação das proteínas recombinantes. A clonagem em vetores bacterianos para a expressão e purificação dessas proteínas serve a diferentes propósitos. Entre eles, a produção de insumos imunológicos, como testes diagnósticos ou mesmo vacinas. O presente projeto visou à expressão e purificação da proteína de capsídeo recombinante L2 de BPV-2. A proteína foi expressa em bactéria e tentou-se a purificação por coluna de afinidade; entretanto, problemas na purificação não possibilitaram a conclusão deste objetivo. Todas as abordagens e protocolos utilizados nesse trabalho são discutidos para contribuição ao conhecimento do processo. / The bovine papillomatosis is an infectious disease of worldwide occurrence, plaguing the Brazilian herd, without any effective attitude control, and whose illnesses associated with bladder tumors \"enzootic hematuria\" and upper digestive tract tumors \"caraguatá\" sensitive responsible for losses to livestock. Several attempts have been undertaken vaccine with prophylactic or therapeutic purposes, but without effective results. This is due to issues related to viral structure that hinder efficient manipulation for production of vaccine products. In order to obtain such information, it is necessary better understanding of the action of recombinant proteins. The bacterial cloning vectors for the expression and purification of such proteins serve different purposes. Among them, the production of immune inputs, such as diagnostic tests or vaccines. This project aimed the expression and purification of recombinant L2 capsid protein of BPV-2. The protein was expressed in bacteria and purification was carried out by affinity column. However, difficulties in the purification process, impaired the full completion of this objective. All the attempted approaches and protocols were discussed and potential solutions proposed.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3741_1.pdf: 1581853 bytes, checksum: 0025fe881a3b0e2eed7c457909ca63d6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os papilomavírus são conhecidos por causarem lesões tumorais, geralmente benignas, em tecidos epiteliais de diversos organismos, que podem sob condições adequadas progredirem para o câncer. O papilomavírus bovino (BPV) tem sido amplamente caracterizado tanto por ser considerado um modelo experimental para o estudo do papilomavírus humano (HPV), quanto por sua grande importância na bovinocultura. Estudos para o combate da infecção mostram que vacinas baseadas em virus-like particles (VLPs), formadas a partir das proteínas capsidiais L1/L2 ou L1, induzem à produção de anticorpos neutralizantes conferindo proteção contra o mesmo tipo viral. A levedura Pichia pastoris é um sistema de expressão eficiente e de baixo custo para produção de altos níveis de proteínas, além de apresentar vantagens em relação a outros sistemas. Neste trabalho foi avaliado a possibilidade do uso do sistema de expressão heteróloga baseado em células da levedura P. pastoris para a produção da proteína L1 do capsídeo do papilomavírus bovino tipo 1. O gene L1 foi amplificado por PCR a partir do genoma completo de BPV 1, clonado no vetor pGEM-T Easy e subclonado sob a regulação do promotor AOX1 e em fase de leitura com uma cauda de poli-histidina presentes no vetor pPICZA. As células da levedura foram transformadas com a construção pPICZAL1B1 e os recombinantes resistentes a zeocina foram selecionados para expressão da proteína L1. Estes foram cultivados em frascos contendo meio com glicerol como fonte de carbono e após 48 horas o meio foi trocado por outro contendo 0,5% de metanol. A cada 24 horas foi adicionado metanol para uma concentração final de 2%, até completar 96 horas. Os resultados obtidos mostraram que os recombinantes P. pastoris transformados com o cassete de expressão pPICZAL1B1, após indução com metanol, foram capazes de expressar o gene L1 e de produzir a proteína L1 de BPV 1. Tais transformantes permitirão o estabelecimento de um sistema de expressão da proteína L1 e conseqüente produção de VLPs como primeiro passo para implementação de uma estratégia vacinal contra infecções por papilomavírus

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6203_1.pdf: 1326366 bytes, checksum: 5cd77ce2de56aff15acaf6fb51f8cd1f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Os papilomavírus constituem um grupo de pequenos vírus de DNA de dupla fita caracterizados por induzirem a formação de lesões que são em geral benignas, podendo regredir naturalmente ou se transformar em tumores malignos. Dentre eles se encontra o papilomavírus bovino (BPV). Até o momento são bem caracterizados seis diferentes tipos de BPV (BPV de 1-6) e recentemente outros dois novos tipos (BPVs 7 e 8) foram descritos. Na região Nordeste do Brasil, em especial no Estado de Pernambuco (região da Zona da Mata), a incidência de papilomatose bovina é muito alta provocando grandes perdas econômicas para os criadores. No momento não há tratamento com eficácia comprovada. A proteção contra infecção é conferida por anticorpos neutralizantes direcionados proteína estrutural L1. Estes anticorpos podem ser eficientemente induzidos por imunização com virus-like particles (VLP), que se formam espontaneamente após a expressão de L1 em vetores recombinantes. A levedura metilotrófica Pichia pastoris emergiu como um sistema heterólogo, eficiente e de baixo custo para a produção de proteínas. Neste trabalho foi avaliada a produção da proteína L1 de BPV-4 por células de P. pastoris. O gene L1 foi amplificado e clonado no vetor de expressão pPICZA (Invitrogen). As células de P. pastoris foram transformadas com pPICZAL1B4. Os transformantes de P. pastoris obtidos foram analisados para expressão do gene L1 por RT-PCR e Dot blot. Os transformantes analisados mostraram transcrição do gene L1 e conseqüente produção da proteína