Há muitos estudos sobre plantas medicinais brasileiras, porém a carência de pesquisas relacionadas à segurança alimentar de plantas brasileiras usadas como alimento ainda é consideravelmente grande. A maioria dos alcaloides são substâncias tóxicas que podem ser encontrados em uma grande variedade de plantas medicinais e alimentícias, inclusive em espécies de Passiflora chamadas popularmente no Brasil de \"maracujá\". As pesquisas sobre as diversas espécies de Passiflora, em grande parte estão relacionadas com as folhas e frutos e na maioria das vezes as sementes são consideradas como resíduo. As metodologias analíticas modernas para análises na área de alimentos, utilizando SBSE com fase extratora de PDMS, tem o objetivo de facilitar o preparo de amostras complexas e diminuir os resíduos orgânicos gerados na etapa de preparo da amostra. Para isso, este estudo teve como objetivo a análise de alcaloides harmânicos pelo método SBSE/CLAE-Flu dual, adaptado para a quantificação de harmana e de harmina em sementes de maracujá azedo. O método foi especifico e linear para os alcaloides estudados (r2 = 0,996 para harmana e r2 = 0,999 para harmina). Os ensaios de repetibilidade e de precisão intermediária confirmam a precisão do método. Os testes de recuperação (entre 92,34% a 105,90% para a harmana e 83,61% a 117,76% para a harmina) indicam a exatidão do método. A amostra analisada continha (3,094x10-2 ± 5,874x10-5) µg de harmana por grama de sementes secas de maracujá azedo e (8,108x10-3±7,599x10-4) µg de harmina por grama de sementes secas de maracujá azedo. A detecção por fluorescência foi um método sensível e seletivo para a detecção da harmana (LOD = 30 ng L-1 e LOQ = 200 ng L-1) e para a harmina (LOD = 100 ng L-1 e LOQ = 400 ng L-1). Conclui-se que o método SBSE/CLAE-Flu dual pode ser usado para a análise dos alcaloides harmânicos nas sementes de maracujá azedo. / There are many studies of Brazilian medicinal plants, but the lack of research related to food safety of Brazilian plants used as food is still high. Most of the alkaloids are toxic chemicals found in a wide variety of medicinal plants and edible plants, including Passiflora species popularly known in Brazil as \"maracujá\". Researches about most of the Passiflora species are largely related about the leaves and the fruits and in most of the cases, the seeds are considered as waste. Modern analytical methodologies for food analysis, using SBSE with PDMS as the extraction phase, have the purpose of make easier the preparation of complex samples and to reduce the organic waste generated in the sample preparation step. For that, this study had the aim to analyze harman alkaloids by a dual SBSE/HPLC-Flu method, adapted to the quantification of harmane and harmine in sour passion fruit seeds. The method was specific and linear for the studied of the alkaloids (r2 = 0.996 for harmane and r2 = 0.999 for harmine). The repeatability and accuracy intermediate assays confirm the precision of the method. The recovery assay (between 92.34% and 105.90% to harmane and between 83.61% and 117.76% to harmine) indicate the accuracy of the method. The sample analyzed contained (3.094x10-2 ± 5.874x10-5) µg of the harmane in 1.0 g of dried seeds of sour passion fruit and (8.108x10-3 ± 7.599x10-4) µg of the harmine in 1.0 g of dried seeds of sour passion fruit. The fluorescence detection was a sensitive and selective method for detection of harmane (LOD = 30 ng L-1 and LOQ = 200 ng L-1) and harmine (LOD = 100 ng L-1 and LOQ = 400 ng -1). It was concluded that the dual SBSE/HPLC-Flu method can be used for the analysis of the harman alkaloids in dried seeds of sour passion fruit.

Um dos desafios atuais da pesquisa em frutíferas tropicais é incorporar abordagens baseadas em marcadores moleculares nos programas convencionais de melhoramento. O maracujá-doce (Passiflora alata) é uma espécie diploide, de fecundação cruzada e pouco explorada. Recentemente, nosso grupo construiu um mapa de ligação de P. alata composto de diferentes tipos de marcadores moleculares. Além disso, dispõe-se de um conjunto de transcritos de Passiflora edulis, obtidos a partir de duas bibliotecas de expressão: forward e reverse onde foram isolados transcritos diferencialmente expressos na planta inoculada com Xanthomonas axonopodis (Xap) (672) e na planta controle, não inoculada (310), respectivamente. Assim, neste estudo, este conjunto de transcritos foi explorado visando ao desenvolvimento de marcadores SSR e SNP com o intuito de enriquecer, posteriormente, o mapa de ligação de P. alata com marcadores funcionais putativos. Para o desenvolvimento dos marcadores SSRs, as 672 sequências da biblioteca forward foram investigadas e em 91 delas foram encontrados 115 SSRs. Como esperado, a classe de repetições trinucleotídicas foi a mais abundante, sendo o motivo (AG)n o mais comum entre as repetições dinucleotídicas. Desenhou-se primers para amplificar 42 desses SSRs. Dois acessos de P. edulis e seis indivíduos da população de mapeamento de P. alata foram usados nos testes de transferibilidade e avaliação do polimorfismo. Trinta e quatro pares de primers apresentaram bom padrão de amplificação, porém apenas 10 deles revelaram polimorfismo em P. alata. Para o desenvolvimento dos marcadores SNPs, 118 sequências selecionadas das bibliotecas de expressão forward e reverse foram usadas para o desenho de primers; 37 delas foram usadas para avaliar o polimorfismo no mesmo set de indivíduos de P. alata. Foram encontrados 34 locos contendo SNPs bialélicos em 16 fragmentos gênicos, cujas sequencias variaram em tamanho de 332 a 872 pb. Considerando todos os fragmentos gênicos (16), foi analisado um total de 10.003 pb; a frequência de SNPs foi estimada como sendo 1 a cada 294 pb. Observou-se a mesma ocorrência de SNPs (50%, 17/34) em regiões codantes e não-codantes. Uma função putativa pôde ser atribuída a todos os fragmentos gênicos de P. alata, sendo que 82% mostraram homologia com as mesmas proteínas das sequências de origem, isoladas de P. edulis. No geral, os locos marcadores apresentaram baixo nível de polimorfismo molecular. Este é o primeiro trabalho sobre o desenvolvimento de locos marcadores funcionais putativos em Passiflora usando transcritos expressos em resposta à Xap. / One of the current challenges of tropical fruit research is to incorporate molecular marker-based approaches into conventional breeding programs. The sweet passion fruit (Passiflora alata) is a diploid, outcrossing and underexploited species. Recently, our group has constructed a P. alata linkage map consisted of different types of molecular markers. Moreover, we have a set of transcripts of Passiflora edulis obtained from two expression libraries: the forward and the reverse where differentially expressed transcripts were isolated from a plant inoculated with Xanthomonas axonopodis (Xap) (672), and from the control plant, uninoculated (310), respectively. Thus, in this study, this set of transcripts were exploited aiming at the development of SNP and SSR markers for future enrichment of the P. alata linkage map with putative functional markers. For the development of SSR markers, the 672 sequences from the forward library were investigated and 91 of them were found to have 115 SSRs. As expected, the trinucleotide class of repeats was the most abundant, and the (AG)n motif was the most common among the dinucleotide repeats. Primers were designed to amplify 42 of these SSRs. Transferability tests and polymorphism investigation were carried out using two accessions of P. edulis and six individuals of the mapping population of P. alata. Thirty-four primer pairs showed a good amplification pattern but only 10 loci revealed polymorphism in P. alata. For the development of SNP markers, 118 sequences selected from forward and reverse expression libraries were used for designing primers; 37 were used to assess the polymorphism in the same set of individuals of P. alata. Thirty-four biallelic SNPs were found in 16 gene fragment sequences that ranged in size from 332 to 872 bp. Considering all gene fragments, a total of 10,003 bp was obtained; the frequency of SNPs was estimated to be 1 every 294 bp. The same prevalence of SNPs (50%, 17/34) was observed within coding and non-coding regions. A putative function was assigned to all gene fragments of P. alata; 82% of them have shown homology to the original protein sequences isolated from P. edulis. Overall, the marker loci showed a low level of molecular polymorphism. This is the first report on the development of putative functional marker loci in Pasiflora using transcripts induced in response to Xap.

O maracujá azedo, Passiflora edulis, e o maracujá doce, Passiflora alata, são as duas espécies pertencentes à família Passifloraceae de maior importância econômica para o Brasil, sendo seus frutos amplamente comercializados como alimentos. Um grupo de substâncias conhecido como alcaloides β-carbolínicos são componentes minoritários desses frutos, no entanto, a literatura indica que substâncias pertencentes a esse grupo podem ter atividade tóxica. Este trabalho apresentou três objetivos específicos, com o intuito de ampliar o conhecimento sobre a fitoquímica dos frutos de P. edulis e de P. alata e da aplicação da SBSE como método de preparo de amostra: quantificação de harmana e de harmina na polpa e nas sementes de P. alata utilizando SBSE-PDMS e análise por HPLC/Flu; identificação de alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis através de análises por HPLC/Flu e por UHPLC/MS; estudo do processo de extração de norharmana por SBSE com duas fases extratores diferentes (PDMS e EG-Silicone) por HPLC/Flu. A quantificação de harmana e harmina na polpa e nas sementes de P. alata foi realizada após preparo de amostra por SBSE-PDMS e análises por HPLC/Flu. A concentração de harmana encontrada foi 1,0328 . 10-1 ± 3,1217 . 10-3 μg L-1 na polpa, enquanto que nas sementes foi encontrada a concentração de 7,4391 . 10-5 ± 2,5501 . 10-6 μg g-1. As concentrações de harmina ficaram abaixo do LOD e do LOQ na polpa e nas sementes de P. alata, respectivamente. Na identificação dos alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis, os extratos para análises por HPLC/Flu e por UHPLC/MS foram preparados pelo método clássico, sendo identificados os alcaloides norharmana, harmana, harmina, harmol e harmalol. Nas análises por HPLC/Flu de extrato das cascas de P. edulis preparado utilizando SBSE-PDMS, o alcaloide norharmana foi identificado como majoritário e por esse motivo, foi realizado o estudo do processo de extração de norharmana por SBSE com duas fases extratoras diferentes, PDMS e EG-Silicone, utilizando planejamento fatorial fracionário, tendo como objetivo obter a melhor recuperação percentual possível. Com as melhores condições para extração definidas, os ensaios utilizando PDMS e EG-Silicone apresentaram recuperação percentual de cerca de 50 % e 80 %, respectivamente. A quantificação de harmana na polpa e nas sementes do maracujá doce, P. alata, indicou quantidades muito pequenas desse alcaloide nessas partes dos frutos, levando à conclusão que um fruto de P. alata, apresenta cerca de 140 vezes menos alcaloides β-carbolínicos do que o fruto de P. edulis, levando em consideração as quantidades de harmana e harmina no maracujá azedo relatadas na literatura. A identificação dos alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis é um importante passo para a compreensão sobre a fitoquímica dessa parte do fruto, que, nos últimos anos, deixou de ser apenas resíduo industrial e passou a ser produto alimentício com valor agregado, comercializadas como farinhas das cascas de maracujá. O estudo sobre a utilização da SBSE como técnica de extração de norharmana mostrou-se promissor, atingindo recuperação percentual aceitável para o futuro desenvolvimento de um método de quantificação de norharmana nas cascas de maracujá. / Sour passion fruit, Passiflora edulis, and sweet passion fruit, Passiflora alata, are the two species of Passifloraceae of greater economic importance to Brazil, and their fruits are widely marketed as food. A class of compounds known as β-carboline alkaloids is a minor component of these fruits, however, the literature indicates that substances belonging to this group may have toxic activity. This work presents three specific objectives, in order to increase knowledge about the phytochemistry of P. edulis and P. alata and the application of SBSE as a sample preparation method: quantification of harmane and harmine in the pulp and in the seeds of P. alata using SBSE-PDMS and HPLC/Flu analysis; identification of β-carboline alkaloids in P. edulis peels using HPLC/Flu and UHPLC/MS analysis; study of the SBSE extraction process of norharmane using two different phases (PDMS and EG-Silicone), by HPLC/Flu analysis. Quantification of harmane and harmine in the pulp and the seeds of P. alata was performed after sample preparation by SBSE-PDMS and analysis by HPLC/Flu. The concentration of harmane was 1,0328 . 10-1 ± 3,1217 . 10-3 μg L-1 in the pulp while the in the seeds it was found 7.4391 . 10-5 ± 2.5501 . 10-6 μg g-1 harmane. The concentrations of harmine were below the LOD and LOQ in the pulp and in the seeds of P. alata, respectively. For the identification of the β-carboline alkaloids in the peels of P. edulis, the extracts were prepared by using the classic method and analyzed by HPLC/Flu and UHPLC/MS, and the alkaloids norharmane, harmane, harmine, harmol and harmalol were identified. In the HPLC/Flu analysis of the extract of P. edulis peels prepared using SBSE-PDMS, the alkaloid norharmane was identified as a major constituent and, for this reason, it was performed a study about the extraction process of norharmane by SBSE, evaluating two different phases, PDMS and EG-Silicone, by using fractional factorial design, aiming to get the best percentage recovery. Defined the best conditions for extraction, the experiments performed by using PDMS and EG-Silicone bars showed percentage recovery about 50% and 80%, respectively. Quantification of harmane in the pulp and seeds of sweet passionfruit, P. alata, indicated very small amounts of this alkaloid in these parts of the fruits, leading to the conclusion that the fruits of P. alata, has around 140 times less β-carboline alkaloid than the fruits of P. edulis, taking into account the amounts of harmana and harmine on sour passionfruit reported in the literature. Identification of β-carboline alkaloids in P. edulis peels is an important step for understanding the phytochemistry of this part of the fruits, which, in recent years, is no longer just an industrial waste and became a food product with added value, marketed as passion fruit peels flour. The study about the utilization of SBSE as extraction technique of norharmane showed to be promising, reaching acceptable recovery percentage, for the future development of a method for quantification of norharmane in passion fruit peels.

Há muitos estudos sobre plantas medicinais brasileiras, porém a carência de pesquisas relacionadas à segurança alimentar de plantas brasileiras usadas como alimento ainda é consideravelmente grande. A maioria dos alcaloides são substâncias tóxicas que podem ser encontrados em uma grande variedade de plantas medicinais e alimentícias, inclusive em espécies de Passiflora chamadas popularmente no Brasil de \"maracujá\". As pesquisas sobre as diversas espécies de Passiflora, em grande parte estão relacionadas com as folhas e frutos e na maioria das vezes as sementes são consideradas como resíduo. As metodologias analíticas modernas para análises na área de alimentos, utilizando SBSE com fase extratora de PDMS, tem o objetivo de facilitar o preparo de amostras complexas e diminuir os resíduos orgânicos gerados na etapa de preparo da amostra. Para isso, este estudo teve como objetivo a análise de alcaloides harmânicos pelo método SBSE/CLAE-Flu dual, adaptado para a quantificação de harmana e de harmina em sementes de maracujá azedo. O método foi especifico e linear para os alcaloides estudados (r2 = 0,996 para harmana e r2 = 0,999 para harmina). Os ensaios de repetibilidade e de precisão intermediária confirmam a precisão do método. Os testes de recuperação (entre 92,34% a 105,90% para a harmana e 83,61% a 117,76% para a harmina) indicam a exatidão do método. A amostra analisada continha (3,094x10-2 ± 5,874x10-5) µg de harmana por grama de sementes secas de maracujá azedo e (8,108x10-3±7,599x10-4) µg de harmina por grama de sementes secas de maracujá azedo. A detecção por fluorescência foi um método sensível e seletivo para a detecção da harmana (LOD = 30 ng L-1 e LOQ = 200 ng L-1) e para a harmina (LOD = 100 ng L-1 e LOQ = 400 ng L-1). Conclui-se que o método SBSE/CLAE-Flu dual pode ser usado para a análise dos alcaloides harmânicos nas sementes de maracujá azedo. / There are many studies of Brazilian medicinal plants, but the lack of research related to food safety of Brazilian plants used as food is still high. Most of the alkaloids are toxic chemicals found in a wide variety of medicinal plants and edible plants, including Passiflora species popularly known in Brazil as \"maracujá\". Researches about most of the Passiflora species are largely related about the leaves and the fruits and in most of the cases, the seeds are considered as waste. Modern analytical methodologies for food analysis, using SBSE with PDMS as the extraction phase, have the purpose of make easier the preparation of complex samples and to reduce the organic waste generated in the sample preparation step. For that, this study had the aim to analyze harman alkaloids by a dual SBSE/HPLC-Flu method, adapted to the quantification of harmane and harmine in sour passion fruit seeds. The method was specific and linear for the studied of the alkaloids (r2 = 0.996 for harmane and r2 = 0.999 for harmine). The repeatability and accuracy intermediate assays confirm the precision of the method. The recovery assay (between 92.34% and 105.90% to harmane and between 83.61% and 117.76% to harmine) indicate the accuracy of the method. The sample analyzed contained (3.094x10-2 ± 5.874x10-5) µg of the harmane in 1.0 g of dried seeds of sour passion fruit and (8.108x10-3 ± 7.599x10-4) µg of the harmine in 1.0 g of dried seeds of sour passion fruit. The fluorescence detection was a sensitive and selective method for detection of harmane (LOD = 30 ng L-1 and LOQ = 200 ng L-1) and harmine (LOD = 100 ng L-1 and LOQ = 400 ng -1). It was concluded that the dual SBSE/HPLC-Flu method can be used for the analysis of the harman alkaloids in dried seeds of sour passion fruit.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_Maria_Cristina_Copello_Rotili.pdf: 1512539 bytes, checksum: 0de2ebbb956f5ea7ef24fdd44b97de82 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The passion fruit is a climacteric fruit and at the phase of the Post harvest suffers important physiological transformations resulting of its own metabolism of ripening and others oxidative stress. The storage conditions of the passion fruit establish determining factor for its conservation. The refrigeration and modified atmosphere have been widely used in fruits, and the yellow passion fruit appears very promising in the use of these techniques, due to high instability of its physical and physiological characteristics post harvest. Therefore, this study was conducted with the objective of to evaluate the biochemical, physicochemical and microbiological of the passion fruit during its storage in modified atmosphere and at different temperatures. The work was divided into two experiments: The first consisted of the evaluation of the effect of storage temperature, where the fruits were stored at 5 º and 24 ºC. And in the second experiment evaluated the effect of modified atmosphere during the storage of the fruits at 5 °C. In both experiments the evaluations occurred at intervals of 10 days for 40 days, being evaluated the antioxidant activity DPPH and TEAC, the content of total phenolic compounds, ß-carotene and ascorbic acid, and physical and microbiological quality of the fruits. In the second experiment were included assessments of total titratable acidity, total soluble solids and enzymatic activity for polyphenol oxidase and peroxidase. In both experiments, it was utilized a completely randomized delineation, with five repetitions. The results showed that the total phenolic compounds, β-carotene and antioxidant activity of passion fruit juice were not affected by storage temperature and the content of total phenolic compounds of the juice increased with storage time. The effects of high temperature during storage were more evident in the appearance of the fruit than at the nutritional quality of the juice. The antioxidant activity of the juice, expressed in kidnapping DPPH radical, decreased during the storage, independent of temperature. Under the conditions of storage at 5 ° C and normal atmosphere, the shelf-life of passion fruit was higher and lasted up to 20 days in good conditions of marketing. The use of modified atmosphere was not able to reduce the losses of antioxidant activity of passion fruit juice during its storage. Total phenolics compounds and ascorbic acid were not affected by the use of modified atmosphere. Up to 30 days of storage there was suppressive effect of the activity of pathogens similarly in the two atmospheres of storage, suggesting that this effect was more related to low temperature. At 40 days of storage the modified atmosphere was more effective in inhibiting the activity of pathogens. The modified atmosphere was effective in reducing fresh mass loss and wrinkling of the rind, evidencing the high sensitivity of the fruit changes involving the loss of water and the importance of the use of modified atmosphere in maintaining their physical quality. Total soluble solids and total titratable acidity decreased during the storage and the modified atmosphere did not affect these results. The use of modified atmosphere during the storage at 5° C provided great conditions for marketing the yellow passion fruit up to 20 days. This study revealed the existence of activities of the polyphenoloxidase and peroxidase enzymes in the yellow passion fruit rind, but they were not identified in the fruit juice / O maracujá-amarelo é um fruto climatérico e na fase pós-colheita sofre importantes transformações fisiológicas decorrentes do próprio metabolismo de maturação e de outros estresses oxidativos. As condições de armazenamento do maracujá estabelecem fator determinante para sua conservação. A refrigeração e a atmosfera modificada têm sido largamente utilizadas em frutos, e o maracujá-amarelo se apresenta muito promissor no uso dessas técnicas, devido à elevada instabilidade de suas características físicas e fisiológicas pós-colheita. Assim, este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar as respostas bioquímicas, físico-químicas e microbiológicas do maracujá-amarelo durante o seu armazenamento em atmosfera modificada e em diferentes temperaturas. O trabalho foi dividido em dois experimentos: O primeiro constou da avaliação do efeito da temperatura de armazenamento, onde os frutos foram armazenados em temperatura de 5º e 24ºC. E no segundo experimento foi avaliado o efeito da atmosfera modificada durante o armazenamento dos frutos a 5 ºC. Em ambos os experimentos as avaliações ocorreram em intervalo de 10 dias durante 40 dias, sendo avaliada a atividade antioxidante DPPH e TEAC, os teores de compostos fenólicos totais, ß-caroteno e ácido ascórbico e a qualidade física e microbiológica dos frutos. No segundo experimento foram incluídas as avaliações de acidez total titulável, sólidos solúveis totais e a atividade enzimática para polifenoloxidase e peroxidase. Em ambos os experimentos, foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado, com cinco repetições. Os resultados mostraram que os compostos fenólicos totais, β-caroteno e atividade antioxidante do suco do maracujá-amarelo não foram influenciados pela temperatura de armazenagem e o conteúdo de compostos fenólicos totais do suco aumentou com o tempo de armazenagem. Os efeitos da elevada temperatura durante o armazenamento foram muito mais evidentes na aparência do fruto do que na qualidade nutricional do suco. A atividade antioxidante do suco, expressa em sequestro do radical DPPH, diminuiu durante o armazenamento, independente da temperatura. Nas condições do armazenamento a 5 ºC e em atmosfera normal, a vida-de-prateleira do maracujá-amarelo foi superior e se estendeu até 20 dias em boas condições de comercialização. O uso da atmosfera modificada não foi capaz de reduzir as perdas de atividade antioxidante do suco do maracujá-amarelo, durante o seu armazenamento. Compostos fenólicos totais e ácido ascórbico também não foram influenciados pelo uso da atmosfera modificada. Até 30 dias de armazenamento houve efeito supressor da atividade de patógenos similarmente nas duas atmosferas de armazenagem, sugerindo que este efeito esteve mais relacionado à baixa temperatura. Aos 40 dias de armazenamento a atmosfera modificada foi mais eficiente em inibir a atividade de patógenos. A atmosfera modificada foi eficaz na redução da perda de massa fresca e do enrugamento da casca, ficando evidente a alta sensibilidade dos frutos à alterações envolvendo a perda de água e a importância do uso da atmosfera modificada na manutenção da sua qualidade física. Sólidos solúveis totais e acidez total titulável diminuíram durante o armazenamento e a atmosfera modificada não influenciou estes resultados. O uso da atmosfera modificada durante o armazenamento a 5 ºC proporcionou condições ótimas para comercialização do maracujá-amarelo até 20 dias. Este estudo revelou a existência de atividade das enzimas polifenoloxidase e peroxidase na casca do maracujá-amarelo, mas não foram identificadas no suco do fruto

Passiflora edulis, popularly known in Brazil as sour passion fruit is the most widely cultivated species of the genus Passiflora, and is of economic importance in Brazil for industrial production of juice and fresh fruit for consumption. Despite its economic importance, little research has been conducted on this species, even on the most basic aspects. To fill in this gap, our group conducted various genetic studies, including estimating levels of molecular polymorphism, studying quantitative loci that control fruit yield and quality, and mapping genes conferring resistance to bacterial spot disease caused by Xanthomonas axonopodis. In addition, to enhance our knowledge of the P. edulis genome, a genomic library inserted into bacterial artificial chromosomes (BAC) has been constructed (82,944 clones, with coverage of 6× the species\' haploid genome). The library is kept at the French Plant Genomic Resources Center (CNRGV/INRA) in Toulouse. Initially, some 10,000 BES (BAC-end sequences) were sequenced, generating approximately 6.2 Mb of genomic information and providing an initial overview of P. edulis genome in terms of gene content and repeat sequences. With the aim of obtaining more comprehensive information, it was decided to select around 100 BAC inserts for complete sequencing. The aim of this study was to carry out genomic analysis in order to elucidate the structural and functional annotation of the genes, and identify and characterize transposable elements. The data generated by fully sequencing 10.4 Mb of P. edulis provide a rich source of information which has been taken full advantage of in this doctoral thesis. / Passiflora edulis, popularmente conhecido como maracujá azedo, é a espécie do gênero Passiflora mais cultivada, tendo importância econômica no Brasil tanto para a produção de suco industrializado quanto para o consumo da fruta fresca. Apesar da relevância da espécie, faltam pesquisas, principalmente nas áreas básicas. Para superar isso, nosso grupo tem realizado diversos estudos genéticos que incluem a estimativa dos níveis de polimorfismos moleculares, o estudo de locos quantitativos envolvidos no controle da produção e qualidade dos frutos e o mapeamento de genes de resistência à mancha bacteriana causada por Xanthomonas axonopodis. Além disso, para conhecer o genoma de P. edulis, foi construída uma biblioteca genômica inserida em BACs (82.944 clones, com cobertura de 6× do genoma haploide da espécie) que é mantida no CNRGV/INRA em Toulouse, França. Inicialmente, cerca de 10.000 BES (BAC-end sequences) foram sequenciadas, gerando aproximadamente 6,2 Mb de informação genômica, fornecendo a primeira visão do genoma de P. edulis sobre o conteúdo de genes e da porção repetitiva. Com o objetivo de obter informações mais completas, decidiu-se selecionar cerca de 100 insertos de BACs para o sequenciamento completo. A análise genômica realizada, especialmente a anotação estrutural e funcional dos genes e a identificação e caracterização dos elementos de transposição, constituíram os objetivos deste estudo. Os dados gerados pelo sequenciamento completo de 10.4 Mb de P. edulis representam uma fonte rica de informações que foram exploradas nesta tese de doutorado.

O maracujá azedo, Passiflora edulis, e o maracujá doce, Passiflora alata, são as duas espécies pertencentes à família Passifloraceae de maior importância econômica para o Brasil, sendo seus frutos amplamente comercializados como alimentos. Um grupo de substâncias conhecido como alcaloides β-carbolínicos são componentes minoritários desses frutos, no entanto, a literatura indica que substâncias pertencentes a esse grupo podem ter atividade tóxica. Este trabalho apresentou três objetivos específicos, com o intuito de ampliar o conhecimento sobre a fitoquímica dos frutos de P. edulis e de P. alata e da aplicação da SBSE como método de preparo de amostra: quantificação de harmana e de harmina na polpa e nas sementes de P. alata utilizando SBSE-PDMS e análise por HPLC/Flu; identificação de alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis através de análises por HPLC/Flu e por UHPLC/MS; estudo do processo de extração de norharmana por SBSE com duas fases extratores diferentes (PDMS e EG-Silicone) por HPLC/Flu. A quantificação de harmana e harmina na polpa e nas sementes de P. alata foi realizada após preparo de amostra por SBSE-PDMS e análises por HPLC/Flu. A concentração de harmana encontrada foi 1,0328 . 10-1 ± 3,1217 . 10-3 μg L-1 na polpa, enquanto que nas sementes foi encontrada a concentração de 7,4391 . 10-5 ± 2,5501 . 10-6 μg g-1. As concentrações de harmina ficaram abaixo do LOD e do LOQ na polpa e nas sementes de P. alata, respectivamente. Na identificação dos alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis, os extratos para análises por HPLC/Flu e por UHPLC/MS foram preparados pelo método clássico, sendo identificados os alcaloides norharmana, harmana, harmina, harmol e harmalol. Nas análises por HPLC/Flu de extrato das cascas de P. edulis preparado utilizando SBSE-PDMS, o alcaloide norharmana foi identificado como majoritário e por esse motivo, foi realizado o estudo do processo de extração de norharmana por SBSE com duas fases extratoras diferentes, PDMS e EG-Silicone, utilizando planejamento fatorial fracionário, tendo como objetivo obter a melhor recuperação percentual possível. Com as melhores condições para extração definidas, os ensaios utilizando PDMS e EG-Silicone apresentaram recuperação percentual de cerca de 50 % e 80 %, respectivamente. A quantificação de harmana na polpa e nas sementes do maracujá doce, P. alata, indicou quantidades muito pequenas desse alcaloide nessas partes dos frutos, levando à conclusão que um fruto de P. alata, apresenta cerca de 140 vezes menos alcaloides β-carbolínicos do que o fruto de P. edulis, levando em consideração as quantidades de harmana e harmina no maracujá azedo relatadas na literatura. A identificação dos alcaloides β-carbolínicos nas cascas de P. edulis é um importante passo para a compreensão sobre a fitoquímica dessa parte do fruto, que, nos últimos anos, deixou de ser apenas resíduo industrial e passou a ser produto alimentício com valor agregado, comercializadas como farinhas das cascas de maracujá. O estudo sobre a utilização da SBSE como técnica de extração de norharmana mostrou-se promissor, atingindo recuperação percentual aceitável para o futuro desenvolvimento de um método de quantificação de norharmana nas cascas de maracujá. / Sour passion fruit, Passiflora edulis, and sweet passion fruit, Passiflora alata, are the two species of Passifloraceae of greater economic importance to Brazil, and their fruits are widely marketed as food. A class of compounds known as β-carboline alkaloids is a minor component of these fruits, however, the literature indicates that substances belonging to this group may have toxic activity. This work presents three specific objectives, in order to increase knowledge about the phytochemistry of P. edulis and P. alata and the application of SBSE as a sample preparation method: quantification of harmane and harmine in the pulp and in the seeds of P. alata using SBSE-PDMS and HPLC/Flu analysis; identification of β-carboline alkaloids in P. edulis peels using HPLC/Flu and UHPLC/MS analysis; study of the SBSE extraction process of norharmane using two different phases (PDMS and EG-Silicone), by HPLC/Flu analysis. Quantification of harmane and harmine in the pulp and the seeds of P. alata was performed after sample preparation by SBSE-PDMS and analysis by HPLC/Flu. The concentration of harmane was 1,0328 . 10-1 ± 3,1217 . 10-3 μg L-1 in the pulp while the in the seeds it was found 7.4391 . 10-5 ± 2.5501 . 10-6 μg g-1 harmane. The concentrations of harmine were below the LOD and LOQ in the pulp and in the seeds of P. alata, respectively. For the identification of the β-carboline alkaloids in the peels of P. edulis, the extracts were prepared by using the classic method and analyzed by HPLC/Flu and UHPLC/MS, and the alkaloids norharmane, harmane, harmine, harmol and harmalol were identified. In the HPLC/Flu analysis of the extract of P. edulis peels prepared using SBSE-PDMS, the alkaloid norharmane was identified as a major constituent and, for this reason, it was performed a study about the extraction process of norharmane by SBSE, evaluating two different phases, PDMS and EG-Silicone, by using fractional factorial design, aiming to get the best percentage recovery. Defined the best conditions for extraction, the experiments performed by using PDMS and EG-Silicone bars showed percentage recovery about 50% and 80%, respectively. Quantification of harmane in the pulp and seeds of sweet passionfruit, P. alata, indicated very small amounts of this alkaloid in these parts of the fruits, leading to the conclusion that the fruits of P. alata, has around 140 times less β-carboline alkaloid than the fruits of P. edulis, taking into account the amounts of harmana and harmine on sour passionfruit reported in the literature. Identification of β-carboline alkaloids in P. edulis peels is an important step for understanding the phytochemistry of this part of the fruits, which, in recent years, is no longer just an industrial waste and became a food product with added value, marketed as passion fruit peels flour. The study about the utilization of SBSE as extraction technique of norharmane showed to be promising, reaching acceptable recovery percentage, for the future development of a method for quantification of norharmane in passion fruit peels.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MauroST_DISSERT.pdf: 1583076 bytes, checksum: 21ea20c37f445bdcb3542826ae383cfd (MD5) Previous issue date: 2009-02-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The culture of the passion fruit plant-yellow it is explored commercially of north to south of Brazil, involving tropical and subtropical areas. Your cultivation is in expansion phase in reason of the great commercialization perspectives. In this context the objective of the work was to evaluate the effect of the manuring nitrogenada in the production of the yellow passion fruit plant irrigated in the conditions of Cassilandia (MS). The experimental design used was of randomized complete blocks whit 5 doses of nitrogen (0, 80, 160, 240 and 320 kg ha-1), with 4 repetitions, spaced in 3m between lines and 4m among plants; each experimental unit was constituted by 6 plants and 4 plants in the useful area. The conduction in the culture was accomplished in a wire thread to 1,8m of height of the soil. The application of the treatments was parceled out in 6 times (from 11/2006 to 05/2007), beginning 5 months after transplant of the seedlings. The crop was it accomplishes from 29/11/2006 to 17/08/2007. The increase of the manuring with nitrogen promoted an answer of behavior quadratic polinomial for the total of fruits you didn't trade; total of fruits; production commercial, no-commercial and total; commercial and no-commercial productivity; thickness of the peel; and SST. The increase of the doses of N promoted a decreasing answer for medium weight of marketable fruits; pulp revenue; number of seeds; and pH of the soil. Not being verified effect of the treatments for total of marketable fruits, weigh medium, diameter and fruit length; and pH of the pulp. The manuring with nitrogen influences in the production and the quality of the passion fruit plant-yellow, in the conditions of Cassilandia (State of Mato Grosso do Sul - Brazil), it can be applied from 116 to 173 kg ha-1 of nitrogen in covering. / A cultura do maracujazeiro amarelo é explorada comercialmente de norte a sul do Brasil, envolvendo regiões tropicais e subtropicais. Seu cultivo encontra-se em fase de expansão em razão das ótimas perspectivas de comercialização. Neste contexto o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da adubação nitrogenada na produção do maracujazeiro amarelo irrigado nas condições de Cassilândia (MS). Foi utilizado um experimento com delineamento em blocos casualizados ao acaso, sendo testadas 5 doses de nitrogênio (0, 80, 160, 240 e 320 kg ha-1), com 4 repetições, espaçadas em 3 m entre linhas e 4 metros entre plantas; cada unidade experimental foi constituída por 6 plantas, sendo 4 plantas a área útil. A condução da cutura foi realizada em forma de espaldeira, conduzido por um fio de arame a 1,8m de altura. A aplicação dos tratamentos foram parcelada em 6 vezes (11/2006 a 05/2007), iniciando 5 meses após o transplantio. A colheita foi realizada de 29/11/2006 a 17/08/2007. O aumento da adubação nitrogenada promoveu uma resposta de comportamento polinomial quadrática para o total de frutos; produção comercial e total; produtividade comercial; espessura da casca; o SST e pH do solo. O aumento das doses de N promoveu uma resposta decrescente para peso médio de frutos comerciáveis; rendimento de polpa e o número de sementes. Não sendo verificado efeito dos tratamentos para total de frutos comerciáveis, peso médio, diâmetro equatorial e comprimento de frutos; pH da polpa. A adubação nitrogenada influencia na produção e a qualidade do maracujazeiro amarelo , nas condições de Cassilândia (MS), pode ser aplicado de 116 a 173 kg ha-1 de nitrogênio em cobertura.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MauroST_DISSERT.pdf: 1583076 bytes, checksum: 21ea20c37f445bdcb3542826ae383cfd (MD5) Previous issue date: 2009-02-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The culture of the passion fruit plant-yellow it is explored commercially of north to south of Brazil, involving tropical and subtropical areas. Your cultivation is in expansion phase in reason of the great commercialization perspectives. In this context the objective of the work was to evaluate the effect of the manuring nitrogenada in the production of the yellow passion fruit plant irrigated in the conditions of Cassilandia (MS). The experimental design used was of randomized complete blocks whit 5 doses of nitrogen (0, 80, 160, 240 and 320 kg ha-1), with 4 repetitions, spaced in 3m between lines and 4m among plants; each experimental unit was constituted by 6 plants and 4 plants in the useful area. The conduction in the culture was accomplished in a wire thread to 1,8m of height of the soil. The application of the treatments was parceled out in 6 times (from 11/2006 to 05/2007), beginning 5 months after transplant of the seedlings. The crop was it accomplishes from 29/11/2006 to 17/08/2007. The increase of the manuring with nitrogen promoted an answer of behavior quadratic polinomial for the total of fruits you didn't trade; total of fruits; production commercial, no-commercial and total; commercial and no-commercial productivity; thickness of the peel; and SST. The increase of the doses of N promoted a decreasing answer for medium weight of marketable fruits; pulp revenue; number of seeds; and pH of the soil. Not being verified effect of the treatments for total of marketable fruits, weigh medium, diameter and fruit length; and pH of the pulp. The manuring with nitrogen influences in the production and the quality of the passion fruit plant-yellow, in the conditions of Cassilandia (State of Mato Grosso do Sul - Brazil), it can be applied from 116 to 173 kg ha-1 of nitrogen in covering. / A cultura do maracujazeiro amarelo é explorada comercialmente de norte a sul do Brasil, envolvendo regiões tropicais e subtropicais. Seu cultivo encontra-se em fase de expansão em razão das ótimas perspectivas de comercialização. Neste contexto o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da adubação nitrogenada na produção do maracujazeiro amarelo irrigado nas condições de Cassilândia (MS). Foi utilizado um experimento com delineamento em blocos casualizados ao acaso, sendo testadas 5 doses de nitrogênio (0, 80, 160, 240 e 320 kg ha-1), com 4 repetições, espaçadas em 3 m entre linhas e 4 metros entre plantas; cada unidade experimental foi constituída por 6 plantas, sendo 4 plantas a área útil. A condução da cutura foi realizada em forma de espaldeira, conduzido por um fio de arame a 1,8m de altura. A aplicação dos tratamentos foram parcelada em 6 vezes (11/2006 a 05/2007), iniciando 5 meses após o transplantio. A colheita foi realizada de 29/11/2006 a 17/08/2007. O aumento da adubação nitrogenada promoveu uma resposta de comportamento polinomial quadrática para o total de frutos; produção comercial e total; produtividade comercial; espessura da casca; o SST e pH do solo. O aumento das doses de N promoveu uma resposta decrescente para peso médio de frutos comerciáveis; rendimento de polpa e o número de sementes. Não sendo verificado efeito dos tratamentos para total de frutos comerciáveis, peso médio, diâmetro equatorial e comprimento de frutos; pH da polpa. A adubação nitrogenada influencia na produção e a qualidade do maracujazeiro amarelo , nas condições de Cassilândia (MS), pode ser aplicado de 116 a 173 kg ha-1 de nitrogênio em cobertura.

NOGUEIRA, Eliomar. Coeficiente de cultivo e lâminas de irrigação do Maracujazeiro Amarelo nas condições semiáridas. 2011. 70 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia Agrícola, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Agrícola, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-06-22T14:41:16Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_enogueira.pdf: 6330872 bytes, checksum: b45642fa70c9e615f28157c7d80c869a (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-06-22T14:55:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_enogueira.pdf: 6330872 bytes, checksum: b45642fa70c9e615f28157c7d80c869a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T14:55:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_enogueira.pdf: 6330872 bytes, checksum: b45642fa70c9e615f28157c7d80c869a (MD5) Previous issue date: 2007 / This work aims to determine the crop coefficie nt of the yellow passion fruit and to find irrigation levels that can raise the yield a nd quality of passion fruit production under the environmental conditions of the semiarid re gion of Piaui (Br). The experiment was conducted at the Projeto Piloto de Fruticultura Irrigada (Irrigated Fruit Culture Pilot Project) of the CODEVASF, in Santa Rosa, PI (06 ° 47 '5 6''S, 42 ° 17' 17''W). We used randomized blocks with six treatments and four replications, with four plants to a plot. The treatments (irrigation levels) were defined as percentages of the reference evapotranspiration (ETo): T1 (25% ETo), T2 (50% ETo), T3 (75% ETo), T4 ( 1 00% ETo), T5 (125% ETo) and T6 (150% ETo). It was installed a battery with three tensiom eters per treatment at depths of 0.10 m, 0.30 m and 0.50 m, to monitor the soil water. Determining the crop coefficient (Kc), we used the soil water balance, and for obtaining that, two batteries were installed, with tensiometers placed at depths of 0.10 m, 0.30 m 0.50 m within a radius of 0.30 m and 0.60 m from the stems of the plants in T4. The Kc values were estimated in the 41-240 days a fter transplanting (DAT). The irrigation le vels of 408.25 mm (T1), 463.41 mm (T2) 535.11 mm (T3), 609.98 mm (T4), 704.71 mm (T5) and 826.02 mm (T6) were applied on performing the experiment. We evaluated the morphological and physiologic al growth variables of yellow passion fruit (plant height, stem diameter, number of internod es, leaf area, leaf number and leaf water potential) and production traits (yield, fruit numb er, fruit weight, fruit transverse diameter and fruit longitudinal diameter). Analysis of varia nce showed that the irrigation significantly influenced stem diameter (P <0.05) in assessments conducted in December 2009, January and February 2010; leaf area (P < 0.01) for assessments conducted from Januar y to April 2010; number of leaves (P <0.05) for assessments conducted in March 2010 and (P <0.01) in April 2010; leaf water potential (P <0.01) at all testing times. Besides, the number of fruits (P<0.05), the average fruit weight (P <0.05) and the productivity (P <0.05) were found significantly responding to the irrigation level. Maximum yield (6763 kg ha-1) was obtained in 60 days of harvest, ie 25% of potential annual production of passion fruit was obtained with an irrigation level of 763.80 mm...Estimating to its full potential to the first year of production we obtained a value of 27,052 kg ha-1 yr -1. As for the average fruit weight, it ranged from 0.207 kg (T6) to 0,159 kg (T1). The maximum number of fruits (33 119 fruit ha -1) was obtained with an irrigation level of 760.21 mm. The Kc values ranged from 0.43 to 1.04 with a maximum recorded value at 211 to 220 DAT. The average Kc obtained at the vegetative stage, was 0.57, and the average Kc at the production stage(flower ing and fruiting)was 0.94. Therefore: The irrigation level most suitable for the passion fruit must be between 72% and 100% ETo; The assessed morphophysiological growth variables of the yellow passion fruit are influenced by the variation of irrigation level applied to culture; The yield, average weight and fruit number of the yellow pa ssion plant are also influenced by the same variation of irrigation level / Coeficiente de cultivo e lâminas de irrigação do maracujazeiro amarelo nas condições semiáridas. Orientador: Valdemício Ferreira de Sousa. Conselheiros: Thales Vinícius de Araújo Viana, Luís de França Camboim Neto. O objetivo do trabalho foi determinar o coeficiente de cultivo do maracujazeiro amarelo e definir lâminas de irrigação capazes de elevar a produtividade da cultura e a qualidade da produção nas condições ambientais da região semiárida do Piauí. O experimento foi realizado na área do Projeto Piloto de Fruticultura Irrigada da CODEVASF, no município de Santa Rosa, PI (06° 47’ 56’’ S, 42° 17’ 17’’ W). Utilizou-se delineamento experimental blocos ao acaso com seis tratamentos e quatro repetições, parcela com quatro plantas úteis. Os tratamentos (lâminas de irrigação) foram definidos em função de percentagens da evapotranspiração de referência (ETo): T1 (0,25*ETo), T2 (0,50*ETo), T3 (0,75*ETo), T4 (1,00*ETo), T5 (1,25*ETo) e T6 (1,50*ETo). Para o monitoramento da água no perfil do solo instalou-se uma bateria com três tensiômetros por tratamento nas profundidades de 0,10 m; 0,30 m e 0,50 m. Para determinação do coeficiente de cultivo (Kc), utilizou-se o balanço de água no solo e para tanto, foram instaladas duas baterias com tensiômetros distribuídos nas profundidades de 0,10 m; 0,30 m e 0,50 m, num raio de 0,30 m e 0,60 m do caule das plantas no T4 . No período de 41-240 dias após transplantio (DAT) estimou-se valores de Kc. Na execução do experimento foram aplicadas as respectivas lâminas de irrigação 408,25 mm (T1), 463,41 mm (T2), 535,11 mm (T3), 609,98 mm (T4), 704,71 mm (T5) e 826,02 mm (T6). Foram avaliadas as características morfofisiológicas de crescimento do maracujazeiro amarelo (altura da planta, diâmetro do caule, número de internós, área foliar, número de folhas e potencial hídrico foliar; características de produção (produtividade, números de frutos, peso médio de frutos, diâmetros transversal e longitudinal de frutos). A análise de variância mostrou que as lâminas de irrigação influenciaram significativamente o (diâmetro de caule (P<0,05) nas avaliações realizadas em dezembro de 2009, janeiro e fevereiro de 2010; área foliar (P<0,01) para avaliações realizadas de janeiro a abril de 2010; número de folha (P<0,05) para as avaliações realizadas em março 2010 e (P<0,01) para abril de 2010); o potencial hídrico nas folhas (P<0,01) em todas as épocas de avaliação. E foi significativo o número de frutos (P<0,05), peso médio do fruto (P<0,05) e a produtividade (P<0,05). A produtividade máxima (6.763 kg ha-1) obtida em 60 dias de colheita, isto é, 25% do potencial produtivo anual do maracujazeiro foi obtida com aplicação da lâmina de 763,80 mm e estimando-se para seu potencial total para o primeiro ano de produção obteve-se o valor de 27.052 kg ha-1 ano-1; o peso médio de fruto variou de 0,207 kg (T6) e 0,159 kg (T1); foi registrado o número máximo de frutos (33.119 frutos ha-1) com lâmina de 760,21 mm. Os valores de Kc variaram de 0,43 a 1,04 com registro de máximo valor em 211 a 220 DAT. E o Kc médio obtido para a fase vegetativa foi de 0,57 e para fase de produção (floração e frutificação) de 0,94. Conclui-se que, as lâminas de irrigação mais adequadas para maracujazeiro amarelo se situam entre o equivalente 0,72*ETo e 1,00*ETo; as características morfofisiológicas de crescimento do maracujazeiro amarelo avaliadas, são influenciadas pela variação de lâminas de irrigação aplicada à cultura; a produtividade do maracujazeiro amarelo, peso médio e número de frutos são influenciados pela diferenciação de lâminas de irrigação aplicada à cultura.