Orientador: Pedro de Magalhães Padilha / Banca: Clelia Akiko Hiruma Lima / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: Paulo dos Santos Roldan / Banca: Lincolin Carlos Silva de Oliveira / Resumo: Inserido na realidade de contaminação dos rios amazônicos pelo mercúrio, este trabalho busca, por meio do estudo metaloproteômico, a identificação e a caracterização de proteínas do tecido muscular de três espécies diferentes de peixes do rio Madeira que possam atuar como possíveis biomarcadores da toxicidade deste elemento na região de influência do Aproveitamento Hidrelétrico de Jirau (AHE JIRAU). As estratégias para este estudo foram separadas em três componentes distintos: de seletividade, de sensibilidade e estrutural. Ao longo desta pesquisa, diferentes metodologias foram empregadas nessas etapas para o estudo metaloproteômico: componente de seletividade - 2D PAGE no fracionamento bidimensional das proteínas; componentes de sensibilidade - SR XRF e GFAAS para identificação e quantificação do mercúrio nos spots proteicos, respectivamente; componente estrutural - ESI MS MS na caracterização das proteínas identificadas com mercúrio em sua estrutura. As espécies de peixes estudadas foram: dourada (Brachyplatystoma rousseauxii), pacu (Mylossoma sp., Myleus sp.) e jaraqui (Semaprochilodus sp.). Entre os resultados obtidos, a 2D PAGE se mostrou eficiente no fracionamento proteico do tecido muscular de peixes. Utilizando análises qualitativas por SR XRF foi possível identificar a presença de mercúrio no spot 68 da dourada (massa molar 20,8 kDa e pI 5,6) e no spot 72 do pacu (massa molar 19,8 kDa e pI 7,5). Determinações por GFAAS permitiram a quantificação do mercúrio no tecido muscular e em 28 spots, que apresentaram concentrações de 11,3 a 41,2 mg g-1 de mercúrio em sua composição; esses resultados possibilitaram o cálculo da estimativa do número de átomos de mercúrio por molécula de proteína entre os spots estudados. Após análise por ESI MS MS, foi possível caracterizar oito proteínas com diferentes isoformas em 21 spots que apresentaram pI de 3,5 a 9,8 e massa molar ... / Abstract: Inserted in the context of mercury contamination of Amazonian rivers, this work pursues through metaloproteomic study the identification and characterization of proteins from muscle tissue of three different species of fish from Madeira River that may act as potential biomarkers of toxicity of this element in the region of influence of "Jirau Power Plant". The strategies for this study were separated into three distinct components: selectivity, sensitivity and structural. Throughout this research, different methodologies were used in these steps for metaloproteomic study: component of selectivity - 2D PAGE in two-dimensional proteins fractionation; components of sensitivity - SR XRF and GFAAS for mercury identification and quantification in protein spots, respectively; structural component - ESI MS MS in the characterization of proteins identified with mercury in its structure. The species studied were: "dourada" (Brachyplatystoma rousseauxii), "pacu" (Mylossoma sp., Myleus sp.) and "jaraqui" (Semaprochilodus sp.). Among the results, the 2D PAGE proved efficient in protein fractionation of fish muscle tissue. Using qualitative analysis by SR XRF was possible to identify the presence of mercury in the spot 68 of "dourada" (molar mass of 20.8 kDa and pI 5.6) and spot 72 of "pacu" (molar mass of 19.8 kDa and pI 7.5). Determinations by GFAAS allowed the mercury quantification in muscle tissue and in 28 spots that showed concentrations from 11.3 to 41.2 mg g-1 of mercury in its composition; these results enabled an estimative calculation of the number of mercury atoms per protein molecule between the spots studied. After analysis by ESI MS MS it was possible to characterize eight proteins with different isoforms in 21 spots that showed pI 3.5 to 9.8 and molar mass between 9.9 and 18.1 kDa, indicating that these proteins may be potential candidates for mercury biomarkers in ... / Doutor

Resumo: Parâmetros enzimáticos (CAT, GPx, GST, AChE e CbE), níveis de peroxidação lipídica, teste de inibição in vitro da AChE e CbE foram analisados no fígado de Pterygoplichtys anisitsi e Oreochromis niloticus expostos a 100 µg/L de cloreto de mercúrio por dois e dez dias. Variáveis hematológicas (eritrócitos, hemoglobina, hematócrito, VCM e CHCM) em P. anisitsi foram avaliados adicionalmente. A atividade da AChE em P. anisitsi e O. niloticus não apresentou diferenças significativas, mas in vitro esta enzima apresentou um decréscimo em altas concentrações testadas (0,01 e 0,1 mM). O HgCl2 ocasionou um decréscimo da CbE em peixes expostos por dois dias (P<0,05). Com relação aos parâmetros hematológicos, ocorreu uma diminuição nos índices de eritrócitos em cascudos após dois e dez dias. Em P. anisitisi foi observado um decréscimo na atividade enzimática da GST após dez dias de tratamento, enquanto que, em O. niloticus observou-se um aumento na GST após dez dias de exposição. Os níveis de peroxidação lipídica também aumentaram em tilápias expostas por dez dias. O presente estudo teve a finalidade de nos fornecer informações sobre a aplicabilidade dos métodos enzimáticos e variáveis hematológicas para fins de biomonitoramento de metais tóxicos, em mananciais, utilizando organismos bioindicadores. / Abstract: Enzymatic activities (CAT, GST, GPx AChE and CbE), lipid peroxidation levels, and in vitro inhibition tests were analyzed in the liver of the Pterygoplichtys anisitsi and Oreochromis niloticus exposed to 100 µg/L of mercury chloride (HgCl2) for two and ten days. Haematological variables (erythrocyte, hemoglobin, hematocrit, MCV and MCHC) were evaluated additionally in P. anisitsi. AChE activity was not affected in P. anisitsi and O. niloticus exposed to mercury chloride but a decreased at the highest concentrations tested (0,01 and 0,1 mM) was found in vitro. CbE activity was decreased in fishes exposed to mercury for two days (P<0,05). With respect to the haematological parameters, decrease in the erythrocyte was observed after two days and ten days. In P. anisitsi GST was decreased after ten days exposure, while this enzyme was higher in O. niloticus exposed to HgCl2 for the same period; lipid peroxidation levels was also increased after ten exposure days in O. niloticus, indicating the involvement of oxidative stress in HgCl2 toxicity. The present study aimed to supply data about potential use of the enzymatic methods and haematological variables as biomarkers of the presence of mercury contamination in biomonitoring studies. / Orientador: Eduardo Alves de Almeida / Coorientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: Altair Benedito Moreira / Banca: Hamilton Cabral / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-30Bitstream added on 2014-06-13T18:08:54Z : No. of bitstreams: 1 castro_ld_me_sjrp.pdf: 655870 bytes, checksum: f059a320529090224063851307b53692 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Parâmetros enzimáticos (CAT, GPx, GST, AChE e CbE), níveis de peroxidação lipídica, teste de inibição in vitro da AChE e CbE foram analisados no fígado de Pterygoplichtys anisitsi e Oreochromis niloticus expostos a 100 µg/L de cloreto de mercúrio por dois e dez dias. Variáveis hematológicas (eritrócitos, hemoglobina, hematócrito, VCM e CHCM) em P. anisitsi foram avaliados adicionalmente. A atividade da AChE em P. anisitsi e O. niloticus não apresentou diferenças significativas, mas in vitro esta enzima apresentou um decréscimo em altas concentrações testadas (0,01 e 0,1 mM). O HgCl2 ocasionou um decréscimo da CbE em peixes expostos por dois dias (P<0,05). Com relação aos parâmetros hematológicos, ocorreu uma diminuição nos índices de eritrócitos em cascudos após dois e dez dias. Em P. anisitisi foi observado um decréscimo na atividade enzimática da GST após dez dias de tratamento, enquanto que, em O. niloticus observou-se um aumento na GST após dez dias de exposição. Os níveis de peroxidação lipídica também aumentaram em tilápias expostas por dez dias. O presente estudo teve a finalidade de nos fornecer informações sobre a aplicabilidade dos métodos enzimáticos e variáveis hematológicas para fins de biomonitoramento de metais tóxicos, em mananciais, utilizando organismos bioindicadores. / Enzymatic activities (CAT, GST, GPx AChE and CbE), lipid peroxidation levels, and in vitro inhibition tests were analyzed in the liver of the Pterygoplichtys anisitsi and Oreochromis niloticus exposed to 100 µg/L of mercury chloride (HgCl2) for two and ten days. Haematological variables (erythrocyte, hemoglobin, hematocrit, MCV and MCHC) were evaluated additionally in P. anisitsi. AChE activity was not affected in P. anisitsi and O. niloticus exposed to mercury chloride but a decreased at the highest concentrations tested (0,01 and 0,1 mM) was found in vitro. CbE activity was decreased in fishes exposed to mercury for two days (P<0,05). With respect to the haematological parameters, decrease in the erythrocyte was observed after two days and ten days. In P. anisitsi GST was decreased after ten days exposure, while this enzyme was higher in O. niloticus exposed to HgCl2 for the same period; lipid peroxidation levels was also increased after ten exposure days in O. niloticus, indicating the involvement of oxidative stress in HgCl2 toxicity. The present study aimed to supply data about potential use of the enzymatic methods and haematological variables as biomarkers of the presence of mercury contamination in biomonitoring studies.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:47Z : No. of bitstreams: 1 000865809_20170301.pdf: 260503 bytes, checksum: 3e79e7bc77d518ffd72f73f4301727cb (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:33Z: 000865809_20170301.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:42Z : No. of bitstreams: 1 000865809.pdf: 1846324 bytes, checksum: 3b33f5972e852e7c38fcb0ac2633d033 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / CAPES: 13836/2013-07 / CNPq: 140359/2011-7 / FAPESP: 12/00561-0

Orientador: Reinaldo José da Silva / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Lúcia Helena O'Dwer de Oliveira / Banca: Luis Eduardo Roland Tavares / Banca: Ana Cécília Amado Xavier de Oliveira / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Márcia Cristina Bisinoti / Coorientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Gisela de Aragão Umbuzeiro / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Resumo: As substâncias húmicas aquáticas possuem grande importância ambiental por terem a capacidade de complexar íons metálicos presentes no ambiente influenciando a disponibilidade dos mesmos, tornando-os geralmente menos tóxicos para a biota. As Metalotioneínas (MT) apresentam a característica de regular metais nos organismos aquáticos, sendo induzidas na presença de metais e outros compostos e, portanto utilizadas como biomarcador ambiental. O benzo[a]pireno é oriundo de fontes biogênicas, pirogênicas e petrogênicas e seu efeito na indução de MT em tilápias é desconhecido. Neste contexto, foi avaliada a indução de MT em peixes expostos a metais tóxicos individualmente e na mistura, na ausência e presença de substâncias húmicas aquáticas (SHA), bem como na presença de benzo[a]pireno. Neste trabalho foram feitas a otimização e padronização do método para quantificação de metalotioneínas em fígado e brânquias de peixes empregando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detector de Fluorescência (HPLC-FD). Também foi avaliada a influência do tempo de duração dos ensaios na indução de metalotioneínas em peixes expostos a metais de interesse ambiental durante 3, 7 e 14 dias. Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) foram alocadas em aquários individuais e submetidas à exposição a concentrações regulamentadas pela resolução Conama 357/2005 para rios Classe 2, Classe 3 e 5 vezes Classe 3 de Cádmio, Cobre, Chumbo, Ferro e Benzo[a]pireno isoladamente, bem como a mistura dos metais na presença e ausência de SHA. A concentração de metal "livre" foi acompanhada durante os experimentos de exposição empregando o Sistema de Ultrafiltração com Fluxo Tangencial. Em todas as amostras de água dos experimentos de exposição e no tecido muscular dos peixes utilizados foram realizadas a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aquatic humic substances have great environmental importance to have the ability to complex metal ions present in the environment influencing their availability, making them generally less toxic to biota. Metallothioneins (MT) have the characteristic of regular metals on aquatic organisms being induced in the presence of metals and other compounds and therefore used as a biomarker environment. Benzo[a]pyrene is formed by biogenic sources, pyrogenic and petrogenic and its effect on the induction of MT in tilapia is unknown. In this context, we evaluated the induction of MT in fish exposed to toxic metals (Fe, Cu, Cd and Pb) individually and all these metal combined in the absence and presence of humic substances (SHA), as well as in the presence of benzo[a]pyrene. In this work we made the optimization and standardization of the method for quantification of metallothionein in liver and gills of fish employing the technique of High Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detector (HPLC-FD). We also evaluated the influence of the duration of the tests in the induction of metallothionein in fishes exposed to metals of environmental interest for 3, 7 and 14 days. Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were placed in individual aquaria and subjected to exposure to concentrations regulated by CONAMA 357/2005 Resolution for rivers Class 2, Class 3 and 3 fold the concentrations to Class 3 for Cadmium, Copper, Lead, Iron and Benzo[a]pyrene separately, and all these metals combined in the presence and absence of SHA. The concentration of free metal was monitored during the exposure experiments using a Tangential Flow Ultrafiltration System (TFUS). In all samples of water exposure experiments and in the muscle tissue of fishes were quantified total metal employing a Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrophotometer... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Maria Aparecida Marin Morales / Banca: Glória Elisa Florido Mendes / Resumo: Os contaminantes ambientais são relevantes no contexto ecotoxicológico devido a seus efeitos citotóxicos e carcinogênicos nos organismos não-alvos. A análise de biomarcadores bioquímicos constitui uma ferramenta eficiente nos estudos de avaliação de risco e impacto ambiental, pois conseguem realizar a detecção precoce dos efeitos nos organismos em virtude da exposição aos poluentes ambientais. O Brasil está entre os maiores consumidos de agrotóxicos do mundo e nesse contexto destacam-se os compostos organofosforados (OP) e carbamatos (CA). Neste trabalho foram analisadas em brânquias, fígado e tecido nervoso da tilápia Oreochromis niloticus e do cascudo Pterygoplichthys anisitsi após 2 e 7 dias, a atividade das enzimas acetilcolinesterase (AChE), carboxilesterase (CbE), glutationa S-transferase (GST), glutationa peroxidase (GPx), 7- etóxiresorufina-O-deetilase (EROD), e peroxidação lipídica como candidatos a biomarcadores bioquímicos sensíveis à contaminação por diazinon (OP) e carbaril (CA). A morfologia do fígado dos cascudos foi avaliada após 7 dias de exposição aos pesticidas, em fragmentos de tecidos corados com HE. A exposição aos pesticidas causou significativa inibição da AChE e CbE nas duas espécies; aumento significativo da GST no fígado dos cascudos expostos ao OP , no fígado e brânquias das tilápias expostas ao CA e nas brânquias dos cascudos expostos ao CA; inibição da EROD no fígado das duas espécies expostas ao OP e tendência à ativação nas duas espécies expostas ao CA; tendências à diminuição dos níveis de malondialdeído e aumento da GPx no fígado nas duas espécies. Os cascudos expostos ao OP mostraram aumento na taxa de núcleos hipercromáticos e esteatose, e em ambas as exposições os cascudos apresentaram aumento no diâmetro do núcleo dos hepatócitos, sendo mais acentuado pelo composto CA. Estes resultados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Environmental contaminants are ecotoxicologically relevant due to their cytotoxic and carcinogenic effects in non-targets organisms. The analysis of biochemical biomarkers is a powerful tool in studies of risk assessment and environmental impact, because it can achieve early detection of the effects on organisms as a result of exposure to environmental pollutants. Brazil is among the largest world consumers of pesticides, including organophosphates and carbamates. In this work, after 2 and 7 days of the treatment, the activity of the enzymes acetylcholinesterase (AChE), carboxylesterase (CbE), glutathione S-transferase (GST), glutathione peroxidase (GPx), ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD) and lipid peroxidation were analyzed in gills, liver and nervous tissue of tilapia Oreochromis niloticus and armoured catfish Pterygoplichthys anisitsi, as candidates of sensible biochemical biomarkers of contamination by diazinon (OP) and carbaryl (CA). The morphology of the liver of the armoured catfishes was examined after 7 days of exposure to pesticides, in fragments of tissue stained with HE. Exposure to pesticides caused significant inhibition of AChE and CBE in the two species, significant increase in GST in the liver of armoured catfishes exposed to OP, in the liver and gills of tilapia exposed to CA and the gills of armoured catfishes exposed to CA, EROD inhibition in the liver of both species exposed to OP and a trend of activation in both species exposed to CA, and trends to decreased levels of malondialdehyde and increased GPx in the liver in both species. The catfishes exposed to OP showed increased rate of hyperchromatic nuclei and steatosis, and both armoured catfishes showed increase in the diameter of the nucleus of hepatocytes, being more accentuated by the armoured catfishes exposed to CA. These results suggest the usefulness of the activity of AChE, CBE, GST and morphological... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-15Bitstream added on 2014-06-13T19:08:30Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_acf_me_sjrp.pdf: 796473 bytes, checksum: 478bd32abee6cd2efceb78698757085b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os contaminantes ambientais são relevantes no contexto ecotoxicológico devido a seus efeitos citotóxicos e carcinogênicos nos organismos não-alvos. A análise de biomarcadores bioquímicos constitui uma ferramenta eficiente nos estudos de avaliação de risco e impacto ambiental, pois conseguem realizar a detecção precoce dos efeitos nos organismos em virtude da exposição aos poluentes ambientais. O Brasil está entre os maiores consumidos de agrotóxicos do mundo e nesse contexto destacam-se os compostos organofosforados (OP) e carbamatos (CA). Neste trabalho foram analisadas em brânquias, fígado e tecido nervoso da tilápia Oreochromis niloticus e do cascudo Pterygoplichthys anisitsi após 2 e 7 dias, a atividade das enzimas acetilcolinesterase (AChE), carboxilesterase (CbE), glutationa S-transferase (GST), glutationa peroxidase (GPx), 7- etóxiresorufina-O-deetilase (EROD), e peroxidação lipídica como candidatos a biomarcadores bioquímicos sensíveis à contaminação por diazinon (OP) e carbaril (CA). A morfologia do fígado dos cascudos foi avaliada após 7 dias de exposição aos pesticidas, em fragmentos de tecidos corados com HE. A exposição aos pesticidas causou significativa inibição da AChE e CbE nas duas espécies; aumento significativo da GST no fígado dos cascudos expostos ao OP , no fígado e brânquias das tilápias expostas ao CA e nas brânquias dos cascudos expostos ao CA; inibição da EROD no fígado das duas espécies expostas ao OP e tendência à ativação nas duas espécies expostas ao CA; tendências à diminuição dos níveis de malondialdeído e aumento da GPx no fígado nas duas espécies. Os cascudos expostos ao OP mostraram aumento na taxa de núcleos hipercromáticos e esteatose, e em ambas as exposições os cascudos apresentaram aumento no diâmetro do núcleo dos hepatócitos, sendo mais acentuado pelo composto CA. Estes resultados... / Environmental contaminants are ecotoxicologically relevant due to their cytotoxic and carcinogenic effects in non-targets organisms. The analysis of biochemical biomarkers is a powerful tool in studies of risk assessment and environmental impact, because it can achieve early detection of the effects on organisms as a result of exposure to environmental pollutants. Brazil is among the largest world consumers of pesticides, including organophosphates and carbamates. In this work, after 2 and 7 days of the treatment, the activity of the enzymes acetylcholinesterase (AChE), carboxylesterase (CbE), glutathione S-transferase (GST), glutathione peroxidase (GPx), ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD) and lipid peroxidation were analyzed in gills, liver and nervous tissue of tilapia Oreochromis niloticus and armoured catfish Pterygoplichthys anisitsi, as candidates of sensible biochemical biomarkers of contamination by diazinon (OP) and carbaryl (CA). The morphology of the liver of the armoured catfishes was examined after 7 days of exposure to pesticides, in fragments of tissue stained with HE. Exposure to pesticides caused significant inhibition of AChE and CBE in the two species, significant increase in GST in the liver of armoured catfishes exposed to OP, in the liver and gills of tilapia exposed to CA and the gills of armoured catfishes exposed to CA, EROD inhibition in the liver of both species exposed to OP and a trend of activation in both species exposed to CA, and trends to decreased levels of malondialdehyde and increased GPx in the liver in both species. The catfishes exposed to OP showed increased rate of hyperchromatic nuclei and steatosis, and both armoured catfishes showed increase in the diameter of the nucleus of hepatocytes, being more accentuated by the armoured catfishes exposed to CA. These results suggest the usefulness of the activity of AChE, CBE, GST and morphological... (Complete abstract click electronic access below)