Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-03-02T23:14:28Z No. of bitstreams: 1 EdinaraTarginoDeMelo_DISSERT.pdf: 2062041 bytes, checksum: b2de2a9d0f47d751e6c33c3d69b984a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-04T23:26:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EdinaraTarginoDeMelo_DISSERT.pdf: 2062041 bytes, checksum: b2de2a9d0f47d751e6c33c3d69b984a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-04T23:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EdinaraTarginoDeMelo_DISSERT.pdf: 2062041 bytes, checksum: b2de2a9d0f47d751e6c33c3d69b984a7 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / No Brasil, ? grande a incid?ncia de animais pe?onhentos, dentre os quais se destacam os escorpi?es por sua import?ncia m?dica, sendo sua pe?onha fonte de diversas subst?ncias qu?micas com atividades biol?gicas e farmacol?gicas ainda n?o compreendidas, incluindo diversos pept?deos bioativos. Pept?deos antimicrobianos (PAMs) s?o componentes do sistema imune de procariotos e eucariotos utilizados como primeira linha de defesa contra micro-organismos. No presente trabalho, foi caracterizado o primeiro PAM do escorpi?o Tityus stigmurus, nomeado Stigmurina, previamente identificado por meio do transcriptoma da gl?ndula de veneno desta esp?cie. As caracter?sticas da Stigmurina foram investigadas por modelagem computacional e constru??o de dendrograma. Al?m disso, as caracter?sticas estruturais da Stigmurina foram investigadas por dicro?smo circular em ?gua, em 2, 2, 2- trifluoethanol (TFE) e em dodecil sulfato de s?dio (SDS) e os modelos refinados por simula??es de din?mica molecular. Testes in vitro foram empregados para investigar a atividade antibacteriana, antif?ngica, hemol?tica e citot?xica do veneno bruto e da Stigmurina. Os resultados mostraram que a sequ?ncia selecionada codifica uma prote?na madura com 17 res?duos de amino?cidos e o dendrograma revela um caso de converg?ncia evolutiva. Os espectros de dicro?smo demonstraram flexibilidade conformacional, predominando estrutura estendida e ??folha, al?m de not?vel capacidade de renatura??o. A pe?onha bruta n?o apresentou atividade relevante nos testes antimicrobianos para as concentra??es testadas. No entanto, a Stigmurina mostrou um amplo espectro de atividade antibacteriana, com concentra??es inibit?rias m?nimas (CIMs) entre 31,25?g/mL a 250 ?g/mL para diferentes micro-organismos, enquanto que os resultados para a avalia??o da atividade hemol?tica nestas concentra??es foram baixas. Nos estudos de citotoxicidade, a pe?onha bruta foi incapaz de reduzir a viabilidade celular em c?lulas VERO E6, por?m sua toxicidade em c?lulas SiHa foi significativamente superior, correspondendo a uma IC50 de 3,6 ?g/mL. J? nos testes com a Stigmurina, as concentra??es capazes de reduzir a viabilidade celular das c?lulas VERO E6 e SiHa em 50% foram de 275,67 ?g/mL e 212,54 ?g/mL, respectivamente.Os resultados sugerem que a Stigmurina poder ser considerada como um potencial medicamento anti-infeccioso. / In Brazil, there is a high incidence of venomous animals. Among them, scorpions are highlighted by their medical importance, and for being their venom a source of several molecules with biological and pharmacological activity not yet fully understood, including several bioactive peptides. Antimicrobial peptides (AMPs) are components of the immune system in prokaryotes and eukaryotes, used in the first line of defense against microorganisms. In the present study, we characterized the first PAM previously identified through transcriptome of the venom gland of the scorpion Tityus stigmurus, named Stigmurin. The characteristics of Stigmurin were investigated by computational modeling and construction of dendrogram. In vitro tests investigated the antibacterial, antifungal, haemolytic and cytotoxic effects of crude venom and Stigmurin. In addition, the structural characteristics of Stigmurin were investigated by circular dochroism in water, 2, 2 , 2- trifluoethanol (TFE) and sodium dodecyl sulfate (SDS) and the models were refined by molecular dynamics simulations. The results showed that the selected sequence encodes a mature protein of 17 amino acid residues and the dendrogram reveals a case of convergent evolution. The crude venom showed no antimicrobial activity, however, Stigmurin exhibited a broad spectrum of antibacterial activity, with minimal inhibitory concentrations (MIC) ranging from 31.25 and 250 ?g/mL for different strains, while the hemolytic activity at these concentrations was low. In cytotoxicity studies, the crude venom was unable to reduce cell viability in VERO E6 cells; in contrast, its activity in SiHa cells was significantly higher, corresponding to IC50 of 3.6 ?g/mL. For Stigmurin the concentration sable to decrease cell viability of Vero E6 and SiHa cells in 50% were 275.67 ?g/mL and 212.54 ?g/mL, respectively. The dichroism spectra revealed the conformational flexibility, with predominating extended and ??sheet structures, as well as a remark able renaturation ability. The results suggest that Stigmurin could be considered as a potential antiinfective drug

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-09-20T20:31:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) gabriele_azevedo_cardoso.pdf: 4324631 bytes, checksum: 3efd70a64b9fe1de1234371d61299990 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-10-09T13:35:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) gabriele_azevedo_cardoso.pdf: 4324631 bytes, checksum: 3efd70a64b9fe1de1234371d61299990 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T13:35:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) gabriele_azevedo_cardoso.pdf: 4324631 bytes, checksum: 3efd70a64b9fe1de1234371d61299990 (MD5) Previous issue date: 2017 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / A necessidade de desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos cresce ? medida que se torna maior a resist?ncia de microrganismos aos antibi?ticos usualmente empregados. Nesse sentido, os pept?deos antimicrobianos (PAMs) surgem como uma excelente alternativa para o desenvolvimento de novos antibi?ticos. O presente trabalho prop?s a s?ntese do pept?deo antimicrobiano LyeTx-I para estudos de mecanismo de a??o em membranas bacterianas, empregando diferentes t?cnicas biof?sicas e estruturais. O pept?deo LyeTx-I, composto por 24 res?duos de amino?cidos, foi isolado pela primeira vez do veneno de aracn?deos da esp?cie Lycosa erythrognata. Utilizando como t?cnicas principais a ITC e a RMN para obten??o de par?metros cin?ticos, termodin?micos e da intera??o pept?deo-membrana, foi poss?vel avaliar a rela??o estrutura e atividade do pept?deo LyeTx-I. Foram utilizadas ainda, t?cnicas complementares de CD, extravasamento de CF, fluoresc?ncia de Trp, DLS e, potencial zeta para obter informa??es adicionais acerca do modo de intera??o do pept?deo. Observou-se a predomin?ncia de conforma??o helicoidal do pept?deo LyeTx-I, tanto em meios biomim?ticos zwitteri?nicos, quanto em meios ani?nicos. Em meios ani?nicos, observou-se maior conte?do de ?-h?lice, bem como maior constante de intera??o, enquanto que em presen?a de ambientes zwitteri?nicas foram observadas menor helicidade e constante de intera??o. Os dados termodin?micos, obtidos para ambos os meios, mostraram que o processo de intera??o pept?deo-membrana ? dirigido principalmente pela componente entr?pica, uma vez que a componente ent?lpica ? menor. Os dados estruturais e termodin?micos foram coerentes com os demais estudos biof?sicos. Foi observada a partir da an?lise de extravasamento de CF maior capacidade de forma??o de poros no meio ani?nico. Os dados de fluoresc?ncia intr?nseca de Trp e de supress?o de fluoresc?ncia por acrilamida mostraram maior mudan?a de ambiente qu?mico para apolar, do res?duo de Trp-2, quando em presen?a de meio biomim?tico ani?nico. Dessa forma, o pept?deo apresenta maior capacidade de permeabilizar a membrana ani?nica. Al?m disso, o estudo comparativo entre os meios zwitteri?nicos e ani?nicos, permitiu verificar que, embora a intera??o eletrost?tica seja importante para a intera??o pept?deo-membrana, a permeabiliza??o do LyeTx-I na membrana fosfolip?dica ? fundamental para a lise celular. Dessa forma, este estudo mostra que o pept?deo LyeTx-I apresenta elevada prefer?ncia por intera??o com bicamadas fosfolip?dicas ani?nicas, o que faz dele um potencial agente bactericida. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / The demand for the development of new antimicrobial agents increases in line with the resistance of microorganisms to the antibiotics usually employed. In this sense, antimicrobial peptides (AMPs) appear as an alternative to the classical antibiotics. The present work proposed the synthesis of the antimicrobial peptide LyeTx-I for studies of mechanism of action in bacterial membranes using a set of biophysical and structural techniques. LyeTx-I peptide is composed of 24 amino acid residues and was isolated for the first time from the venom of the Lycosa erythrognata arachnid species. In order to evaluate the structure-activity relationship of the LyeTx-I, we have employed ITC and NMR as main techniques to obtain the kinetic, thermodynamic and structural parameters of the peptide-membrane interaction. Complementary measurements of CD, CF extravasation, Trp fluorescence, DLS and zeta potential were also used as additional information about the mode of action of the peptide. The ?-helical conformation of the LyeTx-I peptide was observed either in presence of zwitterionic and anionic biomimetic media. Nevertheless, a higher ?-helix content and interaction constant was observed for LyeTx-I in all anionic media when compared to the zwitterionic environments. The thermodynamic data gathered in both media, showed that the peptide-membrane interaction is driven mainly by the entropic contributions, since the enthalpic component is smaller. The structural and thermodynamic data were consistent with the complementary biophysical experiments. It was observed from the CF extravasation a greater capacity of pore formation in the anionic medium. Intrinsic Trp fluorescence showed also a greater change of the residue of Trp-2 to the apolar chemical environment in the presence of anionic biomimetic medium. In this way, the peptide presents a higher capacity to permeabilize the anionic membrane. In addition, the comparative study between the zwitterionic and anionic media, reveals that, although the electrostatic interaction is important to the peptide-membrane interaction, the permeabilization of the LyeTx-I peptide in the phospholipid membrane is fundamental for the cellular lysis. Finally, the study clearly shows the high preference of LyeTx-I for interacting anionic phospholipid bilayers, which makes it a potential bactericidal agent.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 411926.pdf: 537628 bytes, checksum: ad84cc7d4a6b34220ad5f86256433b5f (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / As caderinas desempenham um papel-chave na manuten??o das ades?es c?lula-c?lula e altera??es em sua express?o tem implica??es significativas na homeostasia tecidual, estando envolvidas na progress?o do c?ncer. O RC-3095 e um antagonista sint?tico do receptor do pept?deo liberador de gastrina capaz de restringir o crescimento de tumores pela a??o inibit?ria sobre prolifera??o, aumento da motilidade e morfog?nese de c?lulas tumorais, representando uma nova e promissora estrat?gia farmacol?gica no tratamento anti-tumoral. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito do tratamento com RC-3095 durante a progress?o tumoral da linhagem de adenocarcinoma colorretal HT-29 sobre a express?o de caderinas dos tipos E e N. Nossos resultados corroboram achados pr?vios que demonstraram o efeito negativo do RC-3095 sobre a viabilidade celular, refor?ando seu potencial no tratamento do c?ncer colorretal. O tratamento com RC-3095, contudo, n?o alterou o perfil de express?o de caderinas durante o per?odo de 48h estudado. Neste per?odo n?o foi detectada express?o de caderina do tipo N, enquanto a express?o de caderina E diminui progressivamente independente do tratamento com RC-3095, sugerindo que a adesividade celular n?o e alvo do antagonista do receptor do pept?deo liberador de gastrina nas condi??es estudadas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 464249.pdf: 13663409 bytes, checksum: 370383758e5762e6645f52a510e7dfab (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Lung cancer is the most commonly diagnosed type of cancer and the leading cause of cancer related mortality in the world, causing nearly one million deaths per year. Among all histological types, adenocarcinoma is the most frequent one (75-80%). Gastrin-releasing peptide (GRP) is considered to be a mitogen, capable of inducing cell proliferation, since it is involved in fetal lung development. This neuropeptide had its effect on tumor growth first identified in human cells of small cell lung cancer, acting as an autocrine growth factor for tumor tissues by binding to its receptor GRPR. The receptor has been found in many tumor types such as prostate, breast, stomach, pancreas and colon. Moreover, this peptide acts as a morphogen, in angiogenesis and is related to inflammatory processes and in the regulation of cells of the immune system. Furthermore, asymptomatic smokers have high levels of GRP in bronchoalveolar lavage and urine. However, little is known about its effects in tumorigenesis and metastasis, and which molecular mechanisms and signaling pathways are responsible for the effects found. Our group demonstrated recently that GRP could act as a chemotactic molecule for neutrophils. Thus, we hypothesized that GRP could be also a chemotactic stimulus to tumor cells expressing the GRPR. In this study, we tested this hypothesis by examining the effect of GRP on proliferation, survival and migration of cells from the adenocarcinoma cell line A549, seeking to identify the mechanisms of action of this peptide. These cells express high levels of GRPR and treatment with GRP leads to activation of kinases such as AKT and ERK1/2 that are involved in the cellular processes mentioned. Our results suggest that GRP is a migratory stimulus to these cells without evidence of significant effect on their proliferation or survival to treatment with the chemotherapy drug cisplatin (CDDP). Nonetheless, they become more sensitive to CDDP when the drug is combined with a GRPR antagonist. Thus, we believe that future studies should consider a possible role for GRP in metastasis of NSCLC. / O c?ncer de pulm?o ? o tipo de c?ncer que mais comumente diagnosticado e o que mais mata no mundo levando a quase 1 milh?o de mortes por ano. Entre todos os tipos histol?gicos, o adenocarcinoma ? o mais frequente (75-80%). O pept?deo liberador de gastrina (GRP) ? considerado um agente mitog?nico, capaz de induzir a prolifera??o celular, uma vez que est? envolvido no desenvolvimento fetal dos pulm?es. Este pept?deo teve sua a??o sobre o crescimento tumoral primeiramente identificada em c?lulas humanas de c?ncer de pulm?o de pequenas c?lulas, atuando como fator aut?crino de crescimento de tecidos e tumores atrav?s da liga??o ao seu receptor GRPR. Este receptor foi encontrado em diversos tipos de tumores como pr?stata, mama, est?mago, p?ncreas e c?lon. Al?m disso, este pept?deo atua como um morf?geno, na angiog?nese e, est? relacionado a processos inflamat?rios e na regula??o de c?lulas do sistema imune. E, fumantes assintom?ticos possuem altos n?veis de GRP no lavado broncoalveolar e na urina. No entanto, pouco se conhece sobre os seus efeitos na tumorig?nese e met?stase e, quais os mecanismos moleculares e as vias de sinaliza??o que s?o respons?veis pelos efeitos encontrados. Nosso grupo demonstrou, recentemente, que o GRP pode atuar como uma mol?cula quimiot?tica para neutr?filos. Desta forma, hipotetizamos que o GRP poderia constituir num estimulo quimiot?tico tamb?m para as c?lulas tumorais que express?o o GRPR. Neste trabalho, testamos essa hip?tese, analisando o efeito do GRP sobre a prolifera??o, sobreviv?ncia e migra??o de c?lulas da linhagem de adenocarcinoma A549, buscando identificar mecanismos de a??o desse pept?deo. Esta linhagem expressa altos n?veis de GRPR. O tratamento com GRP leva a ativa??o de quinases como a AKT e ERK1/2 que est?o envolvidas nestes processos celulares. Nossos resultados sugerem que o GRP ? principalmente um est?mulo migrat?rio para estas c?lulas, sem evid?ncias de efeito significativo sobre a sua prolifera??o ou sobreviv?ncia ao tratamento com a droga quimioter?pica cisplatina, mas tornam-se mais sens?veis quando a droga ? combinada com um antagonista do GRPR. Dessa forma, acreditamos que estudos futuros devam considerar um poss?vel papel para o GRP na met?stase.

?rea de Concentra??o: Qu?mica Anal?tica. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-06T16:39:24Z No. of bitstreams: 2 catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-07T11:55:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T11:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) catia_da_cruz_santos.pdf: 3231163 bytes, checksum: 02f6b9329a3b1f0bfb3aba6cc16a3ef7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Neste trabalho foi investigada a eletropolimeriza??o do ?cido 4-aminobenz?ico (4-ABA), visando sua aplica??o como plataforma funcionalizada para imobiliza??o de biomol?culas, para o desenvolvimento de sensores biol?gicos. Foi utilizado o mon?mero 4-ABA, e por meio deste a eletrogera??o foi conduzida sobre a superf?cie do eletrodo de grafite (EG), utilizando-se as t?cnicas de voltametria c?clica (VC) e cronoamperometria (CA), onde nesta, foi investigado o tempo de eletrodeposi??o. Associado a este estudo, foi investigado a imobiliza??o de pequenos fragmentos de DNA (oligonucleot?deos), observando a atua??o da plataforma funcionalizada na resposta do biossensor em rela??o ? detec??o dos oligonucleot?deos, bem como avalia??o do reconhecimento do evento de hibridiza??o, com o alvo complementar. Para a VC, os EG foram modificados com 100 ciclos consecutivos de potencial, em velocidade de varredura de 50 mV/s, na faixa de potencial de +0,00 a +1,20 V, enquanto que na CA, os EG foram modificados nos potenciais de +0,95 V; +1,05 V e +1,15 V, onde tempo de polimeriza??o foi investigado em 4800 segundos e 2400 segundos. Observou-se que dentre os tr?s potenciais pr?-estabelecidos, o que apresentou maior eletroatividade, foi no eletrodo modificado ? +1,05 V, seguido dos potenciais de +1,15 V e +0,95 V, respectivamente. Para o filme formado em +0,95 V, h? um ligeiro aumento da corrente na atividade do par redox, sendo tamb?m observado que um maior deslocamento de potencial e corrente, ocorreu para o eletrodo modificado em +1,05 V seguido do potencial +1,15 V. A atividade eletroqu?mica dos filmes polim?ricos ? praticamente da mesma magnitude quando a eletropolimeriza??o por CA, ocorre a 4800 segundos e 2400 segundos. O eletrodo que apresentou as melhores respostas para imobiliza??o e detec??o das bases p?ricas, guanina e adenina, foi o eletrodo modificado por VC, seguido do eletrodo modificado no potencial de +1,05 V, uma vez que mostrou-se maiores amplitudes nos valores de corrente de pico an?dica (Ipa) dentre os potenciais constantes. Os filmes formados a 2400 segundos apresentam menor sensibilidade para a imobiliza??o e detec??o da guanina, biomarcador. Medidas de espectroscopia de imped?ncia eletroqu?mica (EIE) mostraram maior resist?ncia ? transfer?ncia de carga (Rtc) para o eletrodo modificado no potencial +1,05 V, seguido do eletrodo modificado por VC. Imagens de microscopia eletr?nica de varredura (MEV) mostraram que em todos os casos n?o h? total recobrimento da superf?cie do EG. Para o poli(4-ABA) eletropolimerizado por VC, as imagens de MEV mostraram morfologia completamente distinta, pois se observa uma maior cobertura da superf?cie do grafite, quando comparado aos filmes polim?ricos formados por CA. ? n?tido que para os filmes formados a 4800 segundos, h? maior presen?a de material depositada para a plataforma desenvolvida em +1,05 V. A plataforma Poli(4-ABA)/EG mostrou-se eficiente e sens?vel para a imobiliza??o do oligonucleot?deo (poliGA), bem como a detec??o do evento de hibridiza??o com o oligonucleot?deo complementar (poliCT). A ssDNA apresentou melhor afinidade pelo azul de metileno (AM) devido aos pares de bases da guanina presentes na sonda, comparada a dsDNA, onde a forma??o do h?brido diminui o acesso de intercala??o do azul de metileno (AM) ?s bases guanina, enquanto que a resposta eletroqu?mica do brometo de et?dio (BE) foi melhor observada na dsDNA. Estudos da imobiliza??o do pept?deo DD K, com o alvo espec?fico (fosfolip?deo POPC), e o alvo n?o espec?fico (fosfolip?deo POPC + colesterol), mostraram-se bastante promissores. A imobiliza??o do pept?deo sobre o poli(4-ABA) n?o gerou grandes altera??es no perfil dos espectros de EIE. Foi poss?vel observar uma semelhan?a entre os diagramas de Bode para as medidas da sonda e da sonda + alvo espec?fico devido ? forte intera??o existente entre pept?deo/LUVs sem colesterol. Contudo, para o eletrodo contendo a sonda + alvo n?o espec?fico (LUVs com colesterol), o espectro foi alterado. Tais resultados indicam promissora aplica??o da plataforma desenvolvida no reconhecimento de alvos biol?gicos, bem como o desenvolvimento de biossensores. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT The electropolymerization of 4-aminobenzoic acid (4-ABA) on graphite electrodes (GE) was investigated for the development of electrochemically functionalized platforms applied in the immobilization of biomolecules. The electrogeneration of 4-ABA was carried out in perchloric acid solutions using cyclic voltammetry (CV) and chronoamperometry (CA) techniques. In the case of CV studies, the GEs were modified by applying 100 consecutive potential cycles, while in the case of CA studies the electrodes were modified at different potentials (E/V vs. Ag/AgCl): +0.95, +1.05 and +1.15. The modified GEs were characterized using CV and electrochemical impedance spectroscopy (EIS) techniques in HClO4 solutions in the presence and absence of the ferricyanide/ferrocyanide redox couple (redox probe). Scanning electron microscopy (SEM) was used for morphological characterization. In case of CA, the best electrochemical activities for the electropolymerization reaction were verified at +1.05 V > +1.15 V > +0.95 V. The poly(4-ABA) platforms were investigated for the immobilization and direct detection of purine bases (adenine and guanine), where the higher values of the anodic peak current (Ip,a) were observed for the transducers electroformed using CV. For immobilization of oligonucleotides poly(GA) and recognition of hybridization event with the complementary target poly(CT), methylene blue (MB) and ethidium bromide (EB) were used as indicator and intercalator, respectively. MB was reduced at ?0.26 V resulting in the cathodic peak current (Ip,c) for the ssDNA, while in the case of EB the oxidation was observed at +0.58 V thus resulting in the higher values of Ip,a for the dsDNA. The platforms were also evaluated for immobilization of the DD K peptide, whose antibacterial activity and biological recognition were verified using the complementary (phospholipid 1- palmitoyl - 2 - oleoyl phosphatidylcholine - POPC) and non-complementary (phospholipid POPC + cholesterol) targets. The recognition mechanism was monitored using impedance measurements, where it was verified a good interaction of the peptide DD K with the POPC mimetic membrane. In addition, the interaction was affected by the presence of cholesterol, thus revealing that the use of poly(4-ABA) platforms is very promising for the development of biosensors.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-04-02T15:02:41Z No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-04-05T13:08:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-05T13:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Tityus stigmurus corresponde ? esp?cie de escorpi?o predominante na regi?o Nordeste do Brasil, sendo considerado um dos principais causadores de acidentes escorpi?nicos. Na pe?onha do T. stigmurus, que ? composta de uma mistura complexa de mol?culas de alta e baixa massa molecular, foi identificado e caracterizado um pept?deo antimicrobiano denominado Stigmurina (FFSLIPSLVGGLISAFK-NH2). Pept?deos antimicrobianos s?o pequenas mol?culas consideradas a primeira linha de defesa contra micro-organismos, apresentando amplo espectro de a??o antimicrobiana. A literatura reporta tamb?m a atividade desses pept?deos contra c?lulas cancer?genas. Sequ?ncias nativas de pept?deos bioativos como prot?tipo para a obten??o de novas mol?culas t?m sido utilizadas com o intuito de potencializar a sua atividade e reduzir a toxicidade. Nesse contexto, realizou-se a caracteriza??o estrutural in silico e por dicro?smo circular, bem como a avalia??o da atividade antimicrobiana, antiparasit?ria, antiproliferativa e hemol?tica de dois pept?deos an?logos obtidos ? partir da Stigmurina, denominados StigA3 e StigA4. A an?lise da conforma??o tridimensional in silico do StigA3 e StigA4 demonstrou uma estrutura helicoidal, sendo este resultado confirmado por dicro?smo circular. O aumento da carga superficial e do momento hidrof?bico de ambos os pept?deos an?logos quando comparado com a Stigmurina resultaram na potencializa??o da atividade antimicrobiana e antiparasit?ria. Os pept?deos StigA3 e StigA4 apresentaram a??o antiproliferativa semelhante ao pept?deo nativo, com exce??o para a c?lula normal, para qual os pept?deos an?logos se mostraram menos t?xicos. Portanto, estes resultados indicam uma potencial aplica??o terap?utica destes pept?deos an?logos, demonstrando a efici?ncia do desenho racional de f?rmacos para a obten??o de novos agentes antiproliferativos e anti-infecciosos. / Tityus stigmurus it?s the predominant scorpion specie in Northeast region from Brazil, it?s considered one of the main cause of scorpion accidents in this region. In T. stigmurus venom, which is a complex mixture of high and low molecular mass molecules, was identified an antimicrobial peptide denominated Stigmurin. Antimicrobial peptides are small molecules considered the first line of defense against microorganisms, they show broad spectrum action. Many authors have proved that these peptides can also be effective on cancerous cells. Mutation in these molecules sequence has been held aiming the increase in the activity maintaining its low toxicity. Therefore, it is proposed the characterization of the structure in silico and by circular dichroism, as well the antimicrobial, antiparasitic, anti-proliferative and hemolytic activities of two analog peptides from Stigmurin, denominated StigA3 and StigA4. We performed an in silico analysis for these peptides, where we were able to observe ?-helix structure, which was confirmed by circular dichroism. We were also able to find that the analog peptides net charge and hydrophobic moment were higher than Sitgmurin?s, which can explain the increase in antimicrobial and antiparasitic activity. The peptides StigA3 e StigA4 showed activity on cancerous cells similiar to the native peptide, except when tested on a normal cell we were able to find that they?re less toxic. Therefore, these results indicate a potential biotechnological application for the analogs peptides, even as prototype to new therapeutic agents.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434382.pdf: 1595815 bytes, checksum: e9f7e7d4a7dcd6de22b69890074a8785 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Neutr?filos s?o os principais personagens do processo inflamat?rio, tanto na imunidade inata como adaptativa. Sua migra??o para os s?tios inflamat?rios ? crucial para o in?cio da inflama??o, assim como para o controle de infec??es, apresentando envolvimento na perpetua??o de diferentes doen?as inflamat?rias cr?nicas. O pept?deo liberador de gastrina (GRP: Gastrin-releasing peptide) ? um neuropept?deo que atua via receptores ligados a prote?na G e que est? envolvido em diferentes fun??es fisiol?gicas, atuando da motilidade gastrointestinal ? modula??o da mem?ria. Seu receptor preferencial, GRPR (Gastrin-releasing peptide receptor), ? expresso em v?rios tipos celulares, incluindo os sistemas g?strico, respirat?rio e nervoso, tendo sua express?o aumentada em c?lulas tumorais. RC-3095 ? um dos antagonistas seletivos de GRPR, desenvolvido para o tratamento de c?ncer. Mais recentemente, o RC-3095 mostrou-se com propriedades anti-inflamat?rias no tratamento de artrite e sepse.Os mecanismos pelos quais o GRP e o RC-3095 afetam o crescimento tumoral e o sistema imune ainda n?o foram totalmente determinados. Neste estudo, n?s propomos caracterizar os efeitos pr?-inflamat?rios do GRP na indu??o de migra??o de leuc?citos in vitro e in vivo, demonstrando que o GRPR atua como um receptor quimiot?tico para neutr?filos. Inje??es intraperitoneais de GRP recrutaram neutr?filos em quatro horas, um fen?meno antagonizado pelo RC-3095, deple??o de macr?fagos ou neutraliza??o do TNF-α. Al?m disso, o GRP apresentou um efeito direto in vitro, atuando como quimiocina na indu??o de migra??o atrav?s da sinaliza??o por GRPR, um mecanismo que ? dependente de PI3K, ERK, p38 e independente de prote?na Gαi, demonstrando que o GRPR ? um receptor quimiot?tico alternativo. Interessantemente, a migra??o de neutr?filos in vitro em dire??o ao l?quido sinovial de pacientes com artrite foi abolida com o pr?-tratamento com RC-3095, em uma magnitude comparada ao bloqueio do CXCR2. Discutimos aqui as implica??es dessas descobertas para os tratamentos baseados no antagonista de GRPR em doen?as inflamat?rias e propomos que o GRPR ? um novo receptor quimiot?tico alternativo que est? envolvido nessa patog?nese destes dist?rbios.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T17:01:07Z No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T17:56:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-18T18:01:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-18T18:01:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carlos_felipe_reis_costa_guimaraes.pdf: 3938293 bytes, checksum: e0cdf597f1d9513ef2531c8a0cd6278f (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Previous issue date: 2013 / Neste trabalho foi estudada a influ?ncia dos efeitos estruturais na rea??o de dimeriza??o associada ? obten??o do pept?deo antimicrobiano homotarsinina (Htr), bem como foram realizados ensaios hemol?ticos e de toxicidade desse pept?deo perante c?lulas humanas. Primeiramente foi realizada a s?ntese da cadeia monom?rica da homotarsinina (Htr-M), empregando-se a estrat?gia Fmoc de s?ntese em fase s?lida. Em seguida, o produto foi purificado por cromatografia l?quida de alta efici?ncia em fase reversa (CLAE-FR), tendo sido o homod?mero obtido sequenciado e caracterizado por espectrometria de massas (MALDI-ToF). Foram realizados estudos das prefer?ncias conformacionais da Htr-M por dicro?smo circular (CD) em diferentes meios e condi??es, como na presen?a de tamp?o Tris-HCl aquoso, em diferentes misturas de TFE-H2O e na presen?a de micelas de SDS. Realizou-se ent?o a rea??o de dimeriza??o do mon?mero em tr?s meios: (i) solu??o tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5, (ii) solu??o micelar de SDS 350 mmol?L-1 em tamp?o Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5 e (iii) solu??o TFE:H2O 40:60 (v/v) em Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8,5. O acompanhamento cin?tico das rea??es de dimeriza??o foi realizado por CLAE-FR. Como resultado, foi observado que em solu??o micelar de SDS a rea??o se completa em aproximadamente 6h (rendimento de 62%), enquanto que em solu??o tamp?o e em solu??o de TFE:H2O s?o necess?rias 24h e 48h (rendimentos de 66% e 85%), respectivamente. Os resultados de CD obtidos para a Htr-M em condi??es similares ?s empregadas nas rea??es de dimeriza??o mostraram que a Htr-M apresenta predominantemente conforma??o rand?mica em tamp?o Tris-HCl aquoso, enquanto adota predominantemente estrutura de h?lice ? em solu??o de TFE:H2O (40:60) ou na presen?a de micelas de SDS. Assim, os resultados do acompanhamento cin?tico da rea??o de dimeriza??o indicam que a conforma??o predominantemente rand?mica da Htr-M em tamp?o Tris-HCl aquoso, bem como a diminui??o de sua mobilidade e maior intera??o com a superf?cie das micelas de SDS e os efeitos de agrega??o que ocorrem em solu??o de TFE:H2O influenciam diretamente na forma de aproxima??o das cadeias monom?ricas, atuando de maneiras diferentes na forma??o da liga??o dissulfeto. Por fim, foram realizados ensaios de toxicidade em c?lulas humanas, os quais mostraram que Htr-M e Htr n?o apresentam toxicidade a leuc?citos mononucleares, al?m do que tamb?m n?o apresentam atividade hemol?tica. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT This dissertation is mainly related to studies concerning the role of the structural effects on the dimerization reaction that leads to the antimicrobial peptide homotarsinin (Htr). Besides, hemolytic assays as well as the toxicity of this peptide against human cells have also been investigated. Firstly, the monomeric chain (Htr-M) was obtained by Fmoc solid-phase synthesis. The product was purified by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and then sequenced and characterized by mass spectrometry (MALDI-ToF). Circular dichroism (CD) studies regarding the Htr-M conformational preferences were performed for the peptide in different media and conditions, such as Tris-HCl aqueous buffer, TFE:H2O mixtures, as well as in the presence of SDS micelles. The dimerization reaction was then performed in three distinct media, namely: (i) Tris-HCl aqueous buffer 100 mmol?L-1 pH 8.5, (ii) SDS micellar solution of 350 mmol?L-1 in Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8.5 and (iii) TFE:H2O 40:60 in Tris-HCl 100 mmol?L-1 pH 8.5. CD studies performed in similar conditions indicated that Htr-M presents predominantly random conformations in aqueous Tris-HCl buffer, whereas it adopts ?-helical arrangements in either TFE:H2O (40:60) solution or in the presence of SDS micelles. The kinetic monitoring of the dimerization reactions was carried out by RP-HPLC. The results indicated that the reaction is completed in about 6 h (yield 62%) in the presence of SDS micelles, whereas 24 h and 48 h (yields 66% and 85%) are necessary for the dimerizations performed in the aqueous Tris-HCl and in the TFE:H2O solutions, respectively. Therefore, the kinetic studies indicated that the predominantly random conformation of Htr-M in Tris-HCl aqueous buffer, as well as the mobility decrease alongside with the peptide-micelle interactions in the presence of SDS, as well as the aggregation effects in the TFE:H2O solution directly affect the inter-chain approach process, which leads to different pathways of the disulfide bond formation. Finally, toxicity assays were performed in human cells and the results showed that both Htr-M and Htr are not toxic against mononuclear leukocytes and also do not show hemolytic activity.

?rea de concentra??o: Qu?mica org?nica. / Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-08-25T12:50:30Z No. of bitstreams: 1 eduardo_ferreira_coelho_junior.pdf: 3071757 bytes, checksum: e9deb6aa475b6a67aeab117cf2df4603 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-09-08T17:54:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 eduardo_ferreira_coelho_junior.pdf: 3071757 bytes, checksum: e9deb6aa475b6a67aeab117cf2df4603 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eduardo_ferreira_coelho_junior.pdf: 3071757 bytes, checksum: e9deb6aa475b6a67aeab117cf2df4603 (MD5) Previous issue date: 2015 / O presente trabalho prop?e a glicosila??o do pept?deo antimicrobiano HSP-1, composto por 14 res?duos de amino?cidos e isolado originalmente da esp?cie Hyla punctata (PRATES et al., 2004) empregando-se a s?ntese de pept?deos em fase s?lida associada a rea??o de cicloadi??o catalisada por cobre (SHARPLESS et al., 2002). Para isto, foi realizada a s?ntese do pept?deo HSP-1 propargilado ([PAG1]HSP-1) atrav?s da metodologia de s?ntese de pept?deo em fase s?lida (SPFS) via estrat?gia Fmoc. Ap?s a confirma??o da obten??o do [PAG1]HSP-1 por espectrometria de massa (MALDI-ToF), foi realizada a glicosila??o com as inser??es dos derivados azido acetilado de glicose e N-acetilglicosamina na presen?a de sulfato de cobre penta hidratado (CuSO4.5H2O) e de ascorbato de s?dio como agente redutor para obten??o dos glicopept?deo-triaz?is [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1. Os produtos das s?nteses foram purificados por cromatografia l?quida de alta efici?ncia de fase reversa (CLAE-FR) e tamb?m caracterizados por espectrometria de massa (MALDI-ToF), confirmando a forma??o regiosseletiva dos glicopept?deo-triaz?is sem produ??o de subprodutos da glicosila??o. Os estudos biol?gicos comparativos entre o pept?deo HSP-1 e de suas formas glicosiladas revelaram que as modifica??es qu?micas n?o alteraram significativamente a efic?cia do HSP-1 contra agentes bacterianos. Entretanto, os testes antif?ngicos demonstraram melhor atividade fungicida para os glicopept?deos quando comparado ao pept?deo HSP-1. Foram ainda realizados estudos conformacionais e de intera??o entre o pept?deo e os glicopept?deos com ves?culas fosfolip?dicas de car?ter zwitteri?nico (POPC) e ani?nico (POPC/POPG). Os estudos conformacionais empregando-se a t?cnica de Dicro?smo Circular (CD) revelaram menor teor de helicidade tanto em LUV?s de POPC quanto de POPC/POPG para os glicopept?deos em rela??o a HSP-1. Os estudos de intera??o foram realizados empregando-se as t?cnicas de espalhamento de luz din?mico (DLS), potencial zeta (?) e extravasamento de carboxifluoresce?na (CF). De uma maneira geral, verifica-se que a varia??o no di?metro hidrodin?mico (?Dh) para ves?culas ii zwitteri?nicas POPC e ani?nicas POPC/POPG ? maior para os glicopept?deos [Glc-trz-G14]HSP-1e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1 em rela??o ao HSP-1. Por outro lado, a varia??o do potencial zeta tanto em ves?culas zwitteri?nicas quanto em ves?culas predominantemente negativas causada por HSP-1 foi maior em compara??o ao efeito causado pelas formas glicosiladas. E por fim, os resultados de extravasamento de carboxifluoresce?na induzida por cada esp?cie (HSP-1, [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1) mostrou que a capacidade l?tica dos glicopept?deos ? ligeiramente maior em ambos os meios biomim?ticos quando comparados com o pept?deo HSP-1. Assim sendo, este trabalho mostrou que a presen?a do anel triaz?lico pode ser respons?vel pela maior atividade antif?ngica dos glicopept?deos [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1 em rela??o ao pept?deo HSP-1. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2015. / ABSTRACT This work proposes the glycosylation of the antimicrobial peptide HSP-1, containing 14 amino acid residues and originally isolated from Hyla punctata species (PRATES et al., 2004) by solid phase peptides synthesis associated with cycloaddition reaction copper catalyzed (SHARPLESS et al., 2002). The synthesis of propargylated HSP-1 ([PAG1] HSP-1) was carried out by solid phase peptide synthesis using Fmoc strategy and characterized by mass spectrometry (MALDI-ToF). In order to obtain the glycopeptide triazoles [Glc-trz-G14]HSP-1 and [GlcNAc-trz-G14]HSP-1, azide derivatives acetylated glucose and N-acetylglucosamine were used in the presence of copper sulfate pentahydrate (CuSO4. 5H2O) and sodium ascorbate as a reducing agent. The products were purified by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and characterized by mass spectrometry (MALDI-ToF), confirming the regioselective reaction without glycosylation secondary products. Comparative studies among HSP-1 peptide and their glycosylated forms don?t show significant changes in antibacterial assays. However, the antifungal tests have shown a significant increase in fungicidal activity for glycopeptides when compared to HSP-1 peptide. Furthermore, it were carried out conformational and interaction studies among the peptide and glycopeptides with zwitterionic (POPC) and anionic (POPC/POPG) phospholipid vesicles. The circular dichroism (CD) spectra have revealed lower helicity to glycopeptides relative HSP-1 in both zwitterionic and anionic LUV's. Interaction studies were performed employing the dynamic light scattering (DLS), zeta potential and leakage carboxyfluorescein (CF) techniques. Summing up, the hydrodynamic diameter variation (?Dh) for zwitterionic and anionic vesicles is greater for glycopeptides [Glc-trz-G14]HSP-1 and [GlcNAc-trz-G14]HSP-1 when compared with HSP-1. On the other hand, the zeta potential variation in zwitterionic or negative vesicles caused by HSP-1 was higher compared to the effect caused by glycosylated forms. Finally, the results of carboxyfluorescein leakage induced by each species (HSP- iv 1 [Glc-trz-G14] HSP-1 and [GlcNAc-trz-G14] HSP-1) showed a higher lytic capacity of glycopeptides in both media in relation to the HSP-1 peptide. Thus, it showed that the presence of triazole rings may be responsible for the higher antifungal activity of derivatives [Glc-trz-G14] HSP-1 and [GlcNAc trz-G14] HSP-1.

Submitted by PPG Pediatria e Sa?de da Crian?a (pediatria-pg@pucrs.br) on 2018-02-16T19:08:17Z No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-02-22T17:20:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T17:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) Previous issue date: 2017-03-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Respiratory syncytial virus (RSV) is the most common etiologic agent in severe lower respiratory tract infections (LRTI) in children. RSV-associated LRTI is the main cause of bronchiolitis, pneumonia and exacerbation of asthma. This infection is responsible for the high rates of hospitalizations related to respiratory diseases worldwide, especially in children younger than 2 years. Currently, annual mortality rate due to RSV infections is worrying worldwide and is estimated at approximately two hundred thousand cases. The treatment strategies to RSV infections are limited. Ribavirin is an approved drug for use in RSV infections, but its use is limited due to adverse side-effects and risks posed to health professionals who handle it. Palivizumab is a monoclonal antibody which targets RSV F glycoprotein and its use is only indicated as a prophylactic measure. This treatment is already accepted in several countries for groups of high risk children (premature children, with chronic lung disease and with congenital heart disease). However, palivizumab has a high cost for public health and is not available in all countries. The development of an effective RSV vaccine to generate a long-lasting immunological memory response that prevents infection may be the best alternative because it will reduce high public health expenditures with antiviral drugs and monoclonal antibodies. The first attempt in the search for a vaccine against RSV was in the 1960s. This vaccine produced high levels of serum antibodies but could not protect against infection. Children who were vaccinated developed a more serious disease when later infected with the same virus. To date, there is no licensed vaccine for RSV, so the search for effective vaccines is an important focus of research. Natural RSV infections do not induce lasting protective memory, and multiple reinfections can occur lifetime. Nasal secretions from infected infants presented a small number of regulatory CD4 T cells (Treg) in peripheral blood, an increase in interleukin 4 (IL-4) production and T helper type 2 (Th2) response. Treg cells are important for controlling an exacerbated increase in immune responses. A reduction of the Tregs caused by the RSV infection generates an exacerbation of the pulmonary disease due to a Th2 response. The M209-223 RSV peptide was identified to increase IFN-? production by peptide-specific CD4 T cells after challenge with the virus. The treatment with this peptide also induced an increase in pulmonary Treg frequency in infected mice. Recently, it has also been shown that Tregs aid in the development of a T CD8+ effector response, which is crucial for the control of RSV viral load. Our hypothesis is that the RSV M209-223 peptide impacts in the differentiation of CD4 T cells, increasing the population of specific Treg, reducing lung inflammation and modulating the anti-RSV immune response. This peptide in animal model induces the differentiation of specific Treg. Our findings suggest that vaccination with M209-223 peptide results in the differentiation of specific CD4 T cells into conventional effectors and Treg cells. Vaccination with this peptide decreased the expansion of a Th2 response in animals infected with RSV, protecting both the infection site and systemically. We believe that this approach could be an important component in vaccination strategies against this virus. / O v?rus sincicial respirat?rio (VSR) ? o agente etiol?gico mais comum nas infec??es graves do trato respirat?rio inferior (TRI) em crian?as. As infec??es do TRI associada com o VSR s?o a principal causa de bronquiolite, pneumonia e exacerba??o da asma. As TRI causadas pelo VSR s?o respons?veis pelas altas taxas das hospitaliza??es relacionadas ?s doen?as respirat?rias em todo o mundo, principalmente em crian?as menores de dois anos. Atualmente a taxa de mortalidade anual mundial devido ?s infec??es pelo VSR ? preocupante e ? estimada em aproximadamente duzentas mil crian?as. As estrat?gias de tratamento contra o VSR utilizadas s?o limitadas. A ribavirina ? um f?rmaco aprovado no uso para infec??es pelo VSR, por?m sua utiliza??o ? limitada devido aos efeitos secund?rios adversos e aos riscos que representam para os profissionais da sa?de que o manipulam. O palivizumabe ? um anticorpo monoclonal dirigido contra a glicoprote?na F do v?rus e sua utiliza??o ? apenas como medida profil?tica. Este tratamento j? ? aceito em v?rios pa?ses nos grupos de crian?as de alto risco (crian?as prematuras, com doen?a pulmonar cr?nica e com cardiopatia cong?nita). Entretanto o palivizumabe tem um alto custo para sa?de p?blica, n?o sendo disponibilizado em todos os pa?ses. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o VSR pode ser a melhor alternativa, pois ao gerar resposta de mem?ria duradoura que previne a infec??o e reduz, desta forma, os altos gastos com a sa?de p?blica, com os f?rmacos antivirais e com os anticorpos monoclonais. A primeira tentativa na busca de uma vacina contra o VSR foi na d?cada de 60. A vacina produzida estimulou n?veis moderadamente elevados de anticorpos no soro, mas n?o conseguiu proteger contra ? infec??o. As crian?as que foram vacinadas desenvolveram uma doen?a mais grave quando mais tarde infectados com o v?rus. At? o presente momento n?o existe nenhuma vacina licenciada para o VSR. Desta forma, a busca de vacinas eficazes constitui um importante foco de pesquisa em todo mundo. As infec??es naturais pelo VSR n?o induzem mem?ria protetora duradoura, ocorrendo m?ltiplas reinfec??es ao longo da vida. Em crian?as infectadas, observou-se um n?mero reduzido de c?lulas T CD4+ regulat?rias (Treg) no sangue perif?rico, um aumento na produ??o de interleucina 4 (IL-4) e uma resposta T helper do tipo 2 (Th2) nas secre??es nasais. As c?lulas Treg s?o importantes para controlar um aumento exagerado da resposta imunol?gica. Por este fato acredita-se que quando h? uma redu??o das Tregs causada pela infec??o do VSR ocorre uma exacerba??o da doen?a pulmonar devido uma resposta Th2. Foi identificado que o pept?deo M209-223 do VSR aumenta a produ??o de IFN-? nas c?lulas T CD4+ ap?s o desafio com VSR. O tratamento com este mesmo pept?deo tamb?m apresentou um aumento na frequencia de c?lulas Treg ap?s infec??o prim?ria pelo VSR. Recentemente tamb?m foi demonstrado que as Tregs auxiliam no desenvolvimento de uma resposta efetora T CD8+, que ? crucial para o controle da carga viral do VSR. Nossa hip?tese ? que o pept?deo M209-223 do VSR influencia na diferencia??o das c?lulas T CD4+, aumentando a popula??o de c?lulas T efetoras e regulat?rias espec?ficas, reduzindo a inflama??o pulmonar e modulando a resposta imune. Os nossos resultados sugerem que a vacina??o com pept?deo M209-223 resulta na diferencia??o de c?lulas T CD4+ espec?ficas em efetoras convencionais, que produzem mais IFN-? e em c?lulas Treg. A vacina??o com este pept?deo diminuiu a expans?o de uma resposta Th2 nos animais infectados com o VSR, protegendo da inflama??o exacerbada tanto no local da infec??o como sistemicamente. Acreditamos que esta abordagem pode constituir um componente importante nas estrat?gias de vacina??o contra este v?rus.