Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LUCIANA MAIA ESCHER DOS SANTOS.pdf: 3201320 bytes, checksum: f5c8c078f60bbba17912e8c39742ed0a (MD5) Previous issue date: 2013-06-24 / Molecular Biology shown to be an effective tool in forensic laboratories for the ability to identify an individual from minute amounts of biological samples such as blood, bones, semen, hair, teeth, nails, spittle, urine and other biological fluids recovered from the crime scene. One of the main biological evidence found at a crime scene are traces of bloodstains. This study aimed to analyze the molecular profiles of biological samples exposed to the chemiluminescent reagent luminol based on different storage times (48 hours and 30 days). With the measurement of all samples can be inferred that in the first 48 hours of storage, there was obtained DNA and varying concentrations after application of the chemiluminescent reagent. The samples were amplified by PCR using a multiplex system AmpFlSTR ® Select NGM and capillary electrophoresis. Molecular profiles were obtained complete and incomplete denoting specificity as the quality and quantity of the sample analyzed. The selection of molecular markers mini-STRs greatly contributed to the success of these profiles, allowing the study and analysis of degraded material. Our data suggest that the degradation of the DNA molecule exposed to the chemiluminescent reagent was higher in the samples compared to those containing diluted whole blood impregnation. Therefore, analyzing the bloodstains samples exposed to luminol in shorter storage provide molecular profiles compatible to clash samples. / A Biologia Molecular mostrou-se uma ferramenta efetiva nos laboratórios forenses pela capacidade de identificar um indivíduo a partir de quantidades ínfimas de amostras biológicas como sangue, ossos, sêmen, cabelo, dentes, unhas, saliva, urina, entre outros fluidos biológicos recuperados no local do crime. Uma das principais evidências biológicas encontradas em local de crime são vestígios de substâncias hematóides. Esta pesquisa visou a análise de perfis moleculares de amostras biológicas expostas ao reagente quimioluminescente a base de luminol em diferentes tempos de armazenamento (48 horas e 30 dias). Com a quantificação de todas as amostras pode-se inferir que nas primeiras 48 horas de armazenamento, obtiveram-se concentrações variáveis de DNA e após a aplicação do reagente quimioluminescente. As amostras foram amplificadas por PCR utilizando um sistema multiplex AmpFlSTR® NGM SElect e eletroforese capilar. Foram obtidos perfis moleculares completos e incompletos denotando inespecificidade conforme a qualidade e quantidade da amostra analisada. A seleção dos 17 marcadores moleculares mini-STRs em muito contribuiu para o sucesso desses perfis, permitindo estudo e análise de material degradado. Os dados indicam que a degradação da molécula de DNA exposta ao reagente quimioluminescente foi maior nas amostras diluídas em relação àquelas contendo impregnação com sangue total. A análise estatística das amostras com e sem exposição ao reagente quimioluminescente comparado ao grupo controle e em diferentes concentrações, mostrou não haver diferença estatísticamente significativa entre os valores quantificados obtidos. Ainda assim, analisar as amostras hematóides expostas ao luminol em menor tempo de armazenamento proporcionarão perfis moleculares compatíveis ao confronto de amostras.

Os objetivos deste estudo foram: re-identificar 70 isolados de Candida em micoteca por método tradicional e API 20C; identificar a presença de C. dubliniensis; determinar e comparar as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) das amostras, frente a sete antifúngicos (E-test); caracterizar molecularmente as amostras seqüenciais de Candida pela técnica de PFGE; estudar e comparar o perfil genotípico de isolados de C. albicans e C. parapsilosis, através da análise de marcadores microsatélites e cariotipagem. O nível de concordância entre o método tradicional e o API 20C foi de 93%. Nenhum isolado de C. dubliniensis foi identificado no estudo. Em relação à sensibilidade antifúngica, a maioria das amostras apresentou alta porcentagem de sensibilidade às sete drogas testadas. A análise molecular pela técnica de PFGE, mostrou seis perfis de cariótipos diferentes em 24 amostras seqüenciais. Em relação à comparação das técnicas de PFGE e microssatélites, observamos que a última mostrou maior poder discriminatório para as amostras de estudadas. / This study was aimed to: identify the 70 isolates of Candida in a culture collection by the traditional method and by API 20C; identify the presence of C. dubliniensis; determine and compare the minimum inhibitory concentrations (MICs) of these samples in regard to the seven drugs (E-test); molecularly characterize sequential samples from the same patient by the PFGE technique; study the genotypic profile of all the isolates of C. albicans and C. parapsilosis by means of the microsatellite technique and compare the results with those obtained by the PFGE technique. The level of agreement between the traditional method and the API 20C was 93%. No isolate of C. dubliniensis was identified in the study. In relation to antifungal susceptibility, most of the samples presented a high percentage of susceptibility to the seven drugs tested. The molecular analysis by the PFGE technique revealed six different karyotype profiles among 24 sequential samples. In the comparison between the PFGE and microsatellite, the latter showed a greater discriminatory power for samples.

Os objetivos deste estudo foram: re-identificar 70 isolados de Candida em micoteca por método tradicional e API 20C; identificar a presença de C. dubliniensis; determinar e comparar as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) das amostras, frente a sete antifúngicos (E-test); caracterizar molecularmente as amostras seqüenciais de Candida pela técnica de PFGE; estudar e comparar o perfil genotípico de isolados de C. albicans e C. parapsilosis, através da análise de marcadores microsatélites e cariotipagem. O nível de concordância entre o método tradicional e o API 20C foi de 93%. Nenhum isolado de C. dubliniensis foi identificado no estudo. Em relação à sensibilidade antifúngica, a maioria das amostras apresentou alta porcentagem de sensibilidade às sete drogas testadas. A análise molecular pela técnica de PFGE, mostrou seis perfis de cariótipos diferentes em 24 amostras seqüenciais. Em relação à comparação das técnicas de PFGE e microssatélites, observamos que a última mostrou maior poder discriminatório para as amostras de estudadas. / This study was aimed to: identify the 70 isolates of Candida in a culture collection by the traditional method and by API 20C; identify the presence of C. dubliniensis; determine and compare the minimum inhibitory concentrations (MICs) of these samples in regard to the seven drugs (E-test); molecularly characterize sequential samples from the same patient by the PFGE technique; study the genotypic profile of all the isolates of C. albicans and C. parapsilosis by means of the microsatellite technique and compare the results with those obtained by the PFGE technique. The level of agreement between the traditional method and the API 20C was 93%. No isolate of C. dubliniensis was identified in the study. In relation to antifungal susceptibility, most of the samples presented a high percentage of susceptibility to the seven drugs tested. The molecular analysis by the PFGE technique revealed six different karyotype profiles among 24 sequential samples. In the comparison between the PFGE and microsatellite, the latter showed a greater discriminatory power for samples.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_talita_tejada.pdf: 1229434 bytes, checksum: 00aa0198737634a5ddf797dd569f628f (MD5) Previous issue date: 2013-02-04 / Salmonella is one of the main causative agents of foodborne diseases, and chicken-based products play a prominent role in this context, serving as vehicles to the microorganism. The present study aimed to provide data on the Salmonella spread in the poultry chain, check the occurrence of Salmonella and its different serotypes isolated from chicken stool, chicken products and human stool, as well as to verify the similarity between DNA profiles of Samonella isolated. Literature on the occurrence of Salmonella in the poultry chain was reviewed; parallel to it, a project in which 600 samples (200 chicken meat, 200 chicken stool and 200 human stool samples) were analyzed for Salmonella presence was developed. DNA profiles of isolated strains were obtained by PFGE and REP-PCR. The microorganism was isolated from 16 samples, 8 (8/200 4%) from chicken products, 4 of which (4/200 2%) from chicken stool and 4 (4/200 2%) from human stool. Salmonella serotype Schwarzengrund was found to prevail both in chicken meat and chicken stool, followed by serotype Mbandaka, whereas serotype Panama prevailed in humans. Strains with indistinguishable genotypes were found to be present both in chicken stool and chicken products, suggesting that the chicken contamination on the farm remained in the processed product. In humans, the isolated strains were indistinguishable between one another, suggesting an outbreak occurrence; however, the isolated serotypes in humans were not the same as those in chickens, which is probably related to different contamination sources. / Salmonella é um dos principais agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos e os produtos a base de frango tem destaque importante neste contexto, podendo servir de veículo desse micro-organismo. O presente trabalho teve como objetivo apresentar dados quanto à propagação de Salmonella na cadeia avícola, verificar a ocorrência de Salmonella e de suas diferentes sorotipos isoladas de fezes de frango, produtos de frango e fezes humanas, bem como para verificar a similaridade entre os perfis de DNA de Salmonella isolados no extremo sul do Brasil. Foi realizada uma revisão bibliográfica discorrendo sobre Salmonella na cadeia aviária e paralelamente foi desenvolvido um projeto, no qual foram analisadas 600 amostras (200 de carne de frango, 200 de fezes de frango e 200 de fezes de humanos), quanto à presença de Salmonella. Os perfis de DNA das cepas isoladas foram obtidos em PFGE e REP-PCR. O micro-organismo foi isolado de 16 amostras, sendo 8 (8/200 4%) de produtos de frango, 4 (4/200 2%) de fezes de frango e 4 (4/200 2%) de fezes de humanos. Observou-se que, tanto em carne de frango como fezes de frango, o sorotipo predominante foi Schwazengrund, seguido de Mbandaka. Em humanos, predominou S. Panama. Foi constatado que de cepas com genótipos indistinguíveis estavam presentes tanto em fezes de frango como produtos de frango, sugerindo que a contaminação do frango no aviário permaneceu no produto processado. Em humanos, as cepas isoladas foram indistinguíveis entre si sugerindo que tenha ocorrido um surto, no entanto, os sorotipos isolados não foram os mesmos dos isolados de frango, o que sugere outra fonte de contaminação.