Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Curso de Pós-Graduação em Físico-Química / Made available in DSpace on 2012-10-15T22:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T14:29:10Z : No. of bitstreams: 1 202919.pdf: 1442216 bytes, checksum: 156c191b8f72d0852c680b5a9b371b9d (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Juridicas / Made available in DSpace on 2012-10-16T00:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Neste trabalho foram desenvolvidos três métodos de extração e análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas para doze pesticidas (captana, clorotalonil, deltametrina, diclorana, folpete, linuron, malation, prometrina, procloraz, procimidona, triclorfon e trifluralina) em amostras de cenouras, os quais foram aplicados com sucesso em quatro amostras adquiridas no comércio local. Durante o desenvolvimento dos métodos, foram testadas várias condições experimentais, tais como diferentes fases sólidas e solventes. O primeiro método consistiu no uso de dispersão de matriz em fase sólida (MSPD) e emprega uma fase nova (p-nitro-N-propilanilina/sílica - pNNPA) e uma solução de diclorometano:acetato de etila (1:1) para determinação de dez pesticidas em amostras de cenouras frescas: triclorfon, diclorana, captana, clorotalonil, procimidona, deltametrina, trifluralina, prometrina, linuron, procloraz. Os valores de recuperação obtidos ficaram na faixa de 48 a 106% e a precisão alcançada na recuperação foi de 6 a 20%. A pNNPA foi sintetizada e caracterizada através de análise elementar, determinação da área superficial e do diâmetro dos poros. O segundo método utiliza MSPD associada à extração com líquido pressurizado (PLE) com a fase sólida XAD-7 e acetato de etila em cenouras liofilizadas. Este foi desenvolvido para determinação de resíduos de sete pesticidas em cenouras (triclorfon, clorotalonil, malation, folpete, procimidona, procloraz, deltametrina), para os quais se alcançou recuperações de 70 a 130% e precisões de 6 a 21%. O terceiro método emprega PLE com sulfato de sódio anidro e acetato de etila para determinação de sete pesticidas (triclorfon, diclorana, linuron, captana, procimidona, procloraz, deltametrina) em cenouras liofilizadas. Neste, foram alcançadas recuperações de 74 a 102% e precisões na faixa de 10 a 32%. Os coeficientes de determinação das curvas analíticas situaram-se na faixa de 0,9821 a 0,9997, os limites de detecção (LOD) e de quantificação (LOQ) para os vários compostos investigados ficaram entre 0,0024 mg kg-1 e 0,1968 mg kg-1, e entre 0,0072 mg kg-1 e 0,5963 mg kg-1, respectivamente. A repetibilidade foi inferior a 11% e a precisão intermediária foi um pouco superior a 15% somente para o folpete. Constatou-se que a eficiência dos métodos em questão é superior à do método convencional de extração sólido-líquido, sendo semelhante ou superior ao que se obtém com a fase sólida C18, que é a fase mais comumente empregada para MSPD. Todos os três métodos alcançaram LOD e LOQ aceitáveis pelas agências reguladoras. Estes métodos foram aplicados com sucesso em quatro amostras de cenouras comerciais, constatando-se nas mesmas, a presença de vários pesticidas, alguns deles acima dos limites máximos de resíduos de agências reguladoras, tais como USEPA, União Européia e ANVISA. / Three analytical methods were developed for the extraction and analysis using gas chromatography/mass spectrometry of twelve pesticides (captan, chlorothalonil, deltametrin, dichloran, folpet, linuron, malathion, prometryn, prochloraz, procymidone, trichlorphon, and trifluralin) in carrrots. During method development, several experimental conditions were tested for extraction, such as different solid phases and solvents. These methods were successfully applied to four samples of carrots purchased in local markets. Matrix solid phase dispersion (MSPD) was the first method developed with a new solid phase (p-nitro-Npropylaniline/ sílica – pNNPA) and dichloromethane: ethyl acetate (1:1) solution for the determination of ten pesticides (trichlorphon, chlorothalonil, dichloran, captan, procymidone, deltametrin, trifluralin, prometryn, linuron, prochloraz) in fresh carrots samples. Recoveries ranged from 48 to 106% and precisions were good (6 to 20%). The new solid phase pNNPA was synthesized and characterized by elemental analysis, determination of surface area and diameter of the pores. MSPD associated with pressurized liquid extraction (PLE) was employed in the development of a second method for the determination of triclorphon, chlorothalonil, malathion, folpet, procymidone, procloraz, deltametrin in lyophilized carrots, using XAD-7 as solid phase and ethyl acetate as solvent. Recoveries were in the range of 70 to 130% and precisions varied from 6 to 21%. In the third method, PLE was performed using sodium sulphate and ethyl acetate for the determination of seven pesticides (triclorphon, dichloran, linuron, captan, procymidone, procloraz, deltametrin) in lyophilized carrots. Recoveries were in the range of 74 to 102% and precisions varied from 10 to 32%. Determination coefficients of the analytical curves presented values between 0.9821 and 0.9997, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) for the various components varied from 0.0024 and 0.1968 mg kg-1, and 0.0072 to 0.5963 mg kg-1, respectively. Repeatability was less then 11% and intermediate precision was a little higher than 15% only for folpet. The efficiency of the three developed methods was higher than the one obtained with the conventional solid-liquid method. Likewise, the new methods presented similar or superior performance in comparison with results obtained with C18, the most commonly used solid phase for MSPD. All the three methods reached acceptable LOD and LOQ. by some regulatory agencies, such as USEPA, European Union and ANVISA. The application of these methods to four commercial carrot samples showed that residues of various pesticides were found in these samples, and some of them were above the maximum residue limit.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321928.pdf: 2095743 bytes, checksum: 8044a3c0eb4a0fdf00d211952041505f (MD5) Previous issue date: 2013 / O malation é um composto tóxico pertencente à classe dos pesticidas organofosforados (OF) que tem como mecanismo primário de ação inibir a enzima acetilcolinesterase (AChE), levando à clássica síndrome colinérgica. No entanto, estudos vêm demonstrando que a neurotoxicidade decorrente da exposição crônica a esta classe de pesticidas pode ocorrer sem sintomas colinérgicos antecedentes e parece não depender da inibição da enzima AChE. Quanto ao tratamento da intoxicação aguda por esses compostos, a eficácia das oximas clinicamente disponíveis (por exemplo, pralidoxima), utilizadas para reativar a AChE inibida, tem sido questionada. Dessa forma, o primeiro objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da pralidoxima e de uma oxima experimental (K074) na reativação da AChE após exposição aguda ao malation, bem como na prevenção de possíveis alterações bioquímicas relacionadas com o estresse oxidativo induzidas pelo malation, utilizando camundongos Swiss. O malation (1,25 g/kg, s.c.) induziu uma diminuição significativa da atividade da AChE no córtex pré-frontal, hipocampo e sangue dos animais 24 h após uma única injeção. Após os tratamentos com as oximas (1/4 da DL50, i.m., 6 h após a exposição ao malation), foi observado que a pralidoxima (66 mg/kg) foi capaz de reverter significativamente a inibição da AChE sanguínea, enquanto que a oxima K074 (5,8 mg/kg) não teve efeitos de reativação em relação à enzima sanguínea. Interessantemente, ambas as oximas testadas foram incapazes de reativar a AChE inibida pelo malation no córtex pré-frontal e no hipocampo após a injeção intramuscular ou intracerebroventricular (1/4 de DL50, 6 h após a exposição ao malation). Os parâmetros bioquímicos relacionados com o estresse oxidativo (atividade das enzimas glutationa peroxidase, glutationa redutase e catalase, bem como os níveis de peroxidação lipídica) não foram afetados nos animais tratados com malation, oximas ou atropina. No entanto, quando a pralidoxima e K074 foram administradas por via intramuscular 6 h após a exposição ao malation, estas oximas foram capazes de aumentar a atividade das enzimas antioxidantes no córtex pré-frontal e hipocampo. Estes resultados indicam que as atividades da AChE periférica e central não estão necessariamente correlacionadas após o tratamento com malation/oximas, além disso, considerando que os tratamentos disponíveis na clínica para a intoxicação com malation não parecem eficazes, este estudo reforça a necessidade de busca por novos reativadores da AChE capazes de reativar eficientemente a enzima sanguínea e cerebral após o envenenamento com malation. O próximo objetivo do trabalho foi investigar os efeitos de administrações repetidas (ao longo de um período de 15 dias) com doses de malation que não causam toxicidade colinérgica, sobre o desempenho cognitivo (relacionado à memória), bem como alterações bioquímicas no hipocampo de camundongos adultos. Os tratamentos com malation (30 e 100 mg/kg, pela via subcutânea) não afetaram o peso corporal dos animais durante o período experimental, além disso, não foram observados sinais evidentes de toxicidade colinérgica durante todo o período de tratamento. Apenas a dose de 100 mg/kg de malation foi capaz de inibir significativamente a atividade da AChE hipocampal após um período de tratamento de 15 dias; no entanto, esta inibição não produziu sinais aparentes de toxicidade. Ao final do tratamento de 15 dias, os animais expostos ao malation (30 e 100 mg/kg) mostraram uma diminuição significativa na capacidade de memória espacial, a qual foi acompanhada por uma diminuição da atividade do complexo I mitocondrial, aumento da expressão das proteínas pró-apoptóticas Bax e Bak, bem como ativação astroglial no hipocampo. Por outro lado, os níveis de sinaptofisina (marcador de sinapses), de colina acetiltransferase (marcador de neurônios colinérgicos) e de aquaporina4 (proteína associada com disfunção da barreira hematoencefálica) não foram alterados pelo tratamento com malation. O déficit no teste de memória espacial de curto prazo causado pela exposição dos animais a 30 mg/kg de malation, dose que não causou inibição da atividade da AChE hipocampal, indica a possibilidade de acontecimentos não colinérgicos relacionados com a modulação da performance cognitiva nestes animais. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, sugere-se que o mecanismo envolvido no déficit de memória induzido pela exposição ao malation pode ser mediado, pelo menos em parte, por uma interação sinérgica entre disfunção mitocondrial e processos neuroinflamatórios. Finalmente, a partir de estudos in vitro com cultura primária de neurônios corticais, investigou-se os possíveis mecanismos que precedem a morte celular induzida pela exposição prolongada ao malaoxon. O tratamento com malaoxon 100 µM foi capaz de causar significativa morte das células corticais no dia in vitro 6 (6DIV) e significativa inibição da atividade da AChE nos tempos que precederam a morte celular (0,5 h; 24 h e 48 h). Além disso, observou-se um aumento significativo da produção de espécies reativas de oxigênio e uma diminuição do potencial de membrana mitocondrial nos primeiros 60 min de exposição das células a 100 µM de malaoxon. O pré-tratamento das culturas com o antioxidante ácido ascórbico foi capaz de proteger parcialmente, embora significativamente, da morte celular induzida pela exposição prolongada ao malaoxon. Os nossos resultados indicam que a morte das células neuronais corticais expostas ao malaoxon pode estar associada com indução de estresse oxidativo. No entanto, estudos adicionais são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos com a toxicidade do malaoxon neste tipo de cultura, bem como a participação da AChE nestes eventos <br> / The organophosphorus (OP) pesticide malathion is a highly neurotoxic compound and its toxicity is primarily caused by the inhibition of acetylcholinesterase (AChE), leading to cholinergic syndrome. However, studies have shown that the neurotoxicity resulting from OP chronic exposure can occur without previous cholinergic symptoms and they do not appear to be dependent on AChE inhibition. Regarding the treatment of OP acute poisoning, the clinical experience with the available oximes (e.g. pralidoxime) is disappointing and their routine use has been questioned. Thus, the first aim of this study was to investigate the potency of pralidoxime and K074 in reactivating AChE after acute exposure to malathion, as well as in preventing malathion-induced changes in oxidative-stress related parameters in mice. Malathion (1.25 g/kg, s.c.) induced a significant decrease in cortico-cerebral, hippocampal and blood AChE activities at 24 h after exposure. Oxime treatments (1/4 of LD50, i.m., 6 h after malathion poisoning) showed that pralidoxime (66 mg/kg) significantly reversed malathion-induced blood AChE inhibition, although no significant effects were observed after K074 treatment (5,8 mg/kg). Interestingly, both oximes tested were unable to reactivate the cortico-cerebral and hippocampal enzymes after intramuscular or intracerebroventricular injection (1/4 of LD50, 6 h after malathion poisoning). Biochemical parameters related to oxidative stress (cerebro-cortical and hippocampal glutathione peroxidase, glutathione reductase and catalase activities, as well as lipid peroxidation) were not affected in animals treated with malathion, oximes or atropine alone. However, pralidoxime and K074, administered intramuscularly 6 h after malathion poisoning, were able to increase the endogenous activities of these antioxidant enzymes in the prefrontal cortex and hippocampus. These results indicate that peripheral and central AChE activities are not necessarily correlated after the treatment of OP compounds and/or oximes. In addition, considering that the available treatments to malathion poisoning appear to be ineffective, the present study reinforce the need to search for potential new AChE reactivators able to efficiently reactivate the brain and blood AChEs after malathion poisoning. The next aim of this study was to investigate the effects of repeated subtoxic doses of malathion (over a 15-days period) on cognitive performance as well as biochemical changes in the hippocampus of adult mice. The treatments with malathion (30 and 100 mg/kg, subcutaneously) did not affect the body weight of animals throughout the experimental period, furthermore, no evident signs of cholinergic toxicity were observed throughout the treatment. The highest dose of malathion (100 mg/kg) was associated with significant AChE inhibition in the hippocampus after a 15-days treatment period, however, this inhibition did not produce signs of cholinergic toxicity. At the end of treatments, malathion-exposed animals (30 and 100 mg/kg) showed a significant impairment on learning-memory ability which was paralleled by a significant decrease in the mitochondrial complex I activity, increase in the levels of proapoptotic proteins (Bax and Bak) and astroglial activation (increase in the level of GFAP), in the hippocampus. On the other hand, the levels of synaptophysin (a specific synaptic marker), choline acetyltransferase (a marker of cholinergic neurons) and aquaporin 4 (a protein related with blood-brain barrier dysfunction), were not affected by the treatment with malathion. The short-term spacial memory deficit observed after the exposure to 30 mg/kg dose of malathion, that caused no hippocampal AChE inhibition, indicates the possibility that cholinergic events are not related with the modulation of the cognitive performance in these animals. From the results obtained in this study, we suggest that the cholinergic system may not be involved in the malathion-induced neurotoxic effects, in addition, we suggest that the mechanism involved in the spacial memory deficit induced by repeated malathion exposure can be mediated, at least in part, by a synergistic interaction between mitochondrial dysfunction and neuroinflammatory processes. Finally, we investigated the possible molecular events that precede malaoxon-induced cell death in cultured neuronal cortical cells. The treatment with 100 µM of malaoxon was able to cause significant death of cortical cells on day in vitro 6 (DIV6) and significant AChE inhibition in the times preceding the cell death (0.5 h, 24 h and 48 h). In addition, there was a significant increase in the production of reactive oxygen species and a decrease in mitochondrial membrane potential in the cells exposed to malaoxon. Pretreatment with the antioxidant ascorbic acid displayed a protective effect against malaoxon-induced neurotoxicity in the cortical neuronal cells. Our data indicate that the neuronal cortical cell death induced by malaoxon may be associated with induction of oxidative stress. However, additional studies are needed to elucidate the mechanisms involved in the malaoxon toxicity in these cells, as well as the involvement of AChE in these events.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Quimica, Florianópolis, 2012. / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:51:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 314869.pdf: 1288810 bytes, checksum: 59657a62f206c3a16a14fbd3f7ed909d (MD5) / Os métodos de microextração em fase sólida (SPME) e de microextração em fase sólida com recobrimento internamente refrigerado (CF-SPME) foram utilizados neste trabalho para o desenvolvimento de metodologias analíticas para a determinação de fenóis e pesticidas na matriz couro. Estratégias de otimização foram utilizadas para estabelecer as condições ótimas de extração e derivatização. A primeira metodologia desenvolvida se refere à utilização da técnica de SPME para determinação de 16 fenóis em couro utilizando uma fibra comercial de poliacrilato (PA) e cromatrografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC/MS). Para a metodologia desenvolvida, obteve-se um limite de detecção (LOD) na faixa de 0,03 a 0,20 ng g-1 com desvio padrão relativo (RSD) 10,3% (n=6), com recuperação entre de 90,0 e 107,2%. A segunda metodologia utiliza a CF-SPME para determinação de 8 fenóis em couro associada com a derivatização on fiber com bis(trimetilsilil)trifluoracetamida (BSTFA) e detecção por GC/MS. A fase extratora utilizada foi uma membrana oca de PDMS. Neste estudo obteve-se faixa linear entre 8,92 e 80 µg g-1 para os fenóis e LOD variando de 1,03 a 2,68 µg g-1com RSD 15,5% (n=5), com recuperação na faixa de 64,6 a 92,3%. A terceira e última metodologia desenvolvida foi para quantificação de 11 pesticidas organoclorados em couro utilizando a técnica de SPME (fibra comercial de PDMS/DVB) e GC/MS. Para a metodologia desenvolvida, obteve-se um LOD na faixa de 3,28 a 10,98 ng g-1 com RSD 14,3% (n=5), com recuperação entre 93,7 e 107,3%. Todas as metodologias mostraram-se adequadas para análise de fenóis e pesticidas em couro.<br> / Abstract : Solid phase microextraction (SPME) and cold fiber solid phase microextraction (CF-SPME) methods were used in this work for the development of analytical methods for the detection of phenols and pesticides in leather matrices. Optimization strategies were used to establish the derivatization and extraction optimal conditions. The first developed method refers to the use of SPME technique for the determination of 16 phenols in leather using a commercial PA fiber and gas chromatography mass spectrometry (GC/MS). For the developed method, a detection limit in the range 0.03 to 0.2 ng g-1 was obtained, with a relative standard deviation (RSD) 10.23% (n=6), with recovery between 90.0 and 107.2%. The second method uses CF-SPME for the determination of 8 phenols in leather associated with on fiber derivatization, using trimethylsilyltrifluoroacetamide (BSTFA) and detection by GC/MS. The extraction phase was a PDMS hollow membrane. In this study a linear range between 8.92 and 80.00 ìg g-1 was obtained for phenols with a detection limit ranging from 1.03 to 2.68 ìg g-1 with RSD 15.48% (n=5), with recovery into the range 64.6 to 92.3%. The third and last method developed was the quantitation of 11 organochlorinated pesticides in leather using the SPME technique (commercial PDMS/DVB fiber) and GC/MS. For the developed method, a detection limit in the range of 3.28 to 10.98 ng g-1 was obtained, with RSD 14.25% (n=5), with recovery between 93.7 and 107.3%. All the methods proved adequate for analysis of phenols and pesticides in leather.

Resumo: A doenca de Parkinson (DP) e caracterizada pela degeneracao de neuronios dopaminergicos na substancia negra pars compacta (SNpc). A DP e a segunda doenca neurodegenerativa depois da doenca de Alzheimer, afetando aproximadamente 1% da populacao em torno dos 65 anos. A doenca e caracterizada clinicamente por tremor de repouso, rigidez, bradicinesia e instabilidade postural. A pioglitazona, um agonida dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma (PPAR-ƒÁ) tem sido mostrado por atenuar a perda celular dopaminergica no modelo animal -metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) da DP, um efeito atribuido as suas propriedades anti-inflamatorias. O presente estudo investigou os efeitos motores e cognitivos obtidos pela pioglitazona, um agonista dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma gama (PPARƒÁ), em um modelo de doenca de Parkinson induzido por 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) intranigral. No primeiro experimento nos realizamos uma curva dose-resposta comportamental e neuroquimica apos uma unica dministracao de pioglitazona oral (5, 15 e 30mg/kg) 1 hora apos MPTP. Um dia apos a exposicao a neurotoxina nos demonstramos que somente a pioglitazona de 30mg/kg foi capaz de restaurar as concentracoes estriatais de dopamina e o comportamento motor. Um segundo experimento foi conduzido para testar os efeitos de dois protocolos (agudo e cronico) da administracao de pioglitazona de 30mg/kg no teste do campo-aberto, esquiva ativa de duas vias e nos niveis da DA e seus metabolitos. O protocolo agudo consistiu em uma unica administracao 1 hora apos MPTP. Ja o protocolo cronico foi realizado com administracoes diarias de pioglitazona de 30mg/kg durante 22 dias, iniciando uma hora apos MPTP. Resultados mostraram que ambos os protocolos nao foram suficientes para reverter o prejuizo cognitivo promovido por MPTP. Nos tambem demonstramos que o tratamento agudo gerou alguns niveis de europrotecao, como confirmado pela ausencia da reducao de DA no grupo tratado com pioglitazona em comparacao com o grupo sham. Em contrapartida, o tratamento cronico levou a uma reducao da DA estriatal, causada pelo MPTP. Estes achados sugerem que a administracao aguda de pioglitazona 30mg/kg foi mais eficiente para gerar efeitos beneficos no comportamento motor e nos niveis de DA estriatais. No entanto, nos nao conseguimos demonstrar melhora na cognicao relatada pela DA apos MPTP.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-11-14T11:55:11Z No. of bitstreams: 1 2012_CarolineBarbosaFariasMourao.pdf: 5439112 bytes, checksum: 09bc9fa597576b8a38b218e890515d36 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-14T12:18:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CarolineBarbosaFariasMourao.pdf: 5439112 bytes, checksum: 09bc9fa597576b8a38b218e890515d36 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-14T12:18:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CarolineBarbosaFariasMourao.pdf: 5439112 bytes, checksum: 09bc9fa597576b8a38b218e890515d36 (MD5) / Aranhas produzem em sua peçonha uma complexa mistura de moléculas, as quais, devido a seus potenciais neurotoxicos, tem despertado o interesse para a prospecção de novos fármacos e pesticidas. No entanto, poucos estudos são realizados com a peçonha de aranhas caranguejeiras, em especial de espécies encontradas no Brasil. O presente estudo teve como objetivo a caracterização da peçonha bruta da aranha caranguejeira Acanthoscurrio poulensis em busca de peptídeos neuroativos, sendo este o primeiro estudo completo realizado com essa peçonha. A peçonha de A. paulensis apresentou um total de 58 frames cromatograficas e 97 massas moleculares distintas, variando de m/z 601,4 a 21.932,3. A dose letal media em camundongos foi de 25,45 ± 2,42 µg/g. Nos ensaios em coração de rã (coração in situ e fatias isoladas de ventrículo), a peçonha bruta e a "fração de baixa massa molecular" (FBMM) promoveram efeitos semelhantes ao do estímulo vagal, os quais foram bloqueados na presença de atropina, um antagonista muscarinico. A fração protéica (FP) da pegonha não apresentou atividade similar nessas preparações. Um peptídeo denominado Ap1a, eluído aos 41% de acetonitrila no fracionamento da peçonha bruta, foi isolado e caracterizado. A seqüência precursora da Apia apresentou um peptídeo sinal e pro-peptídeo contendo 23 e 27 resíduos de aminoácidos, respectivamente, e 48 resíduos de aminoácidos, com seis cisteínas, referentes ao peptídeo maduro. Esse peptídeo, com massa molecular monoisotopica ([M+H]+) de 5.457,79, apresentou de 60 a 84% de identidade com toxinas da família da HWTX-II. Diferentemente do padrão estrutural proposto para essas toxinas, a Ap1a apresentou um arranjo das pontes dissulfeto típico do motivo ICK. A Ap1a induziu um efeito paralítico dependente da dose em lagartas Spodoptero frugiperda, com DE50 de 13,01 ± 4,21 µg/g. No circuito da Fibra Gigante de Drosophilo melonogoster, a Ap1a causou a redução de freqüência e amplitude nas respostas das vias GF-TTM e GF-DLM, indicando uma ação na junção neuromuscular de Drosophilo, a qual e mediada por receptores glutamatergicos. A Apia foi também letal a camundongos (30 mg/animal via intracranial), causando hipermotilidade com movimentos circulares e saltos e crises tônicas generalizadas com status epiiepticus e morte entre 25 e 35 min, sendo esses efeitos semelhantes aos reportados com a administração via i.c.v. de NMDA, um agonista glutamatergico. A Ap1a (1 µM) não alterou a resposta induzida por acetilcolina na preparação com células de rabdomiossarcoma, e seus efeitos foram mínimos nos canais hNav1.2, hNav1.4, hNav1.5 e hNav1.6. Dessa forma, o presente estudo proporcionou a caracterização química e biológica de uma nova molécula neuroativa da peçonha da aranha A. paulensis, com possível ação na neurotransmissao glutamatergica, e também a caracterização da peçonha bruta, mostrando uma grande variedade de compostos que podem ser futuramente estudados visando a melhor compreensão de canais iônicos ou receptores celulares e o desenvolvimento de novos fármacos e pesticidas. / Spiders produce in their venoms a complex mixture of molecules which, due to their neurotoxic potential, have raised interest in prospecting new drugs and pesticides. Nevertheless, few studies are carried out with tarantula venoms, especially with species found in Brazil. The present study aimed to characterize the crude venom from Aconthoscurria paulensis tarantula venom in search of neuroactive peptides, being this the first complete study performed with this venom. The venom of A. paulensis presented a total of 58 chromatographic fractions and 97 different molecular masses ranging from m/z 601.4 to 21,932.3. The median lethal dose in mice was 25.45 ± 2.42 |ig/g. On the frog heart assays [in situ and isolated ventricle slices), the crude venom and the "low molecular mass fraction" (LMMF) promoted effects similar to vagal stimulation, which were blocked in the presence of atropine, a muscarinic antagonist. The proteic fraction did not show similar effects on frog heart tissue. A peptide named Apia, eluted with 41% acetonitrile in the crude venom fractionation was isolated and characterized. The Apia showed 48 amino acid residues, with six cysteines, and a precursor sequence showing a signal peptide and pro¬peptide containing 23 and 27 residues, respectively. This peptide, with a monoisotopic molecular mass ([M+H]+) of 5457.79, presented 60 to 84% identity with toxins from the HWTX-II family. Unlike the structural pattern proposed for these toxins, Apia presented an arrangement of disulfide bonds typical of the ICK motif. The Apia induced a dose-dependent paralytic effect in Spodoptera frugiperda caterpillars, with and ED50 of 13.01 ± 4.21 ng/g. In the Drosophilo melonogaster Giant Fiber circuit, Apia has reduced both the amplitude and frequency of responses from GF-TTM and GF-DLM pathways, indicating an action at the Drosophilo neuromuscular junction, which is mediated by glutamatergic receptors. The Apia was also lethal to mice (30 |_ig/animal by intracranial route), causing hypermotility with circular and jump movements and generalized tonic seizures with status epilepticus and death between 25 and 35 min. These effects were similar to those reported with the administration by i.e.v. route of NMDA, a glutamatergic agonist. The Apia (1 yiM) did not alter the response induced by acetylcholine on the rhabdomyosarcoma cells preparation, and it presented minimal effects on hNavl.2, hNavl.4, hNavl.5 and hNavl.6 channels. Thus, this study provided chemical and biological characterization of a new neuroactive molecule from A. paulensis spider venom, with possible action on glutamatergic neurotransmission, and also the crude venom characterization, showing a wide variety of compounds that can be further studied in order to better understanding ion channels or cell receptors and to the design of new drugs and pesticides.

Neste trabalho foram desenvolvidos três métodos de extração e análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas para doze pesticidas (captana, clorotalonil, deltametrina, diclorana, folpete, linuron, malation, prometrina, procloraz, procimidona, triclorfon e trifluralina) em amostras de cenouras, os quais foram aplicados com sucesso em quatro amostras adquiridas no comércio local. Durante o desenvolvimento dos métodos, foram testadas várias condições experimentais, tais como diferentes fases sólidas e solventes. O primeiro método consistiu no uso de dispersão de matriz em fase sólida (MSPD) e emprega uma fase nova (p-nitro-N-propilanilina/sílica - pNNPA) e uma solução de diclorometano:acetato de etila (1:1) para determinação de dez pesticidas em amostras de cenouras frescas: triclorfon, diclorana, captana, clorotalonil, procimidona, deltametrina, trifluralina, prometrina, linuron, procloraz. Os valores de recuperação obtidos ficaram na faixa de 48 a 106% e a precisão alcançada na recuperação foi de 6 a 20%. A pNNPA foi sintetizada e caracterizada através de análise elementar, determinação da área superficial e do diâmetro dos poros. O segundo método utiliza MSPD associada à extração com líquido pressurizado (PLE) com a fase sólida XAD-7 e acetato de etila em cenouras liofilizadas. Este foi desenvolvido para determinação de resíduos de sete pesticidas em cenouras (triclorfon, clorotalonil, malation, folpete, procimidona, procloraz, deltametrina), para os quais se alcançou recuperações de 70 a 130% e precisões de 6 a 21%. O terceiro método emprega PLE com sulfato de sódio anidro e acetato de etila para determinação de sete pesticidas (triclorfon, diclorana, linuron, captana, procimidona, procloraz, deltametrina) em cenouras liofilizadas. Neste, foram alcançadas recuperações de 74 a 102% e precisões na faixa de 10 a 32%. Os coeficientes de determinação das curvas analíticas situaram-se na faixa de 0,9821 a 0,9997, os limites de detecção (LOD) e de quantificação (LOQ) para os vários compostos investigados ficaram entre 0,0024 mg kg-1 e 0,1968 mg kg-1, e entre 0,0072 mg kg-1 e 0,5963 mg kg-1, respectivamente. A repetibilidade foi inferior a 11% e a precisão intermediária foi um pouco superior a 15% somente para o folpete. Constatou-se que a eficiência dos métodos em questão é superior à do método convencional de extração sólido-líquido, sendo semelhante ou superior ao que se obtém com a fase sólida C18, que é a fase mais comumente empregada para MSPD. Todos os três métodos alcançaram LOD e LOQ aceitáveis pelas agências reguladoras. Estes métodos foram aplicados com sucesso em quatro amostras de cenouras comerciais, constatando-se nas mesmas, a presença de vários pesticidas, alguns deles acima dos limites máximos de resíduos de agências reguladoras, tais como USEPA, União Européia e ANVISA. / Three analytical methods were developed for the extraction and analysis using gas chromatography/mass spectrometry of twelve pesticides (captan, chlorothalonil, deltametrin, dichloran, folpet, linuron, malathion, prometryn, prochloraz, procymidone, trichlorphon, and trifluralin) in carrrots. During method development, several experimental conditions were tested for extraction, such as different solid phases and solvents. These methods were successfully applied to four samples of carrots purchased in local markets. Matrix solid phase dispersion (MSPD) was the first method developed with a new solid phase (p-nitro-Npropylaniline/ sílica – pNNPA) and dichloromethane: ethyl acetate (1:1) solution for the determination of ten pesticides (trichlorphon, chlorothalonil, dichloran, captan, procymidone, deltametrin, trifluralin, prometryn, linuron, prochloraz) in fresh carrots samples. Recoveries ranged from 48 to 106% and precisions were good (6 to 20%). The new solid phase pNNPA was synthesized and characterized by elemental analysis, determination of surface area and diameter of the pores. MSPD associated with pressurized liquid extraction (PLE) was employed in the development of a second method for the determination of triclorphon, chlorothalonil, malathion, folpet, procymidone, procloraz, deltametrin in lyophilized carrots, using XAD-7 as solid phase and ethyl acetate as solvent. Recoveries were in the range of 70 to 130% and precisions varied from 6 to 21%. In the third method, PLE was performed using sodium sulphate and ethyl acetate for the determination of seven pesticides (triclorphon, dichloran, linuron, captan, procymidone, procloraz, deltametrin) in lyophilized carrots. Recoveries were in the range of 74 to 102% and precisions varied from 10 to 32%. Determination coefficients of the analytical curves presented values between 0.9821 and 0.9997, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) for the various components varied from 0.0024 and 0.1968 mg kg-1, and 0.0072 to 0.5963 mg kg-1, respectively. Repeatability was less then 11% and intermediate precision was a little higher than 15% only for folpet. The efficiency of the three developed methods was higher than the one obtained with the conventional solid-liquid method. Likewise, the new methods presented similar or superior performance in comparison with results obtained with C18, the most commonly used solid phase for MSPD. All the three methods reached acceptable LOD and LOQ. by some regulatory agencies, such as USEPA, European Union and ANVISA. The application of these methods to four commercial carrot samples showed that residues of various pesticides were found in these samples, and some of them were above the maximum residue limit.

Orientador : Maria Cecilia de Figueiredo Toledo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T04:47:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_JorgeJosedoVale_D.pdf: 40199090 bytes, checksum: b2ab483c2a707a2cd752f670e547675f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O resumo podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Flavio Ailton Duque Zambrone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T04:03:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevisan_RosaMariadeSa_M.pdf: 823188 bytes, checksum: e97775f7c115b8cf0b70847be9ecf0ed (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A avaliação da exposição é parte integrante do processo da avaliação do risco à saúde humana requerido para a regulamentação de produtos praguicidas em muitos países. A avaliação do risco toxicológico ocupacional de trabalhadores agrícolas expostos aos praguicidas durante seu manuseio é realizada através de uma abordagem em 3 etapas (tier approach), proposta pela OECD. Através dela, a segurança ocupacional ao produto é quantificada associando-se a avaliação da exposição com os dos dados toxicológicos do produto em consideração. A realização deste processo, na pré- comercialização de praguicidas, é uma primeira medida na prevenção de possíveis danos à saúde humana. A exposição, ou seja, a quantificação do contato do trabalhador com o praguicida, pode ser estimada através de modelos preditivos ou medida através de estudos empíricos. Os modelos preditivos (estimativa da exposição por meio de dados substitutos) são utilizados nas primeiras etapas do processo da avaliação do risco. Durante a avaliação, se o risco calculado for aceitável ¿ for demonstrado existir uma margem de segurança para a exposição -, não é necessário prosseguir na investigação. Porém, se não o for, é requerida pelas autoridades competentes a quantificação da exposição através de estudos empíricos. No Brasil, a legislação dos praguicidas e afins exige apenas uma revisão de sua periculosidade através da avaliação toxicológica, não abordando, portanto, de forma sistemática, o processo da avaliação do risco. As ferramentas e informações para a realização da avaliação do risco toxicológico ocupacional com praguicidas estão disponíveis e seria desejável que fossem discutidas, visando sua realização, para melhorar as condições de segurança no trabalho com praguicidas no país, e a capacitação técnica necessária / Abstract: The exposure assessment is part of the assessment process of health risk for the regulation of pesticides products in many countries. The toxicological evaluation risk of agricultural workers exposed to pesticides during its use is done through 3 stages (tier approach) proposed by the OECD. It is through this evaluation that the security of the product is verified associated with the evaluation of the exposure with its toxicological information. The realization of this process in the pre-commercialization of pesticides is the first stage in the prevention of possible health risk. The exposure, or better the quantity and quality relation of the workers contact with the pesticide, can be estimated through predictable models or through empirical studies. The predictable models (estimate exposure through surrogate data) are used in the first stage of the evaluation process of the risk. During this assessment, if the risk calculated is acceptable, with a good safety margin for the exposure, no further investigation takes place. But on the other hand if the risk calculated is not accepted than the authority requires an empirical study to be made as to the exposure of the product. In Brazil, the legislation of the pesticides and derivates requires only a revision of its hazards through a toxicological evaluation and not its risk assessment. The tools and information for the execution of the process are available and it would be good if they were discussed towards its realization and capabilities / Mestrado / Saude Coletiva / Mestre em Saude Coletiva