Orientador: Maura Seiko Tsutsui Esperancini / Banca: Luiz Cesar Ribas / Banca: Marcelo Fodra / Resumo: A incidência de insetos praga na cultura da soja causa aumento no custo de produção, o que ocasiona menor rentabilidade ao produtor em razão da maior utilização de defensivos para seu controle. Deste modo, o desenvolvimento de ferramentas que atenuem estes problemas é frequente. Assim, a biotecnologia torna-se alternativa que contribui para minimizar os impactos deste cenário. A transformação genética de plantas cultivadas possibilita o melhoramento da produção, por meio da inserção de características agronômicas desejáveis. No entanto, ao adotar semente transgênica o custo da semente deve ser levado em consideração devido aos direitos de patentes pagas ao detentor da tecnologia, o que também pode refletir em aumento do custo de produção. A partir da necessidade de alternativas ao manejo fitossanitário de insetos praga foi desenvolvida a soja RR2 PRO, tolerante a herbicida e resistente a insetos. Esta cultivar é a evolução da soja RR1 que apresenta apenas tolerância a herbicida. Além do custo de produção mais satisfatório ao sojicultor, espera-se que a cultura proporcione benefícios sociais e ambientais, através da menor exposição do homem aos defensivos, bem como menor contaminação ambiental, seja por menor uso de defensivo, seja pela menor emissão de CO2. Todavia, o custo para obtenção desta tecnologia deve ser ponderado frente ao real benefício gerado. Diante disso, este trabalho teve como objetivo estimar indicadores econômicos do sistema de produção com a soja RR2 PRO e a soja RR1 no estado de Mato Grosso. A metodologia utilizada para estimar o custo operacional de produção foi a do Instituto de Economia Agrícola (IEA). Foram avaliados os principais indicadores de rentabilidade. O custo operacional total (COT) do sistema com adoção da soja RR2 PRO foi inferior ao sistema com adoção da soja RR1, refletindo no menor custo por saca da ... / Abstract: The appearance of insect pests in soybean cultivars may increase production cost and reduce producer profitability due to high use of pesticides. Techniques to minimize these problems must be developed. Biotechnology has become an alternative to minimize the impact on scenarios. Genetic transformations in cultivars enables production improvements by inserting desirable agronomic characteristics. Thus, it is necessary to take into account the cost of transgenic seeds. Patent rights of transgenic seeds require payment to them. However, the adoption of transgenic seeds requires consideration of the added production cost due to payment of patent rights of the technology's owner. The need for alternative insect pest management led to the development of the herbicide-tolerant insect-resistant soybean cultivar RR2 PRO, which was evolved from the herbicide-tolerant RR1 PRO. Besides reducing production costs, the RR2 PRO cultivar is expected to provide social and environmental benefits including reductions in exposure, environmental contamination, pesticide use and CO2 emissions. A cost assessment of this technology should take into account the real benefit generated. Thus, the objective of this study was estimated economic indicators in a soybean system of RR2 PRO and RR1 in the state of Mato Grosso. Operational cost was evaluated by Instituto de Economia Agrícola (IEA) methodology. Mean profitability indicator was evaluated. The soybean system RR2 PRO presented lower total operational cost than the RR1 system, including lower cost per bag under the RR2 PRO system versus RR1. Favorable profitability was demonstrated by both RR2 PRO with insect resistance and RR1 without insect resistance. However, the results have shown that the insect-resistant soybean cultivar may offer more advantages than its counterpart without insect resistance / Mestre

O sistema coletor de luz (LHC) é o principal complexo de proteínas associado a carotenóides e clorofilas, localizado nas membranas dos tilacóides nas plantas e algas superiores. O LHC atua como um sistema antena para o fotossistema I e o fotossistema II e tem um papel chave na captação da energia luminosa para a fotossíntese (Horton et aI, 1996). Os processos de transporte de elétrons, fixação do CO2 e assimilação do nitrato estão relacionados às necessidades de ATP, poder redutor e cofatores proteicos como, ferredoxina ou tiorredoxinina. Existe uma forte correlação entre o metabolismo do carbono e nitrogênio em plantas superiores, pois os esqueletos carbônicos e a energia, produtos da fotossíntese, são necessários à assimilação do nitrato direta ou indiretamente, através da síntese de sacarose (Ferrario-Mery, 1998; Foyer et al., 1998). A regulação deste processo é necessária para prevenir uma competição potencial da disponibilidade de poder redutor e precursores orgânicos, necessários para às vias biossintéticas (Champigny, 1995). A assimilação do nitrato para a biossintese de amino ácidos e outras moléculas necessita de ferredoxina reduzida (Durnford & Falkowski, 1997). Neste trabalho nós investigamos a regulação do metabolismo fotossintético e a assimilação do nitrato, em plantas trangênicas de tabaco que produzem uma proteína da ervilha de 28kDa do sistema principal do complexo LHCII. As análises foram conduzidas em condições de baixa luminosidade. Os resultados demostraram um aumento na assimilação de nitrogenio das plantas transgênicas, evidenciado pelo maior estado de ativação da nitrato redutase, maior atividade da glutarnina sintetase e mudanças no conteúdo de amino ácidos. Glutamato e Glutarnina aumentaram nas folhas das plantas transgênicas, enquanto Treonina teve uma severa diminuição. / not available

O complexo antena é um complexo de proteínas associado a pigmentos, como clorofilas e carotenóides. Tem a função de coletar energia luminosa para a fotossíntese (Horton et al., 1996). A luz é um fator importante na produtividade das plantas; no entanto, pode ser um fator de estresse, quando é superior à capacidade fotossintética da planta (Gilmore, 1997). Portanto, as plantas no decorrer da evolução desenvolveram mecanismos de aclimatação e dissipação segura, evitando o excesso de energia (Horton et al., 1996); (Niyogi 1999). As proteínas Cab são as proteínas de maior abundância no complexo antena LHCIIb, e estes polipeptídeos são codificados por uma família multigênica: a família Lhc em plantas superiores (Anderson & Anderson 1988); (Bassi & Dainesse 1992), sendo este complexo fundamental para a resposta das plantas a flutuações de luz (Horton et al., 1994). O metabolismo do carbono encontra-se intimamente relacionado em diversos pontos com o metabolismo do nitrogênio (Geiger et al., 1999); (Stitt & Krapp 1999); (Huppe & Turpin 1994). Uma regulação muito precisa entre estes dois metabolismos é necessária para evitar conflitos pela disponibilidade de poder redutor e precursores orgânicos (Champigny 1995). Este trabalho tem o objetivo de estudar a regulação dos metabolismos do nitrogênio e carbono, em plantas transgênicas que produzem constitutivamente as proteínas Lhcb1∗2 de ervilha e a enzima nitrato redutase (EC 1.6.6.1). A avaliação do metabolismo do carbono foi feita|por estudos de assimilação de CO2, quantificação da clorofila a, clorofila b e razão entre as duas. O metabolismo do nitrogênio foi avaliado por análises da ativação da nitrato redutase e quantificação de aminoácidos. Os resultados mostraram que as plantas transgênicas apresentam uma maior quantidade e atividade da nitrato redutase, evidenciadas pela maior atividade total e seletiva dos transformantes. Estes eventos de transformação (continua) ) aparentemente provocaram uma alteração da fotorrespiração dos indivíduos transgênicos, evidenciados pela diminuição do aminoácido serina, também foi detectada uma drástica diminuição de treonina e um aumento no conteúdo total de aminoácidos em relação aos transformantes primários (transformados só com o gene Lhcb1∗2). / The antenna complex is a protein complex associated to pigments, as chlorophylls and carotenoids. Its function is to collect light energy for the photosynthesis (Horton et al., 1996). Light is an important factor on plant productivity; however, radiation can be a cause of stress if it is above the photosynthetic capacity of the plant (Gilmore, 1997). Thus, during evolution plants developed mechanisms of acclimation and safe dissipation, avoiding excess energy (Horton et al., 1996); (Niyogi 1999). Cab proteins are the more abundant proteins within the antenna complex, and this polipeptides are codified for a multigenic family, the family Lhc in superior plants (Anderson & Anderson, 1988); (Bassi & Dainesse, 1992). This complex is essential for the answer of plants to light fluctuation (Horton et al., 1994). Carbon metabolism is related in several points with nitrogen metabolism (Geiger et al., 1999); (Stitt & Krapp, 1999); (Huppe & Turpin, 1994). It is necessary a precise regulation between these two metabolisms to avoid conflicts for the availability of reducing power and organic precursors (Champigny, 1995). This work has the objective of studying the regulation of the metabolisms of nitrogen and carbon in transgenic plants that produce constitutively the proteins Lhcbl *2 of pea and the nitrate redutase enzyme (EC 1.6.6.1). The evaluation of the carbon metabolism was made through studies of CO2 assimilation, quantification of the chlorophylls a and b and their ratio between both. Nitrogen metabolism was evaluated through analysis of the activation of the nitrate redutase and quantification of aminoacids. Results showed that transgenic plants present more content and activity of the nitrate redutase, evidenced by a higher total and in vivo activity of the transforrners. These transformation events apparently caused an alteration of the fotorespiration of the transgenic plants, evidenced by the decrease of the serina aminoacid. It also was detected a drastic decrease of threonine and an increase in the total content of aminoacids in relation to the primitive transformers (transformed just with the gene Lhcb 1*2 ).

Orientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Marcio José da Silva / Resumo: A identificação de promotores com expressão tecido-específica é uma alternativa viável para substituição dos promotores com expressão ubíqua geralmente utilizados em transgenia. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivos caracterizar funcionalmente o promotor de um gene de eucalipto que codifica um transportador de potássio com expressão específica em raiz bem como isolar e caracterizar a região promotora de um gene de eucalipto selecionado como apresentando expressão específica em folha. Plantas transgênicas de tabaco (Nicotiana tabacum SR1) contendo um cassete de expressão composto pelo promotor de raiz fusionado ao gene repórter GUS (que codifica a β-glucoronidase) foram usadas em ensaios histoquímicos e histológicos para investigar a especificidade da expressão determinada pelo promotor em estudo. Os resultados evidenciaram que o promotor investigado dirige a expressão do gene repórter em tecido vascular de folhas e raízes. A expressão em feixes vasculares de folhas e raízes foi confirmada em cortes histológicos. Visando avaliar a resposta deste promotor a baixas concentrações de potássio, duas linhagens da geração T2 foram submetidas à deficiência de potássio, e a expressão relativa do gene repórter GUS foi determinada por PCR em tempo real. Nas linhagens submetidas a estresse de potássio observou-se um aumento da expressão relativa do gene repórter GUS em função da privação do elemento. Em paralelo, um gene selecionado in silico como apresentando expressão em folha de eucalipto teve seu perfil de expressão validado por RT-PCR. A construção de um cassete de expressão contendo o referido promotor fusionado ao gene repórter GUS foi empreendida visando futuras validações funcionais / Abstract: The identification of tissue-specific promoters is of great value to substitute the ubiquitous promoters generally used in transgenic production. In this context, the present study aimed to functionally characterize the promoter of a Eucalyptus grandis gene encoding a potassium transporter showing root specific expression, and to isolate and functionally characterize the promoter region of an E. grandis gene selected as showing specific expression in leaf. Transgenic tobacco plants (Nicotiniana tabacum SR1) harboring a promoter:GUS fusion were used to investigate the expression specificity of the selected root promoter. The results showed that the investigated promoter drives a reporter gene expression in vascular tissues of leaves and roots. The expression in vascular bundles of leaves and roots was confirmed in histological crosssections. To evaluate the promoter responsiveness to low potassium concentrations, two transgenic lines (T2) were submitted to potassium starvation and the relative expression of the GUS reporter gene was determined by real time PCR. An increase in the relative expression of GUS in response to potassium starvation was observed. In parallel, the expression pattern of a gene showing leaf specific expression in Eucalyptus grandis was validated by RT-PCR. The construction of an expression cassette containing this promoter fused to the GUS reporter gene was performed aiming future functional characterization / Mestre

O oxigênio atua como substrato ou cofator numa série de reações bioquímicas do metabolismo primário e secundário das plantas. Várias estratégias têm sido utilizadas no sentido de interferir neste metabolismo aeróbico, visando, entre outras possibilidades, reduzir a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS). A fim de alterar a disponibilidade de oxigênio no interior da organela, foram produzidas plantas de fumo (Nicotiana tabacum) expressando a leghemoglobina de soja no interior das mitocôndrias. Para tanto, as plantas foram transformadas, via Agrobacterium tumefaciens, com uma construção quimérica, onde o gene da Lba de soja foi fusionado a uma seqüência de direcionamento mitocondrial. A expressão do gene quimérico foi assegurada pela presença do promotor constitutivo 35S, do vírus do mosaico da couve-flor. A proteína foi corretamente importada e processada no interior das mitocôndrias. Entretanto, não foi possível detectar alterações significativas na função mitocondrial. Numa segunda etapa do presente trabalho, plantas transgênicas de batata (Solanum tuberosum cv Bintje) expressando a leghemoglobina de soja no interior dos cloroplastos, foram caracterizadas do ponto de vista molecular e fenotípico. Observou-se que as plantas apresentaram um fenótipo semelhante àquelas deficientes na biossíntese de giberelina / not available

Esta pesquisa teve como principais objetivos o desenvolvimento de um protocolo de regeneração de plantas de soja in vitro e a obtenção de tecidos transformados, utilizando-se o Agrobacterium tumefasciens como vetor de transformação. Inicialmente, os objetivos foram direcionados para obter um protocolo de regeneração in vitro para três genótipoes de soja. Utilizando-se nós-cotiledonares como explantes, inoculados em meio de cultura MS/2 suplementado com 2,5 μM de BA + 30 g/l de sacarose + 0,7% (p/v) de ágar, obteve-se altas taxas de regeneração e múltipla brotação. Vencida a etapa da cultura in vitro, dois métodos de infecção foram avaliados, usando-se a linhagem GV2260 de Agrobacterium. Após ferir os explantes com bisturi, foram feitos dois cocultivos: em meio líquido por 16 h e em meio sólido por 48 h. Este procedimento interferiu drasticamente no processo de regeneração, sendo que apenas 8% dos explantes apresentaram brotos, a maioria, com vitrificação. No segundo método, os explantes foram infectados, na região onde ocorre a regeneração, com uma seringa contendo uma cultura líquida do Agrobacterium. Em seguida, procedeu-se o cocultivo em meio sólido por 48 h. Este ensaio mostrou 96% de regeneração com brotação abundante. Nos dois processos, foi observada a expressão transitória do gene da β-glucuronidase (GUS), usado como reporter na construção do plasmídio. Fica demonstrado neste trabalho que a utilização do Agrobacterium como vetor de transformação de soja independe do método de infecção. Porém, a regeneração de brotos está condicionada à não exposição dos explantes ao cocultivo em meio líquido. / not available

As plantas sintetizam inibidores de proteinases (IPs) como um dos mecanismos de defesa contra o ataque de insetos-praga. Esses inibidores atuam ligando-se às proteinases digestivas localizadas no aparelho digestivo dos insetos fitófagos, impedindo sua atividade proteolítica. Como conseqüência, ocorre uma redução da disponibilidade de aminoácidos levando a um quadro de deficiência nutricional. Portanto, os IPs são considerados agentes anti-metabólicos. Heliothis virescens (Fabr.,1781) é um inseto-praga de polifagia acentuada, atacando várias culturas de importância econômica. Na tentativa de estudar os efeitos de IPs produzidos pelo fumo e de plantas transgênicas de fumo expressando um IP de batata sobre o desenvolvimento da lagarta desta espécie, foram realizados ensaios biológicos nos quais lagartas foram criadas em dieta artificial (sem inibidor), em plantas de fumo transgênicas (expressando o IP do tipo 2 de batata conhecido como PIN2) e em plantas fumo normais (controle). Os ensaios biológicos mostraram que as lagartas de H. virescens apresentaram crescimento e desenvolvimento normais quando em presença do PIN2. A fim de estudar a adaptação das lagartas à presença dos IPs, foram realizados ensaios bioquímicas envolvendo a caracterização das proteinases intestinais das lagartas. A combinação de técnicas de separação de proteínas pelo peso molecular via eletroforese em gradiente de poliacrilamida (SDS-PAGE) e estudos cinéticos, mostraram a expressão de quatro enzimas do tipo das tripsinas (TI- T4) nos homogeneizados do tubo digestivo de lagartas alimentadas com plantas de fumo (transgênicas ou não) com as seguintes propriedades: T1 (Km= 0,27 mM, PM= 70 kDa),T2 (Km= 0,35 mM, PM= 67 kDa), T3 (Km= 2,4 mM, PM= 29 kDa), T4 (Km= 15 mM, PM= 17 kDa). No entanto, lagartas alimentadas em dieta sem inibidor apresentaram apenas uma tripsina majoritária (Km= 2,9 mM, PM= 29 kDa), o que está de acordo com o peso molecular das tripsinas normalmente encontradas nas lagartas de lepidópteros. Além das tripsinas, foram detectadas uma quimotripsina (26 kDa) para os três tratamentos e uma elastase (35 kDa) para os homogeneizados de lagartas alimentadas à base de folhas. Eletroforese nativa em diferentes concentrações de géis de poliacrilamida mostrou que T1 e T2 ocorreram em lagartas alimentadas com folhas (selvagens ou transgênicas), ao passo que a filtração em gel, na presença ou ausência de SDS, revelou ainda que T3 e T4 podem originar TI e T2. Estes resultados sugerem que a presença de IPs nas folhas de fumo permite a expressão de novas moléculas de tripsina com uma superfície hidrofóbica, a qual favorece a formação de oligômeros. Acredita-se que os oligômeros sejam menos afetados pelos IPs por que se ligam melhor ao substrato diminuindo a afinidade dos IPs, ou ainda por hidrolisá-los. O Papel da elastase na adaptação é incerto / not available

As proteases FtsHs, encontradas em eubactérias e eucariotos, pertencem à família das proteínas AAA (ATPases associadas a diferentes atividades celulares) e são classificadas no grupo das metaloproteases. A proteína FtsH foi primeiro identificada em Escherichia coli em mutantes ftsH (filamentation temperature sensitive) como uma protease que age facilitando a degradação de proteínas intermembrânicas e citosólicas. Ortólogas a FtsH já foram encontradas em leveduras, metazoários e plantas. Nestas últimas, a FtsH pode estar localizada nos plastídeos, como uma proteína integral da membrana dos tilacóides ou na membrana interna das mitocôndrias, como em leveduras. Estudos sobre as isoformas plastidiais são abundantes e indicam a participação dessas proteases na renovação da proteína D1, componente do fotossistema II, na resposta hipersensível e na biogênese das membranas do tilacóide. Os estudos sobre as isoformas mitocôndriais são escassos e resumem-se a informações sobre o direcionamento subcelular dessas proteases e evidências de seu envolvimento no acúmulo da subunidade 9 da ATP-sintase na membrana interna. Com o objetivo de caracterizar a função da FtsH-m1 em plantas, foi realizada a transformação genética de Nicotiana tabacum via Agrobacterium tumefaciens contendo um plasmídeo em que o cDNA da FtsHm1 de cana-de-açúcar encontra-se sob o controle de um promotor transcricional constitutivo. Esse plasmídeo apresenta o gene seletivo nptII, que confere resistência à canamicina. As plantas regeneradas in vitro, 17 no total, foram aclimatadas e transferidas para a casa de vegetação até a produção de sementes. As plantas regeneradas foram testadas quanto à presença do cDNA da FtsH-m1 de cana-de-açúcar por meio da técnica de PCR. A seleção de plantas da geração T1 que possuíam o transgene de interesse foi conduzida em ensaios in vitro e em casa de vegetação baseados na resistência dessas plantas à canamicina. A presença do transgene foi confirmada por meio da técnica de PCR. A análise da expressão heteróloga foi realizada via RT-PCR e revelou níveis elevados de RNA mensageiro nas plantas transformadas. Ao todo, foram obtidas dez plantas de fumo em que a presença do transgene de interesse foi confirmada. Não foram observadas alterações fenotípicas marcantes nas plantas das gerações T0 e T1 que pudessem ser relacionadas à expressão heteróloga da FtsH-m1 de cana-de-açúcar. Devem ser realizadas análises mais finas, que podem incluir ensaios para a investigação de possíveis alterações na função mitocondrial, no metabolismo respiratório ou na ultraestrutura das mitocôndrias em plantas a partir da geração T2. / FtsH proteases of eubacteria and eucaryotes belong to the AAA protein family (ATPases associated with different celular activities) and are included among the metaloproteases. The FtsH protein was first described in ftsh (filamentation temperature sensitive) mutant of Escherichia coli as a protease involved in the degradation of transmembrane and cytosolic proteins. FtsH-ortologous proteins have been described in yeast, metazoa and plants. In the latter, FtsHs are localized to plastids, as an integral membrane protein of thylakoid or, as in yeast, to the inner mitochondrial membrane. The various studies on the plastid isoforms point to their involvement in the turnover of D1 protein, a member of the photosystem II, in hypersensitive response, and in thylakoid membrane biogenesis. On the other hand, data on the mitochondrial isoforms are scarce and restricted to their subcellular localization, and involvement in the accumulation of ATP-synthase subunit 9 in the inner membrane. With the aim of disclosing the function of FtsH-m1 in plants, Nicotiana tabacum plants were transformed by Agrobacterium tumefaciens carrying a designed plasmid containing the sugar-cane FtsH-m1 cDNA under the control of a constitutive-transcription promoter. This plasmid also contained the selectable kanamycin-resistance gene nptII. The seventeen plants obtained in vitro were acclimatized and kept in a greenhouse until seeding. These plants were then tested by PCR for the presence of the sugar-cane FtsH-m1 cDNA. Selection of T1 plants for the presence of the transgene of interest was carried out both in vitro and in the greenhouse, based on kanamycin resistance. The transgene carrier status of the selected plants was confirmed by PCR. Higher levels of FtsH-m1 messenger RNA were detected by RT-PCR in transformed T1 plants. A total of ten tobacco plants carrying the sugar-cane FtsH-m1 cDNA were obtained. T0 and T1 plants did not show conspicuous phenotype alterations which could be related to the heterologous gene expression. Refined analyses are needed in plants from T2 generation on, including the evaluation of mitochondrial structural abnormalities and disfunction, as well as respiratory alterations.

Orientador: Caio Antonio Carbonari / Coorientador: Alfredo Junior Paiola Albrecht / Banca: Edivaldo Domingues Velini / Banca: Leandro Paiola Albrecht / Resumo: O gene fosfinotricina acetyltransferase (pat) produz a enzima PAT, que por n-acetilação é capaz de metabolizar o glufosinate, transformando-o em n-acetyl-L-glufosinate (NAG). Assim, plantas transgênicas contendo esse gene resistem às aplicações desse herbicida. No milho, esse gene foi inserido como marcador de seleção e mais estudos precisam ser realizados a fim de validar o uso dessa tecnologia. Nesse contexto, os objetivos do presente trabalho foram avaliar se a expressão do gene pat é proporcional ao nível de resistência de tecnologias de milho à aplicação de glufosinate e avaliar a seletividade de herbicidas em associação ao glufosinate em milho com o gene pat. Durante o primeiro trabalho, foram utilizados híbridos de milho com as tecnologias Herculex®; Agrisure TL®; Herculex Yieldgard®; Leptra®; Viptera 3®; Power Core® com o gene pat e VT PRO® sem o gene pat. Para isso, um experimento foi realizado para avaliar a expressão relativa do gene pat nos híbridos de milho, por meio de PCR em tempo real. Em outro estudo, foram aplicadas doses de glufosinate (0, 500, 1000, 2000 e 4000 g i.a ha-1) sobre os híbridos de milho, no qual foram avaliados os teores de glufosinate e NAG, assim como acúmulo de amônia, taxa de transporte de elétrons (ETR), injúria visual e acúmulo de biomassa. Em campo, foi realizada a aplicação de 500 g i.a ha-1 de glufosinate durante o estádio V4 do milho, e foi avaliado o rendimento de grãos. Um segundo estudo foi realizado a campo, adotando-se a tecnolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The phosphinothricin acetyltransferase (pat) gene produces the enzyme PAT, which by n-acetylation is able to metabolize the glufosinate, transforming it into n-acetyl-L-glufosinate (NAG). So transgenic plants containing this gene resist the applications of this herbicide. In corn, this gene was inserted as a selection marker and further studies are needed to be performed to validate this technology use. In this context, the objectives of the present work were to evaluate if the expression of the pat gene is proportional to the resistance level of maize technologies submitted to the application of glufosinate and also to evaluate the selectivity of some others herbicides in association with glufosinate in maize which presents the pat gene. For the first work, the technologies used were: Herculex®; Agrisure TL®; Herculex Yieldgard®; Leptra®; Viptera 3®; Power Core® with the pat gene and VT PRO® without the pat gene. For this, an experiment was carried out to evaluate the relative expression of the pat gene in the technologies by RT- PCR. In another study, glufosinate (0, 500, 1000, 2000 and 4000 g a.i ha-1) doses were applied to the technologies, in which the glufosinate and NGA contents, ammonia accumulation, electron transportation rate (ETR), visual injury and biomass accumulation were evaluated. In the field, the spraying of 500 g a.i ha-1 of glufosinate in the V4 stage of maize was carried out in the technologies and grain yield was measured. For the second study the Power Core® technology was adopted, and the experiment was carried out in the field. The treatments were: glufosinate; glyphosate; glufosinate + glyphosate; glufosinate + nicosulfuron; glufosinate + atrazine; glufosinate + tembotrione; glufosinate + mesotrione; glufosinate + carfentrazone ethyl; glufosinate + bentazon; glufosinate + 2,4-D; no-weeding control and weeding control. Evaluations of visual injury, ETR, ammonia ... / Mestre

A eritropoietina (EPO) é um hormônio que pertence a um grupo de fatores de crescimento hematopoiético, controlando a proliferação e a diferenciação de células da medula óssea. Ela age induzindo a elevação da produção de células vermelhas, aumentando a quantidade de hemoglobina e o oxigênio circulante. Este hormônio é principalmente secretado pelo rim, e é amplamente usado na medicina no tratamento de anemias, desordens renais e cardíacas, tumores e diversas outras doenças. A EPO recombinante tem sido produzida em células de mamíferos (COS-1 e CHO) em culturas in vitro e tem sido expressa experimentalmente em células de insetos, leveduras e bactérias. Até o momento, há somente uma descrição da expressão transgênica desta proteína em plantas sem, no entanto, sucesso na regeneração de plantas saudáveis e férteis. No presente trabalho, plantas transgênicas de arroz (Oryza sativa) e tabaco (Nicotiana tabaccum) contendo o gene da EPO foram geradas, nas quais foi avaliada a expressão gênica e detectada a presença da proteína recombinante. O gene recombinante da EPO utilizado foi sintetizado baseado na técnica de “overlapping” de nucleotídeos. Um fragmento de 582 pb correspondente ao cDNA da EPO foi clonado e submetido a seqüenciamento automático. Uma mutação no nucleotídeo 252 (G A) foi identificada, o que não modificou o aminoácido codificado pelo códon, uma glicina. O fragmento foi transferido para o vetor de expressão pWUbi.tm1, o qual contém o promotor do gene da ubiquitina e o terminador tm1'. Este cassete de expressão foi transferido para o vetor binário pWBVec4a, que foi transformado nas cepas AGL1 e LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens. Estas cepas foram utilizadas na transformação de arroz e de tabaco, respectivamente. A integração do transgene no genoma da planta foi comprovada por PCR. A expressão da EPO nas plantas de tabaco foi detectada por RT-PCR convencional e quantitiativa, e a presença da proteína foi avaliada por SDS-PAGE e Western blot, provando o sucesso da obtenção de plantas transgênicas de tabaco expressando EPO. Foi obtida por auto-fecundação a geração T1, a qual apresentou segregação mendeliana. Nenhuma das plantas avaliadas apresentou qualquer tipo de deformidade ou mal-formação. Não foi possível a obtenção de plantas de arroz transgênicas devido à deficiência das mesmas no processo de regeneração, possivelmente em conseqüência da super-expressão do transgene em função do promotor escolhido. / Erythropoietin (EPO) is a hormone that belongs to a group of growth hematopoeitic factors, which control the proliferation and differentiation of marrow bone´s cells. It acts inducing the production of blood red cells, increasing the amount of circulating hemoglobin and oxygen. This hormone, mostly secreted by kidneys, is widely used in medicine as a treatment for anaemia, kidney and heart disorders, tumors and numerous diseases. Recombinant EPO has been produced in mammalian cells (COS-1 and CHO) cultured in vitro and has been also experimentally inserted into insect, yeast and bacterial cells. Up to now, to the best of our knowledge, there is only one description of transgenic expression of this protein in plants but without success in the generation of healthy, fertile plants. In the present work we evaluated the expression of human EPO in plants such as rice (Oryza sativa) and tobacco (Nicotiana tabaccum). The recombinant EPO gene was synthesized based on the nucleotide “overlapping” technique. A fragment of 582 bp corresponding to the EPO cDNA was cloned and then submitted to automatic sequencing. At that time, a mutation on nucleotide 252 (G A) was identified. It did not modify the encoded amino acid of the codon, a glycine. This fragment was transferred to the expression vector pWUbi.tm1, armed with the promoter of the ubiquitin gene and the terminator tm1’. This expression cassette was transferred to the binary vector pWBVec4a, which was then transformed into strains ALG1 and LB4404 of Agrobacterium tumefaciens. These strains were employed in the transformation of rice and tobacco, respectively. Transgenic integration into plant genomes was evaluated by PCR. The expression of EPO in tobacco plants was detected by conventional and quantitative RTPCR and the presence of the protein was evaluated by SDS-PAGE and western blot, successfully proving the generation of transgenic tobacco plants expressing EPO. By selfcrossing it was obtained a collection of T1 plants, which presented mendelian segregation of the transgene, and none of the plants presented any kind of miss-formation or deformity. It was not possible to obtain rice transgenic plants due to their deficiency in the regeneration process, possibly due to the transgene over-expression driven by the ubiquitin promoter.