Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-05Bitstream added on 2014-06-13T18:19:57Z : No. of bitstreams: 1 silva_alm_me_jabo.pdf: 515451 bytes, checksum: e4541fd6e085b2151dc035caa5bdb7d9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O rhG-CSF é uma citocina que eleva o número de neutrófilos e também mobiliza células-tronco hematopoéticas (CTH) para o sangue periférico, porém sua aplicação pode ocasionar a queda de plaquetas. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer entre três diferentes doses (5, 10 e 20μg/Kg/dia) do rhG-CSF qual proporcione mobilização de pelo menos 10 CTH CD34+/μL ao sangue periférico, elevação do número de neutrófilos, além de avaliar seu efeito sobre o número de plaquetas em cães sadios. O rhG-CSF (filgrastine) foi aplicado em cães sadios durante quatro dias e a contagem no número de CTH CD34+/μL, neutrófilos e plaquetas foi obtida durante a aplicação da citocina e sete dias após o término da aplicação. A leucocitose ocorreu devido à elevação dose-dependente de neutrófilos segmentados que ocorreu 24 horas após a primeira aplicação do medicamento com diferença estatística. Entretanto, 48 horas após a última dose, os valores retornaram aos níveis basais nos três grupos. O número de plaquetas reduziu após a primeira dose e não recuperou até o último momento de avaliação. Em relação às CTH CD34+, para os grupos que receberam 10 e 20μg/Kg/dia ocorreu elevação dose–dependente 24h após primeira aplicação com diferença estatística; no grupo que recebeu 5μg/Kg/dia os valores não elevaram. A dose de 5μg/Kg/dia foi suficiente para elevar os valores de neutrófilos, porém não acarretou na mobilização de CTH CD34+. As três doses administradas aos animais levou a queda nos valores de plaquetas, sendo necessária precaução ao administrar em cães trombocitopenicos / The rhG-CSF is a cytokine that increase the number of neutrophils and also mobilizes hematopoietic stem cell (HSC) to peripheral blood, but their application can cause a drop in platelets. The aim this work was to establish between three different doses (5, 10 e 20 μg/kg/day) of rhG-CSF which provides mobilization at least 10 HSC CD34+/μL to peripheral blood, increased number of neutrophils and to evaluate its effect on the number platelets in normal dogs. The rhG-CSF (Filgrastine®) was applied from healthy dogs for four days and couting the number of HSC CD34+, neutrophils and platelets was obtained during the application of cytokine and seven days after the application. The leukocytosis occurred due to increase dose relation of segmented neutrophils that occurred 24 hours after the first application of the drug with a statistical difference. However, 48 hours after the last dose, the values returned to baseline levels in the three groups. The number of platelets reduced after the first dose and not returns to the last time point. Regarding the number HSC CD34+, for the groups receiving 10 and 20 μg/kg/day occurred increase dose relation 24 hours after the first application with a statistical difference; in the group that received 5 μg/kg/day, values did not improve. The dose of 5 μg/kg/day was enough to raise the values of neutrophils, but did not result in the mobilization of HSC CD34+. All three doses administered to animals led to a drop in platelets, necessitating caution when administering in thrombocytopenic dogs

Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Coorientador: Maria de Moura Campos Pardini / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Ana Flavia Nacif Pinto coelho Pires / Resumo: A detecção do RNA viral do VHC tem sido documentada em outros compartimentos biológicos além do soro e plasma de pacientes infectados pelo vírus, como nas plaquetas. No entanto, sua influência na terapia antiviral é desconhecida. Poucos estudos têm sido realizados na tentativa de avaliar a quantificação do RNA viral em outros compartimentos biológicos e a significância deste achado no resultado da terapia antiviral. Considerando que o VHC é carreado pelas plaquetas na circulação, a avaliação quantitativa do RNA viral neste compartimento biológico pode se mostrar distinta da observada no plasma.Realizar a avaliação comparativa in vitro do RNA do VHC plasmático e do RNA do VHC carreado à plaqueta e, realizar a avaliação comparativa da quantificação do RNA viral do VHC em plasma e plaquetas de pacientes com recidiva ao tratamento antiviral.Amostras de sangue periférico provenientes de pacientes infectados pelo VHC foram utilizadas para realização de dois experimentos. Experimento in vitro (repetido em triplicata) consistiu na separação de quatro alíquotas da mesma amostra, as quais foram submetidas a incubação a 37oC por 30xg por diferentes intervalos de tempo (0, 48, 96, 144h) e, posteriormente separadas para obtenção de plasma e pellet de plaquetas. A partir de cada uma destas frações foi extraído RNA viral, o qual foi utilizado como fonte para qPCR. Experimento in vivo: Foram acompanhados pacientes que iniciaram e finalizaram a terapêutica entre janeiro de 2011 a julho de 2012 e, dentre estes, os que apresentaram recidiva virológica ao tratamento antiviral estabelecido. Dos pacientes em recidiva virológica foram processadas amostras para a obtenção do plasma e pellet de plaquetas em dois momentos: no momento da recidiva virológica e, no momento imediatamente anterior (12 semanas anteriores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Treatment for chronic hepatitis C is effective in about 50% of patients treated with exogenous interferon, which induces interferon-stimulated genes leading to endogenous interferon production. Integrins are involved in interferon production and structural modifications of them can be associated with altered function. Some integrins, expressed on the platelet membrane, show polymorphic antigenic determinants called human platelet antigens (HPA). The association between HCV infection and HPA-5b has already been demonstrated, in the same way the HPA profile could be associated with therapeutic response. This study aimed evaluates the association between the HPA-1, -3, -5 frequencies and therapy response in HCV-infected patients. HPA genotyping was performed in 168 HCV-infected patients by PCRSSP or PCR-RFLP. The patients were on interferon- (48.8%: 43.9% carriers of HCV genotype 1 and 56.1% non-1) or peginterferon (51.2%; 87.2% carriers of HCV genotype 1 and 12.8% non-1), both combined with ribavirin. Statistical analysis was performed using the proportional odds model. The genotypic frequency of HPA-1a/1b was significantly higher in the patients with therapeutic failure (odds ratio=3.58, 95% CI -1.18 - 10.82). The results suggest that the HPA-1a/1b genotype is associated with therapy failure... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luís Carlos Spolidorio / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Raquel Fernanda Gerlach / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administracao da aspirina (Asp), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre o processo de reparacao dos tecidos periodontais apos inducao experimental de periodontite em ratos. Primeiramente avaliou-se a acao destas drogas sobre a expressao das citocinas pro-inflamatorias: TNF-α, IL-6 e TXA2 no tecido gengival de 25 ratos subdivididos em 5 grupos (n=5), 15 dias apos a instalacao da ligadura ao redor do primeiro molar inferior. Para avaliacao do reparo dos tecidos periodontais, setenta e dois ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 6 grupos (n=12), sendo 1 controle e 5 submetidos a periodontite atraves da instalacao de ligadura bilateral na regiao de primeiro molar inferior. Apos 15 dias, o grupo controle e um grupo com periodontite foram sacrificados. Para a inducao do reparo dos tecidos periodontais, as ligaduras dos animais dos outros 4 grupos foram removidas e os ratos foram tratados com solucao de NaCl 0.9%, Asp (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), diariamente, via gavagem. Apos 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemi- mandibulas do lado direito removidas para analise histologica e as do lado esquerdo para avaliacao macroscopica, microtomografia computadorizada e analise da expressao, atividade especifica e co-localizacao das metaloproteinases de matriz (MMPs) -2 e -9 atraves de zimograma e zimografia in situ. Apos a retirada da ligadura, houve reparacao do osso alveolar e reparacao do tecido gengival representado pela recomposicao da arquitetura tecidual do epitélio e do tecido conjuntivo. O tratamento com Asp comprometeu a reparacao óssea alveolar na face mesial e acelerou na area de furca, ao passo que nao influenciou na recomposicao da arquitetura do tecido epitelial e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (Asp), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) in the process of periodontal tissue repair after induction of experimental periodontitis in rats. First, we evaluated the action of these drugs on the expression of pro-inflammatory cytokines: TNF-α, IL-6 and TXA2 in the gingival tissue of 25 rats randomly distributed in five equal groups (n=5), 15 days after ligature placement around lower first molars. For periodontal tissue evaluation, seventy-two rats (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) were randomly distributed in 6 equal groups (n=12). One control and 5 submitted to a ligature-induced periodontitis model in the region of lower first molar bilaterally. After 15 days, the control group and a group with periodontitis were sacrificed. To induce periodontal tissue repair, ligatures from the other 4 groups were removed and the rats treated with NaCl 0.9%, Asp (30 mg/kg), Clo (75 mg/kg) and Tic (300 mg/kg) daily by gavage. After 15 days of treatment, animals were killed, the right mandibles were removed for histological analysis and the left side to macroscopic, microtomography evaluation and expression, activity and colocalization of matrix metalloproteinases (MMPs) -2 and -9 by zymogram and in situ zymography. After removal of the ligature, there was repair of the alveolar bone and gingival tissue represented by the restoration of tissue architecture of the epithelium and connective tissue. Treatment with Asp undertook the repair of the mesial alveolar bone and accelerated the repair of furcation area, while not influenced the restoration of tissue architecture and epithelial tissue. Treatment with Tic undertook the repair of mesial alveolar bone and furcation the area, as well as the repair of gingival epithelial... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-11-12T11:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000452038-Texto+Completo-0.pdf: 5927941 bytes, checksum: d7c697db12eaa2a93c2f82acbfe45c20 (MD5) Previous issue date: 2013 / Objective: To evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) and platelet-rich fibrin (PRF) on cutaneous wound healing in rats by comparing treated and control wounds. Material and Methods: Forty-eight Wistar rats were used in the study. Two wounds with 1-cm diameter, of total skin thickness, were excised from the back of the animals and treated with either PRP or PRF and saline (paired model). The wounds were evaluated immediately after the procedure and after 7 and 14 days using macroscopic (photographs) and microscopic (histology) methods. The photographs were used to measure the area of wounds in order to analyse wound contraction (morphometric analysis). The histological images permitted a count-analysis of collagen concentration (histomorphometric analysis) while the histological slides providet the description of the wounds’ characteristics. Results: Morphometric analysis revealed statistically significant time effect (P<0. 001) and treatment group effect (P=0. 022) over the observation period. The rate of wound contraction was higher in PRF-treated wounds than in PRP-treated wounds (P=0. 030). In the histomorphometric analysis, mean collagen concentration, on the images of the experimental groups, increased significantly (P<0. 001) from day 7 to day 14. There was wide variation in the percentage of collagen concentration: 129% in the PRF group vs. 22% in the PRP group; however, this difference did not achieve statistical significance (P=0. 380). Histology of the wounds suggested a more accelerated healing process in the PRF group vs. the PRP group, despite the lack of statistical significance in the characteristics analyzed. PRP-treated and PRF-treated groups were not statistically superior to their controls in any of the studied variables. Conclusion: The present results suggest that treatment with PRP and PRF were not more effective than saline for cutaneous wound healing in rats. However, PRF proved to be superior to PRP. / Objetivo: Avaliar o efeito do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e da Fibrina Rica em Plaquetas (PRF) na cicatrização de feridas cutâneas em ratos, comparando os tratamentos entre si e com seus respectivos grupos controle. Material e Métodos: Foram utilizados 48 ratos Wistar. Duas feridas de 1,0 cm de diâmetro, de espessura total da pele, foram excisadas do dorso dos animais e tratadas com PRP ou PRF e soro fisiológico (modelo emparelhado). As feridas foram avaliadas no pós-operatório imediato e depois de 7 e 14 dias, de forma macroscópica (fotografias) e microscópica (histologia). As fotografias forneceram medidas da área das feridas, possibilitando analisar sua contração (análise morfométrica). As imagens histológicas permitiram calcular a concentração de colágeno nas feridas (análise histomorfométrica) e as lâminas histológicas a descrever suas características. Resultados: Quanto à análise morfométrica, o efeito do tempo (P<0,001) e dos grupos (P=0,022), ao longo do período de observação, foi estatisticamente significativo. A taxa de contração das feridas tratadas com PRF foi maior do que as tratadas com PRP (P=0,030). Na análise histomorfométrica, a média da concentração de colágeno, nas imagens dos grupos experimentais, apresentou um aumento do 7º para o 14º dia, considerado significativo (P<0,001). Houve grande variação percentual na concentração de colágeno: 129% para a PRF contra 22% para o PRP, porém, sem significância estatística (P=0,380). A descrição histológica das feridas sugeriu que o grupo PRF apresentou maior aceleração do reparo quando comparado ao grupo PRP, apesar da ausência de significância estatística nas características avaliadas. Os grupos de tratamento PRP e PRF não foram estatisticamente superiores aos seus grupos controle nas variáveis estudadas. Conclusão: Os dados do presente estudo sugerem que o PRP e a PRF não apresentaram resultados mais eficazes do que o soro fisiológico na cicatrização de feridas cutâneas em ratos. No entanto, a PRF mostrou-se superior ao PRP.

Made available in DSpace on 2014-06-11T02:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458594-Texto+Completo-0.pdf: 1623070 bytes, checksum: 141e39e7200c7e85ea7cf51cf01083c9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Imbalance in hemostatic mechanisms can occur during pregnancy with a tendency for hypercoagulability and increased thrombosis risk. Pregnant women with a hypertensive disorder, especially preeclampsia, may disclose alterations in total platelet count and the platelet indexes, mean platelet volume (MPV) and immature platelet fraction (IPF). The IPF has been suggested as a sensitive index for monitoring changes in platelet production and destruction. An automated technique for obtaining this parameter has been used. The aim of the present study was to evaluate the immature platelet fraction behavior in patients diagnosed with a gestational hypertensive disorder (GHD), using fluorescent flow cytometry. A crosssectional study conducted at the São Lucas Hospital, Porto Alegre, Brazil to estimate IPF levels in the maternal blood of 99 pregnant women, divided into 3 groups: normotensive controls (NP), preeclampsia syndrome (PES) and non-proteinuric hypertensive pregnancy (nPHP).Following ethical approval and written informed consent, samples were collected from 33 NP, 34 PES, and 32 nPHP women. IPF levels were measured by fluorescent flow cytometry using the XE-5000® (Sysmex Corporation, Kobe, Japan). The IPF and MPV count in pregnant women with a GHD was significantly higher than the control group. No significant difference was detected between the PES and nPHP groups. The MPV for the NP group was normal. A distinct profile in platelet indexes was detected in hypertensive pregnancies. It is suggested that these markers could be used in daily routine as an additional tool in the management of hypertensive pregnant women. / Um desequilíbrio nos mecanismos hemostáticos pode ocorrer durante a gestação com tendência à hipercoagulabilidade e aumento do risco de trombose. Nas gestantes com distúrbio hipertensivo, principalmente nas pré-eclâmpticas, há dados na literatura que indicam haver alteração no número total de plaquetas e nos índices plaquetários, volume plaquetário médio (VPM) e fração de plaquetas imaturas(IPF). A IPF tem sido sugerida como um índice sensível para monitorar mudanças na produção e destruição plaquetária. Uma técnica automatizada para a obtenção deste parâmetro tem sido utilizada. O objetivo do presente estudo é avaliar o comportamento da IPF utilizando citometria de fluxo fluorescente em pacientes com diagnóstico de doença hipertensiva gestacional. Foi realizado estudo transversal controlado com 99 gestantes a fim de estimar os níveis de IPF no sangue materno das pacientes com síndrome de pré-eclâmpsia (SPE) comparando com hipertensas gestacionais sem proteinúria (HGsP) e gestantes normais normotensas (NT) atendidas no Hospital São Lucas/PUCRS, Porto Alegre, Brasil.O termo de consentimento livre e esclarecido foi empregado nas 34 gestantes com SPE, 32 com GHsP e nas 33 NT. A IPF foi contada através do equipamento XE-5000 (Sysmex Corporation, Kobe, Japan), utilizando citometria de fluxo fluorescente. A contagem de IPF e VPM em gestantes com doença hipertensiva gestacional (DHG) foi significativamente maior que no grupo controle. Não houve diferença estatística entre os grupos SPE e HGsP. O VPM foi normal em todas as gestantes do grupo controle. Detectou-se um distinto perfil dos índices plaquetários em gestantes hipertensas, e sugere-se que esses marcadores possam ser utilizados na rotina clínica diária como uma ferramenta adicional no auxílio do diagnóstico precoce da DHG.

Orientador: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Francisley Ávila Souza / Banca: Paula Lazilha Faleiros / Resumo: O propósito do presente estudo clínico será avaliar o efeito do tratamento de recessões gengivais classe II de Miller com enxerto gengival livre (EGL), associado a fibrina rica em plaquetas e leucócitos (L-PRF) no "creeping attachement" (CA). 12 pacientes que apresentavam recessões bilaterais classe II de Miller, localizadas em pré-molares inferiores, totalizando 24 sítios, foram divididos aleatoriamente nos Grupo EGL (n=12), é o grupo controle no qual o sitio recebeu o recobrimento radicular com enxerto gengival livre (EGL); e o Grupo EGL/L-PRF (n=12), EGL associado ao L-PRF, estabilização de membrana de L-PRF no leito receptor e sutura do EGL. Para obtenção do L-PRF, foi realizada a coleta de 20 ml de sangue de cada paciente, que foi imediatamente centrifugado a 2700 rpm, por 12 minutos. Realizou a medida do recobrimento radicular o presente no período inicial e após 30 dias de pós-operatório, e foi avaliado a quantidade de CA (90, 180 e 360 dias). Após 360 dias não foi possível observar uma diferença significativa de CA entre os grupos EGL (1.81 ± 0.40) e 1.00 ± 0.70 (EGL/L-PRF ), entretanto ocorreu diferença na quantidade de mucosa queratinizada, gengiva inserida e altura da recessão. EGL e EGL/L-PRF proporcionaram aumento na mucosa queratinizada e migração tecidual em recessões classe II de Miller / The main objective of the present clinic study will be to evaluate through observation of the root covering, the "creeping attachment" (CA) on Miller class II gingival recession treated with free gingival graft combined with leucocyte and platelet rich -fib rin (PRF-L). 12 patients with bilateral Miller Class II gingival recession in lower premolars were recruited . Group FGG (n=12): control group, the site will receive the root coverage with free gingival graft, and Group FGG/L-PRF (n=12): will be performed an association between free gingival graft and L-PRF, the L- PRF membrane stabilized to the receptor region and suturing the EGL. To obtain this platelet concentrate, 20 ml of blood of each patient will be collected and immediately centrifuged at 2700rpm for 12 minutes. The following parameters illbe measured: O'Leary plaque index, gingival index, eight of gingival recession, recession width, amount of eratinized mucosa, probing depth (PD) and then, the linical attachment level will be conducted. The measurements will be performed at 30, 90, 180 e 60 days after the surgical procedure . The CA will be measured at 90, 180 and 360 days. Data will be analyzed statistically (p < 0.05) in a specialized omputer program (Bioestat 5.0). After 360 days, ignifica nt differences were not found between the wo roups for CA, however there was a significant difference for kerati / Mestre

Orientador: Edison Bittencourt / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T14:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verceze_ArmandoValladas_M.pdf: 3062706 bytes, checksum: 0e14b20018f95cd0fb842992c96ca734 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Em Hemoterapia,tem-se utilizado bolsas múltiplas para a coleta e fracionamento de sangue e seus derivados. A característica especial destas bolsas é quanto à variação do tempo de estocagem para os concentrados de plaquetas, que depende de propriedades como a permeabilidade ao oxigênio, considerado fator importante para o metabolismo das plaquetas. Tomando como padrão o filme de PVC plastificado com DOP (di-2-etilhexilftalato), de espessura padrão 370 micra, com gravação usual por jateamento, foi estudado o filme denominado PL5, plastificado com o mesmo DOP, com espessura reduzida para 350 micra, com gravação especial, piramidal, regular e o filme de PVC plastificado com TOTM (tri-octil trimelitato) de espessura 370 micra, com gravação usual por jateamento. As modificações causadas pelo tipo de gravação foram avaliadas pelo estudo da permeabilidade ao oxigênio, com filmes da mesma espessura aparente, utilizando diferentes gravações e diferentes plastificantes (DOP e TOTM). Para caracterização da compatibilidade bio-toxicológica foram estudados todos os metais e as substâncias exigidas em portarias do Ministério da Saúde e norma ISO específica...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In hemoteraphy, multiple blood bags have been used to collect and fractionate blood and its derivatives. The special feature of such bags is related to the storage-time length variation of the platelet concentrates, which depends upon properties such as permeability to oxygen, considered a factor of high importance for the metabolism oh platelets. Having a PVC film, plasticized with DOP, as thick as 370 micra, made rugged by usual jet as a pattern, a film named PL5, plasticized with the same DOP which was thinned to 350 micra and was regularly, pyramid-like rugged, as well as a PVC film plasticized with TOTM, as thiek as 370 micra, made rugged by usual jet were studied. The changes caused by the kind of rugosity were evaluated by a study on the permeability to oxygen in films with the same thickness using different techniques to make them rugged and different plastieizers ( DOP and TOTM ). ln order to characterize the bio-toxicological compatibility, all the metals and substances required by regulations of the Ministry of Health and specific ISO norm were studied...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Ciencia e Tecnologia de Materiais / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T23:37:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BaldisseraJunior_Lineu_M.pdf: 826113 bytes, checksum: a2244710b71a5e86c7de35e81492c539 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Há relatos de que as plaquetas desempenham função importante no desencadeamento da resposta inflamatória alérgica, como a asma brônquica. Entretanto, existem poucos estudos funcionais avaliando a interação plaqueta-asma. O objetivo deste trabalho foi investigar a função plaquetária em modelo de asma alérgica em ratos. Para tanto, ratos Wistar machos (180-200 g) foram sensibilizados à ovalbumina (OVA) e desafiados intranasalmente uma única vez, quatorze dias após a sensibilização. Para confirmar a eficácia da sensibilização à OVA, realizou-se a dosagem de IgE sérica e contagem de leucócitos no lavado broncoalveolar (LBA) após o desafio antigênico. O comportamento plaquetário foi avaliado através da contagem de plaquetas no sangue periférico entre 30 minutos a 24 horas após o desafio. As plaquetas foram isoladas em tempos variados após o desafio com OVA, a saber: 30 minutos, 2, 8 e 24 horas. Em seguida, realizou-se ensaios de adesão plaquetária em microplaca de 96 poços recoberta com fibrinogênio e ensaios de agregação plaquetária. Nossos resultados mostraram que a sensibilização e o desafio antigênico resultaram em aumento significativo dos níveis de IgE e infiltrado eosinofílico no LBA, validando o modelo alérgico adotado no estudo. Observou-se redução significativa do número de plaquetas circulantes em 30 minutos após o desafio com OVA, atingindo redução máxima em 8 horas, retornando aos valores basais 24 horas após o desafio. A adesão plaquetária ao fibrinogênio imobilizado e agregação plaquetária foram realizadas nos tempos de 30 min, 2, 8 e 24 horas após o desafio com OVA. A adesão plaquetária espontânea não foi modificada em nenhum dos tempos estudados. A adesão plaquetária induzida com ADP (5-50 µM) ou trombina (30-100 mU/mL) mostrou-se significativamente elevada em 30 minutos, e diminuída em 24 horas após o desafio com OVA. O desafio antigênico não modificou o perfil de agregação plaquetária, exceto para as plaquetas ativadas com ADP (50 µM) e/ou trombina (200 mU/mL), em 24 horas após o desafio. Com o intuito de se verificar se a via de sinalização de cálcio estaria envolvida nas mudanças observadas na adesão plaquetária, realizamos ensaios de mobilização de cálcio em plaquetas nos tempos de 30 min e 24 horas. A mobilização dos estoques internos de cálcio induzidos por ADP (20 µM) ou trombina (100 mU/mL) foram significativamente maiores em 30 minutos, e menores 24 horas após desafio antigênico à OVA. O influxo de cálcio externo foi significativamente maior em plaquetas de ratos estimuladas com ADP (20 µM) em 30 minutos após desafio com OVA. Após 24 horas, houve tendência de redução do influxo de cálcio externo em plaquetas de animais sensibilizados. Em conjunto, nossos dados mostram que o desafio intranasal com OVA acarreta, na fase imediata (30 minutos), aumento de adesão plaquetária ao fibrinogênio e elevação do transporte interno e externo de cálcio. Na fase tardia (24 horas), observamos redução da adesão plaquetária e diminuição dos estoques internos de cálcio / Abstract: Evidences show that platelets play important roles in triggering the allergic inflammatory diseases, such as bronchial asthma. However, there are few functional studies attempting to evaluate the platelet-asthma interaction. The aim of this work was to investigate platelet function in a rat model of allergic asthma. Male Wistar rats (180-200 g) were sensitized with ovalbumin (OVA) and challenged intranasally fourteen days after sensitization. In order to assess the efficacy of OVA sensitization, serum IgE levels and leukocyte counts in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid was performed post-antigen challenge. Counts of platelets in peripheral blood were performed from 30 minutes to 24 hours post-OVA challenge. Platelets were isolated in different time-periods after OVA challenge, namely: 30 minutes, 2, 8, 24 hours; then, ex-vivo platelet adhesion to immobilized fibrinogen and aggregation assays were performed. Our results showed that antigen-sensitization and challenge resulted in increased serum levels of IgE and eosinophil infiltration in BAL fluid, thus validating the allergic model adopted in this work. A significant reduction of circulating platelet was observed at 30 minutes post OVA-challenge, reaching the maximal reduction at 8 hours, and returning to baseline at 24 hours post-challenge. Platelet adhesion to immobilized fibrinogen and aggregation were performed at 30 minutes, 2, 8 and 24 hours after OVA challenge. Spontaneous platelet adhesion remained unaffected in all studied time. ADP (5-50 µM)- and thrombin (50-100 mU/mL)-stimulated platelet adhesion were significantly increased at 30 minutes, and decreased 24 hours after OVA challenge. The antigen challenge did not modify the platelet aggregation profile, except in platelets activated with 50 µM ADP and 200 mU/mL thrombin, at 24 hours post challenge. In order to verify whether calcium signaling pathway would be involved in the changes observed in platelet adhesion, we performed Ca2+ mobilization assays at 30 minutes and 24 hours. Internal calcium stores mobilization induced by ADP (20 µM) and thrombin (100 mU/mL) were significantly enhanced at 30 minutes, and decreased 24 hours after OVA-challenge. The extracellular calcium influx was significantly increased in ADP (20 µM)-stimulated rat platelets at 30 minutes post OVA-challenge. After 24 hours, the platelet calcium influx was lesser than that in nonsensitized animals. Together, our results show that intranasal OVA challenge causes an increased platelet adhesion at an early time post OVA-challenge (30 minutes) concomitant with elevated Ca2+ internal and/or external transport. At late phase (24 hours), we observed reduced platelet adhesion and decreased Ca2+ internal storage / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:21:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Noronha_JoseFernandodeAlmeida_D.pdf: 5060365 bytes, checksum: 9a433693a12ebc4fc3a72a0639d93c73 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Introdução: Plaquetas reticuladas (PRs) são plaquetas jovens recentemente liberadas pela medula óssea para a circulação e que possuem alto conteúdo de RNA em seu citoplasma. As PRs são descritas como plaquetas grandes, densas e mais ativas no processo de formação do trombo hemostático. A participação das plaquetas ativadas nos fenÃ'menos vaso-oclusivos que acometem pacientes com síndrome falciformes (SF) já está documentada, mas a avaliação do papel das PRs não foi ainda descrito. Assim, avaliamos o número e a atividade das PRs, correlacionando-os com os níveis séricos de P-selectina solúvel (sCD62p), interleucinaâ?¿6 (IL-6), interleucina-3 (IL-3) e trombopoietina (TPO) em sangue periférico de pacientes em diferentes estágios clínicos das SF. Casuística e Métodos: Foram estudados 89 pacientes adultos, sendo 38 em fase â?¿estávelâ??, 27 em crise hemolítica (CH), 27 em crise vaso-oclusiva (CVO) e 30 indivíduos saudáveis (grupo controle - GC). Os parâmetros plaquetários, incluindo a quantificação de macroplaquetas foram determinados em analisador hematológico. Através da técnica da citometria de fluxo com o uso de anticorpos monoclonais e thiazole orange (TO), realizamos as identificações e quantificações das plaquetas ativadas (anti CD41a + anti CD62p), PRs (anti CD41a + TO) PRs ativadas (TO + anti CD62p). As dosagens de sCD62p, IL-6, IL-3 e TPO foram realizadas pela técnica de ELISA. Resultados: O número de macroplaquetas foi significativamente superior nas 3 fases clínicas das SF em relação ao GC. O número de plaquetas ativadas, tanto reticuladas como maduras foi superior em todas as fases clínicas quando comparadas ao GC. Os valores de PRs mostraram-se mais elevados no grupo de pacientes em CVO do que na fase â?¿estávelâ?? e na CH. Em todos os grupos as PRs apresentaram um maior grau de ativação quando comparadas às plaquetas maduras. Os pacientes em CVO apresentaram maiores níveis de sCD62p em relação ao GC. Nas diferentes fases das SF observamos níveis séricos elevados de IL-6, IL-3 e TPO, embora não tenha sido observada correlação entre essas determinações com os números absolutos de PRs, Plaquetas ativadas (CD62p+) e PRs ativadas (TO+/CD62p+). Conclusões: Os resultados sugerem a contribuição das PRs na trombogênese das Síndromes Falciformes. Níveis elevados das interleucinas provavelmente indicam a participação das mesmas no processo inflamatório que acompanha os fenÃ'menos de vaso-oclusão, mas aparentemente esses moduladores inflamatórios não exercem efeito sobre a trombopoiese em pacientes com SF / Abstract: Introduction: Reticulated Platelets (RPs) are youngest platelets released recently from bone marrow to the blood and are characterized by the high citoplasmatic RNA content. RPs are described as higher size, denser and more active in the formation of thrombus than mature platelets. The participation of activated platelets in vaso-occlusive process in sickle cell disease patients have been documented, but the evaluation of the RPs role has not been established at the moment. We evaluated the number and activity of RPs and correlated them with serum soluble P-selectin (sCD62p), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin 3 (IL-3) and thrombopoetin (TPO) levels in patients with sickle cell diseases in different clinical expressions. Casuistic and Methods: Eighty-nine adult patients were studied: 38 in steady-state, 27 in hemolytic crisis (HC), 27 in vascular-occlusive crisis (CVO) and 30 healthy individuals (control groupâ?¿CG). Platelet parameters including the percentage of larger platelets were obtained by an automatic hematological analyzer. Monoclonal antibodies, thiazole orange (TO) dye and flow cytometric technique were used to identify and to quantify activated platelets (anti CD41a+ and anti CD62p+), RPs (anti CD41a+ and TO+) and activated RPs (TO+ and anti CD62p+). Soluble CD62p, IL-3, IL-6 and TPO determinations were measured by ELISA tests. Results: The number of macroplatelets was significantly higher in steady-state, CVO and HC groups than in CG. The number of activated mature platelets and activated RPs was higher in all stages of the disease when compared with CG. PRs values were more elevated in group of patients with CVO than in HC and steady-state. The degree of activation was higher in PRs than in mature platelets independently on sickle cell disease phase. CVO patients showed higher serum levels of sCD62p than CG. IL-6, IL-3 and TPO serum levels were increased in sickle cell disease, but there was not a correlation between those determinations and parameters related to platelets. Conclusions: Our results suggest that PRs contribute to the thrombogenesis process in sickle cell disease. Increased serum levels of interleukins probably indicate the participation of PRs in inflammatory process which is associated to vascular-occlusive phenomenon, but apparently those inflammatory mediators do not have an effect on thrombopoiese in sickle cell disease patients / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Joyce Maria Annicchi-Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:14:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flores-Nascimento_MarianeCristina_M.pdf: 1784393 bytes, checksum: 7247759965458fc5957d9f5617c9fb7e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Trombose Venosa Profunda (TVP) é uma doença multicausal, mas muitos fatores de risco ainda não estão definidos. Micropartículas (MPs) são pequenas vesículas liberadas da membrana celular durante ativação e apoptose. MPs podem ser um reflexo da dinâmica entre repouso, ativação e morte celular e podem contribuir com a gravidade da doença pois são procoagulantes e pro-inflamatórias. Parece haver associação entre elevado número de MPs e risco de complicações tromboembólicas, que podem ter um papel na patogênese destas doenças. Neste estudo avaliamos e caracterizamos as MPs em pacientes com TPV de membro inferior, [ao diagnóstico (5M/4H, idade média=41,1 anos), após 6 meses de tratamento (7M/3H, idade média=32,9 anos), associada à Síndrome do Anticorpo Antifosfolípide (7M/3H, idade média=33,8 anos)], em portadores assintomáticos do Fator V de Leiden (FVL) (7M, idade média=34 anos), e comparando-as a controles pareados por sexo, idade e etnia. As MPs foram isoladas de sangue periférico citratado, por centrifugação diferencial. A quantificação e caracterização foram feitas por citometria de fluxo usando os anticorpos: CD235, CD61, CD45, CD31, CD14, CD45, anti-TF e Anexina V. A atividade procoagulante plasmática foi investigada pela dosagem do fragmento 1+2 de protrombina (F1+2). A atividade procoagulante das MPs foi analisada pela dosagem de F1+2, de Dímero-D (DD2) e pelo teste de geração de trombina (TGT) em pool de indivíduos saudáveis em presença de MPs, corrigidas ou não por número na amostra (10.000 MPs). A análise estatística empregou os testes Wilcoxon ou U de Mann-Whitney, a=0.05. O número de MPs não estave diminuído em nenhum dos grupos estudados. A porcentagem de MPs estava estatisticamente aumentada nos pacientes com SAF/TVP em relação a seus controles (P=0,007). Observou-se um aumento significativo das MPs plaquetárias nos pacientes com SAF/TVP (P=0,01) e diminuição das MPs endoteliais naqueles com TVP ao diagnóstico (P=0,03), quando comparados aos seus controles. Os pacientes com SAF/TVP apresentaram diminuição significativa do F1+2 plasmático, tanto em relação aos seus controles (P=0,008) como ao CTR total (P=0,002). O F1+2 gerado pelas MPs estava significativamente diminuído em indivíduos com FVL em relação ao CTR total (0,009), e em pacientes com SAF/TVP em relação aos seus controles (P=0,001), e ao CTR total (P=0,008). O DD2 em pool de plasma, independente do número de MPs, estava significativamente aumentado na comparação entre TVP ao diagnóstico e seus controles (P=0,008) e ao CTR total (P=0,0001). O DD2 em pool com número corrigido de MPs apresentava-se aumentado significativamente nos pacientes com TVP ao diagnóstico quando comparados aos seus controles (P=0,008). Os valores do TGT com número corrigido de MPs estavam estatisticamente diminuídos em pacientes com TVP após 6 meses (P=0,01), em comparação ao CTR total. Nossos resultados demonstraram que o número de MPs está alterado em pacientes com TVP, e talvez possam ter um papel, particularmente após o evento trombótico ou em presença de anticorpos antifosfolípides. As MPs demonstraram atividade procoagulante, principalmente ao diagnóstico de TVP, podendo contribuir ou agravar o quadro clínico do paciente / Abstract: Deep Venous Thrombosis (DVT) is a multicausal disease, but many risk factors are not well defined. Microparticles (MPs) are small blebs released from cellular surfaces during activation and apoptosis. MPs may be the consequence of the dynamics between rest, activation and cellular death and can contribute to the seriousness of the illness and are therefore procoagulant and pro-inflammatory. There seems to be an association between high numbers of MPs and risk of thromboembolic complications and these may have a role in pathogenesis of these illnesses. In this study, we evaluated and characterized the MPs in patients with DVT of inferior limbs, [at diagnosis (5M/4H, medium age= 41.1 years), after 6 months of treatment (7M/3H, medium age= 32.9 years), and associated to Antibody Antiphospholipid Syndrome (7M/3H, medium age= 33.8 years)], and asymptomatic carriers of Factor V Leiden (FVL) (7M, medium age 34= years), matched to health controls by sex, age and ethnic origin. The MPs were isolated from citrated peripheral blood, by differential centrifugation. The quantification and characterization were performed by flow cytometry using the antibodies: CD235, CD61, CD45, CD31, CD14, CD45, anti-TF and Annexin V. The plasmatic procoagulantic activity was investigated by prothrombin fragment 1+2 (F1+2) dosage. The MPs procoagulant activities were analyzed by F1+2 dosage, D-dímer (DD2) and Thrombin Generation Test (TGT) in a pool of healthy individuals in the presence of MPs, corrected or not for number in the sample (10.000 MPs). Statistical analysiswas performed by Wilcoxon or the Mann-Whitney tests, a=0.05. The MPs number were not lower in any of the studied groups. The MPs percentage was statistically increased in the SAF/DVT patients compared to their matched controls (P=0.007). A significant increase in the platelet-derived MPs in SAF/DVT patients (P=0.01) and a reduction in the endothelial-derived MPs at diagnosis were observed (P=.03), when compared to their matched controls. The SAF/TVP patients show a significant reduction in plasmatic F1+2, when compared to their matched controls (P=0.008) and to the total CTR (P=0.002). The F1+2 generated by MPs were significantly lower in FVL carriers compared to the total CTR (0.009), and in SAF/DVT patients compared to their controls (P=0.001), and to the total CTR (P=0.008). The DD2 in the pool of plasma, independently of the number MPs, was significantly higher in DVT at diagnosis when compared to their matched controls (P=0.008) and the total CTR (P=0.0001). The DD2 in the pool with corrected MPs number was significantly higher in DVT at diagnosis patients when compared to their matched controls (P=0,008). The values of TGT in corrected MPs number were statistically lower in patients with DVT after 6 months (P=0.01), in comparison to the total CTR. Our results demonstrated that the number of MPs is modified in patients with DVT, and may play a role, particularly after the thrombotic event or in association with antiphospholipid antibodies. The MPs demonstrated procoagulant activity, especially at DVT diagnosis, and were able to contribute or to aggravate the patient¿s clinical situation / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica