Orientador: Elisa Aparecida Gregório / Resumo: O objetivo do presente estudo foi analisar plaquetas de pacientes do sexo masculino, portadores de aterosclerose obliterante periférica (GAOP) no estágio de claudicação intermitente, comparando-as com grupo controle de indivíduos normais (GC2) do mesmo sexo e faixa etária. As plaquetas foram estudadas do ponto de vista funcional, através da agregação plaquetária espontânea, e morfológico, através da ultra-estrutura e da morfometria plaquetária. Também foram analisadas plaquetas de indivíduos normais, de faixa etária inferior a 50 anos (GC1), para verificar eventual influência do fator idade na função plaquetária. Para a análise morfológica e morfométrica, sedimentos plaquetários foram processados para microscopia eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV), segundo técnicas convencionais. Para a prova funcional, o plasma rico em plaquetas foi agitado em agregômetro de plaquetas, sem a adição de agonistas. Todos os indivíduos foram avaliados clínica e laboratorialmente. Com relação à função plaquetária, não houve diferença significativa na agregação plaquetária espontânea, entre os grupos analisados (p>0,05). A morfometria das plaquetas também não acusou diferença na forma das plaquetas, entre os grupos estudados (p>0,05). À MEV, as plaquetas dos indivíduos do grupo GC1 apresentaram freqüência de alterações na forma significativamente maior (42,70±4,54), quando comparadas às dos outros grupos, GC2 (32,31±6,22) e GAOP (37,76±8,91), p>0,05. A dosagem de fibrinogênio do grupo GAOP (262,90±47,86) revelou-se significativamente maior que do grupo GC1 (209,80±47,02), p>0,05; a dosagem de HDL colesterol do grupo GAOP (30,00±5,33) foi significativamente menor que do grupo GC2 (42,70±12,58), p>0,05. Nossos resultados mostram que as plaquetas circulantes dos pacientes portadores de AOP não... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aims to analyze the platelets of patients with peripheral obliterative atherosclerosis (POAG), at the intermittent claudication stage and comparing this platelets with the control group of healthy age and sex-matched subjects (CG2). The platelets were studied in relation to: their function, by the spontaneous platelet aggregation, and their morphology, by the platelet ultrastructure and morphometry. We also analyzed the platelets of younger healthy subjects aged less than 50 years (CG1) to find out a probable influence of age factor on platelet function. Morphological and morphometric analyses were performed using platelet pellets processed by transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM), according to conventional procedures. The functional test was performed using the platelet-rich plasma, mixed in platelet aggregometer without the addition of stimulating agents. All the healthy subjects and patients submitted to clinical and laboratory evaluations. Platelet function did not show significant difference in the studied groups (p>0.05). Platelet morphometry did not show difference in the analysed groups (p.>0.05). The CG1 platelets showed major alteractions in shape (42.70±4.54) than the other groups: CG2 (32.31±6.22) and POAG (37.76±8.91), p>0.05. The POAG fibrinogen determination (262.90±47.86) was significantly higher than CG1 group (209.80±47.02), p>0.05. The POAG HDL determination (30.00±5.33) was significantly higher than CG2 (42.70±12.58), p>0.05. Our results reveal: the POAG circulating platelets do not show functional or morphological alteractions when compared to the age-matched healthy subjects; and the freqüency of circulating platelet with alteractions in shape using SEM preparations were greater in CG1. This suggests an influence of the age factor on function platelet. / Mestre

Resumo: A hepatite C é uma doença crônica resultante da infecção por um vírus, o VHC, que infecta hepatócitos pela interação com um receptor de superfície celular, o CD81. No entanto, algumas proteínas de adesão já foram associadas com a entrada do vírus em hepatócitos e, têm sido relacionadas com a entrada de outros vírus em suas células alvo. O RNA do VHC já foi encontrado em plaquetas, as quais não expressam CD81, embora esta proteína esteja presente em megacariócitos. As plaquetas expressam determinantes antigênicos polimórficos em sua superfície denominados HPA. Alguns HPA residem em integrinas. Já foi demonstrada uma associação entre HPA-5b e a infecção pelo VHC. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de RNA do VHC em plaquetas coletadas de sangue periférico de 50 doadores de sangue com RT-PCR negativa para o vírus. Estas plaquetas foram infectadas com VHC in vitro e incubadas a 37ºC por 8-48 horas. RNA extraído foi utilizado para detectar a presença do vírus por RT-PCR e, avaliar as diferenças quantitativas na carga viral de acordo com o perfil HPA por qRT-PCR. Todas as plaquetas foram positivas para o RNA do VHC após a incubação com o vírus, o que demonstra que o vírus interage com as plaquetas in vitro. Foi observado um desvio no equilíbrio de Hardy-Weinberg no sistema HPA-1. A freqüência do alelo HPA-1b foi significativamente inferior (p <0,05) em plaquetas com carga viral acima de 18,4 UI/mL, sugerindo que o alelo b pode estar relacionado com menores níveis de carga viral / Abstract: Hepatitis C is a chronic disease caused by a virus, the HCV, which usually infects hepatic cells by interaction with a cell surface receptor, a tetraspanin (CD81). However, adhesion proteins already were associated with the virus entry in hepatocytes and have been related with the entry of the others virus in their host cell, too. The HCV RNA already found in platelet but it doesn't express CD81, although this protein is present in megakaryocytes. Platelets express polymorphic antigenic determinants on their surface, named HPA. Some HPA resides in transmembrane glycoprotein of integrin family. Preview study demonstrated an association between HPA -5b and HCV infection. The goal of this study was to determine the presence of HCV RNA in platelets collected from peripheral blood from 50 blood donors with RT-PCR negative for the virus. These platelets were infected in vitro with HCV and incubated at 37oC for 8-48 hours. RNA was then extracted and used for RTPCR and qRT-PCR to detect the presence of the virus and evaluate quantitative differences in viral load according with the HPA profile. All platelets were positive for HCV RNA after incubation with the virus, demonstrating that the virus interacts with the platelets in vitro. There was deviation from Hardy-Weinberg equilibrium in the HPA-1 system. The allele frequency of HPA-1b was found to be significantly lower (p<0.05) in platelet with viral load upper 18.4 UI/mL, suggesting that allele b could be related with lower viral load levels / Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Coorientador: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Paula Rahal / Banca: Isabel Maria Vicente Guedes de Carvalho / Mestre

Orientador: Luís Carlos Spolidorio / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Raquel Fernanda Gerlach / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administracao da aspirina (Asp), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre o processo de reparacao dos tecidos periodontais apos inducao experimental de periodontite em ratos. Primeiramente avaliou-se a acao destas drogas sobre a expressao das citocinas pro-inflamatorias: TNF-α, IL-6 e TXA2 no tecido gengival de 25 ratos subdivididos em 5 grupos (n=5), 15 dias apos a instalacao da ligadura ao redor do primeiro molar inferior. Para avaliacao do reparo dos tecidos periodontais, setenta e dois ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 6 grupos (n=12), sendo 1 controle e 5 submetidos a periodontite atraves da instalacao de ligadura bilateral na regiao de primeiro molar inferior. Apos 15 dias, o grupo controle e um grupo com periodontite foram sacrificados. Para a inducao do reparo dos tecidos periodontais, as ligaduras dos animais dos outros 4 grupos foram removidas e os ratos foram tratados com solucao de NaCl 0.9%, Asp (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), diariamente, via gavagem. Apos 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemi- mandibulas do lado direito removidas para analise histologica e as do lado esquerdo para avaliacao macroscopica, microtomografia computadorizada e analise da expressao, atividade especifica e co-localizacao das metaloproteinases de matriz (MMPs) -2 e -9 atraves de zimograma e zimografia in situ. Apos a retirada da ligadura, houve reparacao do osso alveolar e reparacao do tecido gengival representado pela recomposicao da arquitetura tecidual do epitélio e do tecido conjuntivo. O tratamento com Asp comprometeu a reparacao óssea alveolar na face mesial e acelerou na area de furca, ao passo que nao influenciou na recomposicao da arquitetura do tecido epitelial e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (Asp), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) in the process of periodontal tissue repair after induction of experimental periodontitis in rats. First, we evaluated the action of these drugs on the expression of pro-inflammatory cytokines: TNF-α, IL-6 and TXA2 in the gingival tissue of 25 rats randomly distributed in five equal groups (n=5), 15 days after ligature placement around lower first molars. For periodontal tissue evaluation, seventy-two rats (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) were randomly distributed in 6 equal groups (n=12). One control and 5 submitted to a ligature-induced periodontitis model in the region of lower first molar bilaterally. After 15 days, the control group and a group with periodontitis were sacrificed. To induce periodontal tissue repair, ligatures from the other 4 groups were removed and the rats treated with NaCl 0.9%, Asp (30 mg/kg), Clo (75 mg/kg) and Tic (300 mg/kg) daily by gavage. After 15 days of treatment, animals were killed, the right mandibles were removed for histological analysis and the left side to macroscopic, microtomography evaluation and expression, activity and colocalization of matrix metalloproteinases (MMPs) -2 and -9 by zymogram and in situ zymography. After removal of the ligature, there was repair of the alveolar bone and gingival tissue represented by the restoration of tissue architecture of the epithelium and connective tissue. Treatment with Asp undertook the repair of the mesial alveolar bone and accelerated the repair of furcation area, while not influenced the restoration of tissue architecture and epithelial tissue. Treatment with Tic undertook the repair of mesial alveolar bone and furcation the area, as well as the repair of gingival epithelial... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Mário Taba Junior / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar, histologicamente, a influência da associação do plasma rico em plaquetas (PRP) ao enxerto de osso autógeno (OA) no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC) em calvárias de coelhos. Sessenta coelhos foram divididos em 3 grupos: C (controle), OA (osso autógeno) e OA/PRP (osso autógeno associado ao plasma rico em plaquetas). Um defeito de tamanho crítico, com 15 mm de diâmetro, foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo. No Grupo OA, o defeito foi preenchido com osso autógeno particulado. No Grupo OA/PRP, o defeito foi preenchido com osso autógeno particulado associado ao PRP. Todos os grupos foram divididos em subgrupos (n = 10) para eutanásia aos 30 ou 90 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histológica e histométrica. A quantidade de osso neoformado foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Os dados em porcentagem foram transformados em raiz quadrada para análise estatística (ANOVA, teste t, p<0,05). Aos 30 dias pós-operatórios, o Grupo OA/PRP apresentou uma quantidade significativamente maior de osso neoformado que o Grupo OA (64,44% e 46,88%, respectivamente). Aos 90 dias, todos os espécimes dos Grupos OA/PRP e OA mostraram fechamento ósseo completo do defeito, com quantidades similares de osso neoformado (77,9% e 75%, respectivamente). Dentro dos limites deste trabalho, pode-se concluir que o PRP acelerou o processo de reparo do enxerto de osso autógeno em defeitos de tamanho crítico em calvária de coelhos. / Abstract: The purpose of this study was to histologically analyze the effect of platelet-rich plasma (PRP) on bone healing in an autogenous bone graft placed in surgically created criticalsize defects (CSD) in rabbit calvaria. 60 rabbits were divided into 3 groups: C (control); AB (autogenous bone graft) and AB/PRP (autogenous bone graft with platelet-rich plasma). A 15 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C the defect was filled by blood clot only. In Group AB the defect was filled with particulate autogenous bone. In Group PRP it was filled with particulate autogenous bone in combination with platelet-rich plasma. All groups were divided into subgroups (n=10) and euthanized at either 30 or 90 days post-operative. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Amount of new bone was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Percentage data were transformed into square root for statistical analysis (ANOVA, t test, p<0.05). At 30 days post-op, Group AB/PRP had a statistically greater amount of bone formation than Group AB (64.44% and 46.88%, respectively). At 90 days, complete bone regeneration of the defect was seen in all specimens of Groups AB/PRP and AB, with similar amounts of newly formed bone (77.9% and 75%, respectively). Within the limits of this study, it can be concluded that PRP accelerated the healing of autogenous bone graft in critical-size defects in rabbit calvaria. / Doutor

Orientador: Regina Kiomi Takahira / Banca: Leonardo Brandão / Banca: Marcelo Larami Santoro / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a importância das plaquetas reticuladas nas condições trombocitopênicas associadas a hipoplasia de megacariócitos e a outras etiologias sem alteração no número de megacariócitos. Para tanto foram utilizados 30 cães sadios adultos (Grupo controle); 15 cães com trombocitopenia (< 100.000 plaquetas/mL), por causas diversas que não sejam por hipoplasia megacariocítica (Grupo A) e 15 cães com trombocitopenia (< 100.000 plaquetas/mL) e com hipoplasia megariocítica (Grupo B), constatadas por meio de citologia aspirativa de medula óssea. Foi coletado sangue e extraído o plasma rico em plaquetas para a realização da quantificação das plaquetas reticuladas em citometria de fluxo e colheita de medula óssea para a análise do número de megacariócitos por duas técnicas distintas e correlação com as plaquetas reticuladas. Não foi observada diferença estatística (p>0,05) entre as duas técnicas de quantificação de megacariócitos. Foi observada diferença estatística (p<0,05) para as plaquetas reticuladas, sendo superior nos grupos A e B, em relação ao grupo controle. Não houve correlação entre plaqueta reticulada e megacariócitos medulares. A ausência de correlação observada não nos permite estabelecer relações de contagem de PR com o aumento do número de megacariócitos na medula óssea. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the reticulated platelet importance in evaluation of platelet production in thrombocytopenic conditions associated with megakaryocytic hypoplasia and other conditions with adequate number of bone marrow megacaryocytes. These study were obtained from 30 healthy dogs (control group), 15 thrombocytopenic dogs (< 100,000 platelets/μL) without megakaryocytic hipoplasia (group A) and 15 thrombocytopenic dogs (< 100,000 platelets /μL) with megakaryocytic hipoplasia (group B). Blood samples were collected and the platelet rich plasma (PRP) was extracted for quantification of reticulated platelets in flow cytometry, megakaryocytes were quantified in marrow particles, collected from aspiration cytology and correlated to reticulated platelets counts. No statistical significance (p>0.05) was observed between two megakaryocytes quantification techniques. For reticulated platelets was observed statistical significance difference (p<0.05), values from groups A and B were higher than control group. No correlation was verified between reticulated platelets and marrow megakaryocytes. The absence of correlation do not allow us to establish relationship of reticulated platelets with increase production of bone marrow megakaryocytes. / Mestre

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Maurício Guimarães Araújo / Banca: Luiz Alberto Milanezi / Resumo: Objetivo: O propósito deste estudo foi avaliar, histologicamente, a influência do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) no reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico (DTC) criados cirurgicamente em calvárias de ratos. Material e Método: 32 ratos foram divididos em 2 grupos: C (controle) e PRP (Plasma Rico em Plaquetas). Um DTC de 8 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido somente com coágulo sangüíneo. No Grupo PRP, o defeito foi preenchido com Plasma Rico em Plaquetas. Cada grupo foi subdividido para eutanásia em 4 ou 12 semanas pós-operatórias (n=8). Foram realizadas análises histológica e histométrica. A quantidade de osso neoformado foi calculada como uma proporção da área total do defeito original. Esses valores foram transformados em arcoseno para a análise estatística (ANOVA, Tukey, p < 0.05). Resultados: Nenhum defeito reparou completamente com tecido ósseo. O Grupo PRP apresentou significativamente mais neoformação óssea que o Grupo C, tanto em 4 semanas (17,68% e 7,20%, respectivamente) como em 12 semanas (24,69% e 11,65%, respectivamente) pós-operatórias. Conclusão: Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP aumentou significativamente o reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico em calvárias de ratos. / Abstract: The purpose of this study was to histologically analyze the influence of Platelet Rich Plasma (PRP) on bone healing in surgically created critical-size-defects (CSD) in rat calvaria. 32 rats were divided into 2 groups: C (control) and PRP (Platelet Rich Plasma). An 8 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C the defect was filled by blood clot only. In Group PRP it was filled with Platelet Rich Plasma. Both groups were divided into subgroups (n=8) and euthanized at either 4 or 12 weeks post-operative. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Amount of new bone was calculated as percentage of total area of original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, Tukey, p < 0.05). No defect completely regenerated with bone. Group PRP had a statistically greater amount of bone formation than Group C at both 4 (17.68% and 7.20%, respectively) and 12 weeks (24.69% and 11.65%, respectively) post-operative. Within the limits of this study, it can be concluded that PRP significantly enhanced bone healing in critical-size-defects in rat calvaria. / Mestre

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Claudia Maria Coelho Alves / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração da aspirina (AAS), do clopidogrel (Clo) e da ticlopidina (Tic) sobre a evolução da periodontite experimental em ratos. Cinquenta ratos (Rattus norvegicus albinus, Holtzman) foram distribuídos aleatoriamente em 5 grupos (n=10), sendo 1 controle e 4 submetidos à periodontite através da instalação de ligadura bilateral na região de primeiro molar inferior. Os ratos submetidos à periodontite experimental foram tratados com solução de NaCl 0.9%, AAS (30mg/kg), Clo (75 mg/kg) e Tic (300 mg/kg), com uma única dose e diariamente, via gavagem. Após 15 dias de tratamento, os animais foram sacrificados, as hemimandíbulas do lado direito removidas para análise histológica e as gengivas do lado esquerdo para avaliação da expressão de TNF-α, IL-6 e TXA-2 por ELISA. O tratamento com as drogas antiplaquetárias induziu diminuição da expressão dos mediadores próinflamatórios analisados. Histologicamente, os animais tratados com drogas antiplaquetárias apresentaram gengiva com menor quantidade de células inflamatórias e maior quantidade de feixes de fibras colágenas suprajacentes ao osso alveolar. Os valores das medidas morfométricas foram significativamente menores nos animais tratados com derivados tienopiridínicos , enquanto os animais tratados com AAS apresentaram apenas uma tendência a menor reabsorção óssea quando comparados ao grupo NaCl 0,9%.Esses dados despertam o potencial anti-inflamatório das drogas antiplaquetárias e confirmam o envolvimento plaquetário no desenvolvimento da doença periodontal. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of administration of aspirin (AAS), clopidogrel (Clo) and ticlopidine (Tic) on the evolution of experimental periodontitis in rats. Fifty rats (Rattus norvegicus albinos, Holtzman) were randomly divided into 5 groups (n = 10), with 1 control and 4 subjected to periodontitis through the installation of bilateral ligature in the region of first molar. The rats subjected to experimental periodontitis were treated with NaCl 0.9%, AAS (30 mg / kg), Clo (75 mg / kg) and Tic (300 mg / kg), with a single dose and daily by gavage. After 15 days of treatment, the animals were killed, the right hemi-jaw removed for histological analysis and gingival tissues on the left to evaluate the expression of TNF-α, IL-6 and TXA-2 by ELISA. Treatment with antiplatelet drugs induced decrease in expression of proinflammatory mediators analyzed. Histologically, the animals treated with antiplatelet drugs had gingival tissues with fewer inflammatory cells and larger bundles of collagen fibers overlying the alveolar bone. The values of morphometric measurements were significantly lower in animals treated with thienopyridine derivatives, while animals treated with AAS showed only a trend to lower bone resorption when compared with 0.9% NaCl. These data awaken the potential anti-inflammatory drugs antiplatelet and confirm the involvement of platelets in the development of periodontal disease. / Mestre