Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, William Dias Belangero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T23:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perez_AmandaGomesMarcelino_D.pdf: 5504365 bytes, checksum: dfd77169a41938bfecc5af20b2eddd27 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O plasma rico em plaquetas (PRP) é um tratamento autólogo, portanto não imunogênico, capaz de estimular e acelerar a regeneração tecidual. A qualidade do PRP preparado é fundamental para o sucesso da sua aplicação clínica. Apesar do intenso uso desta terapia em diversas áreas da medicina, as condições de preparação reportadas na literatura são muito dispersas e, juntamente com a natureza autóloga do produto e com a falta de caracterização dos diferentes PRPs, dificultam a interpretação dos dados da literatura e a comparação de resultados clínicos. Portanto, profissionais e estudiosos reivindicam a padronização do PRP como base para os estudos clínicos. Entretanto, a padronização do PRP exige estudos de ciência básica, os quais ainda são muito escassos. Tal como citado na literatura, devido à natureza autóloga do PRP o problema não é necessariamente estudar o PRP, mas antes o desenvolvimento desses estudos. Buscando contemplar estes aspectos, neste trabalho desenvolveu-se inicialmente uma estratégia de estudo para análise integrada das etapas do processo de preparação do PRP, de modo a tornar factível o delineamento das propriedades das formulações em função das condições de preparação, com um número reduzido de experimentos. Essa estratégia foi aplicada ao P-PRP, um PRP rico em plaquetas e pobre em leucócitos. A análise dos resultados permitiu selecionar três arquiteturas de géis de fibrina, derivados da ativação de plaquetas íntegras, como representativos de uma ampla gama de condições de ativação das plaquetas. Esses géis foram caracterizados quanto às propriedades reológicas, à liberação dos seus fatores de crescimento (FCS), o tempo de gelificação e à capacidade de sustentação do crescimento de células mesenquimais derivadas no tecido adiposo humano (hADSCs). Em uma segunda etapa, os estudos envolveram a incorporação do PRP em géis de ácido hialurônico visando proteção e liberação gradual dos seus FCs e seu desempenho como scaffolds no cultivo de hADSCs . Os resultados obtidos contribuem para a padronização do P-PRP, e também abrem novas possibilidades para utilização dos scaffolds naturais de fibrina em combinação com ácido hialurônico. / Abstract: Platelet Rich Plasma (PRP) is an autologous, no immunogenic therapy, which is able to stimulate and accelerate tissue regeneration. The PRP quality is essential for success in clinical applications. Despite the widely use of PRP therapy in different areas of medicine, the preparation conditions described in literature are dispersed and, together with the autologous nature of PRP and the absence of characterization, turn difficult the interpretation of literature data and comparison of clinical results. Therefore, professional and researchers claim for the standardization of PRP preparation as the basis for clinical studies. However, the standardization of PRP preparations requires basic science studies, which are still scarce. As described in literature, due to the autologous nature of PRP, the challenge is not to study PRP, but the development of these studies. Aiming to overcoming these challenges, we developed a strategy to analyze, the integration of the steps in PRP preparation, to turn feasible the design of the formulations properties a function of the preparation conditions, with a reduced number of experiments. This strategy was applied to P-PRP, a type of PRP rich in platelets and poor in leukocytes. The analysis of the results allowed selecting three architectures of fibrin gels, derived from the activation of intact platelets, as representative of a wide range of conditions for platelet activation. These gels were characterized with respect to rheological properties, GFs release, clotting time and the ability to sustain the growth of human adipose-derived mesenchymal stem cell (hADSCs). In a second phase, the studies contemplated the incorporation of PRP in hyaluronic acid gels aiming protection, sustained release of growth factors and the ability to sustain the growth of hADSCs .The obtained results contribute to standardization of the P-PRP, as well as open new opportunities to the use the natural fibrin scaffolds in combination with hyaluronic acid. / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutora em Engenharia Quimica

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karina.pdf: 2597948 bytes, checksum: d65c6af5a956ec0d8f0afae614fe6d8a (MD5) Previous issue date: 2014-03-17 / The platelet rich plasma is a source of several growth factors and appears as a new biotechnology in tissue repair, with great therapeutic power. Patients with general health problems and the lack of volume of blood required for autologous production of concentrate, may be restricted to receive this innovative treatment. To overcome the limitation, this study evaluated the effects of heterologous platelet-rich plasma gel obtained from a healthy dog, in the healing of dermal wounds in rabbits by standard morphological, morphometric and histological analyzes. Two surgical incisions were made on the back of six rabbits using a punch of 8 mm diameter. Randomly one side was denominated as a Control (A), leaving the contralateral Treaty as (B). 0.9% saline solution and heterologous platelet-rich plasma gel were applied topically to the lesions (A) and (B) respectively, on days 0, 3, 7, 10 and 14 after surgery. Macroscopic observations recorded on the days mentioned above, including the 17th, which is also a biopsy for histological analysis was performed, demonstrated similarity between the lesions in relation to the study variables, pain sensitivity, color of wound edema, hyperemia, exudate, crust and granulation tissue. The process of contraction of the lesion area (A) and (B) similarly developed linearly, so that histologically complete reepithelialization was achieved in 90% of lesions (A) and 100% of the lesions (B), no differences statistically significant. Such differences were also not found between wounds in relation to other histological parameters analyzed: presence of crust, neovascularization, collagen, fibroblasts and macrophages, cell type and intensity of the inflammatory process. The results of this study suggest that the heterologous platelet-rich plasma gel was able to promote the healing of dermal wounds in rabbits, no harmful effects. / O plasma rico em plaquetas é fonte de diversos fatores de crescimento e surge como uma nova biotecnologia na reparação tecidual, com grande potencial terapêutico. Pacientes com problemas de saúde geral e ausência de volume de sangue necessário para produção autóloga deste concentrado, podem ficar limitados para receber este tratamento inovador. Para ultrapassar a limitação, o presente estudo avaliou os efeitos do gel de plasma rico em plaquetas obtido a partir de um cão saudável, na cicatrização de feridas dérmicas padronizadas em coelhos mediante análises morfológicas, morfométricas e histológicas. Foram produzidas duas incisões no dorso de seis coelhos utilizando punch de 8 mm de diâmetro. Aleatoriamente, um dos lados foi denominado Controle (A), permanecendo o contralateral Tratado (B). Solução fisiológica a 0.9% e gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foram aplicados topicamente nas lesões (A) e (B) respectivamente, nos dias 0, 3, 7, 10 e 14 de pós-operatório. Observações macroscópicas registradas nos dias mencionados acima, incluindo o 17o, no qual também foi realizada uma biópsia para análise histológica, demonstraram semelhança entre as lesões em relação às variáveis estudadas, sensibilidade dolorosa, cor da ferida, edema, hiperemia, exsudato, crosta e tecido de granulação. O processo de contração da área das lesões (A) e (B) evoluiu similarmente de forma linear, de modo que, histologicamente, reepitelização total foi alcançada em 90% das lesões (A) e 100% das lesões (B), sem diferenças estatisticamente significantes. Tais diferenças também não foram constatadas entre as feridas em relação aos demais parâmetros histológicos analisados: presença de crosta, neovascularização, colagenização, quantidade de fibroblastos e macrófagos, tipo celular e intensidade do processo inflamatório. Os resultados desta pesquisa sugerem que o gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foi capaz de promover a cicatrização de feridas dérmicas em coelhos, sem efeitos prejudiciais.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karina.pdf: 2597948 bytes, checksum: d65c6af5a956ec0d8f0afae614fe6d8a (MD5) Previous issue date: 2014-03-17 / The platelet rich plasma is a source of several growth factors and appears as a new biotechnology in tissue repair, with great therapeutic power. Patients with general health problems and the lack of volume of blood required for autologous production of concentrate, may be restricted to receive this innovative treatment. To overcome the limitation, this study evaluated the effects of heterologous platelet-rich plasma gel obtained from a healthy dog, in the healing of dermal wounds in rabbits by standard morphological, morphometric and histological analyzes. Two surgical incisions were made on the back of six rabbits using a punch of 8 mm diameter. Randomly one side was denominated as a Control (A), leaving the contralateral Treaty as (B). 0.9% saline solution and heterologous platelet-rich plasma gel were applied topically to the lesions (A) and (B) respectively, on days 0, 3, 7, 10 and 14 after surgery. Macroscopic observations recorded on the days mentioned above, including the 17th, which is also a biopsy for histological analysis was performed, demonstrated similarity between the lesions in relation to the study variables, pain sensitivity, color of wound edema, hyperemia, exudate, crust and granulation tissue. The process of contraction of the lesion area (A) and (B) similarly developed linearly, so that histologically complete reepithelialization was achieved in 90% of lesions (A) and 100% of the lesions (B), no differences statistically significant. Such differences were also not found between wounds in relation to other histological parameters analyzed: presence of crust, neovascularization, collagen, fibroblasts and macrophages, cell type and intensity of the inflammatory process. The results of this study suggest that the heterologous platelet-rich plasma gel was able to promote the healing of dermal wounds in rabbits, no harmful effects. / O plasma rico em plaquetas é fonte de diversos fatores de crescimento e surge como uma nova biotecnologia na reparação tecidual, com grande potencial terapêutico. Pacientes com problemas de saúde geral e ausência de volume de sangue necessário para produção autóloga deste concentrado, podem ficar limitados para receber este tratamento inovador. Para ultrapassar a limitação, o presente estudo avaliou os efeitos do gel de plasma rico em plaquetas obtido a partir de um cão saudável, na cicatrização de feridas dérmicas padronizadas em coelhos mediante análises morfológicas, morfométricas e histológicas. Foram produzidas duas incisões no dorso de seis coelhos utilizando punch de 8 mm de diâmetro. Aleatoriamente, um dos lados foi denominado Controle (A), permanecendo o contralateral Tratado (B). Solução fisiológica a 0.9% e gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foram aplicados topicamente nas lesões (A) e (B) respectivamente, nos dias 0, 3, 7, 10 e 14 de pós-operatório. Observações macroscópicas registradas nos dias mencionados acima, incluindo o 17o, no qual também foi realizada uma biópsia para análise histológica, demonstraram semelhança entre as lesões em relação às variáveis estudadas, sensibilidade dolorosa, cor da ferida, edema, hiperemia, exsudato, crosta e tecido de granulação. O processo de contração da área das lesões (A) e (B) evoluiu similarmente de forma linear, de modo que, histologicamente, reepitelização total foi alcançada em 90% das lesões (A) e 100% das lesões (B), sem diferenças estatisticamente significantes. Tais diferenças também não foram constatadas entre as feridas em relação aos demais parâmetros histológicos analisados: presença de crosta, neovascularização, colagenização, quantidade de fibroblastos e macrófagos, tipo celular e intensidade do processo inflamatório. Os resultados desta pesquisa sugerem que o gel de plasma rico em plaquetas heterólogo foi capaz de promover a cicatrização de feridas dérmicas em coelhos, sem efeitos prejudiciais.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valeria Cardoso.pdf: 519085 bytes, checksum: 5ce9c2c85a8919b74df1fa049692802e (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Significant scientific advances have been made in the last ten years to ascertain the effects of the use of platelet-rich plasma (PRP) and its contribution not only to the hemostatic process, but also wound healing, by releasing growth factors that have tissue regenerating induction properties. The effects of autologous PRP gel and the quality of collagen fibers produced were evaluated after induction of dermal wounds in 6 New Zealand rabbits, treated or not with autologous PRP gel. The wounds were followed for 17 days. On days 7, 10 and 17 the animals were evaluated for the morphological and morphometric behavior of the wounds. Regarding the percentage of collagen fibers, there was a greater quantity (P <0.05) in the untreated rabbits (85.7%) compared to those receiving autologous PRP gel (75.0%). However, microscopically, increased expression of collagen fibers was observed in the samples treated with autologous PRP gel, displaying a more homogenous layout and better fiber reorganization, demonstrating a dense network involving all attachments and newly formed vessels characterized by high dermal birefringence. It can be concluded from this study that the use of autologous PRP gel on wounds improved the quality and reorganization of collagen fibers. / Avanços científicos significativos nos últimos dez anos foram feitos para verificar os efeitos do uso do plasma rico em plaquetas (PRP) e a sua contribuição não só para o processo hemostático, mas também para cicatrização de feridas através da liberação de fatores de crescimento que têm propriedades de indução de regeneração tecidual. Avaliou-se o efeito do PRP autólogo gel e a qualidade de fibras colágenas produzidas após realização de ferida dérmica em 6 coelhos da raça Nova Zelândia tratados ou não com PRP autólogo gel. As lesões foram acompanhadas durante 17 dias. Nos dias 7, 10, e 17, os animais foram avaliados quanto ao comportamento das feridas morfológica e morfometricamente. Em relação à porcentagem das fibras de colágeno, houve uma quantidade maior (P<0,05) nos coelhos não tratados (85,7%) comparados aos que receberam PRP autólogo em gel (75,0%). Porém, microscopicamente, observou-se aumento de expressão de fibras de colágeno nos coelhos tratados com PRP autólogo gel, mostrando uma disposição mais homogênea com melhor reorganização dessas fibras, evidenciando uma rede densa que envolveu todos os anexos e com vasos neoformados caracterizados pela alta birrefringência da derme. Pode-se concluir neste estudo que o uso do PRP autólogo gel em feridas melhora a qualidade e a reorganização das fibras colágenas.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maria elisa marin marques.pdf: 515384 bytes, checksum: ea781c03147655b978641ca0ac918799 (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Platelet-rich plasma (PRP) has been extensively studied as a biomaterial for wound treatment, and the heterologous PRP is useful in the event that obtaining the patient s own blood is impossible. This study aimed to evaluate and compare wound healing in rabbits and quantify the collagen in experimentally induced wounds in a control group and in a group treated with heterologous PRP gel. We hypothesize that this gel is capable of promoting proper healing with no adverse reactions, increased collagen content, and faster healing. The clinical aspects of coloring, edema, hyperemia, exudation, crust, granulation and retraction index of the wounds were measured on days 7, 14, and 17 after the injury. Collagen quantification by Picrosirius staining and evaluation under polarized light was performed on the 17th day. Crust was present in both groups at all evaluated time points, with the absence of other clinical signs. The wound contraction rate and collagen quantity did not differ between groups. In conclusion, the heterologous PRP gel was unable to increase the amount of collagen and accelerate the wound healing process, however, wound healing was efficient and similar in both groups and there was no local adverse reaction. Thus, despite the scarcity of studies in the literature, the heterologous PRP gel is an effective alternative treatment for wounds in the absence of other sources of PRP. / O plasma rico em plaquetas (PRP) tem sido amplamente estudado como um biomaterial para o tratamento de feridas, sendo o produto de fonte heteróloga indicado na impossibilidade de obtenção do sangue do próprio paciente. O presente estudo teve como objetivo, avaliar e comparar a cicatrização em coelhos e quantificar o colágeno de feridas experimentalmente induzidas, denominadas controle e tratadas, com PRP heterólogo gel. A hipótese é que este seja capaz de promover cicatrização adequada sem reações adversas, e promova aumento do colágeno e uma cicatrização mais rápida. Os aspectos clínicos cor, edema, hiperemia, exsudato, crosta, granulação e índice de retração das feridas foram avaliados nos dias 7, 14 e 17 após a lesão. A quantificação do colágeno, através da coloração com Picrosirius e avaliação sob luz polarizada, foi realizada no 17º dia. Houve presença de crosta nos dois grupos em todos os momentos avaliados, com ausência dos demais sinais clínicos. O percentual de contração da lesão e quantidade de colágeno não diferiu entre os grupos. Concluiu-se que o PRP heterólogo gel não foi capaz de aumentar a quantidade de colágeno e acelerar o processo de cicatrização tecidual, no entanto, a cicatrização foi eficiente e semelhante entre os dois grupos e não houve nenhum tipo de reação adversa local. Desta forma, apesar da escassez de estudos encontrados na literatura, o PRP heterólogo gel é uma alternativa de tratamento de feridas, na impossibilidade de uso de outras fontes de PRP.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-06-01T14:57:32Z No. of bitstreams: 1 Eveline.pdf: 680438 bytes, checksum: 5fb8af2b6ed1e1ccd9b3e015958fc2cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T14:57:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eveline.pdf: 680438 bytes, checksum: 5fb8af2b6ed1e1ccd9b3e015958fc2cb (MD5) Previous issue date: 2016-11-21 / The platelet-rich plasma (PRP) is a promising resource in treatment of wounds, considered a non-toxic biomaterial, which when injected in the tissue, increases its regeneration capacity by stimulating growth factors and activating angiogenesis and thus to induce synthesis of collagen. Studies confirm the effectiveness of the autologous gel source of PRP, but the homologous and heterologous gel sources are alternatives when there are no conditions for obtaining the animal's own PRP, however, unknown whether the effect of using these sources in the organization of the collagen fibers during the process scar. Therefore, this study aimed to compare the effects on healing produced after performing dermal wound in rabbits treated with different sources of platelet-rich plasma (PRP) gel (autologous, homologous and heterologous). 36 biopsies of dermal wounds have been used, experimentally induced in 18 adult rabbits, clinically healthy, of New Zealand breed (n = 9 males, n = 9 females), treated and not treated with different sources of PRP. The wounds were sanitized and treated on 0,3,7,10,14 days, and, in 17º day, a biopsy of the wound has been made, for histologic evaluation and observation of the initial phase of remodeling. In order to determine the type of collagen, the biopsy slides passed through polarization technique with dye-red Picrosirius F3BA. Results confirmed that the source of homologous PRP gel proved to be as efficient as the source of autologous PRP gel if compared healing. Other important finding in this study was that heterologous PRP gel use provided a healing process as good as those provided by autologous and homologous gel groups. As tough PRP is rich in growth factors, even these being from other animals of the same species and also of different species, it is noteworthy that even when applied serially, the different types of PRPs have not caused negative effects, as rejection, for example. It has been concluded that the heterologous and homologous sources are safe alternatives and their use contributes positively to an adequate healing process. / O plasma rico em plaquetas (PRP) é um recurso promissor no tratamento de feridas, considerado um biomaterial atóxico, que quando injetado no tecido, aumenta a capacidade de regeneração tecidual por estimular fatores de crescimento e ativar a angiogênese, e assim induzir a síntese de colágeno. Estudos comprovam a eficácia do PRP de fonte autóloga gel, porém as fontes homóloga e heteróloga gel constituem alternativas quando não há condições de obtenção do PRP do próprio animal, porém desconhece-se o efeito do uso destas fontes na organização das fibras colágenas durante o processo cicatricial. Sendo assim, o trabalho teve como objetivo comparar os efeitos na cicatrização após a realização de ferida dérmica em coelhos tratados com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas (PRP) gel (autólogo, homólogo e heterólogo). Foram utilizadas 36 biópsias de feridas dérmicas, experimentalmente induzidas em 18 coelhos adultos, clinicamente saudáveis, da raça Nova Zelândia (n= 9 machos, n= 9 fêmeas), tratados e não tratados (controle) com diferentes fontes de PRP. As feridas foram higienizadas e tratadas nos dia 0,3,7,10,14 e no 170 dia foi realizada a biópsia da ferida, para avaliação histológica e observação da fase inicial de remodelação. Para a determinação do tipo de colágeno, as lâminas de biópsia passaram pela técnica de polarização com o corante Picrosirius-red F3BA. Os resultados comprovaram que a fonte de PRP homólogo gel mostrou-se tão eficiente quanto a fonte de PRP autólogo gel em comparação a cicatrização. Outro importante achado no presente estudo foi que o uso PRP heterólogo gel proporcionou um processo de cicatrização tão bom quanto àqueles proporcionados pelos grupos autólogo e homólogo gel. Como o PRP é rico em fatores de crescimento, mesmo estes sendo de outros animais da mesma espécie e também de espécies diferentes, vale ressaltar que, mesmo quando aplicadas de forma seriada, as diferentes fontes de PRP não ocasionaram efeito negativo como, por exemplo, complicações clínicas. Conclui-se que as fontes heteróloga e homóloga são alternativas seguras e que seu uso contribui positivamente para um processo cicatricial adequado.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2018-02-20T17:29:34Z No. of bitstreams: 1 Gabriela Haro de Melo.pdf: 1119579 bytes, checksum: f99d268fab2103015abb1dca2740c64b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T17:29:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabriela Haro de Melo.pdf: 1119579 bytes, checksum: f99d268fab2103015abb1dca2740c64b (MD5) Previous issue date: 2017-09-18 / Due to its high concentration of growth factors, platelet-rich plasma (PRP) has become the subject of much research, either as an isolated or adjuvant treatment for wound repair. The fractal dimension has been used as an innovative method for the characterization and quantification of tissue structural alterations without any interference from the evaluator. The objective of this study was characterizing collagen types I and III in experimentally induced wounds and treated with different PRP sources by means of fractal dimension and other histological analyzes using blades stained with picrocirius-red and hematoxylin-eosin (HE). In statistical analysis, the variables presented a non-parametric distribution; thus, Mann-Whitney and Kruskall-Wallis tests (p<0,05) were performed using the Student-Newman-Keuls method. It was observed an increase of the collagen fibers by measuring the area with Threshold Color in the different treatments, especially with autologous PRP (p = 0.009) and heterologous PRP (p = 0.016). The fractal dimension of type I collagen had a significant increase for the autologous group (p = 0.028) in relation to the control, but, on average (p <0.05), type III collagen was higher than type I. Fractal dimension was efficient to separately characterize type I and type III collagen fibers. In this study, collagenization was higher in autologous, heterologous and homologous PRP treatments. / Devido a alta concentração em fatores de crescimento, o plasma rico em plaquetas (PRP) tornou-se objeto de estudos para pesquisadores de todo o mundo, seja como tratamento isolado ou adjuvante e demonstra efeitos benéficos em processos de cicatrização com maior produção de colágeno. Contudo, são escassos estudos que avalim a qualidade do tecido cicatricial em feridas tratadas com diferentes tipos de PRP e que qualificam o colágeno, proteína importante na elasticidade e resistência da pele. A dimensão fractal (DF), método utilizado em lâminas histológicas, permite a caracterização de estruturas. Geralmente, quanto maior a DF, mais complexa a forma do objeto e dentre os vários cálculos de DF existente, a técnica de box-couting é a mais indicada. Levantamos a hipótese de que a DF, como método auxiliar na avaliação da fisiopatologia da reparação tecidual, pode contribuir na tomada de decisão do protocolo terapêutico mais indicado para cicatrização de feridas. Objetivou-se Avaliar as características do colágeno na reparação tecidual de feridas experimentalmente induzidas e tratadas com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas (PRP) gel por meio de achados histológicos e análise fractal. Para avaliar os efeitos de diferentes tipos de PRP sob a forma de gel em cicatrização cutânea in vivo, foram utilizados 18 coelhos Nova Zelândia, divididos em três grupos de seis animais nos quais foram induzidas duas feridas com punch de 8 mm, o lado esquerdo (controle) foi tratado com NaCl 0,9%, e o direito (tratado) foi aplicado gel de PRP. As feridas foram avaliadas por um período de 17 dias. Ao 17º dia, foram realizadas biópsias para avaliação histológica pelo software Image J®. Seis animais foram doadores para PRP homólogo e um cão adulto foi usado para obtenção do PRP heterólogo. Observou-se incremento das fibras colágenas, por meio de medição de área com Threshold Colour nos diferentes tratamentos, sobretudo com PRP de fontes autóloga (p=0,009) e homóloga (p=0,016). A DF do colágeno tipo I mostrou aumento significativo para o grupo autólogo (p=0,028) em relação ao controle, porém, em média (p<0,05) o colágeno tipo III foi maior em relação ao tipo I. A coloração de picrosirius sob luz polarizada permitiu a visualização do colágeno tipo I mostrando marcada birrefringência laranja e vermelha e do colágeno tipo III com birrefringência verde. Nos grupos tratados, as fibras colágenas do tipo I, foram mais evidentes e organizadas do que as do tipo III, que estavam distribuídas irregularmente, quando comparadas com as do tipo I. Em microscopia optica, em lâminas coradas com HE, não foram observados indicativos de necrose ou inflamação nos tecidos analisados, assim como em outros estudos. A dimensão fractal foi eficaz para caracterizar separadamente as fibras de colágeno tipo I e tipo III. Os métodos utilizados neste estudo demonstraram que o emprego de PRP gel de diferentes fontes para o tratamento de feridas dérmicas é eficiente, porém o gel autólogo demonstrou melhor colagenização quando comparado ao heterólogo e homólogo, respectivamente, homólogo e heterólogo, respectivamente.

In der vorliegenden Studie wurde an 109 Patienten mit einer Erkrankung des Fesselträgers retrospektiv untersucht, ob die intraläsionale Applikation von autologem thrombozyten-reichem Plasma (PRP) Vorteile gegenüber der intraläsionalen Applikation von xenogener azellulärer Matrix aus porziner Harnblasenmukosa (ACell Vet™ UBM Powder) besitzt. Die gesamten Daten zum Patientenmaterial entstammen einer großen, schwerpunktmäßig orthopädisch orientierten Pferdeklinik. In die Gruppe mit Thrombozyten angereichertem Plasma (PRP) wurden 75 Patienten aufgenommen. Es wurden 3 verschieden Methoden zur Herstellung von thrombozytenreichem Plasma verwendet. Als Vergleichsgruppe dienten 34 Patienten, welche mit einer xenogenen Therapieform (ACell™) am Fesselträger behandelt wurden. Initial wurden alle Patienten klinisch und ultrasonographisch untersucht, wobei bei allen Patienten ein frischer oder alter aufgefrischter/chronischer Schaden am Fesselträger dargestellt werden konnte. Die Wahl der Therapieform richtete sich nach der Einschätzung, der Präferenz und den Erfahrungen des jeweiligen behandelnden Tierarztes unter Berücksichtigung des finanziellen Aufwandes für die Patientenbesitzer. Alle Patienten wurden entweder mit PRP oder mit ACell™ behandelt und Boxenruhe in Verbindung mit einem steigernd aufgebauten Schritt- und Aufbautrainingsprogramm verordnet. Die Nachuntersuchungen zur Kontrolle des Heilungserfolges und -fortschrittes beinhalteten eine klinische Lahmheitsuntersuchung sowie eine ultrasonographische Untersuchung. Je nach klinischer und ultrasonographischer Entwicklung wurde das Bewegungsprogramm angepasst. Zum Abschluss der Studie konnte als Resultat festgestellt werden, dass 45 (60 %) Patienten der PRP Gruppe ihr ursprüngliches Leistungsniveau wieder erreicht hatten, 8 (10,7 %) Patienten konnten ihr ursprüngliches Leistungsniveau nicht wieder erreichen, 17 (22,7 %) Patienten erlitten ein Rezidiv und ein (1,3 %) Patient musste euthanasiert werden. Im Vergleich dazu erreichten 20 (58,8 %) Patienten der ACell™ Gruppe wieder ihr ur-sprüngliches Leistungsniveau, 5 (14,7 %) Patienten konnten ihr ursprüngliches Leistungs-niveau nicht wieder erreichen, 7 (20,6 %) erlitten ein Rezidiv und ein (2,9 %) Patient musste euthanasiert werden. Die Unterschiede im Resultat sind statistisch nicht signifikant. Ein statistisch signifikanter Unterschied (p= 0,05) ist allerdings bei der Dauer der Rehabilitationsphase zu beobachten. Im Durchschnitt benötigten erfolgreich therapierte PRP Patienten signifikant weniger Zeit bis zum Erreichen der vollen Belastbarkeit als erfolgreich therapierte ACell™ Patienten. PRP Patienten wurden durchschnittlich 15,6 Wochen im Schritt bewegt und erhielten 13,2 Wochen Aufbautraining, so dass sie im Durchschnitt nach 29,6 Wochen wieder ihre volle Belastbarkeit erreicht hatten. Erfolgreich therapierte ACell™ Patienten wurden durchschnittlich 20,2 Wochen im Schritt bewegt und erhielten im Anschluss im Durchschnitt 19,8 Wochen Aufbautraining, so dass sie im Durchschnitt nach 40,6 Wochen wieder ihre volle Belastbarkeit erreicht hatten. Es konnte gezeigt werden, dass die Rehabilitationsdauer bei mit thrombozytenreichem Plasma behandelten Fesselträgerschäden signifikant kürzer ist als bei mit ACell™ behandelten Fesselträgerschäden, obwohl sich das Resultat der Behandlung statistisch nicht wesentlich unterscheidet (p= 0,88). Die vielversprechenden Ergebnisse einiger ähnlich konzipierten Arbeiten konnten in der vorliegenden Studie mit keiner der angewandten Behandlungsform erreicht werden. Erwähnte Studien umfassten deutlich größere oder deutlich kleinere Patientengruppen und unterschieden sich hinsichtlich Rasse und Nutzung des Patientenmaterials sowie dem meist kürzeren Untersuchungszeitraum. Insofern erscheint einerseits eine derartige Studie aus praktischer Sicht sinnvoll und lohnenswert, andererseits zeigt sich auch der Bedarf an vergleichbaren, klinischen, praxisorientierten Arbeiten zur Evaluierung dieser Behandlungsmethoden.

Purpose: In an Orthopedic office in Northeast Tennessee clinical decision making about injection options for non-surgical candidates with knee osteoarthritis is unclear. Aims: This quality improvement project will develop a clinical guideline so that providers know criteria for choosing optimal knee alternative treatments for non-surgical knee patients. Outcome measures: An expert panel gave feedback and advice on the information presented for the injection types of Platelet Rich Plasma, Corticosteroids, Amniotic Allograft and Hyaluronic Acid. They edited the guideline then sent the edits back to be complied and edited using the Delphi method. Process and Methods: The expert feedback was then be collected in a non-identifiable fashion and the guideline was rewritten based on the panel advice. Then the guideline was then presented to the practice site and the site reviewed and rated the guideline on clarity, accuracy and ease of use. Results: The guideline was rated by the practice site as able to be adopted into practice and used at the site. Findings and Limitations: Limitations include the practice site is constantly changing and new implementations could be overlooked. The expert panel are all busy professionals and finding time to review and critique a guideline is extensive. Conclusions and Implications: This novel guideline will improve healthcare by eliciting an expert panel of orthopedics that perform injections to assist in compiling the most accurate up to date guideline through which will create enhanced decision making and overall better patient care when choosing knee injections for non surgical patients.

Introdução: Pacientes com câncer na região de cabeça e pescoço normalmente são tratados por combinação de cirurgia, radioterapia (RT) e quimioterapia. Em muitos casos, a reabilitação oral com próteses implanto-suportadas representa a melhor opção para uma recuperação funcional adequada. Entretanto, em pacientes irradiados procedimentos como exodontias e instalações de implantes dentários são fatores de risco ao desenvolvimento de osteorradionecrose. Diversos estudos experimentais têm demonstrado que o uso de células-tronco mesenquimais (CTMs) associadas a fatores de crescimento como plasma rico em plaquetas (PRP) proporciona melhora no reparo ósseo e na osseointegração, podendo ser considerada uma alternativa viável para defeitos ósseos ou injúria. Objetivos: Isolar e caracterizar as CTMs da medula óssea (MO) de miniporcos brasileiros (Minipigs BR-1), avaliar a interferência da RT e o efeito da associação de CTMs-MO+PRP no processo de osseointegração de implantes instalados em alvéolos frescos em mandíbulas de miniporcos, por análise histológica e histomorfométrica da interface osso-implante. Métodos: CTMs-MO de 12 miniporcos adultos machos foram isoladas da crista ilíaca. Após 21 dias de cultura, o potencial de diferenciação celular foi avaliado por meio de coloração e RT-PCR. O perfil imunofenotípico foi caracterizado por citometria de fluxo. Os animais foram divididos em três grupos: Grupo A (grupo controle, sem RT), Grupo B (implantes instalados 15 dias antes da RT) e Grupo C (implantes instalados três meses após a RT). A dose total de radiação para cada lado da mandíbula foi de 24 Gy, divididos em três doses de 8 Gy com intervalo de 7 dias entre as doses, a qual equivale biologicamente a aproximadamente 56 Gy, com 28 exposições de 2 Gy cada. Quatro implantes de titânio foram instalados nos alvéolos frescos, imediatamente após as extrações dos terceiro e quarto pré-molares, totalizando 48 implantes controles e 48 experimentais (uso de CTM-MO+PRP). Os animais foram eutanasiados 90 dias pós-implantação. Foram analisados o percentual de implantes perdidos (PIP), o contato osso-implante (COI), e a densidade óssea no interior das roscas (DOIR). Resultados: A eficiência de isolamento das CTMs-MO foi de 100% e em cultura as células apresentaram morfologia fibroblastóide. As células foram positivas para CD90 (88,6%), CD29 (89,8%), CD44 (86,9%) e negativas para CD34 (1,6%), CD45 (1,8%), CD14 (1,8%) e MHC-II (2,7%). As células foram diferenciadas em adipócitos, demonstrado pela presença de vacúolos lipídicos no interior das células; osteoblastos, pela mineralização da matriz extracelular e condrócitos pela presença de lacunas ao redor dos condrócitos jovens. A maior expressão gênica de AP2, ALP e COL II em células induzidas também confirmou o potencial de diferenciação (p < 0,001; p < 0,001; p = 0,031; respectivamente). Os PIP nos lados controle e experimental foram respectivamente 25,0% e 18,7% no grupo A (p = 0,686), 31,2% e 25,0% no grupo B (p=0,686) e 68,7% e 68,7% no grupo C (p =1,000). Na comparação entre os três grupos, o PIP apresentou diferença estatisticamente significante tanto no lado controle (p=0,041) como no experimental (p = 0,047). Os percentuais de COI nos lados controle e experimental foram respectivamente 39,0 e 27,7 no grupo A (p = 0,110); 20,9 e 16,7 no grupo B (p=0,347) e 16,0 e 7,1 no grupo C (p = 0,310), com diferença estatística entre os grupos tanto no lado controle (p = 0,033) quanto no experimental (p=0,046). As DOIR nos lados controle e experimental foram respectivamente 46,8 e 36,5 no grupo A (p = 0,247); 29,3 e 24,1 no grupo B (p = 0,379) e 21,0 e 11,6 no grupo C (p = 0,421), porém com diferença estatisticamente significante entre os três grupos somente no lado controle (p=0,025). Conclusões: As CTMs-MO de Minipigs BR-1, obtidas com o protocolo utilizado neste estudo são células-tronco, podendo ser aplicadas em ensaios pré-clínicos na medicina regenerativa. Os resultados mostraram um efeito negativo da radiação ionizante na neoformação óssea periimplantar tanto no grupo B quanto no C. Após a RT a perda de implantes foi três vezes maior que em osso não irradiado. A RT realizada 15 dias após a instalação dos implantes não interferiu na perda de implantes, sugerindo que este seria o melhor momento para reabilitação bucal com implantes dentários. Com a metodologia empregada, o uso da associação CTMs-MO+PRP previamente à instalação de implantes não apresentou efeito positivo significante na neoformação óssea periimplantar / Introduction: Patients with head and neck cancer are usually treated by a combination of surgery, radiotherapy (RT) and chemotherapy. In many cases, oral rehabilitation with implant-supported prostheses is the best option for a proper functional recover. However, in irradiated patients procedures as dental extractions and implants are risk factors for developing osteoradionecrosis. Several experimental studies have shown that the use of mesenchymal stem cells (MSCs) associated with growth factors such as platelet-rich plasma (PRP) provides improvement in bone regeneration and osseointegration, being considered an alternative to bone defects or injury. Objectives: To isolate and characterize MSCs from bone marrow (BM) of Brazilian minipigs (Minipigs BR-1), to evaluate the effect of RT and of BM-MSCs+PRP in the osseointegration of implants placed in fresh sockets, by histological and histomorphometric analysis of the bone-implant interface. Methods: BM-MSCs from 12 adult male minipigs were isolated from the iliac crest. After 21 days of culture, cell differentiation potential was assessed by staining and RT-PCR. The immunophenotypic profile was characterized by flow cytometry. The animals were divided into three groups: Group A (control group, no RT), Group B (implants placement 15 days before RT) and Group C (implants placement three months after RT). The total radiation dose for each side of the mandible was 24 Gy, divided into 3 doses of 8 Gy with a 7 dayinterval for each dose, which is biologically equivalent to approximately 56 Gy, with 28 sections of 2 Gy each. Four titanium implants were installed in the alveoli fresh, immediately after the extraction of the third and fourth premolars of each hemimandible, totalling 48 implants on the control side and 48 on the experimental side (using BM-MSCs+PRP). The animals were euthanized 90 days post-implantation. The implant loss rate (ILR), the bone-implant-contact (BIC) and bone density inside the threads (BDIT) were determined in each group. Results: The efficiency of the isolation of BM-MSCs was 100%, and in culture, the cells showed fibroblastoid morphology. Cells were positive for CD90 (88.6%), CD29 (89.8%), CD44 (86.9%) and negative for CD34 (1.6%), CD45 (1.8%), CD14 (1.8%) and MHC-II (2.7%). Cells were differentiated into adipocytes, as demonstrated by the presence of lipid vacuoles in the cells, osteoblasts, by mineralization of extracellular matrix and chondrocytes, by the presence of gaps around the young chondrocytes. The higher gene expression of AP2, ALP and COL II at induced cells also confirmed the differentiation potential (p < 0.001, p < 0.001, p=0.031; respectively). The ILR in control and experimental sides were respectively 25.0% and 18.7% in group A (p=0.686), 31.2% and 25.0% in group B (p = 0.686) and 68.7% and 68.7% in group C (p =1.000), with a statistically significant difference between the three groups at the control side (p = 0.041) and at the experimental side (p = 0.047). The percentage of BIC in control and experimental sides were respectively 39.0 and 27.7 in group A (p = 0.110), 20.9 and 16.7 in group B (p = 0.347) and 16.0 and 7.1 in group C (p = 0.310), with statistical significance between the groups at the control side (p = 0.033) and at the experimental side (p = 0.046). The BDIT in experimental and control sides were respectively 46.8 and 36.5 in group A (p = 0.247), 29.3 and 24.1 in group B (p = 0.379) and 21.0 and 11.6 in group C (p = 0.421), with statistical significance between the three groups only at the control side (p = 0.025). Conclusions: The BM-MSCs of Minipigs BR-1 obtained with this protocol can be used in pre-clinical regenerative medicine since they are stem cells. The results showed a negative effect of RT in peri-implant bone regeneration in group B and C. The implant loss was three times higher in irradiated bone than in non-irradiated one. The RT performed 15 days after implant placement did not interfere with implant loss, suggesting that this would be the best time for oral rehabilitation with dental implants. With this methodology, the use of BM-MSCs+PRP before the implant placement did not show any significant positive effect on peri-implant bone regeneration