Orientador: Maria Aparecida Brenelli / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T01:38:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AranhaNetto_Abimael_M.pdf: 3339537 bytes, checksum: 59e9191fa1c23e87a74bfce99455e992 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A policitemia neonatal é causa de importante morbidade no período neonatal e apesar da elevada prevalência neste período ainda apresenta etiologia, mecanismos fisiopatológicos, critérios diagnósticos, tratamento e prognósticos imprecisos. Com a finalidade de avaliar o comportamento do hematócrito ao longo do primeiro dia de vida em recém-nascidos normais a termo e suas consequências na definição do tempo ideal de triagem e diagnóstico de policitemia neonatal, foram estudados 172 recém-nascidos no período de julho de 1992 a junho de 1993, no Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher da Universidade Estadual de Campinas. Avaliou-se o hematócrito colhido em sangue misto de cordão umbilical ao- nascimento ou hora zero e a seguir os coletados em veia antecubital com 1, 2, 6, 12 e 24 horas de vida. Posteriórmente verificou-se a associação de fatores como: sexo, cor, tipo de parto, peso de nascimento, tempo de ligadura de cordão umbilical e variação de peso nas primeiras 24 horas de vida com o valor do hematócrito nos diversos tempos estudados. Utilizouse os testes estatísticos t de Student, F de Snedecor, análise de regressão linear simples e múltipla e montados modelos de predição diagnóstica da doença a partir do hematócrito de cordão umbilical com cálculos de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo. Concluiu-se que o hematócrito variou significativamente no tempo, com hemoconcentração máxima na segunda hora de vida e retorno aos valores de cordão umbilical na 248 hora, com esta variabilidade não sendo associada estatisticamente a nenhum dos fatores estudados. A prevalência de policitemia neonatal (hematócrito venoso 65%) variou de forma semelhante ao hematócrito, com maior freqüência relativa na segunda hora (9%) e redução gradativa até atingir o menor valor na 24a hora (1,7%). O hematócrito de sangue misto umbilical não pôde ser utilizado com segurança como modelo diagnóstico de policitemia, mas o ponto de corte de 54% pôde ser estabelecido como modelo de triagem precoce da doença / Abstract: The neonatal polycythemia is cause of important morbidity in neonatal period. In spite of its high prevalence, the polycythemia is still imprecise concerning etiology, physiopathological cansequences, diagnosis criteria, treatment and prognosis in order to evaluate hematocrit behavior during the first day of life in normal, term infants, and its consequences to define the ideal time for blood drawn to diagnose neonatal polycythemia, 172 newborns were studied. The research was carried out between July 1992 and Jun 1993 at the Center for Whole Attention to Woman's Health in Campinas State University. The hematocrit was evaluated at time of births (from umbilical cord blood sample) and by antecubital vein pundion at 1 hour, 2, 6, 12 and 24 hours of life. Others factors such as sex, colour, type of delivery, birthweight, time of umbilical cord clamping and weight variability in the first 24 hours of life were considered to associated them to various hematocrit measures taken. The folowing statistic test were used: t-Student test, F-Snedecor test, simple and multiple regression. Models of diagnostic prediction from umbilical cord hematocrit were created considering sensibility, specificity and predictive value, both positive and negative. The findings show a significant variation in hematocrit along the time, with maximum hemoconcentration in the second hour after birth, returning to umbilical cord values in the 24th hour. The variability was not statistically associated to any of the studied factors. The prevalence of neonatal polycythemia (venous hematocrit equal or higher than 65%) variated in a similar way to the hematocrit, having higher rei ative rate in the 2nd hour (9%) and gradative reduction until attain a lower rate in the 24th hour (1,7%). The hematocrit taken from umbilical cord mixed blood could not be used as a sure diagnostic model for polycythemia, but the cutpoint of 54% could be established as model for precocious screening of the disease / Mestrado / Mestre em Pediatria

Orientador: Maria Aparecida Brenelli Vitali / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T23:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AranhaNetto_Abimael_D.pdf: 3767312 bytes, checksum: 673571c251ef3a09f6ab2343a5f16c6f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Resumo: A poli citem ia e hiperviscosidade são morbidades de grande relevância no período neonatal, determinando manifestações clínicas e comprometimento neurológico em grande número de recém-nascidos. Os fatores envolvidos no desencadeamento das alterações neurológicas ainda não foram suficientemente esclarecidos, propiciando controvérsias sobre a oportunidade e eficácia do seu tratamento, principalmente em crianças assintomáticas. Recentemente tem sido investigada a influência do fluxo sangüíneo cerebral na sua fisiopatogenia, embora não existam resultados conclusivos, visto que a quantificação do fluxo cerebral em recém-nascidos é bastante complexa, por incorporar múltiplos elementos decorrentes da adaptação fisiológica propiciado pelo nascimento. Utilizando a ultra-sonografia Doppler, o objetivo do presente estudo foi avaliar a velocidade de fluxo sangüíneo cerebral em recém-nascidos policitêmicos assintomáticos e normocitêmicos e analisar a influência de algumas variáveis perinatais na hemodinâmica cerebral. Estudaram-se prospectivamente 42 recém-nascidos a termo atendidos no Serviço de Neonatologia do CAISM-UNICAMP, sendo 25 normocitêmicos e 17 policitêmicos. Com 1, 2, 12 e 24 horas de vida, foram realizadas mensurações da velocidade de fluxo cerebral através de ultra-sonografia Doppler em artéria cerebral anterior e calculados a resistência vascular periférica, a "hindrance" vascular e o transporte de células vermelhas. No mesmo período foram medidos hematócrito, viscosidade e pC02 venosos. Através de monitorização não invasiva também foram determinadas a pressão arterial e freqüência cardíaca. Os resultados demonstraram que as medidas ae velocidade de fluxo cerebral foram significativamente mais baixas nos recém-nascidos policitêmicos, exceto o índice de resistência de Pourcelot, que não mostrou diferenciação entre os grupos. A resistência vascular cerebral foi aumentada nos policitêmicos, sem modificação relativa da geometria vascular, porém o transporte de células vermelhas não apresentou diferença significativa entre os grupos. Os valores de velocimetria Doppler aumentaram significativamente entre a 23 e 243 horas de vida, acompanhados por diminuição paralela da resistência periférica. Estas variações coincidiram com as modificações do hematócrito e da viscosidade sangüínea, que apresentaram diminuição significativa no mesmo período. A análise de regressão simples mostrou que os valores de viscosidade sangüínea foram inversamente relacionados ao fluxo em todos os tempos analisados. Os resultados da análise múltipla demonstraram resultados diferentes para cada tempo de vida, embora a relação adequação peso/idade e a presença/ausência de policitemia tenham permanecido como as variáveis mais constantes como preditoras da velocidade de fluxo no período estudado, com os valores de viscosidade sendo incorporados ao modelo de predição somente a partir da 128 hora de vida. Concluiu-se que no primeiro dia de vida houve uma variação significativa da velocidade de fluxo e da resistência vascular cerebral, tendo as medidas ultra-sonográficas de velocidade, exceto o I.R., apresentada diferenciação significativa entre recém-nascidos policitêmicos e normocitêmicos, embora o transporte de células vermelhas não tenha sido diferente entre eles. A predição de velocidade de fluxo cerebral seguiu um modelo complexo, sendo influenciado de maneira importante pela adequação peso/idade, pela presença/ausência de policitemia neonatal e tendo a variação da viscosidade sangüínea apresentado expressão apenas a partir da 128 horas de vida / Abstract: Abstract: Polycytemia and hyperviscosity are morbidity of high relevance during the neonatal period, leading to clinical events and neurological problems in a great number of newborns. The involved triggering effects on these alterations are not yet well clarified leading to controversies about the opportunity and efficacy of its treatment. Recent studies have investigated the influence of cerebral blood flow in, but until now the results are not conclusive due to the complexity in dealing with multiple elements arising from the delivery physiological adaptation. The objective of this study was to evaluate the cerebral blood flow, using Doppler ultrasound, in normocytemic and asymptomatic polycytemic newborns and to analyze the influence of some neonatal variables in the brain hemodynamics. Forty-two term newborn delivered at the Neonatology Service of CAISM-UNICAMP where investigated, being twenty five normocytemic and seventeen polycytemic. The cerebral blood flow velocity was measured in the anterior cerebral artery at 1,2, 12 and 24 hours of life and from these measurements the vascular cerebral resistance, the vascular "hindrance" and the red cells transport were calculated. At the above mentioned time schedule were collected venous blood samples and measured hematocrit values, viscosity and pC02. U sing non-invasive techniques were also evaluated the mean blood pressure and the cardiac frequency. There was no difference of weight and gestational age between the groups and the blood flow velocities were significantly lower in the polycytemic newborn group, except for the resistance index that did not show difference between the groups. In the group of polycytemics the mean blood pressure and the vascular cerebral resistance were increased without relative modification in the vascular geometry, while the red cells transport did not present significant difference. The blood flow velocity increased significantly from the 2nd until the 24th hours of life for the two groups followed by the parallel decrease of the peripheral resistance. These changes matched with variations in hematocrit and blood viscosity that presented significant decrease. As a conclusion, there is a time significant variation of the blood flow velocity and the cerebral vascular resistance in first day of life and that these values present significant difference between the normo and polycytemic newborns, but the prediction of flow follows a complex model, with important influence from the adequate weight/gestational age and having the variation of blood viscosity influence only after the 12th hour of life / Doutorado / Doutor em Pediatria

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monte-Mor_BarbaradaCostaReis_D.pdf: 7171978 bytes, checksum: 5c73cb6c7edd6138186b17d972fce769 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Policitemia vera (PV) é uma síndrome mieloproliferativa (SMP) crônica que ocorre por proliferação clonal de progenitores hematopoéticos multipotenciais. Pacientes com PV apresentam expansão das três principais linhagens mielóides na medula óssea, levando à produção aumentada de hemácias, granulócitos e plaquetas. Características importantes de PV incluem elevação de hematócrito em presença de níveis normais ou diminuídos de eritropoetina (EPO) e a formação de colônias eritróides endógenas (CEE). A mutação JAK2 V617F, presente na maioria dos pacientes com PV, causa ativação constitutiva de JAK2 e parece ser responsável pelo fenótipo observado. Apesar disso, as mudanças transcricionais desencadeadas pela mutação ainda não foram completamente caracterizadas. Neste trabalho, utilizou-se Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) para realizar um estudo de expressão gênica global em células da medula óssea de um paciente com PV portador da mutação, ao diagnóstico e em células normais de doadores saudáveis. Genes com expressão aumentada em PV estão envolvidos em processos biológicos importantes, como transdução de sinal, diferenciação e proliferação celular, ciclo celular, apoptose, resposta imune e regulação da transcrição. JUNB foi um dos genes identificados e, usando reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR), detectou-se expressão aumentada de JUNB em dois outros pacientes com PV JAK2 V617F-positivos. Por meio de linhagens murinas Ba/F3-REPO e culturas primárias de eritroblastos humanos, observou-se que JUNB é expresso após adição de EPO e que a proteína JunB é constitutivamente induzida por JAK2 V617F. Além disso, interferência na expressão de JUNB diminuiu o potencial clonogênico e proliferativo de progenitores eritróides humanos Ainda, em PV, a eritropoese causada por JAK2 V617F mostrou-se mais sensível à diminuição de expressão de JunB do que a eritropoese normal. Assim, esses resultados sugerem que JunB tenha um papel fundamental no desenvolvimento de SMPs causadas por JAK2 V617F / Abstract: Polycythemia vera (PV) is a chronic myeloproliferative disorder that arises through clonal proliferation of multipotent hematopoietic progenitors. PV patients present bone marrow trilineage expansion, leading to increased production of mature red cells, granulocytes and platelets. Important PV features are elevated red cell mass, despite normal or subnormal erythropoietin (EPO) levels, and endogenous erythroid colony (EEC) formation. The JAK2 V617F mutation, present in the majority of polycythemia vera (PV) patients, causes a JAK2 constitutive activation and seems to be responsible for the PV phenotype. However, the transcriptional changes triggered by the mutation have not yet been totally characterized. Serial analysis of gene expression (SAGE) was used to perform a large scale gene expression study in bone marrow cells of a newly-diagnosed PV patient harboring the JAK2 V617F mutation and in normal bone marrow cells from healthy donors. Genes overexpressed in PV are involved in important biological processes, such as signal transduction, cellular differentiation, cellular proliferation, cell cycle, apoptosis, immune response and transcriptional regulation. JUNB was one of the genes up-regulated in PV and overexpression of JUNB was also detected by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in hematopoietic cells of another two JAK2 V617F PV patients. Using Ba/F3-EPOR cell lines and primary human erythroblast cultures, JUNB was found to be expressed after Epo addition and JunB protein was shown to be constitutively induced by JAK2 V617F. In addition, JUNB knock down reduced the clonogenic and proliferative potential of human erythroid progenitors. Furthermore, in PV, the JAK2 V617F driven erythropoisis was more sensitive to JunB downregulation than normal erythropoiesis. Hence, these results demonstrate that JunB may play a major role in the development of JAK2 V617F myeloproliferative disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) são um grupo de doenças derivadas de uma transformação clonal de célula tronco hematopoiéticas no qual a linhagem celular mielóide é predominantemente expandida no sangue periférico. As NMPs Philadelphia-negativas incluem policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (MFP) que compartilham muitas características hematológicas, clínicas e evolutivas. A mutação da JAK2 (JAK2V617F) está presente em cerca de 95% dos pacientes com PV, entre 50 a 70% com TE e 40 a 50% com MFP. No entanto, os testes moleculares para diagnóstico são muitas vezes um desafio devido ao alto custo e a disponibilidade de equipamentos especializados. Objetivo: Verificar o impacto do teste molecular da mutação JAK2V617F para o diagnóstico de NMPs nos pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Métodos: Foram avaliados 87 pacientes com suspeita de NMPs. As amostras de sangue periférico foram analisadas para a mutação JAK2V617F pelo método genético molecular de PCR alelo-específico e os resultados correlacionados com os dados clínico-laboratoriais. Para estabelecimento do diagnóstico, foram utilizados os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016. Resultados: Dos 87 pacientes avaliados, 27,6% foram diagnosticados como PV, 39,1% como TE, 4,6% como MFP e 28,7% não contemplavam os critérios para o diagnóstico NMPs. A comparação da utilização do teste da mutação JAK2V617F mostrou que, apenas 41,7% dos pacientes com PV sem utilizar o teste, teriam sido diagnosticados comparados a 91,7% utilizando este teste como um dos critérios no diagnóstico final (p = 0,004). Na TE e na MFP, este critério não foi estatisticamente significativo. Conclusão: O teste molecular para a mutação de JAK2V617F no nosso hospital teve um impacto significativo no diagnóstico dos pacientes com PV, mostrando ser uma ferramenta importante para o diagnóstico final desta NMP. / Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of disorders derived from a clonal transformation of stem cell on which myeloid cell lineage is predominantly expanded in the peripheral blood. Philadelphia-negative MPNs include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF) which share many hematological, clinical, and evolutionary characteristics. The JAK2 mutation (JAK2V617F) is present in about 95% of patients with PV, between 50 to 70% with ET and 40 to 50% PMF. However, the molecular diagnostic tests are often a challenge due to the high cost and the availability of specialized equipment. Objective: To verify the impact of molecular testing of the JAK2V617F mutation for the diagnosis of MPNs in patients attended at Hospital de Clinics, Porto Alegre. Methods: A total of 97 patients were evaluated with suspected of MPNs. The peripheral blood samples were analyzed for the JAK2V617F mutation by the molecular genetic allelespecific PCR method and the results correlated with the clinical-laboratory data. To establish the diagnosis, the 2016 World Health Organization (WHO) criteria were used. Results: Of the 87 patients evaluated, 27.6% were diagnosed as PV, 39.1% as ET, 4.6% as PMF and 28.7% did not meet criteria for MPNs diagnosis. Comparison of the use of the JAK2V617F test showed that only 41.7% of patients with PV without the mutation test were diagnosed compared to 91.7% using this test as one of the criteria for the final diagnosis (p = 0.004). In the ET and the PMF, this criterion was not statistically significant. Conclusion: The molecular test for the JAK2V617F mutation in our hospital had a significant impact in the diagnosis of patients with PV, showing to be an important tool for the final diagnosis of this MPN.

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) são um grupo de doenças derivadas de uma transformação clonal de célula tronco hematopoiéticas no qual a linhagem celular mielóide é predominantemente expandida no sangue periférico. As NMPs Philadelphia-negativas incluem policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (MFP) que compartilham muitas características hematológicas, clínicas e evolutivas. A mutação da JAK2 (JAK2V617F) está presente em cerca de 95% dos pacientes com PV, entre 50 a 70% com TE e 40 a 50% com MFP. No entanto, os testes moleculares para diagnóstico são muitas vezes um desafio devido ao alto custo e a disponibilidade de equipamentos especializados. Objetivo: Verificar o impacto do teste molecular da mutação JAK2V617F para o diagnóstico de NMPs nos pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Métodos: Foram avaliados 87 pacientes com suspeita de NMPs. As amostras de sangue periférico foram analisadas para a mutação JAK2V617F pelo método genético molecular de PCR alelo-específico e os resultados correlacionados com os dados clínico-laboratoriais. Para estabelecimento do diagnóstico, foram utilizados os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016. Resultados: Dos 87 pacientes avaliados, 27,6% foram diagnosticados como PV, 39,1% como TE, 4,6% como MFP e 28,7% não contemplavam os critérios para o diagnóstico NMPs. A comparação da utilização do teste da mutação JAK2V617F mostrou que, apenas 41,7% dos pacientes com PV sem utilizar o teste, teriam sido diagnosticados comparados a 91,7% utilizando este teste como um dos critérios no diagnóstico final (p = 0,004). Na TE e na MFP, este critério não foi estatisticamente significativo. Conclusão: O teste molecular para a mutação de JAK2V617F no nosso hospital teve um impacto significativo no diagnóstico dos pacientes com PV, mostrando ser uma ferramenta importante para o diagnóstico final desta NMP. / Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of disorders derived from a clonal transformation of stem cell on which myeloid cell lineage is predominantly expanded in the peripheral blood. Philadelphia-negative MPNs include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF) which share many hematological, clinical, and evolutionary characteristics. The JAK2 mutation (JAK2V617F) is present in about 95% of patients with PV, between 50 to 70% with ET and 40 to 50% PMF. However, the molecular diagnostic tests are often a challenge due to the high cost and the availability of specialized equipment. Objective: To verify the impact of molecular testing of the JAK2V617F mutation for the diagnosis of MPNs in patients attended at Hospital de Clinics, Porto Alegre. Methods: A total of 97 patients were evaluated with suspected of MPNs. The peripheral blood samples were analyzed for the JAK2V617F mutation by the molecular genetic allelespecific PCR method and the results correlated with the clinical-laboratory data. To establish the diagnosis, the 2016 World Health Organization (WHO) criteria were used. Results: Of the 87 patients evaluated, 27.6% were diagnosed as PV, 39.1% as ET, 4.6% as PMF and 28.7% did not meet criteria for MPNs diagnosis. Comparison of the use of the JAK2V617F test showed that only 41.7% of patients with PV without the mutation test were diagnosed compared to 91.7% using this test as one of the criteria for the final diagnosis (p = 0.004). In the ET and the PMF, this criterion was not statistically significant. Conclusion: The molecular test for the JAK2V617F mutation in our hospital had a significant impact in the diagnosis of patients with PV, showing to be an important tool for the final diagnosis of this MPN.

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) são um grupo de doenças derivadas de uma transformação clonal de célula tronco hematopoiéticas no qual a linhagem celular mielóide é predominantemente expandida no sangue periférico. As NMPs Philadelphia-negativas incluem policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (MFP) que compartilham muitas características hematológicas, clínicas e evolutivas. A mutação da JAK2 (JAK2V617F) está presente em cerca de 95% dos pacientes com PV, entre 50 a 70% com TE e 40 a 50% com MFP. No entanto, os testes moleculares para diagnóstico são muitas vezes um desafio devido ao alto custo e a disponibilidade de equipamentos especializados. Objetivo: Verificar o impacto do teste molecular da mutação JAK2V617F para o diagnóstico de NMPs nos pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Métodos: Foram avaliados 87 pacientes com suspeita de NMPs. As amostras de sangue periférico foram analisadas para a mutação JAK2V617F pelo método genético molecular de PCR alelo-específico e os resultados correlacionados com os dados clínico-laboratoriais. Para estabelecimento do diagnóstico, foram utilizados os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2016. Resultados: Dos 87 pacientes avaliados, 27,6% foram diagnosticados como PV, 39,1% como TE, 4,6% como MFP e 28,7% não contemplavam os critérios para o diagnóstico NMPs. A comparação da utilização do teste da mutação JAK2V617F mostrou que, apenas 41,7% dos pacientes com PV sem utilizar o teste, teriam sido diagnosticados comparados a 91,7% utilizando este teste como um dos critérios no diagnóstico final (p = 0,004). Na TE e na MFP, este critério não foi estatisticamente significativo. Conclusão: O teste molecular para a mutação de JAK2V617F no nosso hospital teve um impacto significativo no diagnóstico dos pacientes com PV, mostrando ser uma ferramenta importante para o diagnóstico final desta NMP. / Myeloproliferative neoplasms (MPNs) are a group of disorders derived from a clonal transformation of stem cell on which myeloid cell lineage is predominantly expanded in the peripheral blood. Philadelphia-negative MPNs include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), and primary myelofibrosis (PMF) which share many hematological, clinical, and evolutionary characteristics. The JAK2 mutation (JAK2V617F) is present in about 95% of patients with PV, between 50 to 70% with ET and 40 to 50% PMF. However, the molecular diagnostic tests are often a challenge due to the high cost and the availability of specialized equipment. Objective: To verify the impact of molecular testing of the JAK2V617F mutation for the diagnosis of MPNs in patients attended at Hospital de Clinics, Porto Alegre. Methods: A total of 97 patients were evaluated with suspected of MPNs. The peripheral blood samples were analyzed for the JAK2V617F mutation by the molecular genetic allelespecific PCR method and the results correlated with the clinical-laboratory data. To establish the diagnosis, the 2016 World Health Organization (WHO) criteria were used. Results: Of the 87 patients evaluated, 27.6% were diagnosed as PV, 39.1% as ET, 4.6% as PMF and 28.7% did not meet criteria for MPNs diagnosis. Comparison of the use of the JAK2V617F test showed that only 41.7% of patients with PV without the mutation test were diagnosed compared to 91.7% using this test as one of the criteria for the final diagnosis (p = 0.004). In the ET and the PMF, this criterion was not statistically significant. Conclusion: The molecular test for the JAK2V617F mutation in our hospital had a significant impact in the diagnosis of patients with PV, showing to be an important tool for the final diagnosis of this MPN.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-15T17:10:47Z No. of bitstreams: 1 renatamendesdefreitas.pdf: 1082430 bytes, checksum: 17933c41d6c615bede876aefdcce85ef (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:27:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 renatamendesdefreitas.pdf: 1082430 bytes, checksum: 17933c41d6c615bede876aefdcce85ef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renatamendesdefreitas.pdf: 1082430 bytes, checksum: 17933c41d6c615bede876aefdcce85ef (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As Neoplasias Mieloproliferativas são originadas por uma proliferação clonal de um progenitor hematopoético. Descrita inicialmente em 1951 como “Doenças Mieloproliferativas” e reavaliada pela Organização Mundial da Saúde em 2011, as Neoplasias Mieloproliferativas agrupam a Policitemia Vera, Trombocitemia Essencial e Miefibrose Primária em um subgrupo chamado de BCR-ABL negativo. De acordo com a revisão dos critérios adotados para o diagnóstico das Neoplasias Mieloproliferativas a presença da mutação JAK2 V617F é considerada critério de maior importância para o diagnóstico do subgrupo BCR-ABL negativo representando um marcador clonal. A Policitemia Vera é principalmente diagnosticada por um aumento na massa eritrocitária independente de fator estimulante, aumento de leucócitos no sangue periférico, esplenomegalia e trombocitose. Ocorre, geralmente, em homens e mulheres com faixa etária de 60 anos, com incidência de 0,7 a 2,6/100.000 habitantes/ano. A mutação V617F no gene JAK2 produz uma proteína alterada que ativa constitutivamente a via JAK-STAT e outras vias downstream de modo que, as proteínas de ativação transcricional e transdutoras de sinal (STAT do inglês Signal Transducerand Activator of Transcription) são fosforiladas posteriormente impactando na expressão de genes envolvidos na regulação da apoptose e proteínas regulatórias, além de alterar a taxa de proliferação das células hematopoéticas. Neste trabalho foram selecionados 26 pacientes com Policitemia Vera, os quais foram atendidos na cidade de Juiz de Fora, Minas Gerais. Foram realizadas análises de mutações no gene JAK2 a partir do material genético isolado do sangue periférico. Os dados clínicos de cada paciente foram relacionados entre si e correlacionados com os dados moleculares. / Myeloproliferative neoplasms (MPN) are caused by a clonal proliferation of a hematopoietic progenitor. First described in 1951 as “Myeloproliferative Diseases” and reevaluated by the World Health Organization in 2011 (WHO, 2011), the Myeloproliferative Neoplasms gather the Polycythemia Vera, Essential Thrombocythemia and Primary Mielofibrose in a subgroup called negative BCR-ABL. According to WHO the revised diagnosis criteria for myeloproliferative neoplasms, the presence of JAK2 V617F mutation, is considered the most important criterion for the diagnosis of negative BCR-ABL subgroup representing a clonal marker. The Polycythemia Vera is primarily diagnosed by an independent stimulating factor in red cells mass increasing, followed by an increase of leukocytes in peripheral blood, spleen and thrombocytosis. It usually occurs in men and women of all age groups with higher incidence in 60-year-old patients ranging from 0.7 to 2.6/ 100.000 hab/year. The V617F mutation in the JAK2 gene produces an altered protein that activates constitutively the JAK-STAT pathway and other pathways downstream as a result the protein transcriptional activation and signal transduction (STAT) are subsequently phosphorylated causing impact in the expression of genes involved in regulation of apoptosis and regulatory proteins, as well as altering the rate of proliferation of hematopoietic cells. In this study 26 patients with Polycythemia Vera were selected in Juiz de Fora, Minas Gerais. The peripheral blood was used for genetic material isolation (JAK2 mutation). The clinical data of each patient were related to each other and correlated with the molecular data.

Orientadores: Maria de Fatima Sonati, Munir Salomão Skaf / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T12:16:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_SusanElisabethDominguesCosta_M.pdf: 12500595 bytes, checksum: 271d153e901aa04d248746dbcf6d90c6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A hemoglobina (Hb), pigmento respiratório de todos os organismos vertebrados, encontra-se em elevadas concentrações nas hemácias e é responsável pelo transporte de O2 dos pulmões para os tecidos. A Hemoglobina humana constitui-se de dois pares de cadeias polipeptídicas (globinas), cada qual envolvendo um grupo prostético heme, que se liga reversivelmente ao O2. Mais de 1000 variantes estruturais da Hb humana já foram descritas, parte delas relacionada a manifestações clinicas importantes. Algumas variantes apresentam alteração funcional, que se traduz em afinidade modificada pelo O2. Quando elevada, há uma produção compensatoriamente maior de hemácias, levando a policitemia; quando diminuída, resulta em cianose. O Laboratório de Hemoglobinopatias do Departamento de Patologia Clinica da FCM/UNICAMP e um dos laboratórios de referencia no pais, tendo identificado, ate o momento, 12 hemoglobinas novas e 51 variantes raras. Destas, as variantes novas Hb Hb Boa Esperanca (?16 Lys?Thr), Hb Itapira (?30 Glu?Val), Hb Bom Jesus da Lapa (?30 Glu?Ala), Hb Olinda [ß22 (b4) -25 (b7)], Hb Caruaru (ß 122 Phe?Ser) e Hb S-Sao Paulo (ß6 Glu?Val ; ß65 Lys?Glu) foram aqui caracterizadas funcionalmente, assim como as variantes raras Hb Iwata (a87 His??Arg), Hb Sunshine Seth (?94 Asp?His), Hb Deer Lodge (ß2 His?Arg), Hb Deer Lodge (ß2 His??Arg) + Hb S (ß6 Glu??Val), Hb G-Siriraj (ß7 Glu??Lys), Hb G-Siriraj (ß7 Glu??Lys) e Hb C (ß6 Glu??Lys) em associacao, Hb M-Saskatoon (ß63 His??Tyr), Hb Redondo (ß92 His? Asn), Hb Koln (ß98 Val??Met), Hb Coimbra (ß99 Asp??Glu) e Hb Dhonburi (ß126 Val?Gli)+ Btal. O metodo analitico empregado foi descrito por Rossi-Fanelli & Antonini (1958), e analisa espectrofotometricamente o comportamento da Hb frente a conhecidas pressões parciais de oxigênio (pO2), possibilitando a medida de afinidade (p50), da constante de Hill (n), que verifica o fenômeno de cooperatividade entre as cadeias globinicas para ligação do O2, o efeito Bohr (que indica facilidade na ligação Hb-O2 conforme e elevado o pH do meio), bem como a interação com o Inositol Hexafosfato (IHP), um fosfato polianion que dificulta a ligação entre a Hb e o O2. A exceção das Hbs Itapira e Bom Jesus da Lapa, em concentrações reduzidas nos hemolisados, todas as demais apresentam afinidade alterada pelo oxigênio. Como complementação ao estudo funcional, as Hbs Caruaru e São Paulo também foram submetidas a analise por dinâmica molecular, através dos programas VMD (Visual Molecular Dynamics), com dados inseridos nos softwares CHARMM (Chemistry at Harvard Molecular Mechanics) e NAMD (Nanoscale Molecular Dynamics). As demais variantes tiveram sua analise estrutural individualizada feita através da visualização de estruturas nativas depositadas no Protein Data Bank, para melhor compreensão da relação entre o aminoácido substituído e a função protéica alterada. Deste modo, foi possível estabelecer correlações entre a estrutura e a função e inferir sobre as manifestações clinicas resultantes da presença destas heme proteínas anômalas, ilustrando-se assim a importância desses estudos para a completa caracterização das variantes. / Abstract: The human hemoglobin (Hb) is the respiratory pigment of human organisms, found in high concentrations in the erythrocytes and is responsible for transporting O2 from the lungs to the peripheral tissues. This molecule is composed by two pairs of polypeptide chains (globin), each one involving a prosthetic group heme, which bind reversibly to the O2. More than 1000 structural variants had been described already; part of them related to important clinical manifestations. Some variants present functional alteration, with modified affinity for the O2. When it is increased, it has a higher compensatory production of the erythrocytes, causing policitemia; when decreased, it results on cyanosis. The Laboratory of Hemoglobinopaties of the Department of Clinical Pathology of the FCM/UNICAMP is one of the references laboratories in the country, and identified, until this moment, 12 new hemoglobins and 51 rare variants. The new variants Hb Hb Boa Esperanca (?16 Lys?Thr), Hb Itapira (?30 Glu?Val), Hb Bom Jesus da Lapa (?30 Glu?Ala), Hb Olinda [ß22 (b4) -25 (b7)], Hb Caruaru (ß 122 Phe?Ser) e Hb S-Sao Paulo (ß6 Glu?Val ; ß65 Lys?Glu) were, in the present study, functionally characterized, as well as the rare variants Hb Iwata (a87 His??Arg), Hb Sunshine Seth (?94 Asp?His), Hb Deer Lodge (ß2 His?Arg), Hb Deer Lodge (ß2 His??Arg) + Hb S (ß6 Glu??Val), Hb G-Siriraj (ß7 Glu??Lys), Hb G-Siriraj (ß7 Glu??Lys) e Hb C (ß6 Glu??Lys) em associacao, Hb M-Saskatoon (ß63 His??Tyr), Hb Redondo (ß92 His? Asn), Hb Koln (ß98 Val??Met), Hb Coimbra (ß99 Asp??Glu) e Hb Dhonburi (ß126 Val?Gli)+ Btal. The analytical method used was described for Rossi-Fanelli & Antonini (1958), which analyses, by spectrophotometer, the behavior of the Hb against known partial pressures of oxygen (pO2), making possible the measure of affinity (p50), the constant of Hill (n), that verifies the cooperativity, the Bohr effect (that it indicates the relation between Hb-O2 binding according to the pH), as well as the interaction with Inositol Hexaphosphoric acid (IHP), that difficult linkage between the Hb and the O2. Except from Hb Itapira and Hb Bom Jesus of the Lapa, in reduced concentrations at the total hemolysate, all the others presented modified affinity to the oxygen. As a complement of the functional study, the Hb Caruaru and Hb S-Sao Paulo were also submitted to previous molecular dynamics simulation. All the other variants were structurally analyzed by the study of the native structure deposited at the Protein Data Bank, to understand better the relation between the substituted residue and the modified one at the protein function. Therefore, it was possible to establish correlations between the structure and the function and to infer on the clinical manifestations because of the presence of these anomalous proteins, illustrating the importance of these studies for the complete characterization of the variants. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A Neoplasia Mieloproliferativa Crônica (NMPC)- Politemia Vera é uma desordem clonal caracterizada pelo acúmulo de eritrócitos, leucócitos, plaquetas e progenitores normais na ausência de um estímulo definido. Apesar dos avanços no diagnóstico de PV e da descrição de mecanismos envolvidos no estabelecimento da doença sua patogênese permanece desconhecida entretanto, alterações no mecanismo regulador da apoptose parecem estar envolvidos em sua fisiopatologia. A compreensão acerca do funcionamento da maquinaria apoptótica e sua possível regulação por microRNAs em pacientes com Policitemia Vera parece revelar novos alvos para estudo e consequentemente transformar-se em novas terapias para a doença. Neste contexto os objetivos deste trabalho foram avaliar em leucócitos de sangue periférico e células CD34+ de medula óssea dos pacientes de PV: (1) a quantificação da expressão de microRNAs cujos alvos são RNAs associados a regulação da apoptose; (2) Correlação dos níveis de expressão dos miRNAs com os de RNAm das moléculas pró e antiapoptóticas da família Bcl-2 e dos receptores de morte; (3) Correlação dos níveis de expressão dos miRNAs com os seguintes dados clínico-laboratoriais dos pacientes: concentração de hemoglobina, hematócrito e percentagem da mutação JAK2. Os pacientes com Policitemia Vera apresentam aumento de expressão dos microRNAs 29c, 16, 21, 26a, 130b e let-7d e diminuição de miR15a e 34c em leucócitos de sangue periférico; Aumento de expressão dos miRs 29c, 16 e 21; diminuição na expressão de miR 130b e let-7d em células CD34+ ; alteração na expressão de genes pró e anti-apoptóticos em leucócitos de sangue periférico com aumento de a1, mcl-1 e diminuição de bcl-2, ciap-2, bax e fas-L,alteração na expressão de genes pró e anti-apoptóticos em células CD34+ com aumento de expressão de fas, bid, mcl-1, bcl-xl e c-flip; diminuição na expressão de bik. Observamos diminuição na expressão protéica de BCL-2 em pacientes quando comparado aos indivíduos controle.Notamos também a correlação entre a alteração na expressão de microRNAs e seus respectivos genes alvo e destes com parâmetros hematológicos analisados. Os linfócitos dos pacientes de PV apresentam maior resistência a apoptose do que os indivíduos controles quando induzidos por: Actinomicina, etoposídeo, citarabina e cicloheximida. Concluindo, os dados obtidos sugerem a participação dos microRNAs na regulação da maquinaria apoptótica e a participação desta desregulação na fisiopatologia da PV. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento da fisiopatologia da PV e serão úteis futuramente para o desenho de novos alvos terapêuticos e descrição de marcadores de prognóstico. / Polycythaemia vera (PV) is a clonal disorder characterized by an accumulation of normal red and white cells, platelets, and their progenitors in absence of a definable stimulus. Despite the advances in PV diagnosis and the description of the mechanisms involved in disease establishment its pathogenesis remains unclear. The apoptosis deregulation might have a role in PV physiopathology. Fully understanding the basic apoptotic pathway and its potential regulation by microRNA in PV patients cells might unveil targets for manipulation, which may be translated into novel therapies for disease.The aims of this study were to avaluate in leukocytes and CD34+ cells: (1) The microRNA expression whose RNA target are associated with apoptosis regulation (2) Correlation between microRNA expression and the mRNA levels of anti and pro-apoptotic family Bcl-2 expression and death receptors; (3) Correlation between microRNA expression and the clinical data of patients: hemoglobin concentration, hematocrit and JAK2 percentage. Patientes with Polycythemia Vera shows increased expression of microRNAs 29c, 16, 21, 26a, 130b and let-7d and 34c and 15a decrease in peripheral leukocytes; incresead expression of miRs 29c, 16 and 21, decrease in miR130b and let-7d expression in CD34+ cells; deregulation in pro and anti-apoptotic gene expression in peripheral leukocytes with increase in a1, mcl-1 and decrease in bcl-2, ciap-2, bax and fas-L, deregulation in pro and anti-apoptotic gene expression in CD34+ cells with increased expression of fas, bid, mcl-1, bcl-xl and c-flip and decreased expression of bik. Decreased in proteic expression of BCL-2 in peripheral leukocytes of patients when compared to controls. Correlation between de deregulated expression of microRNA and their genes target and those with hematological parameters. Lymphocytes from PV patients shows higher resistance to apoptosis than controls when induced by: Actinomicin, etoposide, cytarabine and cycloheximide. In conclusion the data suggest the involvement of microRNA in apoptosis regulation and the involvement of apoptosis machinery in the PV pathophysiology. These results will contribute for a better understanding of PV pathophysiology and will be useful for the discover of future therapies.

A Neoplasia Mieloproliferativa Crônica (NMPC)- Politemia Vera é uma desordem clonal caracterizada pelo acúmulo de eritrócitos, leucócitos, plaquetas e progenitores normais na ausência de um estímulo definido. Apesar dos avanços no diagnóstico de PV e da descrição de mecanismos envolvidos no estabelecimento da doença sua patogênese permanece desconhecida entretanto, alterações no mecanismo regulador da apoptose parecem estar envolvidos em sua fisiopatologia. A compreensão acerca do funcionamento da maquinaria apoptótica e sua possível regulação por microRNAs em pacientes com Policitemia Vera parece revelar novos alvos para estudo e consequentemente transformar-se em novas terapias para a doença. Neste contexto os objetivos deste trabalho foram avaliar em leucócitos de sangue periférico e células CD34+ de medula óssea dos pacientes de PV: (1) a quantificação da expressão de microRNAs cujos alvos são RNAs associados a regulação da apoptose; (2) Correlação dos níveis de expressão dos miRNAs com os de RNAm das moléculas pró e antiapoptóticas da família Bcl-2 e dos receptores de morte; (3) Correlação dos níveis de expressão dos miRNAs com os seguintes dados clínico-laboratoriais dos pacientes: concentração de hemoglobina, hematócrito e percentagem da mutação JAK2. Os pacientes com Policitemia Vera apresentam aumento de expressão dos microRNAs 29c, 16, 21, 26a, 130b e let-7d e diminuição de miR15a e 34c em leucócitos de sangue periférico; Aumento de expressão dos miRs 29c, 16 e 21; diminuição na expressão de miR 130b e let-7d em células CD34+ ; alteração na expressão de genes pró e anti-apoptóticos em leucócitos de sangue periférico com aumento de a1, mcl-1 e diminuição de bcl-2, ciap-2, bax e fas-L,alteração na expressão de genes pró e anti-apoptóticos em células CD34+ com aumento de expressão de fas, bid, mcl-1, bcl-xl e c-flip; diminuição na expressão de bik. Observamos diminuição na expressão protéica de BCL-2 em pacientes quando comparado aos indivíduos controle.Notamos também a correlação entre a alteração na expressão de microRNAs e seus respectivos genes alvo e destes com parâmetros hematológicos analisados. Os linfócitos dos pacientes de PV apresentam maior resistência a apoptose do que os indivíduos controles quando induzidos por: Actinomicina, etoposídeo, citarabina e cicloheximida. Concluindo, os dados obtidos sugerem a participação dos microRNAs na regulação da maquinaria apoptótica e a participação desta desregulação na fisiopatologia da PV. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento da fisiopatologia da PV e serão úteis futuramente para o desenho de novos alvos terapêuticos e descrição de marcadores de prognóstico. / Polycythaemia vera (PV) is a clonal disorder characterized by an accumulation of normal red and white cells, platelets, and their progenitors in absence of a definable stimulus. Despite the advances in PV diagnosis and the description of the mechanisms involved in disease establishment its pathogenesis remains unclear. The apoptosis deregulation might have a role in PV physiopathology. Fully understanding the basic apoptotic pathway and its potential regulation by microRNA in PV patients cells might unveil targets for manipulation, which may be translated into novel therapies for disease.The aims of this study were to avaluate in leukocytes and CD34+ cells: (1) The microRNA expression whose RNA target are associated with apoptosis regulation (2) Correlation between microRNA expression and the mRNA levels of anti and pro-apoptotic family Bcl-2 expression and death receptors; (3) Correlation between microRNA expression and the clinical data of patients: hemoglobin concentration, hematocrit and JAK2 percentage. Patientes with Polycythemia Vera shows increased expression of microRNAs 29c, 16, 21, 26a, 130b and let-7d and 34c and 15a decrease in peripheral leukocytes; incresead expression of miRs 29c, 16 and 21, decrease in miR130b and let-7d expression in CD34+ cells; deregulation in pro and anti-apoptotic gene expression in peripheral leukocytes with increase in a1, mcl-1 and decrease in bcl-2, ciap-2, bax and fas-L, deregulation in pro and anti-apoptotic gene expression in CD34+ cells with increased expression of fas, bid, mcl-1, bcl-xl and c-flip and decreased expression of bik. Decreased in proteic expression of BCL-2 in peripheral leukocytes of patients when compared to controls. Correlation between de deregulated expression of microRNA and their genes target and those with hematological parameters. Lymphocytes from PV patients shows higher resistance to apoptosis than controls when induced by: Actinomicin, etoposide, cytarabine and cycloheximide. In conclusion the data suggest the involvement of microRNA in apoptosis regulation and the involvement of apoptosis machinery in the PV pathophysiology. These results will contribute for a better understanding of PV pathophysiology and will be useful for the discover of future therapies.