Las neumonías son la segunda causa de mortalidad en crías de alpacas, esta es causada por agentes virales y bacterianos que coexisten en los procesos infecciosos generando cuadros de neumonías agudas. Pasteurella multocida es la principal bacteria involucrada en las infecciones neumónicas en alpacas, seguida de Mannhemia haemolytica, ambos agentes generan cuadros hiperagudos en crías en época de parición, y afectando a crías más grandes en épocas de estrés. Sin embargo se ha demostrado su asociación con la presencia de virus neumopatógenos como BRSV. Los receptores tipo Toll (TLR, por sus siglas en inglés) son proteínas transmembrana que se encuentran en diversos tipos celulares. Los genes que codifican esta proteína están altamente conservados a lo largo de las diferentes especies, siendo el TLR4 la proteína que reconoce al LPS, estructura que poseen todas las bacterias gram negativas (Pasteurella multocida y Mannhemia haemolytica) y a la proteína F del BRSV. En alpacas no se ha identificado la presencia de este gen, por lo que en el estudio se diseñaron cebadores para poder identificar la presencia del gen en esta especie. Al obtener la secuencia del gen en alpacas permitió analizar y comparar las secuencias obtenidas entre individuos y entre especies, observando el alto grado de conservación de la secuencia del gen tlr4 entre especies. No se logró detectar polimorfismos tipo SNP entre animales enfermos y sanos, pero se pudo determinar SNP en individuos mostrando genotipos GT y GC. Palabras Clave: alpacas, neumonías, Pasteurella multocida, Mannhemia haemolytica, BRSV, tlr4, polimorfismos. / --- Pneumonias are the second leading cause of mortality of babies’ alpacas; this is caused by viral and bacterial agents that coexist in infectious processes causing acute pneumonia. Pasteurella multocida is the main bacteria involved in pneumonia infections in alpacas, followed by Mannhemia haemolytica, both agents in hyperacute cases generate death of offspring during calving season and stressful times. However this association has the participation of differences virus likes BRSV. Toll-like receptors (TLR) are transmembrane proteins found in various cell types. The genes encoding this protein are highly conserved across different species. The protein TLR4 recognizes LPS, a structure which have all gram-negative bacteria (Pasteurella multocida and Mannhemia haemolytica) and the F protein of BRSV. In alpacas has not identified the presence of this gene, so that the study primers were designed to identify the presence of the gene in this species. We had obtained the sequence of the gene in alpacas allowed analyzing and comparing the sequences obtained between individuals and between species, noting the high degree of conservation of TLR4gene sequence between species. We could not to detect polymorphisms sort of SNP between sick and healthy animals, but we were able to determine SNP genotypes in individuals showing GT and GC. Key Words: alpacas, pneumonia, Pasteurella multocida, Mannhemia haemolytica, BRSV, tlr4, polymorphism.

Establece la distribución de las frecuencias genotípica y alélicas del SNP rs17817449 en el gen FTO en diferentes subpoblaciones peruanas. Para el propósito, evalúa al SNP rs17817449 utilizando la técnica PCR-RFLP para 173 muestras de ADN genómico de las subpoblaciones de Lima ciudad (49,1 %), Huarochirí-Lima (9,8 %), Calca-Cusco (10, 4 %), y Puno (30,7 %). Las frecuencias genotípicas en la muestra global son: T/T = 87,9 %, G/T = 10,4% y G/G = 1,7 %. En las subpoblaciones los resultados son: Lima ciudad T/T = 81,2%, G/T = 16,5 % y G/G = 2,4 %; en Huarochirí-Lima T/T = 100 %; en Calca-Cusco T/T = 100 % y en Puno T/T = 90,6 %, G/T = 7,5% y G/G = 1,9 %. Las frecuencias genotípicas de la muestra global, Lima y Puno se encuentran en equilibrio Hardy – Weinberg. En la muestra total, las frecuencias de los alelos son: T = 93,1 % y G = 6,9 %. En las subpoblaciones los resultados son: Lima ciudad T = 89,4 % y G = 10,6 %; en Puno T =94,3 % y G = 5,7 %, en Huarochirí-Lima y Calca-Cusco T = 100 %. En general, no existen diferencias para el SNP rs17817449 del gen FTO en las subpoblaciones estudiadas, encontrándose una baja frecuencia de la variante G, asociada a la obesidad y masa grasa, y esto puede tener implicancias en la seguridad nutricional del país. / Tesis

El objetivo de este estudio fue detectar la frecuencia de los polimorfismos de nucleótido simple (SNP) CYP2C8*2 y CYP2C8*3 en genes CYP2C8 de pacientes con cáncer de mama que recibieron quimioterapia neoadyuvante con paclitaxel en el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN). Además, se asoció la presencia de estos SNP con la respuesta terapéutica y la toxicidad. Se incluyó en el estudio 39 mujeres con diagnóstico reciente de cáncer de mama localmente avanzado que acudieron al consultorio de oncología médica del INEN entre marzo y diciembre del 2013, quienes firmaron el consentimiento informado previo a la ejecución del estudio. Se tomaron muestras de sangre venosa para extraer el ADN genómico y se amplificaron regiones específicas del gen CYP2C8 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores diseñados para detectar el SNP CYP2C8*2 en el exón 5 y el SNP CYP2C8*3 en el exón 8. Los productos amplificados fueron cortados con las enzimas de restricción BClI y PdmI (XmnI) para CYP2C8*2 y CYP2C8*3 respectivamente. La información clínica y patológica de las pacientes se obtuvo de las historias almacenadas en el archivo de historias clínicas del INEN mediante una ficha de recolección de datos. El SNP CYP2C8*2 no fue detectado en la población estudiada. El SNP CYP2C8*3 fue encontrado en 3 pacientes (7,7 %), dos homocigotos y un heterocigoto, con una frecuencia alélica de 6,4 %. Así mismo, se encontró que 56,5 % de las pacientes presentó neuropatía; 10,3 % leucopenia; 20,5 % anemia; 2,6 % trombocitopenia; 66,7 % incremento de los niveles de TGP y 46,2 % incremento de los niveles de TGO. No se encontró asociación entre el genotipo CYP2C8*3 y el riesgo de neuropatía inducida por paclitaxel (p>0,05). Las pacientes que presentaron el genotipo AA para el SNP CYP2C8*3 (1196 A>G) mostraron diferencias significativas en la reducción del tamaño clínico del tumor y del compromiso ganglionar después de la quimioterapia con paclitaxel (p<0,05). Sin embargo, las pacientes con los genotipos AG y GG para este SNP, no mostraron diferencias significativas. / --- The aim of this study was to detect the frequency of CYP2C8*2 and CYP2C8*3 single nucleotide polymorphisms (SNP) in CYP2C8 genes of patients with breast cancer who received neoadjuvant chemotherapy with paclitaxel at the National Institute of Neoplastic Diseases (INEN). Furthermore, the presence of these SNP with therapeutic response and toxicity were associated. In the study were included 39 women with newly diagnosed of locally advanced breast cancer who attended the oncology doctor’s office of the INEN between March and December 2013. All the patients signed informed consent before study entry. Venous blood samples were taken to extract the genomic DNA and specific regions of the CYP2C8 gene were amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR) with primers designed to detect the CYP2C8*2 SNP in exon 5 and CYP2C8*3 SNP in exon 8. The amplified products were cut with restriction enzymes BclI and PdmI (XmnI) for CYP2C8*2 and CYP2C8*3, respectively. Clinical and pathological information of the patients was obtained from the medical records stored at the INEN. The CYP2C8*2 SNP was not detected in the study population. The CYP2C8*3 SNP was found in 3 patients (7.7%), two homozygotes and one heterozygote, with an allele frequency of 6.4%. Also, it was found that 56.5% of patients had neuropathy; 10.3% leukopenia; 20.5% anemia; 2.6% thrombocytopenia; 66.7% increase in ALT levels and 46.2% increase in AST levels. No association between CYP2C8*3 genotype and risk of paclitaxel induced neuropathy (p> 0.05) was found. The patients who had the AA genotype for CYP2C8*3 (1196 A>G) showed significant differences in the reduction of clinical tumor size and nodal involvement after chemotherapy with paclitaxel (p <0.05). However, patients with AG and GG genotypes for this SNP showed no significant differences. Keywords: Breast cancer, CYP2C8 gene, SNP, PCR-RFLP.

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Se aplica la técnica del ADN polimorfico Amplificado al Azar (RAPD) se aplica al estudio molecular de Lama pacos (alpaca), esta metodología se propone debido a que las técnicas de microsatélites y ADN mitocondrial, que actualmente se utilizan, no tienen un uso práctico cuando se trata de analizar gran cantidad de muestras. Para la estandarización del RAPD se utilizo ADN genómico a partir de sangre total y cebadores de 10 nucleotidos siguiendo los protocolos estandarizados modificando básicamente la concentración de MgCl2 a 2.5 mM permitiendo aumentar la intensidad de las bandas y una mejor visualización. Se prosiguió con la identificación de cebadores informativos, de 23 cebadores fueron seleccionados 7 (OPF-05, OPI-04, OPB-03, OPI-18, OPB-11, OPA-18 y OPI-14) por generar numerosas bandas por muestras analizadas. Estos cebadores permitieron obtener perfiles diferentes entre alpacas híbridas y puras; en la muestra poblacional estudiadas no se encontraron alpacas que tuvieran un perfil de bandas similares a los presentados por los animales puros, esto explicaría el grado de hibridación que existe debido a un inadecuado cuidado en el cruce, esto trae como consecuencia, por ejemplo, una baja calidad en la producción de fibra por las alpacas y llamas híbridas disminuyendo el ingreso económico para las familias campesinas. En 8 alpacas los cebadores OPB-03 y OPA-18 mostraron bandas polimorficas de 650 pb y 1000 pb respectivamente, este polimorfismo nos podría indicar alguna mutación o variabilidad intraespecífica, ya que estos animales no presentan diferencias fenotípicas evidentes. / -- The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) is applied on the molecular study of Lama pacos (Alpaca), this methodology is proposed because the microsatellites and DNA mitochondrial techniques, which are used commonly, don't have a practical utility when is necessary to analyze great quantity of samples. Genomic DNA obtained from total blood and primers of 10 nucleotides were used to standardize the RAPD technique following the standardized protocols, and concentration of MgCl2 was modified at 2.5 mM which allowed an increase at the intensity and a better visualization of the bands. After the standardization, the identification of informative primers was realized, beginning with 23 primers, selecting only 7 (OPF 05, OPI 04, OPB 03, OPI 18, OPB 11, OPA 18 and OPI 14), because the presence of several bands for the analyzed samples. These primers let obtain different profiles between hybrid and pure alapacas; in the sample were not found alpacas with a similar bands profiles to those presented by the pure animals, this would explain the hybridization grade that exists due to an inadequate care in the crossing, this results in, for example a low quality in the fiber production from the hybrid alpacas and llamas, diminishing the economic entrance for the rural families. In 8 alpacas the primers OPB-03 and OPA-18 showed polymorphic bands of 650 pb and 1000 pb respectively, this polymorphism could indicate some mutation or intraespecific variability, since these animals don't present evident phenotypic differences. / Tesis

La pirazinamida (PZA) es una droga antituberculosa de primera línea, presenta gran actividad in vivo, sin embargo in vitro no es evidente a menos que el pH del medio sea ácido, lo que hace que la susceptibilidad sea difícil de determinar por métodos convencionales. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue evaluar la prueba molecular Polimorfismo Conformacional de la Hebra simple de ADN (SSCP) en cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis, así como comparar su desempeño con otras pruebas como son el BACTECÔ-460TB, el test de Wayne y el secuenciamiento. Se utilizó la prueba molecular del SSCP para la determinación de la susceptibilidad a PZA trabajando con 157 aislamientos clínicos de M. tuberculosis provenientes del Área de Tuberculosis del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Se aplica la técnica del ADN polimorfico Amplificado al Azar (RAPD) se aplica al estudio molecular de Lama pacos (alpaca), esta metodología se propone debido a que las técnicas de microsatélites y ADN mitocondrial, que actualmente se utilizan, no tienen un uso práctico cuando se trata de analizar gran cantidad de muestras. Para la estandarización del RAPD se utilizo ADN genómico a partir de sangre total y cebadores de 10 nucleotidos siguiendo los protocolos estandarizados modificando básicamente la concentración de MgCl2 a 2.5 mM permitiendo aumentar la intensidad de las bandas y una mejor visualización. Se prosiguió con la identificación de cebadores informativos, de 23 cebadores fueron seleccionados 7 (OPF-05, OPI-04, OPB-03, OPI-18, OPB-11, OPA-18 y OPI-14) por generar numerosas bandas por muestras analizadas. Estos cebadores permitieron obtener perfiles diferentes entre alpacas híbridas y puras; en la muestra poblacional estudiadas no se encontraron alpacas que tuvieran un perfil de bandas similares a los presentados por los animales puros, esto explicaría el grado de hibridación que existe debido a un inadecuado cuidado en el cruce, esto trae como consecuencia, por ejemplo, una baja calidad en la producción de fibra por las alpacas y llamas híbridas disminuyendo el ingreso económico para las familias campesinas. En 8 alpacas los cebadores OPB-03 y OPA-18 mostraron bandas polimorficas de 650 pb y 1000 pb respectivamente, este polimorfismo nos podría indicar alguna mutación o variabilidad intraespecífica, ya que estos animales no presentan diferencias fenotípicas evidentes. / The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) is applied on the molecular study of Lama pacos (Alpaca), this methodology is proposed because the microsatellites and DNA mitochondrial techniques, which are used commonly, don't have a practical utility when is necessary to analyze great quantity of samples. Genomic DNA obtained from total blood and primers of 10 nucleotides were used to standardize the RAPD technique following the standardized protocols, and concentration of MgCl2 was modified at 2.5 mM which allowed an increase at the intensity and a better visualization of the bands. After the standardization, the identification of informative primers was realized, beginning with 23 primers, selecting only 7 (OPF 05, OPI 04, OPB 03, OPI 18, OPB 11, OPA 18 and OPI 14), because the presence of several bands for the analyzed samples. These primers let obtain different profiles between hybrid and pure alapacas; in the sample were not found alpacas with a similar bands profiles to those presented by the pure animals, this would explain the hybridization grade that exists due to an inadequate care in the crossing, this results in, for example a low quality in the fiber production from the hybrid alpacas and llamas, diminishing the economic entrance for the rural families. In 8 alpacas the primers OPB-03 and OPA-18 showed polymorphic bands of 650 pb and 1000 pb respectively, this polymorphism could indicate some mutation or intraespecific variability, since these animals don't present evident phenotypic differences.

La enzima 5,10-metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) cataliza la conversión de la 5,10-metilentetrahidrofolato a 5-metiltetrahidrofolato, esta enzima es un intermediario entre el ciclo del folato y el ciclo de la remetilación del aminoácido homocisteina a metionina. Una mutación puntual C677T en el gen de esta enzima trae como consecuencia el cambio del aminoácido Ala por Val, lo cual conlleva a la formación de una enzima termolábil que finalmente se evidencia con un incremento en los niveles de homocisteina en sangre. Se ha documentado la relación de niveles altos de homocisteina y el incremento de la presión arterial y su posible relación a enfermedades coronarias e hipertensión. La determinación del polimorfismo C677T de la MTHFR, tiene índices muy variados en las distintas poblaciones y regiones del mundo. Estimar las frecuencias de este polimorfismo en nuestro país, permitiría al especialista determinar posibles poblaciones en riesgo a estas enfermedades asociadas, como preeclapmsia. Se extrajo muestras de sangre venosa de 92 gestantes del Instituto Materno Perinatal San Bartolomé Herrera (Lima-Perú). Se encontraron 32 gestantes CC (34.8%), 44 gestantes CT (47.8%), y por último 16 gestantes TT (17.2 %). Se encontró una frecuencia de 58.7 % y 41.3% para el alelo C y T respectivamente. Se estimó que la muestra estudiada se encuentra en Equilibrio de Hardy-Weinberg (X2 =0.0022) y que los valores de las frecuencias genotípicas y alélicas se encuentran de acorde a los publicados por otras investigaciones en nuestro país y la región sudamericana. Aun cuando la relación del alelo mutado T y el desarrollo de hipertensión no ha sido demostrada en nuestro país, el monitoreo y la incidencia del polimorfismo C677T y estudios tipo caso-control nos permitiría tener más evidencias sobre esta posible relación en nuestra población. / Tesis

La pirazinamida (PZA) es una droga antituberculosa de primera línea, presenta gran actividad in vivo, sin embargo in vitro no es evidente a menos que el pH del medio sea ácido, lo que hace que la susceptibilidad sea difícil de determinar por métodos convencionales. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue evaluar la prueba molecular Polimorfismo Conformacional de la Hebra simple de ADN (SSCP) en cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis, así como comparar su desempeño con otras pruebas como son el BACTECÔ-460TB, el test de Wayne y el secuenciamiento. Se utilizó la prueba molecular del SSCP para la determinación de la susceptibilidad a PZA trabajando con 157 aislamientos clínicos de M. tuberculosis provenientes del Área de Tuberculosis del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. / Tesis

Los marcadores de ADN son útiles en la identificación de genes y sus variantes que puedan influir en la predisposición genética a desarrollar una determinada enfermedad. Las personas con ciertos polimorfismos en múltiples genes pueden ser susceptibles a la diabetes; sin embargo, estudios realizados en otros países han demostrado que los polimorfismos Pro12Ala del gen PPAR-γ2 y el 174G/C del gen IL-6 cumplen un rol importante en el desarrollo de esta enfermedad y podrían ser considerados como genes candidatos en el diagnóstico molecular temprano de la Diabetes Mellitus tipo II (DM-II) en una población peruana; con el objetivo de evitar complicaciones de la Diabetes como retinopatías, daño renal, daños en el SNC, entre otros. De acuerdo a las cifras oficiales del Ministerio de Salud, en nuestro país existen más de 86,000 pacientes diabéticos y 2 de cada 10 adultos mayores sufren este mal; motivo por el cual vimos la necesidad de realizar este estudio. Objetivo: 1. Determinar las frecuencias genotípicas y alélicas de los genes PPAR-γ2- Pro12Ala y IL-6- 174G/C y 2. Establecer la asociación del polimorfismo de los genes PPAR-γ2- Pro12Ala y IL-6- 174G/C, con la Diabetes. Participantes: Muestras del Banco de Muestras del Laboratorio de Biología Molecular del CIBN. Materiales y métodos: A una muestra poblacional de Lima de 100 muestras, 50 muestras control y 50 muestras de pacientes con DM-II, se realizó extracción del ADN genómico, análisis del polimorfismo Pro12Ala de PPAR-γ2 y 174G/C de IL-6 mediante PCR/RFLP. Resultados: Las distribuciones de los genotipos del gen PPAR-γ2 en los grupos de casos y controles estuvieron de acuerdo con la hipótesis del equilibrio de Hardy-Weinberg; sin embargo, las frecuencias genotípicas del gen IL-6 no cumplieron con esta condición de equilibrio. Palabras clave: Diabetes Mellitus II, SNP, PPAR-γ2, IL-6, PCR-RFLP.