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Fucana ativa via das Map quinases e inibe a prolifera??o de c?lulas de ov?rio de hamster chin?s (CHO)Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto 08 July 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-07-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Fucan is a term used to denominate L-fucose rich sulfated polysaccharides. The fucans have been studied due their pharmacological activities like antithrombotic, antiproliferative and antioxidant. We have extracted three fucan fractions from the brown seaweed Spatoglossum schr?ederi. These fucans were denominated Fuc B 1, Fuc B 1.5 and Fuc B 2. The chemical analyzes show that the fucans have very similar composition as demonstrated by agarose electrophoresis gel, sugar and sulfate content. The antiproliferative effect was determined by MTT and BrdU methodologies in CHO cells. The inhibition of proliferation effect of the three fractions was about 40%. Therefore this we proceed just with the Fuc B 2 due the higher yield. There is no apoptosis indication using the anexin V/propidium iodide test. We found a cell cycle phase G1 arrest. The western blotting show that the PKC; pFAK; pERK 1/2 are activated when the cells were treated with fucans. The treatement with inhibitor of MAPK PD98059 extinguished the fucan effect. These results indicates that fucan act by the ERK pathway inducing the cell death. / Fucana ? um termo utilizado para denominar polissacar?deos sulfatados ricos em L-Fucose. As fucanas t?m sido estudadas devido suas atividades farmacol?gicas: antitromb?tica, antiproliferativa e antioxidante. N?s extra?mos tr?s fra??es de fucanas da alga Spatoglossum schr?ederi. Essas fucanas, denominadas de Fuc B 1, Fuc B 1.5 e Fuc B 2, apresentam uma composi??o muito similar como demonstrado pela eletroforese em gel de agarose, e conte?do de a??car e sulfato. O efeito antiproliferativo foi determinado pelas metodologias de MTT e BrdU em c?lulas CHO. O efeito na inibi??o da prolifera??o das tr?s fra??es foi de cerca de 40%. Assim, procedemos somente com a Fuc B 2 devido seu maior rendimento. N?o houve indica??o de apoptose usando a marca??o com anexina V-FITC/ Iodeto de Prop?deo. Identificamos uma parada na fase G1 do ciclo celular. Os ensaios de western blotting mostraram que PKC, pFAK e pERK 1/2 s?o ativadas quando as c?lulas s?o tratadas com Fuc B. O tratamento com o inibidor de MAPK PD98059 aboliu o efeito da fucana. Esses efeitos indicam que a fucana age via ERK para inibir a prolifera??o das c?lulas.
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Caracteriza??o f?sico-qu?mica e a??es farmacol?gicas hepatoprotetora, antiinflamat?ria, pr?-angiog?nica, antioxidante e anticoagulante da fra??o rica em fucana 0,8FRF 0,8 da alga marrom Lobophora variegataWill, Luiza Sheyla Evenni Porf?rio 21 December 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-12-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / This study examines the physical and chemical composition and the pharmacological
effects of brown seaweed FRF 0.8 Lobophora variegata. Fractionation of the crude
extract was done with the concentration of 0.8 volumes of acetone, obtaining the
FRF 0.8. The physicochemical characterization showed that it was a fucana sulfated.
Anti-inflammatory activity was assessed by paw edema model by the high rates of
inhibition of the edema and the best results were in the fourth hour after induction
(100 ? 1.4% at the dose of 75 mg / kg) and by the strong inhibitory activity of the
enzyme myeloperoxidase (91.45% at the dose of 25 mg / kg). The hepataprote??o
was demonstrated by measurements of enzymatic and metabolic parameters
indicative of liver damage, such as bilirubin (reduction in 68.81%, 70.68% and
68.21% for bilirubin total, direct and indirect, respectively at a dose of 75 mg / kg),
ALT, AST and γ-GT (decrease of 76.93%, 44.58% and 50% respectively at a dose of
75 mg / kg) by analysis of histological slides of liver tissue, confirming that
hepatoprotective effect the polymers of carbohydrates, showing a reduction in tissue
damage caused by CCl4 and the inhibition of the enzyme complex of cytochrome P
450 (increasing sleep time in 54.6% and reducing the latency time in 71.43%). The
effectiveness of the FRF 0.8 angiogenesis was examined in chorioallantoic
membrane (CAM) of fertilized eggs, with the density of capillaries evaluated and
scored, showing an effect proangig?nico at all concentrations tested FRF (10 mg-
1000 mg). The FRF showed antioxidant activity on free radicals (by inhibiting
Superoxide Radical in 55.62 ? 2.10%, Lipid Peroxidation in 100.15 ? 0.01%, Hydroxyl
Radical in 41.84 ? 0.001% and 71.47 Peroxide in ? 2.69% at concentration of 0.62
mg / mL). The anticoagulant activity was observed with prolongation of activated
partial thromboplastin time (aPTT) at 50 mg (> 240 s), showing that its action occurs
in the intrinsic pathway of the coagulation cascade. Thus, our results indicate that
these sulfated polysaccharides are an important pharmacological target / Este estudo analisa a composi??o f?sico-qu?mica e os efeitos farmacol?gicos da FRF
0,8 da alga marrom Lobophora variegata. O fracionamento do extrato bruto foi feito
com a concentra??o de 0,8 volumes de acetona, obtendo a FRF 0,8. A
caracteriza??o f?sico-qu?mica mostrou que se tratava de uma fucana sulfatada. Foi
verificada a atividade antinflamat?ria pelo modelo de edema de pata, atrav?s das
altas taxas de inibi??o do edema e os melhores resultados foram na quarta hora
ap?s a indu??o (100 ? 1,4% com a dose de 75 mg/kg) e pela forte atividade inibidora
da enzima mieloperoxidase (91,45% com a dose de 25 mg/kg). A hepataprote??o foi
demonstrada pelas dosagens de par?metros metab?licos e enzim?ticos indicativos
de dano hep?tico, como bilirrubina (redu??o em 68,81%, 70,68% e 68,21% para
bilirrubinas total, direta e indireta, respectivamente na dose de 75 mg/kg), ALT , AST
e γ-GT (diminui??o em 76,93%, 44,58% e 50%, respectivamente na dose de 75
mg/kg), pela an?lise das l?minas histol?gicas do tecido hep?tico, que confirmam
esse efeito hepatoprotetor dos pol?meros de carboidrato, mostrando uma redu??o no
dano tecidual causado por CCl4, e pela inibi??o do complexo enzim?tico do
citocromo P 450 (aumentando o tempo de sono em 54,6% e reduzindo o tempo de
lat?ncia em 71,43%). A efic?cia sobre a angiogenese da FRF 0,8 foi examinada na
membrana corioalant?ica (CAM) de ovos fertilizados, com a densidade dos capilares
avaliadas e pontuadas, mostrando um efeito proangig?nico em todas as
concentra??es de FRF testadas (10 μg-1000 μg). A FRF apresentou a??o
antioxidante sobre radicais livres (inibindo o Radical Super?xido em 55,62?2,10%,
Peroxida??o Lip?dica em 100,15?0,01%, Radical Hidroxila em 41,84?0,001% e
Per?xido em 71,47?2,69%, todos na concentra??o de 0,62 mg/mL). A atividade
anticoagulante foi verificada com o prolongamento do tempo de tromboplastina
parcial ativada (aPTT) a 50 μg (>240 s), mostrando que sua a??o ocorre na via
intr?nseca da cascata de coagula??o. Sendo assim, nossos resultados indicam que
estes polissacar?deos sulfatados constituem um importante alvo farmacol?gico
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Identifica??o e avalia??o de propriedades de polissacar?deos sulfatados de diferentes fontes naturais que possibilitem sua aplicabilidade biotecnol?gicaSantos, Nednaldo Dantas dos 19 March 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Sulfated polysaccharides (SP) are widely distributed in animals and seaweeds
tissues. These polymers have been studied in light of their important pharmacological
activities, such as anticoagulant, antioxidant, antitumoral, anti-inflammatory, and
antiviral properties. On other hand, SP potential to synthesize biomaterials like as
nanoparticules has not yet been explored. In addition, to date, SP have only been found
in six plants and all inhabit saline environments. However, the SP pharmacological plant
activities have not been carrying out. Furthermore, there are no reports of SP in
freshwater plants. Thus, do SP from marine plants show pharmacological activity? Do
freshwater plants actually synthesize SP? Is it possible to synthesize nanoparticles
using SP from seaweed? In order to understand this question, this Thesis was divided
into tree chapters. In the first chapter a sulfated polysaccharide (SPSG) was
successfully isolated from marine plant Halodule wrightii. The data presented here
showed that the SPSG is a 11 kDa sulfated heterogalactan contains glucose and
xylose. Several assays suggested that the SPSG possessed remarkable antioxidant
properties in different in vitro assays and an outstanding anticoagulant activity 2.5-fold
higher than that of heparin Clexane? in the aPTT test; in the next chapter using
different tools such as chemical and histological analyses, energy-dispersive X-ray
analysis (EDXA), gel electrophoresis and infra-red spectroscopy we confirm the
presence of sulfated polysaccharides in freshwater plants for the first time. Moreover,
we also demonstrate that SP extracted from E. crassipes root has potential as an
anticoagulant compound; and in last chapter a fucan, a sulfated polysaccharide,
extracted from the brown seaweed was chemically modified by grafting hexadecylamine
to the polymer hydrophilic backbone. The resulting modified material (SNFuc) formed
nanosized particles. The degree of substitution for hydrophobic chains of 1H NMR was
approximately 93%. SNFfuc-TBa125 in aqueous media had a mean diameter of 123 nm
and zeta potential of -38.3 ? 0.74 mV, measured bydynamic light scattering. Tumor-cell
(HepG2, 786, H-S5) proliferation was inhibited by 2.0 43.7% at SNFuc concentrations
of 0.05 0.5 mg/ mL and RAEC non-tumor cell line proliferation displayed inhibition of
8.0 22.0%. On the other hand, nanogel improved CHO and RAW non-tumor cell line
proliferation in the same concentration range. Flow cytometric analysis revealed that
this fucan nanogel inhibited 786 cell proliferation through caspase and caspaseindependent
mechanisms. In addition, SNFuc blocks 786 cell passages in the S and
G2-M phases of the cell cycle / Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o amplamente distribu?dos em animais e
tecidos de algas. Estes pol?meros t?m sido estudados em fun??o da import?ncia de
suas atividades farmacol?gicas, tais como: anticoagulante, antioxidante, antitumoral,
anti-inflamat?ria e as propriedades antivirais. Contudo, o potencial dos PS para
sintetizar biomateriais, tais como nanopart?culas, ainda ? pouco explorado. At? ent?o,
os PS s? foram encontrados em seis plantas e todas habitam ambientes salino. N?o
havendo relatos de PS em plantas de ?gua doce. O que nos levou aos seguintes
questionamentos: Os PS extraidos de vegetais marinhos n?o apresentam atividades
farmacol?gicas? Os vegetais de ?gua doce realmente sintetizam PS? ? poss?vel
sintetizar nanopart?culas utilizando PS a partir de algas marinhas? Para melhor
entender as quest?es, esta tese foi dividida em tr?s cap?tulos. No primeiro cap?tulo, um
polissacar?deo sulfatado (SPSG) foi isolado a partir de um vegetal marinho Halodule
wrightii. Os dados aqui apresentados mostram que o SPSG ? uma heterogalactana
sulfatada de 11 kDa constituida de glucose e xilose. Os ensaios realizados sugerem
que o SPSG possue propriedades antioxidantes not?veis em diferentes ensaios in vitro
e uma excelente actividade anticoagulante de 2,5 vezes mais elevadas do que a de
heparina Clexane ? no teste APTT. No cap?tulo seguinte, utilizando ferramentas
diferentes, tais como an?lises qu?micas e histol?gicas, an?lise de dispers?o de raios-X
(EDXA), eletroforese em gel e espectroscopia de infra-vermelho,confirmamos, em
primeira m?o, a presen?a de polissacar?deos sulfatados em vegetais de ?gua doce.
Al?m de demonstrarmos que o PS extra?do a partir da raiz de E. crassipes tem
potencial como um composto anticoagulante.No ?ltimo cap?tulo uma fucana, um
polissac?rido sulfatado, extra?do a partir de uma alga marrom, foi quimicamente
modificada por adi??o de hexadecilamina ? cadeia principal do pol?mero hidrof?lico. O
material resultante (SNFuc) forneceu part?culas nanom?tricas. O grau de substitui??o
para as cadeias hidrof?bicas de 1H RMN foi de aproximadamente 93%. SNFuc em
meios aquosos tinha um di?metro m?dio de 123 nm e potencial zeta de -38,3 ? 0,74
mV. Os ensaios com c?lulas tumorais (HepG2, 786, H-S5) demonstrou a ocorr?ncia de
uma inibi??o que variou de 2,0-43,7% em concentra??es diferentes de SNFuc (0,05-0,5
mg / mL) resultado semelhante foi obtido com a RAEC monstrando uma inibi??o entre
8,0-22,0%. Por outro lado, o nanogel estimulou a prolifera??o de linhagens celulares
n?o tumorais como CHO e RAW nas mesmas concentra??es. An?lise por citometria de
fluxo revelou que este nanogel de fucana inibiu a prolifera??o celular de 786 por
mecanismos dependentes e independentes de caspases. Al?m disso, bloqueou a
passagens da c?lula 786 na fase S e G2-M do ciclo celular / 2020-01-01
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