Publicación a texto completo no autorizada por el autor / El documento digital no refiere un asesor / Identifica y genotipifica cepas de STEC aisladas en puestos de venta de carne de pollo en un distrito de Lima. Para ello, se tomó hisopados de la superficie de manos, tablas de picar y mesa de expendio de 50 puestos de venta de carne de pollo en el distrito de San Juan de Miraflores, se realizó el aislamiento microbiológico estándar, identificación molecular de los genes stx1, stx2 y eaeA mediante PCR y la subtipificación genética mediante electroforesis en campo pulsatil (PFGE). El 84% (42/50) y 66% (33/50) de los puestos de venta poseían al menos una de las superficies contaminadas con E. coli y STEC, respectivamente. El 42%(63/150) y 25.3%(38/150) de las muestras fueron positivas a E. coli y STEC, respectivamente. 43 de las 63 cepas de E. coli aisladas fueron patógenas por presentar al menos un gen evaluado. 38 cepas fueron STEC y presentaron los genes stx1 (19.1%;12/63), stx2 (14.3%;9/63) y las asociaciones: stx1 y stx2 (12.7%;8/63); stx1, stx2 y eaeA (6.3%;4/63); stx2 y eaeA (4.8%;3/63); y, stx1 y eaeA (3.2%;2/63). También se identificó E. colieaeA (7.9%;5/63). Veintitrés cepas de STEC fueron evaluadas mediante PFGE las cuales no mostraron ser cepas genéticamente idénticas, perose llegaron a establecer cinco clusters y nueve cepas poco relacionadas epidemiológicamente. Se observaron prácticas de higiene deficientes en el puesto de venta y durante el expendio. Se confirma que los puestos de venta de carne de pollo evaluados son una fuente de contaminación de STEC cuyas cepas difícilmente proceden de un origen común. Es presumible que la manipulación en el puesto de venta y el manejo en expendio favorezcan la contaminación de carne de pollo con STEC en nuestro medio, debiendo fortalecerse las medidas de control a este nivel para salvaguardar la salud pública del consumidor. / Tesis

El objetivo es la revisión bibliográfica sobre el empleo de probióticos como alternativa al uso de APC en pollos de carne con la finalidad de tener un mayor conocimiento del mismo. El uso de APC en nutrición animal ha generado críticas y presiones legales, para que se disminuya el uso en animales destinados para consumo humano. Esto es debido, a la preocupación en salud pública a el uso de APC en la producción animal, principalmente relacionada a la supuesta inducción de resistencia cruzada de bacterias patógenas para humanos, intensificándose las investigaciones a la búsquedas de estrategias alternativas a los antimicrobianos con el fin de mantener el rendimiento animal y su bienestar. Dentro de estas alternativas la presente investigación propone a los probióticos, prebióticos, enzimas, extractos de plantas y acidificantes; todos éstos con el fin de limitar el número de bacterias patógenas, mejorar la capacidad de absorción del intestino y por ende el rendimiento productivo. / Trabajo de suficiencia profesional

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las quinolonas y fluoroquinolonas corresponden a un grupo de drogas antibacterianas que han sido ampliamente utilizadas en medicina veterinaria. Particularmente, durante la última década, el uso de estos fármacos ha sido explosivo en producción animal, con el consecuente riesgo de generar residuos de estos fármacos en productos destinados a consumo humano. Con el objetivo de entregar a los consumidores un producto inocuo libre de residuos peligrosos para la salud, se han establecido límites máximos residuales (LMR) por parte de varios países como Japón y Chile y organizaciones internacionales, como la Food and Drug Administration (FDA) y la Unión Europea. El control necesario para que los productos de origen pecuario cumplan con los LMR se realiza dentro de Programas de Control de Residuos. Dichos programas deben contar con metodologías analíticas validadas. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue validar un método analítico confirmatorio para la detección de residuos de ácido oxolínico y flumequina en músculo de pollos broiler, mediante el empleo de Cromatografía Líquida con Detector de Masa (LC-Ms/Ms) de acuerdo a las normativas de la Comunidad Europea y la de Estados Unidos de América, de manera que pueda ser utilizado en el Programa Nacional de Control de Residuos de Productos de Exportación. Para validar el método fue necesario fortificar muestras de músculo de pollos broiler libres de antimicrobianos con distintas concentraciones de ácido oxolínico y flumequina y analizarlas utilizando Cromatografía Líquida acoplado a un Detector Masa-Masa (LC-Ms/Ms). La sensibilidad del método determinó un límite de detección o CC de 0,72 µg/kg para ácido oxolínico y 0,53 µg/kg para flumequina. Se obtuvo un límite de cuantificación o CC de 1,21 µg/kg para ácido oxolínico y 1,54 µg/kg para flumequina. El coeficiente de correlación para los analitos fue mayor a 0,9 (R>0,9). De acuerdo a los resultados obtenidos, el método cumple con las condiciones de validación establecidas por la Decisión 2002/657/CE, en relación a los parámetros de linealidad, sensibilidad y repetitividad. En el caso de la recuperación, debido a que este parámetro arrojó valores no aceptados por la norma (Unión Europea, 2002), éste debe ser reevaluado previo al análisis de muestras para la detección de residuos de ácido oxolínico y flumequina en músculo de pollo en caso que éste sea utilizado en un Programa de Control de Residuos. / Quinolones and fluoroquinolones are a group of antibacterial drugs that has been widely used in veterinary medicine. During the last 10 years, these drugs have had an explosive use in food producing animals, wich may cause drug residues in products for human consumption. To assure the delivery of safe products to consumers, maximum residual limits (MRLs) have been established by countries such as Japan and Chile and different organizations, such as the Food and Drug Administration (FDA) and the European Union. Control Programs of Drug Residues are required in order that products from animal origin fulfill the MRLs. These programs must operate with adequately validated analytical methodologies. In this context, the objective of this work was to validate a confirmatory analytical method for the detection of oxolinic acid and flumequine in muscle of chickens, by means of the use of Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-Ms/Ms) according to the European Community and the United States of America requirements, so that it can be used in the National Control Program of Residues of animal products that will be exported to other countries. To validate the analitical method, free-drug muscle samples collected from broiler chickens analysis were needed. Samples were spiked with different concentrations of oxolinic acid and flumequine and analized using LC-Ms/Ms. The sensitivity of the method expressed as detection limit (CC) was 0.72 µg/kg for oxolinic acid and 0.53 µg/kg for flumequine. The detection capability (CCβ) was 1.21 µg/kg for oxolinic acid and 1.54 µg/kg for flumequine. The coefficient of correlation for the analytes was higher than 0.9 (R>0.9). According to these results, the method fulfills the conditions of validation established by Decision 2002/657/CE, in relation to parameters of linearity, sensitivity and repeatability. In the case of the recovery, this parameter threw unacceptable values compared with the established in european regulations (European Community, 2002), and must be again assessed previous to the analysis of samples for oxolinic acid and flumequine residues in a Control Programs of Residues.

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El uso de antimicrobianos como tratamiento terapéutico o profiláctico en animales de consumo masivo, como aves de corral (pollos), actualmente es de vital importancia para la industria avícola ya que permite promover el crecimiento y crianza intensiva de dichos animales así como garantizar productos sanos y de “ calidad ”, pero cuando se utilizan de forma abusiva sin atender a los principios de la buena practica veterinaria, la presencia de residuos en los alimentos representa un grave riesgo para la salud pública ya que podrían generar en los consumidores resistencia bacteriana y alergias provocando problemas médicos y veterinarios. El presente estudio, siguiendo la recomendación de las medidas de control del Consejo de las Comunidades Europeas, realizó un muestreo de carne de pollo en cuatro zonas comerciales: Mercado Central, Supermercado Metro, Mercado Eco, Mercado La Aurora en Lima cercado, donde se tomaron cinco muestras de cada mercado, teniendo un total de veinte muestras. La metodología empleada para detectar la presencia o ausencia de residuos de antibióticos tuvo como referencia el método microbiológico de difusión de las cuatro placas, para luego cuantificarlos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados obtenidos por ensayo microbiológico fueron positivos ya que se obtuvo halos de inhibición en al menos una de las placas ensayadas de cada muestra de 2mm de ancho. Por el método cuantitativo por HPLC se obtuvieron resultados que sobrepasan el Límite Máximo de Residuos (LMR) para sulfametoxazol en 75% de las muestras (mayor a 100ug/Kg de músculo), para norfloxacino en 100% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo) y para ciprofloxacino en 50% de las muestras (mayor a 100 ug/Kg de músculo). Palabras Claves: Antimicrobianos, método microbiológico, HPLC, músculo de pollo, residuos. / The use of antimicrobials as therapeutic or prophylactic treatment in animals of mass consumption, such as poultry (chicken), it is now vital to the poultry industry because it can promote growth and intensive farming of these animals and ensure healthy and "quality", but when used improperly without regard to principles of good veterinary practice, the presence of residues in food poses a serious risk to public health because consumers could develope bacterial resistance and cause allergies medical and veterinary problems. This study, following the recommendation of the control measures of the Council of the European Communities, it is carried out a sampling of chicken meat in four commercial areas: Central Market, Supermarket Metro, Eco Market, Aurora Market in Lima Cercado, where five samples were taken of each market, taking a total of twenty samples. The methodology used to detect the presence or absence of residues of antibiotics had the reference microbiological method of diffusion of the four plates, then quantified by liquid chromatography (HPLC). The results of microbiological tests were positive as halos of inhibition were obtained in at least one plate of each sample tested 2mm wide. For quantitative HPLC method, it was obtained results that exceeded the maximum residue limit (MRL) for sulfamethoxazole in 75% of samples (greater than 100ug/Kg of muscle), norfloxacin of 100% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle) and ciprofloxacin of 50% of the samples (greater than 100 ug / kg of muscle). Key Words: Antimicrobials, microbiological technique, HPLC, chicken’s muscle, residues.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de la adición del aceite de Sacha inchi (Plukenetia volubilis), como fuente de ácidos grasos polinsaturados, principalmente linolénicos, en la dieta de las reproductoras pesadas sobre los parámetros productivos de su progenie. Se utilizaron 720 pollos machos de la línea Cobb Vantress 500, divididos en dos grupos, 360 procedentes de reproductoras alimentadas con una dieta conteniendo 5% de aceite de Sacha inchi (T1) y, 360 pollitos procedentes de reproductoras alimentadas con una dieta control (T0). El estudio comprendió nueve repeticiones por grupo. Fueron evaluados peso corporal, consumo de alimento, mortalidad, índice de conversión alimenticia (ICA), índice de eficiencia productiva (IEP) y nivel de inmunidad humoral activa y pasiva. A los 42 días de edad la progenie T1 obtuvo 22 g mas de peso corporal, 2 puntos menos de ICA y 6.31 puntos más de IEP, en comparación a la progenie del grupo control, sin embargo estas diferencias no fueron significativas. Al primer días de edad, las aves de T1 mostraron un mayor nivel de inmunidad pasiva (promedio aritmético del título de anticuerpos) contra los virus de Newcastle o ENC (9783 vs 769), Gumboro (4623 vs 4006) y Bronquitis (5099 vs 3906), siendo esta diferencia significativa solo para ENC. Igualmente, a los 42 días de edad mostraron un mayor nivel de respuesta inmune activa a la vacunación contra los virus de Gumboro (2650 vs 2170) y Bronquitis (415 vs 237), los resultados del presente estudio permiten concluir que la inclusión del aceite de sacha inchi en la dieta de las reproductoras, aun que no significativamente, influye positivamente sobre los parámetros productivos de la progenie y además tiene un efecto inmunomodulador. / The aim of this study was to evaluate the effect of the addition of Sacha inchi oil (Plukenetia volubilis), as a source of polyunsaturated fatty acid, in the diet of broiler breeders on performance of their progeny. Seven hundred-twenty (720) male chicks Cobb Vantres 500 were used, divided into two groups, 360 from breeders fed a diet containing 5% Sacha Inchi oil (T1), and 360 chicks from breeders fed a control diet (T0). The study included nine replicates per group. Body weight, food intake, mortality, feed conversion index (FCI), productive efficiency index (PEI), and level of active and passive humoral immunity were evaluated. At 42 days old, T1 progeny won more than 22 g of body weight, less than 2 points of FCI, and 6.31 points of PEI, compared to the progeny of the control group, but these differences were not significant. At the first day of age, the T1 birds showed a higher level of passive immunity (Arithmetic Mean Antibody Titers) against Newcastle virus or DNC (9783 vs. 769), Gumboro (4623 vs. 4006), and Bronchitis (5099 vs. 3906), being this difference significant only for DNC. Similarly, at 42 days old, this birds showed a higher level of active immune response to vaccination against Gumboro (2650 vs. 2170), and Bronchitis (415 vs. 237). The results of this study allow to conclude that the inclusion of Sacha Inchi oil in the diet of breeders, altough no significant, positive impact on performance of progeny, and also has an immunomodulatory effect.

Con el objetivo de caracterizar la fosfolipasa A de la membrana externa (OMPLA E.C. 3.1.1.32) de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne, se estandarizaron métodos para el aislamiento e identificación de la bacteria a partir de hisopados rectales de aves comerciales. Para ello, primero se analizó la presencia de C. jejuni en hisopados cloacales mediante técnicas bacteriológicas y la reacción en cadena de la polimerasa anidada en base a los genes ribosómicos 16S e hipO, las cuales permitierón detectar Campylobacter jejuni en 29/50 (58%) y 48/50 (96%) de las muestras respectivamente. Después, se determinó la secuencia nucleotídica de los genes ribosómicos 16S y flaA del aislado MP4 con la finalidad de tener una cepa nativa de C. jejuni bien caracterizada que se utilice como modelo de estudio para la fosfolipasa A, las secuencias nucleotídicas de estos dos genes mostraron 98% y 92% de similiitud nucleotídica con las de Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. Las actividades hemolítica y de fosfolipasa A de C. jejuni MP4 fue dependiente de calcio, cuando este ión se reemplazó con EDTA, las actividades disminuyeron de 4119.4 a 44.78 U/mg de proteína. Utilizando cebadores específicos se amplificó y secuenció la parte central del gen pldA de C. jejuni MP4, se obtuvo 225 nucleótidos y 75 aminoácidos. La comparación de la secuencia aminoácidica por el ClustalW mostró 99% y 98% de identidad con las proteínas OMPLA de las cepas de Campylobacter jejuni RM1221 y C.jejuni subsp. jejuni ATCC 33560 respectivamente; esta alta conservación de secuencia aminoacídica de la fosfolipasa A la convierte en una candidata potencial para el diseño de vacunas y pruebas diagnósticas. / In order to characterize the Campylobacter jejuni’s outer membrane phospholipase A (OMPLA E.C. 3.1.1.32) from broiler chickens, it was standarized suitable methods for isolation and identification of this bacterium from cloacal swabs of commercial chickens. To that end, first it was analized the presence of C. jejuni in cloacal swabs by using bacteriological techniques and nested-PCR based on 16S ribosomal and hipO genes. The approaches used detected C. jejuni in the 29/50 (58%) and 48/50 (96%) of the samples respectively. Then, it was determined the nucleotidic sequence of 16S ribosomal gene to have a well-characterized native strain for using it as a model in the study of phospholipase A. The nucleotidic sequence of both genes showed 98% and 92% of similarity with Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. The haemolytic and phospholipase A enzymatic activities of the C. jejuni MP4 strain was calcium-depended, when calcium was replaced by EDTA both activities significantly decreased of 4119.4 to 44.78 U/mg protein. It was amplified and sequenced the central side from pldA gen of C. jejuni MP4 using specific primers. By means of that, it was obtained 225 nucleotides and 75 aminoacids. The comparison of aminoacidic sequences by CLUSTALW showed 99% and 98% of identity with OMPLA proteins from C. jejuni RM1221 and C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33560. This high conservation of the aminoacidic sequence of phospholipase A become it into a potential target to design vaccines and diagnostic tests.

El síndrome ascítico es una de las principales causas de mortalidad en aves de producción de carne, siendo la hipoxia el factor desencadenante a la que se suma la respuesta del organismo mediante la liberación de diversas sustancias que conducen al cuadro patológico, tales como endotelina 1 (ET-1), óxido nítrico (ON), prostaglandinas y diversas citoquinas inflamatorias. Aún no se conoce el rol del óxido nítrico en la hipertrofia arteriolar pulmonar e hipertrofia cardiaca derecha que se observa en el síndrome ascítico. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue determinar los valores de nitritos y nitratos, metabolitos estables del ON y su correlación con el grado de hipertrofia arteriolar pulmonar mediante la relación capa muscular/diámetro arteriolar (CM/DA) y con la hipertrofia cardiaca derecha mediante la relación ventrículo derecho/ventrículo total (VD/VT) y relación ventrículo derecho/peso corporal (VD/PC) en aves sometidas a hipoxia ambiental. De un mismo lote de aves machos de la línea Cobb vantres, nacidos a nivel del mar, se estudiaron 135 animales; 15 fueron sacrificados a 1 día de edad, en sus muestras se estudiaron diversas variables cuyos resultados fueron la base comparativa para los que se obtuvieron en los demás animales. Los 120 animales restantes fueron divididos en los grupos: nivel del mar (NM) 60 animales y altura (A) 60 animales. A los 10, 20, 30 y 40 días de edad se tomaron 15 aves (al azar) de cada grupo.Las variables determinadas fueron peso corporal (PC), hematocrito (Ht), nitritos y nitratos, CM/DA, VD/VT y VD/PC. / Ascitic syndrome is one of the main causes of mortality in broilers, being the hypoxia the leading factor to which is added the answer of the organism by liberation of diverse sustances that conduce to the pathologic pattern, such us endotheline 1 (ET-1), nitric oxide (NO), prostaglandins and inflammatory chemokines. The rol of NO in the pulmonary arteriolar hypertrophy and right cardiac hypertrophy observed in ascitic syndrome is still unknown. Hence, the aim of this study was to obtain the values of nitrites and nitrates, stable metabolites of NO, and its correlation with the degree of pulmonary arteriole hypertrophy through the muscular wall/arteriolar diameter (CM/DA) ratio, the right ventricular hypertrophy through the right ventricle/total ventricle (RV/TV) ratio and right ventricle/body weight (RV/BW) ratio in chickens rised at environmental hypoxia. A total of 135 male, Cobb vantres chickens and born at sea level were studied; 15 of them were sacrificed at 1 day age and diverse variables were determinate in their samples whose results were used as comparative base line for those of the other animals. The reminder 120 chickens were distributed in the groups: Sea Level (SL) 60 birds and altitude (A) 60 birds. At 10, 20, 30 and 40 days old, 15 chicken were taken randomly to measure body weight (BW), hematocrite (Ht), nitrites and nitrates, MW/AD, RV/VT and RV/BW.

El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia de anticuerpos contra el virus de la Reticuloendoteliosis (REV) en lotes de gallinas ponedoras utilizando la prueba de ELISA. Las muestras fueron colectadas durante los meses de julio del 2004 a marzo del 2005 y evaluadas en conjunto. Se tomaron 630 muestras de suero de 42 lotes en producción de 28 granjas comerciales provenientes de las zonas geográficas del departamento de La Libertad y la provincia de Lima. En los resultados obtenidos se hallaron 33.33% (14/42) lotes seroreactores; de estos, el 22.22% (6/27) provenían de Lima y 53.33% (8/15) de La Libertad; demostrando la presencia del virus en al menos 7% de la población estudiada que fue la prevalencia referencial utilizada. No se encontró asociación estadística significativa en las tres variables evaluadas: antecedentes de problemas tumorales, grupo etáreo y línea genética. Este es un primer estudio realizado en gallinas ponedoras, cuyos resultados evidencian la presencia del REV en el Perú. Por lo tanto, se recomienda realizar monitoreos serológicos en diferentes zonas geográficas del país incluyendo otras especies aviares de crianza industrial, considerar a este virus como parte del diagnóstico diferencial ante la presentación de neoplasias en gallinas ponedoras, y realizar estudios posteriores para confirmar definitivamente el diagnóstico serológico. Palabras Clave: Virus de la Reticuloendoteliosis (REV), anticuerpos, prueba de ELISA, gallinas ponedoras. / The objective of this study is to determinate the presence of antibodies against the Reticuloendotheliosis virus (REV) in flocks of layers hens using the ELISA test. The samples were collected in the period of July 2004 to March 2005 and were evaluated. It was taken 630 serum samples of 42 flocks in production of 28 commercial farms from geografic zones like the department of La Libertad and the province of Lima. In the results were found 33.33% (14/42) seroreactors flocks; of these the 22.22% (6/27) were from Lima and 53.33% (8/15) from La Libertad, showing the presence of the virus in 7% of the studied population that was the referential prevalence used. It was not founded a significative statistical association in the three studied variables: previous tumor problems, etareo group and genetic line. This is a first study made in layers hens, which the results show the presence of the REV in Peru. Therefore, it is recommended to make serologic operations in different geographic regions of Peru, including other avian species of industrial raising, to consider to this virus as part of the differential diagnostic in presence of neoplasias in layers hens and to realize later studies to confirm definitively the serologic diagnostic. Key Words: Reticuloendotheliosis virus, REV, antibodies, ELISA test, layers hens.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se evaluó el efecto de inclusión en la dieta de Preinicio (1-15 días de edad) de pollos broiler con distintos hidrolizados proteicos de pescado (Activium®), sobre los rendimientos productivos y económicos. Este estudio fue llevado a cabo durante 35 días con 630 pollos broiler machos divididos en 30 corrales. Se formuló y usó una dieta control en base a Maíz-Soya (M-S). Todas las dietas fueron formuladas isoproteicas e isoenergéticas, sólo se diferenció en la incorporación de distintos hidrolizados proteicos de pescado (BioCP®, EP-119, EP-120, EP-125 y EP-129). Los pollos fueron alimentados con las dietas experimentales desde la eclosión hasta los 15 días de edad. Luego, todos los pollos fueron alimentados con las mismas dietas según período (Inicio, Intermedio y Final) y requerimientos nutricionales de la línea genética utilizada (Ross 308).Al final del estudio no se observaron diferencias estadísticamente significativas (p > 0,05), entre los tratamientos, para los indicadores productivos peso vivo, consumo de alimento, conversión alimenticia e índice de eficiencia productiva. Existieron diferencias significativas (p ≤ 0,05) entre tratamientos para los indicadores productivos antes señalados, sólo en los períodos iniciales del ciclo. La mortalidad se consideró dentro de los rangos esperables para los estándares de la línea genética utilizada. Al final del estudio (29-35 días), no se observaron diferencias estadísticamente significativas (p > 0,05) entre tratamientos, en el indicador económico margen bruto. Sin embargo, se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p ≤ 0,05) entre tratamientos, en el indicador económico de costo alimentario de la ganancia de peso, resultando el tratamiento EP-120 el de menor costo. Por lo tanto, se concluyó que más estudios son necesarios en esta área, con respecto al uso de hidrolizados proteicos de pescado como ingrediente en las dietas para pollos broiler / Financiamiento: Innova BIO BIO no. 06-IE-SI-86 (2007)