Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-04T16:10:19Z No. of bitstreams: 1 2017_PolianaAmandaOliveiraSilva.pdf: 2281869 bytes, checksum: cf54931fb70b72a7017387cf28a5fe8c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-04-10T11:35:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_PolianaAmandaOliveiraSilva.pdf: 2281869 bytes, checksum: cf54931fb70b72a7017387cf28a5fe8c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T11:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_PolianaAmandaOliveiraSilva.pdf: 2281869 bytes, checksum: cf54931fb70b72a7017387cf28a5fe8c (MD5) / A Análise proteômica de diferentes condições clínicas da polpa dentária humana pode fornecer informações globais sobre mecanismos de patogenicidade e interações multifatoriais existentes entre microrganismos e o tecido pulpar humano. Assim, o objetivo do estudo foi analisar de forma qualitativa proteínas presentes no tecido pulpar em condições clínicas de polpa normal, pulpite irreversível e necrose com lesão periapical visível radiograficamente. Para isso, três réplicas biológicas, contendo pool de 5 dentes, para cada condição clínica foram avaliadas. A extração proteica foi realizada utilizando solução de lise e sonicação, para quantificação foi realizado o método de Bradford. A identificação proteica foi realizada utilizando nanoUPLC-MS/MSE, os dados obtidos foram processados e comparados a um banco de dados com auxílio do software ProteinLynx Global Server (PLGS). A partir dessa análise, um total de 508 proteínas foram identificadas. Entre essas, 75 foram avaliadas de forma exclusiva em polpa normal, 59 no diagnóstico de pulpite e 120 em necrose.Observou-se a presença de proteínas comuns aos diferentes diagnósticos clínicos, sendo 72 destas identificadas nos quadros de polpa normal e de pulpite irreversível, 36 nos quadros de pulpite e necrose, 37 nos quadros de polpa normal e necrose e 109 proteínas foram encontradas de forma semelhante em todos os grupos. No quadro de pulpite foram identificadas predominância das proteínas com função relacionada ao metabolismo e vias de energia, apoptose e maior diversidade de proteínas relacionadas a resposta imune em relação ao quadro clínico de polpa normal. No diagnóstico de necrose com lesão periapical foram identificadas predominância de proteínas relacionadas as funções de crescimento celular, metabolismo de proteínas, transporte, resposta imune, assim como proteínas envolvidas na comunicação, sinal de transdução e adesão celular, em relação ao diagnóstico clínico de pulpite irreversível. Desta forma, o presente estudo conclui que uma mudança no perfil de proteínas relacionadas ao processo imune pode ocorrer, conforme ocorre o agravamento da doença. Além disso, a identificação de proteínas de cada diagnóstico clínico pode contribuir para evolução de estudos relacionado ao processo patogênico pulpar e estudos regenerativos. / The proteomic analysis of different clinical conditions of the human dental pulp can provide global information on mechanisms of pathogenicity and multifactor interactions between microorganisms and human pulp tissue. The objective of this study was to qualitatively analyze the proteins present in pulp tissue under clinical conditions of normal pulp, irreversible pulpitis and necrosis with periapical lesion visible radiographically. For this, three biological replicates of pool containing 5 teeth for each clinical condition was evaluated. Protein extraction was performed using lysis solution (20 mM Tris-HCl pH 8.3, 1.5 mM KCl, 10 mM DTT, 1 mM PMSF 0.1%) and sonication for one minute with alternating cycles. Afterwards, quantification was performed using the Bradford method. The protein identification was performed using nanoUPLC-MS / MSE, the obtained data were processed and compared to a database with the aid of ProteinLynx Global Server (PLGS) software. From this analysis, a total of 508 proteins were identified. Among these, 75 were evaluated exclusively in normal pulp, 59 in the diagnosis of pulpitis and 120 in necrosis. It observed the presence of proteins found similarly between groups, of which 72 were identified between the normal pulp and irreversible pulpitis, 36 in the pulp and necrosis groups, 37 in the normal group and necrosis, and 109 proteins were found in a similar way in All groups. It was observed that from the normal pulp-to-pulpitis table a greater identification of proteins with function related to metabolism and energy pathways, apoptosis and greater diversity of proteins related to immune response was found. From the diagnosis of irreversible pulpitis to periapical lesion necrosis observed an increase in the diversity of proteins involved in cell growth processes, protein metabolism, transport, immune response, as well as proteins involved in communication, transduction signal and cell adhesion. In this way, this work offers complementary and innovative data regarding pulp proteins, since it can lead to advances in the area of tissue regeneration, as well as knowledge of pulp pathogenesis.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Texto parcialmente disponibilizado pelo autor. Conteúdo restrito: Apêndices. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-07-26T15:02:39Z No. of bitstreams: 1 2017_DonaldManigat_PARCIAL.pdf: 621102 bytes, checksum: 1f0b1edf50dddf5686b5208b044257b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-11T18:31:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DonaldManigat_PARCIAL.pdf: 621102 bytes, checksum: 1f0b1edf50dddf5686b5208b044257b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-11T18:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DonaldManigat_PARCIAL.pdf: 621102 bytes, checksum: 1f0b1edf50dddf5686b5208b044257b7 (MD5) Previous issue date: 2017-08-11 / A identificação e caracterização de moléculas capazes de modular a resposta inflamatória pulpar, facilitando ou mesmo promovendo o reparo dentinário oferecem imenso potencial para aumentar o sucesso na manutenção da vitalidade do dente. Neste sentido, os receptores gama e beta/delta ativados por proliferadores peroxissomais (PPARγ e PPAR β/δ), por apresentarem efeitos anti-inflamatórios, configuram-se como alvos farmacológicos potenciais. Enquanto a expressão do PPAR β/δ e sua participação na fisiopatologia pulpar ainda não foram exploradas, a capacidade do PPARγ em modular alguns aspectos inflamatórios em células da polpa já foi demonstrada. Porém, aspectos celulares relacionados com o reparo dentinário não foram avaliados. Assim, como objetivo da primeira parte deste trabalho, investigou-se o efeito da rosiglitazona (RSG), um agonista total do PPARγ sobre a viabilidade (MTT), apoptose (anexina-V FITC /iodeto de propídeo), migração (scratch) e diferenciação osteo/odontogênica de células da polpa dentária humana (vermelho de alizarina S e expressão gênica). Os resultados mostraram que RSG não interferiu na viabilidade, na apoptose ou na migração de células pulpares. Quanto a diferenciação, os resultados com coloração indicaram que RSG estimulou formação precoce de matriz mineralizada e a análise da expressão gênica revelou um aumento significativo da expressão de osteopontina nos grupos tratados com RSG. Como objetivos da segunda parte, a expressão do PPAR β/δ por células pulpares foi verificada (RT-PCRq e imunofluorescência). Posteriormente, essas células foram tratadas com LPS (Escherichia coli) ou H2O2 e o potencial do GW0742, agonista total do PPAR β/δ, em modular a inflamação foi explorado, por meio de análise da expressão gênica de citocinas e metaloproteinases (RT-PCRq), por análise da atividade de gelatinases (zimografia) e por ensaio de quimiotaxia com cocultura em transwell, sendo macrófagos murinos imortalizados RAW 264.7 as células submetidas a atração quimiotática por células pulpares. Células RAW 264.7 também foram estimuladas com LPS e a expressão gênica de citocinas inflamatórias foi analisada (RT-PCRq). Por fim, o efeito do GW0742 sobre o reparo começou a ser investigado neste estudo, por meio da análise da migração de células pulpares (scracth). Os resultados mostraram expressão de PPAR β/δ (transcrito e proteína). O tratamento com GW0742 reprimiu a expressão do RNAm de IL6, IL1β , MCP1 e MMP1 em células pulpares estimuladas com LPS ou H2O2, e de Il6 e Tnfα em células RAW 264.7 estimuladas com LPS. GW0742 reduziu a atividade de MMP2 e de MMP9, em células pulpares estimuladas com 2μg/mL ou 10 μg/mL de LSP, respectivamente. Além disso, o tratamento com GW0742 reduziu significativamente a capacidade de células pulpares estimuladas com LPS em recrutar macrófagos RAW 264.7. Por fim, GW0742 não interferiu na migração de células pulpares. Os resultados da primeira parte deste trabalho sugerem que RSG parece não alterar eventos celulares relacionados com o reparo dentinário. Quanto a segunda parte, esta indica que GW0742 possa modular a resposta inflamatória pulpar, sugerindo um efeito anti-inflamatório do receptor PPAR β/δ ativado. / Identification and characterization of molecules able to dampen inflammatory events within the dental pulp, facilitating or even promoting dentinal repair offer immense potential to increase the success in maintaining the tooth vitality. Due to anti-inflammatory properties, the peroxisome proliferator-activated receptors gamma and beta/dela (PPARγ and PPAR β/δ) could be envisioned as putative therapeutic targets. While neither PPAR β/δ expression nor its participation within the pulp pathophysiology were explored, the ability of PPARγ to modulate some inflammatory aspects in pulp cells has been demonstrated previously. However, cellular aspects related to dentine repair were not assessed. Thus, the aim of the first part of this study was to evaluate the effects of rosiglitazone (RSG), a PPARγ full agonist, on human dental pulp cells (hDPCs) viability (MTT), apoptosis (annexin-V FITC and propidium iodide), migration (scratch) and osteo/odontogenic differentiation (alizarin red and RT-qPCR). RSG did not affect cell viability, apoptosis/necrosis or cell migration. Whereas, alizarin red S showed that RSG stimulated early formation of mineralized matrix. Gene expression analysis revealed a significant increase in osteopontina mRNA expression at the RSG-treated groups. As the aim of the second part of this study, hDPCs PPAR β/δ expression was verified (RT-qPCR; immunofluorescence). Thereafter, hDPCs were treated with LPS or H2O2, and the anti-inflammatory ability of GW0742, a PPAR β/δ full agonist, was assessed by cytokine and metalloproteinases mRNA expression assay (RT-qPCR), gelatinase activity assay (zymography), and chemotaxis assay with transwell co-culture. In this system, an immortalized murine macrophage cell line, RAW 264.7, was attracted by hDPCs. In addition, RAW 264.7 cells were treated with LPS and GW0742, and cytokines mRNA expression was assessed (RT-qPCR). Finally, the effect of GW0742 on pulp repair was initiated through hDPCs migration assay (scracth). The results showed hDPCs PPAR β/δ expression (transcript and protein). GW0742 repressed IL6, IL1β, MCP1 and MMP1 gene expression in LPS/H2O2 treated hDPCs. Il6 and Tnfα mRNA expression was repressed by GW0742 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. GW0742 reduced MMP2 and MMP9 activity in pulp cells stimulated with 2μg / mL or 10μg / mL of LSP, respectively. In addition, treatment with GW0742 significantly reduced the ability of LPS-stimulated pulp cells to recruit RAW 264.7 macrophages. Finally, GW0742 did not impair hDPCs migration. The results of the first part of this study suggested that RSG appear does not impair cellular events related with dentin repair. The second part indicates that GW0742 can modulate pulp inflammatory response, suggesting an anti-inflammatory effect of activated PPARβ/δ receptor.

Orientador: Mario Roberto Vizioli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T20:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ito_ValdirSeije_D.pdf: 3662989 bytes, checksum: b001af023d29fce3ed89294e3e1fe078 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A ciclosporina inibe a produção de IL-2, e é um potente imunossupressor na prevenção e rejeição de transplantes de órgãos humanos. Os efeitos da ciclosporina no desenvolvimento de reações inflamatórias é controverso. Inflamação periapical foram estudados em ratos normais, jovens e adultos todos tratados com ciclosporinas. Ratos tratados com ciclosporina foram injetados via subcutânea diariamente com 10 mg/kg de peso corporal durante todo período experimental ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Cyclosporin inhibits the production of IL-2, and is the most effective immunosupressor to prevent rejection of human organ transplants.The effects of cyclosporin in the development of the inflammatory process is controversial. Periapical infIammation was studied in young and adults normal and cyclosporin treated rats. Cyclosporin treated rats were injected subcutaneously daily with 10 mg/kg of body weight during the whole experimental period ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências