Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-08-21T18:31:15Z No. of bitstreams: 1 patriciayannedeoliveira.pdf: 1047015 bytes, checksum: 1a92b1ec7fc7cdc1e6d9f8551e6c4790 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Favor verificar metadata.dc.contributor.advisor2: Resende on 2017-08-24T12:05:18Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-08-24T12:09:35Z No. of bitstreams: 1 patriciayannedeoliveira.pdf: 1047015 bytes, checksum: 1a92b1ec7fc7cdc1e6d9f8551e6c4790 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-25T12:00:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 patriciayannedeoliveira.pdf: 1047015 bytes, checksum: 1a92b1ec7fc7cdc1e6d9f8551e6c4790 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T12:00:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patriciayannedeoliveira.pdf: 1047015 bytes, checksum: 1a92b1ec7fc7cdc1e6d9f8551e6c4790 (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Objetivo: Neste estudo in vitro, avaliou-se a proliferação de células-tronco de polpa dentária (DPSCs) após a aplicação de laser de baixa intensidade. Métodos: A análise da proliferação de DPSCs cultivadas com DMEM e SFB a 10% foi realizada pelo ensaio de redução de MTT. Estas células foram irradiadas a cada 12 horas durante 72 horas ou de 24 em 24 horas durante 72 horas, com um laser Vermelho-InGaAlP (660nm, 30mW e 0,5 ou 1J/cm2) durante 16 ou 33 segundos. O melhor parâmetro dado pelo ensaio do MTT foi utilizado para analisar a diferenciação osteogênica e a viabilidade celular através do teste Trypan Blue. Para a análise estatística foi utilizado o teste ANOVA com nível de significância de 5% (p <0,05). Resultados: Através do MTT, foi possível observar que a menor dose de laser (0,5J /cm2) em aplicações as 0 e 48 horas obteve as melhores taxas de proliferação comparada a todos os outros grupos. Além disso, o laser de baixa intensidade não influenciou estatísticamente na diferenciação osteogênica e na viabilidade celular após a coloração com o vermelho de alizarina e o teste Trypan Blue no melhor parâmetro encontrato pelo MTT (0,5J/cm2). Conclusões: Ao analisar os resultados e considerando os parâmetros utilizados, podemos observar que o laser de baixa intensidade é uma ferramenta que favorece a proliferação de DPSCs. Finalmente, outros estudos devem ser realizados a fim de melhor definir os parâmetros para as aplicações de células-tronco. / Purpose: In this in vitro study, the proliferation of dental pulp stem cells (DPSCs) was evaluated after the application of low intensity laser. Methods: Analysis of the proliferation of DPSCs cultured with DMEM and 10% FBS was performed by the MTT reduction assay. These cells were irradiated every 12 hours for 72 hours or every 24 hours for 72 hours, with a RedInGaAlP laser (660nm, 30mW and 0.5 or 1J/cm2) for 16 or 33 seconds. The best parameter recorded by MTT was used to analyze the osteogenic differentiation and viability using the Trypan Blue test. For the statistical analysis the ANOVA test was used with significance level of 5% (p <0.05). Results: Through the MTT, it was possible to observe that the lowest dose of the laser (0.5J/cm2) in applications at 0 and 48 hours obtained the best proliferation rates then all the other groups. In addition, the low level laser did not appear to influence on the osteogenic differentiation nor the viability of the cells by the Trypan Blue test in the best parameter found by MTT (0.5J /cm2). Conclusions: When analyzing the results and considering the parameters used, we can observe that the low intensity laser is a tool that favors the proliferation of dental pulp stem cells. Finally, further studies should be carried out in order to better define parameters for stem cell applications.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandaGA_DISSERT.pdf: 1532248 bytes, checksum: 8b25b3bf5e0afc796607cf138b0a9885 (MD5) Previous issue date: 2013-02-14 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Dental pulp stem cells have been widely investigated because of their ability to differentiate into both dental and non-dental cells, with potential use in therapies involving tissue engineering. The technique of cell cryopreservation represents a viable alternative for the conservation of these cells, since it stops reversibly, in a controlled manner, all of cell biological functions in an ultra low temperature. The present study aimed to evaluate, using in vitro experiments, the influence of a cryopreservation protocol on the biologic acti vity of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Cells obtained from the pulp of three deciduous teeth on end-stage exfoliation or with indicated extraction were expanded in &#945;-MEM culture medium supplemented with antibiotics and 15% fetal bovine serum. At second subculture (P2), a group of cells were submitted to cryopreservation for 30 days in 10% DMSO diluted in fetal bovine serum, at -80? C, while the remind cells continued under normal conditions of cell culture. Cell proliferation was evaluated in both groups (not cryopreserved or cryopreserved) by Trypan blue stain essay at intervals of 24, 48 and 72h after plating. Cell cycle analysis of SHEDs submitted or not to the cryopreservation protocol was performed in the same intervals. Events related to cell death were studied by Annexyn V and PI expression under flow cytometry at the intervals of 24 and 72h. The presence of nuclear morphological changes was evaluated by DAPI staining at 72h interval. It was observed that both groups exhibited an upward cell proliferation curve, without considerable changes in cell viability throughout the experiment. The distribution of cell in the cell cycle phasis was consistent with cell proliferation in both groups. There were no nuclear morphological damages in the end range of the experiment. therefore, it is concluded that the proposed cryopreservation protocol is efficient for storing the studied cell type, allowing its use in future experimental studies / C?lulas-tronco da polpa dental humana t?m sido amplamente investigadas em raz?o da sua capacidade de diferenciar-se tanto em c?lulas dentais quanto n?o dentais, com potencial de utiliza??o em terapias envolvendo a engenharia de tecidos. A t?cnica de criopreserva??o celular representa uma alternativa vi?vel para a conserva??o dessas c?lulas, j? que cessa reversivelmente, de forma controlada, todas as suas fun??es biol?gicas em uma temperatura ultra-baixa. O presente estudo teve como objetivo avaliar, atrav?s de experimentos in vitro, a influ?ncia de um protocolo de criopreserva??o na atividade biol?gica de c?lulas-tronco da polpa de dentes humanos d ec?duos esfoliados (SHED). C?lulas obtidas da polpa de tr?s dentes dec?duos em est?gio final de esfolia??o ou com exodontia indicada foram expandidas em meio de cultivo &#945;-MEM suplementado com antibi?ticos e 15% de soro fetal bovino. No segundo subcultivo (P2), um grupo de c?lulas foi submetido a criopreserva??o por 30 dias em DMSO dilu?do a 10% em soro fetal bovino, a 80?C negativos, enquanto o restante seguiu em condi??es normais de cultivo. A prolifera??o celular em ambos os grupos (criopreservado e n?o criopreservado) foi avaliada atrav?s do m?todo de colora??o por azul de Tripan nos intervalos de 24, 48 e 72 horas ap?s o plaqueamento. Nestes mesmos intervalos foi realizada a an?lise do ciclo celular das SHEDs submetidas ou n?o ao protocolo de criopreserva??o. Os eventos relacionados ? morte celular foram analisados atrav?s da express?o de Anexina V e PI em citometria de fluxo, nos intervalos de 24 e 72 horas. A presen?a de altera??es morfol?gicas nucleares foi avaliada atrav?s da marca??o por DAPI no intervalo de 72 horas. Observou-se que ambos os grupos exibiram uma curva de prolifera??o celular ascendente, sem altera??es consider?veis na viabilidade celular ao longo do experimento. A distribui??o das c?lulas nas fases do ciclo celular foi coerente com c?lulas em prolifera??o nos dois grupos. N?o foram observados danos morfol?gicos nucleares no intervalo final do experimento . Deste modo, conclui-se que o protocolo de criopreserva??o proposto ? eficiente para o armazenamento do tipo celular estudado, permitindo a sua utiliza??o em futuros estudos experimentais

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-09-05T13:24:06Z No. of bitstreams: 1 melissamarianagomezvaca.pdf: 1124332 bytes, checksum: 9d1ed8c3594d14657c1d6bae1ec257a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-09-06T11:31:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 melissamarianagomezvaca.pdf: 1124332 bytes, checksum: 9d1ed8c3594d14657c1d6bae1ec257a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T11:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 melissamarianagomezvaca.pdf: 1124332 bytes, checksum: 9d1ed8c3594d14657c1d6bae1ec257a2 (MD5) Previous issue date: 2017-06-07 / O tecido da polpa do dente é uma fonte promissora para a obtenção de células tronco, as Dental Pulp Stem Cells (DPSCs) e seu posterior uso em terapias regenerativas, por isso torna-se importante saber a melhor idade do doador para seu armazenamento. Desta forma, o presente estudo buscou avaliar a eficiência na obtenção, proliferação, senescência e plasticidade das DPSCs em diferentes faixas etárias. Foram obtidas polpas dentarias de dentes molares extraídos, que compuseram três grupos: GI (18 – 33 anos), GII (34 – 49 anos) e GIII (50 – 67 anos). O isolamento celular foi avaliado através da observação microscópica diária do tecido pulpar e das células provenientes da polpa, por 15 dias. A proliferação celular foi analisada pelo ensaio de MTT nos dias 3, 5 e 7. A senescência das DPSCs foi feita em triplicata com contagem celular a cada 2 dias. A plasticidade celular foi realizada através da indução a diferenciação osteogênica, odontogênica e adipogênica. Os resultados apontaram que a eficiência da obtenção das DPSCs foi maior no GI, com decrescimento progressivo para GII e GIII. Não houve diferença estatística entre os grupos testados na avaliação da proliferação celular e na senescência. Amostras dos 3 grupos avaliados demostraram ter capacidade de diferenciação celular. Pode-se concluir que a idade foi capaz de influenciar a obtenção de DPSCs, apontando a faixa etária de 18 a 33 anos de idade (GI), como o grupo mais eficiente, já que o 100% das polpas dentarias deram células. Entretanto, ao avaliar a proliferação, senescência e plasticidade celular, todos os grupos se comportaram dentro de um mesmo padrão, sem a interferência da idade do doador. / The pulp tissue of the tooth is a promising source for obtaining stem cells, the Dental Pulp Stem Cells (DPSCs) and their subsequent use in regenerative therapies, so it becomes important to know the best age of the donor for its storage. In this way, the present study sought to evaluate the efficiency in obtaining, proliferating, senescence and plasticity of DPSCs in different age groups. Dental pulps of extracted molar teeth were obtained, which comprised three groups: GI (18 - 33 years), GII (34 - 49 years) and GIII (50 - 67 years). Cellular isolation was evaluated by daily microscopic observation of pulp tissue and pulp cells for 15 days. Cell proliferation was analyzed by the MTT assay on days 3, 5 and 7. Senescence of the DPSCs was done in triplicate with cell counts every 2 days. Cellular plasticity was achieved through the induction of osteogenic, odontogenic and adipogenic differentiation. The results showed that the efficiency of obtaining DPSCs was higher in the GI, with progressive decrease for GII and GIII. There was no statistical difference between the groups tested in the evaluation of cell proliferation and senescence. Samples of the 3 groups evaluated showed to be cell differentiation capacity. It can be concluded that age was able to influence the achievement of DPSCs, pointing to the age group of 18 to 33 years of age (GI), as the most efficient group, since 100% of the pulps gave cells. However, when evaluating cell proliferation, senescence and plasticity, all groups behaved within the same pattern, without interference from donor age.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This work was developed in two stages, described in scientific papers format. The goal of the first article was to adjust the techniques described in the literature for the isolation and culture of dental pulp cells to the physical and economic conditions of the research laboratory where the research was conducted. The methodology of this study was oriented by obtaining the pulp tissue from five deciduous teeth of dogs, which were digested in simple solution collagenase type 1 with positive results for the isolation. The outcome of the study was the isolation and cell culture of dental pulp with a lower cost and with enough cells for use in therapy. In the second study, the objective was to compare the in vitro resistance of dental implants with masticatory force dogs reported in the scientific literature. For materials and methods three different diameters dental implants 3.3mm, 4mm and 5mm were tested for static strength by applying compressive force on them. The result was a direct relationship to the resistance between the diameter and the applied force. Therefore, we can conclude that the method of isolation of dental pulp cells and culture of this study is similar to that described in the literature, but with the simplified methodology. And chewing strength of dogs can vary greatly, therefore we recommend possible the use of dental implants with a larger diameter. / Este trabalho foi desenvolvido em duas etapas, descritas no formato de artigos científicos. O objetivo do primeiro artigo foi ajustar às técnicas descritas na literatura para o isolamento e cultura da polpa dental para as condições físicas e econômicas do laboratório de pesquisa onde foi realizada a mesma. E a metodologia deste estudo foi orientada pela obtenção do tecido pulpar de cinco dentes decíduos de cães, que foram digeridos em solução simples de colagenase tipo 1 com resultados positivos para os isolamentos. O resultado do estudo foi o isolamento e cultura de células da polpa dental a um custo menor e com suficiente de células para utilização em terapia. No segundo estudo, o objetivo foi comparar a resistência in vitro de implantes dentários com cães de força mastigatória relatado na literatura científica. Para os materiais e métodos do estudo três diâmetros diferentes de implantes dental 3,3 mm, 4mm e 5mm foram testados quanto a resistência pela aplicação de força estática de compressão sobre eles. O resultado obtido foi de uma relação direta para a resistência entre o diâmetro e a força aplicada. Por isso, podemos concluir que o método de isolamento e cultura de células da polpa dental deste estudo é semelhante ao descrito na literatura, porém com a metodologia simplificada. E a força mastigatória dos cães pode variar, por isto é recomendado sempre que possível o uso de implante dental de maior diâmetro.