Orientador: Wilson Roberto Poi / Coorientadora: Mirian Marubayashi Hidalgo / Banca: Celso Koogi Sonoda / Banca: Daniela Atili Brandini de Weert / Banca: Raquel Sano Suga Terada / Banca: Christine Men Martins / Resumo: Objetivo: Avaliar, o reparo pulpar diante de dois antibióticos de uso sistêmico, tetraciclina e amoxicilina, em casos de reposicionamento (luxação extrusiva) ou reimplante (avulsão) dentários imediatos em ratos. Material e Métodos: Incisivos centrais maxilares superiores de ratos foram luxados e reposicionados após 5 minutos (n=90) ou extraídos, imersos em soro fisiológico por 5min e reimplantados (n=90). Os grupos foram divididos em três subgrupos (n=30) conforme o antibiótico e o controle (soro fisiológico) administrado após o ato cirúrgico e até sete dias. Os animais foram eutanasiados após 7, 15 ou 30 dias. Cortes histológicos longitudinais foram corados com HE para análise histomorfológica da camada de odontoblastos, deposição de dentina reparativa, bainha epitelial de Hertwig mantida junto com o dente, necrose e infiltrado inflamatório periapical. Para a análise estatística, utilizaram-se os testes de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e de Dunns (p<0,05). Resultado: Verificou-se haver diferença estatisticamente significativa entre os grupos amoxicilina e tetraciclina apenas na deposição de dentina reparativa no terço médio aos 15 dias após a luxação extrusiva. Para avulsão, a diferença ocorreu entre esses mesmos grupos aos 7 dias (presença da camada de odontoblastos, necrose e infiltrado inflamatório) e aos 15 dias (presença de necrose). Adicionalmente, verificaram-se diferenças entre o uso da amoxicilina ao longo do tempo tanto na avulsão como na luxação. Conclusão: A avali... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aim: To evaluate the pulp repair in the presence of two systemic antibiotics, tetracycline and amoxicillin, in cases of immediate dental repositioning (extrusive luxation) or replantation (avulsion), in rats. Material and Methods: Upper maxillary central incisors of rats were dislocated and repositioned after 5min (n = 90), or extracted, immersed in physiological solution for 5min, and reimplanted (n = 90). The groups were divided into three subgroups (n=30) according to the antibiotic or saline (control) administered after the surgery and up to seven days. The animals were euthanized after 7, 15 or 30 days. Longitudinal histological sections were stained with HE for histomorphological analysis of the odontoblast layer, reparative dentin deposition, Hertwig epithelial sheath maintained along with the tooth, necrosis, and periapical inflammatory infiltrate. For the statistical analysis the Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e de Dunns (p<0,05). Results: There was a statistically significant difference between the amoxicillin and tetracycline groups only in the reparative dentin deposition in the middle third at 15 days after the extrusive luxation. For avulsion, the difference occurred between these same groups at 7 days (presence of odontoblasts layer, necrosis and inflammatory infiltrate) and at 15 days (presence of necrosis). Additionally, there were differences between the use of amoxicillin over time in both avulsion and luxation. Conclusion: Microscopic evaluation demonstrated... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O objetivos deste estudo foi avaliar a influência da radiação ionizante na vitalidade do tecido pulpar mensurada através dos níveis de saturação de oxigênio (%SpO2) em pacientes com tumores malígnos intraoral ou de orofaringe, passado de 4-6 anos da radioterapia (RT). Noventa pacientes com tumores malígnos intraoral ou de orofaringe, submetidos de 4-6 anos anteriores a RT foram selecionados para este estudo. Os níveis de oxigenação e sensibilidade pulpar, avaliados através do oxímetro de pulso e do spray refrigerante TFE (tetrafluoretano), foram analisados nos dentes anteriores (superior e inferior) de cada paciente selecionado (n=693),, indiferente do quadrante e da área irradiada. Como grupo controle foram selecionados noventa pacientes saudáveis (nunca submetidos a RT) e os mesmos testes foram empregados (n=693). Todos os dentes foram considerados vitais. 100% mostraram resposta positva ao teste térmico e as médias de %SpO2 foram de 92.7% no grupo dos pacientes irradiados (SD ± 1.83) e 92.6% no grupo dos não-irradiados (SD ± 1.80), sem diferença estatística observada. Houve uma tendência de valores de %SpO2 menores em dentes caninos comparados aos incisivos, entretanto sem diferença estatística significante. Passados de 4-6 anos da RT, as %SpO2 da polpa dental estão dentro dos padrões considerados normais para uma polpa vital e podese assumir que a RT não têm influência danosa a longo prazo sobre a vitalidade do tecido pulpar, assim sugerindo que este tecido pode ser apto a retornar o fluxo sanguíneo normal após a RT. As mudanças observadas na microcirculação pulpar devido a RT parecem ser temporárias, então o tratamento endodôntico preventivo ou a extração dental em pacientes que receberam radiação ionizante são desnecessários. / The aim of this study was to evaluate the influence of radioation on pulp vitality through the measurement of pulpal oxigenation levels (%SpO2) in patients with malignant intraoral and oropharyngeal tumors at 4-6 years after radiotherapy (RT). Ninety patients with malignant tumors in the oral cavity or oropharynx, submitted to RT 4-6 years prior to the study were selected. Pulp oxygenation levels and pulp sensitivity, measured by pulse oximetry and by cold refrigerant spray TFE (tetrafluoroethane), were analyzed in the anterior teeth (upper and lower) of each patient selected (n=693), regardless of the quadrant and the irradiated area. As a control group were selected ninety healthy patients (never submitted to RT) and the same tests were performed (n=693). All teeth were considered vital. 100% showed a positive response to the thermal test and the %SpO2 rates were 92.7% in irradiated group (SD ± 1.83) and 92.6% in non-irradiated group (SD ± 1.80), without statistical difference. There was a trend for lower %SpO2 values in canine teeth compared to incisors, however it was not statistically significant. After 4-6 years of RT the dental pulp %SpO2 are within the normal range considered for a vital pulp and it can be assumed that RT did not have a long term influence on the pulp vitality, therefore suggesting that the pulp tissue may be able to recover normal blood flow after RT. The changes observed in the pulp microcirculation due to RT seems to be temporary, so preventive endodontic treatment or tooth extraction in patients who will receive RT may not be necessary.

Submitted by CARLA CAROLINE DE OLIVEIRA DUQUE null (carlacoduque@hotmail.com) on 2016-05-19T21:24:16Z No. of bitstreams: 1 Carla corr final 19.05.26 Repositorio Unesp.pdf: 6964321 bytes, checksum: 22480753de2d82fb176b13a6a33d913e (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-23T20:16:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 duque_cco_me_arafo.pdf: 6964321 bytes, checksum: 22480753de2d82fb176b13a6a33d913e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T20:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 duque_cco_me_arafo.pdf: 6964321 bytes, checksum: 22480753de2d82fb176b13a6a33d913e (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tem sido demonstrado que a susceptibilidade do complexo dentino-pulpar aos efeitos adversos do clareamento dental apresenta uma relação direta com a espessura de esmalte/dentina do substrato dental. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito estético e biológico de um gel clareador contendo 10% de peróxido de hidrogênio (H2O2) aplicado por diferentes períodos sobre a superfície de discos simulando a espessura de incisivos inferiores (ICI) e pré-molares superiores (PMS). Discos de esmalte/dentina, provenientes de incisivos bovinos, com 2,3 e 4,0 mm de espessura foram adaptados a câmaras pulpares artificiais e distribuídos nos Grupos ICI e PMS, respectivamente. O gel clareador com 10% de H2O2 foi aplicado na superfície de esmalte por 3x15, 1x15 ou 1x5 minutos. Como controle positivo, um gel com 35% de H2O2 aplicado por 3x15 minutos (protocolo tradicional) foi empregado. Nenhum tratamento foi realizado na superfície de esmalte no grupo controle negativo. O meio de cultura em contato com a dentina imediatamente após o clareamento (extrato) foi coletado e aplicado por 1 hora sobre células pulpares humanas. A viabilidade e morfologia celular foram avaliados imediatamente após exposição aos extratos (T1), bem como 72 horas pós-tratamento (T2). O estresse oxidativo e a quantificação do H2O2 nos extratos também foram analisados em T1. A atividade de ALP (atividade de fosfatase alcalina) e deposição de nódulos de mineralização (NM) foram avaliados em períodos de 14 e 21 dias pós-clareamento, respectivamente. De forma a avaliar a eficácia estética dos protocolos testados nas diferentes condições experimentais, mensurou-se ainda a alteração de cor (ΔE) durante seis sessões clareadoras. De uma forma geral, observou-se que todos os protocolos experimentais com gel a 10% de H2O2 promoveram diminuição dos efeitos deletérios promovidos pelo protocolo tradicional. O protocolo 10% 3x15 causou redução significativa na viabilidade celular em relação ao controle negativo no período T1, em ambos os Grupos ICI e PMS, sendo que as células expostas a este protocolo no Grupo ICI não demonstraram capacidade proliferativa em T2. As alterações morfológicas, a intensidade do estresse oxidativo e a redução nos marcadores fenotípicos (ALP e NM) também foram mais intensos para este protocolo nos Grupos ICI e PMS. Para os protocolos 10% 1x15 ou 1x5 minutos, ausência de redução significante na viabilidade celular foi observada, independente da espessura. No entanto, estresse oxidativo significativo foi observado nas células do Grupo ICI. Estes protocolos promoveram redução na atividade de ALP, a qual foi proporcional ao tempo de contato e espessura do substrato dental; entretanto não se observou redução na deposição de NM aos 21 dias. Valores de ΔE similares ao protocolo tradicional foram observados para os protocolos 10% 3x15 e 10% 1x15 no Grupo ICI após 4 e 6 sessões, respectivamente. Para o Grupo PMS, este parâmetro foi atingido apenas para o protocolo 10% 3x15 após 6 sessões clareadoras. Concluiu-se que a espessura do substrato dental influenciou significativamente na citotoxicidade trans-amelodentinária do gel com 10% de H2O2. A aplicação deste gel por períodos de 45 ou 15 minutos sobre discos simulando a espessura de incisivos inferiores minimizou significativamente a toxicidade celular e promoveu clareamento tão efetivo quanto o protocolo tradicionalmente empregado. / The susceptibility of pulp-dentin complex to the adverse effects of tooth bleaching therapies has a direct relationship with the thickness of dental substrate. Therefore, the aim of this study was to assess the biologic and esthetic effect of a 10% hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel applied for different periods onto enamel/dentin discs simulating the thickness of low incisors (LI) and upper pre-molars (PM). Enamel/dentin discs from bovine incisors measuring 2.3 and 4.0 mm were adapted to artificial pulp chambers and distributed into the IC Group (low incisors) and PM Group (upper premolars), respectively. The enamel surface was bleached with a 10% H2O2 gel for 3x15, 1x15 or 1x5 minutes. The 35% H2O2 gel applied for 3x15 minutes was used as positive control (traditional therapy) and no treatment was performed on negative control group. The culture medium immediately after bleaching (extract) was applied for 1 hour on human dental pulp cells. Cell viability and morphology were evaluated immediately after bleaching (T1) and 72 h thereafter (T2). Oxidative stress and the amount of H2O2 in culture medium were also quantified at T1. The ALP activity and mineralized nodule (MN) deposition were assessed 14 and 21 days after bleaching, respectively. The color change (ΔE) of enamel was analyzed throughout six bleaching sessions. Overall, the experimental protocols with the 10% H2O2 gel minimized significantly the negative effects of traditional therapy to cultured pulp cells. The protocol 10% 3x15 promoted significant cell viability reduction in comparison with negative control at T1, in both, IC and PM Groups; however, the cells of IC Group did not feature proliferative capability at T2. The morphologic alterations, oxidative stress intensity and reduction on phenotype markers (ALP and NM) expression were also more intense on IC Group for this bleaching protocol. Regarding the protocols 10% 1x15 and 1x5, no significant cell viability reduction related to negative control was observed regardless of the thickness of dental substrate. Nevertheless, significant oxidative stress was observed on cells from IC Group. These protocols caused significant reduction of ALP activity in comparison to negative control, which intensity being proportional to enamel/dentin thickness; however, no reduction on NM was detected at 21 days post-bleaching. Similar ΔE values as positive control were found for the 10% 3x15 and 1x15 protocol on IC Group after 4 and 6 sessions, respectively. For PM Group, this feature was reached out after 6 bleaching sessions for the 10% 3x15 protocol. It was concluded that the enamel/dentin thickness of dental substrate played a significant role on the trans-enamel and trans-dentinal cytotoxicity of a 10% H2O2 bleaching gel on human dental pulp cells in vitro. Application of gel during 45 or 15 minutes onto thin dental substrate minimizes significantly the cell toxicity in comparison to high concentrated gels (35%) associated with similar esthetic outcome by increasing the number of bleaching sessions. / FAPESP: 2014/07229-6 / CNPq: 442336/2014-4

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Resumo: Tem sido demonstrado que a susceptibilidade do complexo dentino-pulpar aos efeitos adversos do clareamento dental apresenta uma relação direta com a espessura de esmalte/dentina do substrato dental. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito estético e biológico de um gel clareador contendo 10% de peróxido de hidrogênio (H2O2) aplicado por diferentes períodos sobre a superfície de discos simulando a espessura de incisivos inferiores (ICI) e pré-molares superiores (PMS). Discos de esmalte/dentina, provenientes de incisivos bovinos, com 2,3 e 4,0 mm de espessura foram adaptados a câmaras pulpares artificiais e distribuídos nos Grupos ICI e PMS, respectivamente. O gel clareador com 10% de H2O2 foi aplicado na superfície de esmalte por 3x15, 1x15 ou 1x5 minutos. Como controle positivo, um gel com 35% de H2O2 aplicado por 3x15 minutos (protocolo tradicional) foi empregado. Nenhum tratamento foi realizado na superfície de esmalte no grupo controle negativo. O meio de cultura em contato com a dentina imediatamente após o clareamento (extrato) foi coletado e aplicado por 1 hora sobre células pulpares humanas. A viabilidade e morfologia celular foram avaliados imediatamente após exposição aos extratos (T1), bem como 72 horas pós-tratamento (T2). O estresse oxidativo e a quantificação do H2O2 nos extratos também foram analisados em T1. A atividade de ALP (atividade de fosfatase alcalina) e deposição de nódulos de mineralização (NM) foram avaliados em períodos de 14... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The susceptibility of pulp-dentin complex to the adverse effects of tooth bleaching therapies has a direct relationship with the thickness of dental substrate. Therefore, the aim of this study was to assess the biologic and esthetic effect of a 10% hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel applied for different periods onto enamel/dentin discs simulating the thickness of low incisors (LI) and upper pre-molars (PM). Enamel/dentin discs from bovine incisors measuring 2.3 and 4.0 mm were adapted to artificial pulp chambers and distributed into the IC Group (low incisors) and PM Group (upper premolars), respectively. The enamel surface was bleached with a 10% H2O2 gel for 3x15, 1x15 or 1x5 minutes. The 35% H2O2 gel applied for 3x15 minutes was used as positive control (traditional therapy) and no treatment was performed on negative control group. The culture medium immediately after bleaching (extract) was applied for 1 hour on human dental pulp cells. Cell viability and morphology were evaluated immediately after bleaching (T1) and 72 h thereafter (T2). Oxidative stress and the amount of H2O2 in culture medium were also quantified at T1. The ALP activity and mineralized nodule (MN) deposition were assessed 14 and 21 days after bleaching, respectively. The color change (ΔE) of enamel was analyzed throughout six bleaching sessions. Overall, the experimental protocols with the 10% H2O2 gel minimized significantly the negative effects of traditional therapy to cultured pulp cells. The ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivos deste estudo foi avaliar a influência da radiação ionizante na vitalidade do tecido pulpar mensurada através dos níveis de saturação de oxigênio (%SpO2) em pacientes com tumores malígnos intraoral ou de orofaringe, passado de 4-6 anos da radioterapia (RT). Noventa pacientes com tumores malígnos intraoral ou de orofaringe, submetidos de 4-6 anos anteriores a RT foram selecionados para este estudo. Os níveis de oxigenação e sensibilidade pulpar, avaliados através do oxímetro de pulso e do spray refrigerante TFE (tetrafluoretano), foram analisados nos dentes anteriores (superior e inferior) de cada paciente selecionado (n=693),, indiferente do quadrante e da área irradiada. Como grupo controle foram selecionados noventa pacientes saudáveis (nunca submetidos a RT) e os mesmos testes foram empregados (n=693). Todos os dentes foram considerados vitais. 100% mostraram resposta positva ao teste térmico e as médias de %SpO2 foram de 92.7% no grupo dos pacientes irradiados (SD ± 1.83) e 92.6% no grupo dos não-irradiados (SD ± 1.80), sem diferença estatística observada. Houve uma tendência de valores de %SpO2 menores em dentes caninos comparados aos incisivos, entretanto sem diferença estatística significante. Passados de 4-6 anos da RT, as %SpO2 da polpa dental estão dentro dos padrões considerados normais para uma polpa vital e podese assumir que a RT não têm influência danosa a longo prazo sobre a vitalidade do tecido pulpar, assim sugerindo que este tecido pode ser apto a retornar o fluxo sanguíneo normal após a RT. As mudanças observadas na microcirculação pulpar devido a RT parecem ser temporárias, então o tratamento endodôntico preventivo ou a extração dental em pacientes que receberam radiação ionizante são desnecessários. / The aim of this study was to evaluate the influence of radioation on pulp vitality through the measurement of pulpal oxigenation levels (%SpO2) in patients with malignant intraoral and oropharyngeal tumors at 4-6 years after radiotherapy (RT). Ninety patients with malignant tumors in the oral cavity or oropharynx, submitted to RT 4-6 years prior to the study were selected. Pulp oxygenation levels and pulp sensitivity, measured by pulse oximetry and by cold refrigerant spray TFE (tetrafluoroethane), were analyzed in the anterior teeth (upper and lower) of each patient selected (n=693), regardless of the quadrant and the irradiated area. As a control group were selected ninety healthy patients (never submitted to RT) and the same tests were performed (n=693). All teeth were considered vital. 100% showed a positive response to the thermal test and the %SpO2 rates were 92.7% in irradiated group (SD ± 1.83) and 92.6% in non-irradiated group (SD ± 1.80), without statistical difference. There was a trend for lower %SpO2 values in canine teeth compared to incisors, however it was not statistically significant. After 4-6 years of RT the dental pulp %SpO2 are within the normal range considered for a vital pulp and it can be assumed that RT did not have a long term influence on the pulp vitality, therefore suggesting that the pulp tissue may be able to recover normal blood flow after RT. The changes observed in the pulp microcirculation due to RT seems to be temporary, so preventive endodontic treatment or tooth extraction in patients who will receive RT may not be necessary.

As células da polpa dental têm o potencial de responder a estímulos externos e reparar o tecido dentário lesionado. Nos dentes, as lesões cariosas profundas e as lesões traumáticas são frequentes e resultam em alterações pulpares. Com o desenvolvimento da ciência e a busca de formas inovadoras de tratamento utilizando biomateriais de tamanho cada vez menor, verificar a biocompatibilidade desses materiais antes da aplicação clínica se mostra necessário e promissor. Assim, a finalidade deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade de uma nova nanopartícula de hidroxiapatita utilizando células pulpares humanas em cultura. As Nanopartículas de Hidroxiapatita (HAp) utilizadas em nosso estudo são um material novo e ainda não disponível para a prática clínica. Como parâmetro comparativo, foi utilizado o material já consagrado na Odontologia para tratamentos endodônticos, o Agregado Trióxido Mineral (MTA). Para tanto, foram realizados testes de biocompatibilidade (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). Foi preparada uma solução de material na concentração de 0,1g/ml diluído em meio de cultura, proporção preconizada pela norma ISO 10.993-12 (ISO, 1996). Esta solução foi diluída em 3 diferentes concentrações (1/10, 1/100 e 1/1000). Também foram realizados testes de migração celular e testes de capacidade de diferenciação, na concentração de 1/100. Como resultados pudemos verificar que as células da polpa foram viáveis quando expostas a diferentes concentrações de HAp, proliferaram mais quando tratadas com HAp na concentração de 1/100, migraram em direção aos materiais estudados e diferenciaram-se em tecido mineralizado quando em contato direto com ambos materiais estudados. Concluímos que o novo material testado é biocompatível e capaz de induzir mineralização em células de polpa dental sugerindo que as HAp podem ter aplicações clínicas futuras em tecidos mineralizados como osso e dente. / The dental pulp cells have the potential to respond to external stimuli and repair the dental tissue injury. On teeth, deep carious lesions and traumatic injuries are common and result in pulp changes. With the development of science and the search for innovative treatment forms using reduced size biomaterials, to verify the biocompatibility of these materials before clinical application has become necessary and promising. Thus, the purpose of this study was to evaluate the biocompatibility of a new hydroxyapatite nanoparticle using human pulp cells in culture. The nanoparticles of hydroxyapatite (HAp) used in our study are new material and not yet available for clinical practice. As a comparator, we used the material already used in dentistry to root canal treatment, the Mineral Trioxide Aggregate (MTA). To do so, biocompatibility (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). A solution of the material in a concentration of 0.1 g / ml diluted in culture medium recommended by ISO 10993-12 (ISO 1996) standard was prepared. This solution was diluted in three different concentrations (1/10, 1/100 and 1/1000). Were also performed cell migration and differentiation capacity assays at a concentration of 1/100. As results, we found that the pulp cells were viable when exposed to different concentrations of HAp, they proliferated more when treated with 1/100 HAp concentration, migrated toward the studied materials and differed into mineralized tissue when there was direct contact with both materials studied. We conclude that the new material tested is biocompatible and able to induce mineralization of dental pulp cells suggesting that the HAp may have future clinical applications in mineralized tissues such as bone and tooth.

As células da polpa dental têm o potencial de responder a estímulos externos e reparar o tecido dentário lesionado. Nos dentes, as lesões cariosas profundas e as lesões traumáticas são frequentes e resultam em alterações pulpares. Com o desenvolvimento da ciência e a busca de formas inovadoras de tratamento utilizando biomateriais de tamanho cada vez menor, verificar a biocompatibilidade desses materiais antes da aplicação clínica se mostra necessário e promissor. Assim, a finalidade deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade de uma nova nanopartícula de hidroxiapatita utilizando células pulpares humanas em cultura. As Nanopartículas de Hidroxiapatita (HAp) utilizadas em nosso estudo são um material novo e ainda não disponível para a prática clínica. Como parâmetro comparativo, foi utilizado o material já consagrado na Odontologia para tratamentos endodônticos, o Agregado Trióxido Mineral (MTA). Para tanto, foram realizados testes de biocompatibilidade (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). Foi preparada uma solução de material na concentração de 0,1g/ml diluído em meio de cultura, proporção preconizada pela norma ISO 10.993-12 (ISO, 1996). Esta solução foi diluída em 3 diferentes concentrações (1/10, 1/100 e 1/1000). Também foram realizados testes de migração celular e testes de capacidade de diferenciação, na concentração de 1/100. Como resultados pudemos verificar que as células da polpa foram viáveis quando expostas a diferentes concentrações de HAp, proliferaram mais quando tratadas com HAp na concentração de 1/100, migraram em direção aos materiais estudados e diferenciaram-se em tecido mineralizado quando em contato direto com ambos materiais estudados. Concluímos que o novo material testado é biocompatível e capaz de induzir mineralização em células de polpa dental sugerindo que as HAp podem ter aplicações clínicas futuras em tecidos mineralizados como osso e dente. / The dental pulp cells have the potential to respond to external stimuli and repair the dental tissue injury. On teeth, deep carious lesions and traumatic injuries are common and result in pulp changes. With the development of science and the search for innovative treatment forms using reduced size biomaterials, to verify the biocompatibility of these materials before clinical application has become necessary and promising. Thus, the purpose of this study was to evaluate the biocompatibility of a new hydroxyapatite nanoparticle using human pulp cells in culture. The nanoparticles of hydroxyapatite (HAp) used in our study are new material and not yet available for clinical practice. As a comparator, we used the material already used in dentistry to root canal treatment, the Mineral Trioxide Aggregate (MTA). To do so, biocompatibility (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). A solution of the material in a concentration of 0.1 g / ml diluted in culture medium recommended by ISO 10993-12 (ISO 1996) standard was prepared. This solution was diluted in three different concentrations (1/10, 1/100 and 1/1000). Were also performed cell migration and differentiation capacity assays at a concentration of 1/100. As results, we found that the pulp cells were viable when exposed to different concentrations of HAp, they proliferated more when treated with 1/100 HAp concentration, migrated toward the studied materials and differed into mineralized tissue when there was direct contact with both materials studied. We conclude that the new material tested is biocompatible and able to induce mineralization of dental pulp cells suggesting that the HAp may have future clinical applications in mineralized tissues such as bone and tooth.

Há um grande interesse no estudo de células-tronco em função de sua capacidade de auto-renovação e plasticidade. Estas características capacitam as células-tronco a produzirem células de diferentes linhagens que participam ativamente do processo de homeostase, da resposta à injúria e da regeneração e reparação tecidual. A polpa dental é o tecido mais estudado na Odontologia em relação a células-tronco, mas diversos estudos já mostraram a presença dessas células também na região periodontal. É importante salientar, que dependendo de sua origem, as células-tronco apresentam comportamentos diversos, especialmente no que tange ao transplante in vivo. Além disso, os microambientes onde as células-tronco residem (nichos), têm um papel fundamental no comportamento das mesmas, pois controlam aspectos essenciais como o estado de indiferenciação e a auto-renovação. Esse projeto de pesquisa teve como objetivos duas análises distintas. Na primeira, verificar se existem células-tronco mesenquimais derivadas da curetagem do alvéolo dental humano após extrações dentais. Na segunda, analisar o nicho de células-tronco nas polpas dentais de camundongos. Em comum, as duas análises se basearam no uso de marcadores previamente utilizados na literatura para o estudo de células-tronco. Como não existem marcadores únicos e específicos para a identificação dessas células, diferentes combinações desses marcadores entre si e de técnicas laboratoriais foram empregadas. No primeiro estudo, após o isolamento das células, deu-se especial atenção à sua caracterização, que foi realizada através de ensaios que avaliaram propriedades e comportamentos que sabidamente ocorrem em células-tronco. Já na segunda parte desse estudo, utilizamos a polpa dental de camundongos para a análise in vivo de nichos. Em camundongos, a localização do nicho responsável pelo crescimento continuo dos incisivos é conhecida. De uma maneira geral, nossos resultados demonstram que: 1) É possível isolar células-tronco/progenitoras a partir de tecidos curetados de alvéolo dental após extrações dentárias. Esse fato é inédito e abre novas perspectivas em termos de oportunidade de coleta e futura aplicação clínica. 2) É possível observar a diversidade populacional nas células que formam o nicho de células-tronco em polpa dental de camundongos, e através de uma organização hierárquica, propusemos um modelo para este nicho. Esse modelo servirá de base para estudos subsequentes que visem avaliar o comportamento das células que formam o nicho, quando isoladas das demais, e abrirá possibilidade para análises em outros tecidos dentais e não dentais. / There is great interest in the study of stem cells due to their ability to produce mature cells of different lineages that participate actively in the process of homeostasis, injury response, regeneration and tissue repair. The dental pulp is the most studied tissue in dentistry, but several studies have shown the presence of these cells in the periodontal tissue region. It is important to note that depending on their origin, these cells exhibit different behaviours, especially in regard to in vivo transplantation. Furthermore, the microenvironment in which these cells are found (niches) have an essential role in their behaviour as they control important aspects such as differentiation and self-renewal. This research project aimed for two distinct analyses. The first was to verify if there are mesenchymal stem cells derived from human dental socket curettage after dental extractions. The second, to analyse the stem cell niche in mouse dental pulp. In common, the two analyses were based on the use of markers previously used in the literature for the study of stem cells. As there are no specific and unique markers to identify these cells, an extensive combination of these markers among themselves, and laboratory techniques were performed. In the first study, after the isolation of the cells, special attention was given to their characterization by combining assays to evaluate stem cells properties and behaviours. In the second part of this study, we used the mouse dental pulp model for in vivo analysis of stem cell niches. In mice, the location of the niche responsible for the incisors continuous growth is known. In general our results showed that: 1) It is possible to isolate progenitor/stem cells from tissue curettage of the alveolus after tooth extractions. This fact is unprecedented and opens new perspectives for the obtention of stem cells for future clinical applications. 2) It is possible to observe the cells population diversity of the mouse dental pulp niche and through a hierarchical organization, we proposed a model for this niche. This model will provide basis for further studies aimed at evaluating the behavior of cells that form the niche, when isolated from the others, and opens the possibility for the analysis of the niche structure in other dental and non-dental tissues.

Há um grande interesse no estudo de células-tronco em função de sua capacidade de auto-renovação e plasticidade. Estas características capacitam as células-tronco a produzirem células de diferentes linhagens que participam ativamente do processo de homeostase, da resposta à injúria e da regeneração e reparação tecidual. A polpa dental é o tecido mais estudado na Odontologia em relação a células-tronco, mas diversos estudos já mostraram a presença dessas células também na região periodontal. É importante salientar, que dependendo de sua origem, as células-tronco apresentam comportamentos diversos, especialmente no que tange ao transplante in vivo. Além disso, os microambientes onde as células-tronco residem (nichos), têm um papel fundamental no comportamento das mesmas, pois controlam aspectos essenciais como o estado de indiferenciação e a auto-renovação. Esse projeto de pesquisa teve como objetivos duas análises distintas. Na primeira, verificar se existem células-tronco mesenquimais derivadas da curetagem do alvéolo dental humano após extrações dentais. Na segunda, analisar o nicho de células-tronco nas polpas dentais de camundongos. Em comum, as duas análises se basearam no uso de marcadores previamente utilizados na literatura para o estudo de células-tronco. Como não existem marcadores únicos e específicos para a identificação dessas células, diferentes combinações desses marcadores entre si e de técnicas laboratoriais foram empregadas. No primeiro estudo, após o isolamento das células, deu-se especial atenção à sua caracterização, que foi realizada através de ensaios que avaliaram propriedades e comportamentos que sabidamente ocorrem em células-tronco. Já na segunda parte desse estudo, utilizamos a polpa dental de camundongos para a análise in vivo de nichos. Em camundongos, a localização do nicho responsável pelo crescimento continuo dos incisivos é conhecida. De uma maneira geral, nossos resultados demonstram que: 1) É possível isolar células-tronco/progenitoras a partir de tecidos curetados de alvéolo dental após extrações dentárias. Esse fato é inédito e abre novas perspectivas em termos de oportunidade de coleta e futura aplicação clínica. 2) É possível observar a diversidade populacional nas células que formam o nicho de células-tronco em polpa dental de camundongos, e através de uma organização hierárquica, propusemos um modelo para este nicho. Esse modelo servirá de base para estudos subsequentes que visem avaliar o comportamento das células que formam o nicho, quando isoladas das demais, e abrirá possibilidade para análises em outros tecidos dentais e não dentais. / There is great interest in the study of stem cells due to their ability to produce mature cells of different lineages that participate actively in the process of homeostasis, injury response, regeneration and tissue repair. The dental pulp is the most studied tissue in dentistry, but several studies have shown the presence of these cells in the periodontal tissue region. It is important to note that depending on their origin, these cells exhibit different behaviours, especially in regard to in vivo transplantation. Furthermore, the microenvironment in which these cells are found (niches) have an essential role in their behaviour as they control important aspects such as differentiation and self-renewal. This research project aimed for two distinct analyses. The first was to verify if there are mesenchymal stem cells derived from human dental socket curettage after dental extractions. The second, to analyse the stem cell niche in mouse dental pulp. In common, the two analyses were based on the use of markers previously used in the literature for the study of stem cells. As there are no specific and unique markers to identify these cells, an extensive combination of these markers among themselves, and laboratory techniques were performed. In the first study, after the isolation of the cells, special attention was given to their characterization by combining assays to evaluate stem cells properties and behaviours. In the second part of this study, we used the mouse dental pulp model for in vivo analysis of stem cell niches. In mice, the location of the niche responsible for the incisors continuous growth is known. In general our results showed that: 1) It is possible to isolate progenitor/stem cells from tissue curettage of the alveolus after tooth extractions. This fact is unprecedented and opens new perspectives for the obtention of stem cells for future clinical applications. 2) It is possible to observe the cells population diversity of the mouse dental pulp niche and through a hierarchical organization, we proposed a model for this niche. This model will provide basis for further studies aimed at evaluating the behavior of cells that form the niche, when isolated from the others, and opens the possibility for the analysis of the niche structure in other dental and non-dental tissues.

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