Dissertação (mestrado) Universidade Federal de Viçosa, Curso de Fitopatologia, 1990 / Made available in DSpace on 2016-01-08T16:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1990

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Orientadora : Profª. Drª. Chirlei Glienke / Coorientador : Prof. Dr. Fabricio Packer Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências : f. 42-44;61-63;67-71 / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que ameaça a Citricultura brasileira, causando lesões em frutos e sua queda prematura em estágios mais severos, levando a prejuízos de produção e rejeição no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, presente em folhas caídas em decomposição na forma sexuada (ascósporos) e nas lesões dos frutos, em folhas aderidas à planta e ramos secos na forma assexuada (picnidiósporos). O uso de fungicidas sistêmicos ainda é a principal alternativa de controle, mas se depara com os principais problemas do seu uso excessivo como toxicidade ambiental, acúmulo de resíduos nos frutos e seleção de patógenos resistentes. A busca por um controle alternativo pode envolver microrganismos endofíticos de plantas medicinais, uma vez que é conhecido seu potencial biotecnológico e poder protetor da planta hospedeira, mas depende do conhecimento do ciclo infeccioso do patógeno sob vários aspectos. Sabe-se da importância do manejo de ramos secos no controle da doença mas pouco se conhece sobre a participação dos ramos na epidemiologia da MPC. Técnicas tradicionais de isolamento em meio de cultura juntamente com ensaios moleculares têm agilizado o diagnóstico de doenças, oferecendo dados importantes sobre vários patosistemas. Adicionalmente, o uso de microrganismos transformados geneticamente para expressão de uma proteína repórter, como a green fluorescente protein (gfp), trazem uma nova ferramenta para o monitoramento desses microrganismos e entendimento do seu ciclo infeccioso. No presente estudo foram avaliados 128 ramos de área de alta incidência da MPC, pertencentes a quatro estados fenológicos: novo, jovem, velho e seco. O isolamento destes tecidos revelou 1,6% de amostras positivas para P. citricarpa, apenas em tecidos de estado fenológico velho, enquanto a extração de DNA direto dos tecidos seguido de PCR espécie específico não revelou a presença do patógeno. Foi avaliada a sobrevivência do fungo patogênico em ramos de citros destacados, pela inoculação de suspensão conidial da linhagem transformante LGMF06-T2 (gfp) de P. citricarpa. Foi possível recuperar o fungo inoculado dos tecidos após 45 dias da sua inoculação, não sendo recuperado após 90 e 135 dias. A espécie inoculada foi confirmada por microscopia de fluorescência, e este resultado sugere a sobrevivência do patógeno nos ramos por pelo menos 45 dias. Adicionalmente, foi avaliado o efeito do extrato metabólico do fungo endofítico Diaporthe terebinthifolii sobre a formação de picnídios de P. citricarpa em ramos autoclavados. Fragmentos de 1 cm de ramos autoclavados foram depositados sobre meio ágar-agua e em suas laterais foram inoculados fragmentos miceliais do patógeno. Comparou-se o crescimento micelial e formação de picnídios nos ramos tratados com o extrato do fungo endofítico com relação aos ramos não tratados e ramos tratados com fungicida comercial. Observou-se que o extrato reduz a formação de picnídios comparativamente ao controle negativo, apresentando efeito similar ao promovido pelo fungicida. Tais resultados confirmam o potencial do extrato do fungo D. terebinthifolii no controle do patógeno P. citricarpa. Palavras-chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, endófitos, controle alternativo / Abstract: The Citrus Black Spot (CBS) is a threat to the Brazilian Citrus, causing fruit lesions and premature fruit drop in more severe cases, leading to yield losses and fruit rejection in the consumer market. CBS is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, which ascospores are the sexual stage, found in decomposing fallen leaves, and picnidiospores are the asexual stage, present in fruit lesions, attached leaves and dried branches. Systemic fungicides are the main control alternative, but its overuse causes problems like the environmental toxicity, residues accumulation in fruits and also the selection of resistant pathogens. The search of an alternative disease control method may involve endophytic microorganisms of medicinal plants, due to their biotechnological potential and protective power of the host plant, but it is important to know about the infectious cycle of the pathogen. We know the importance of handling dry branches for CBS control but there is a lack of information about this pathosystem, mainly about the influence of branches in the disease epidemiology. The use of traditional isolation techniques coupled with molecular techniques have enhanced the diagnosis of diseases, providing important data on the interaction between the plant and the pathogen. Additionally, the use of genetically transformed microorganisms for the expression of a reporter protein, such as green fluorescent protein (GFP) brings a new tool to understand the pathogen infectious cycle. In the present study, we evaluated 128 branches in area of high incidence of CBS, belonging to four growth stages: new, young, old and dried. The isolation of these tissues showed 1.6% of samples with the presence of P. citricarpa, only in branches in old growth stages, while the method used for DNA extraction and PCR directly from the branches tissue did not reveal the pathogen. We also evaluated the fungus survival in detached citrus branches by inoculating a conidial solution of the LGMF06-T2 transformed strain expressing the green fluorescent protein (GFP). The pathogen was reisolated from the branches after 45 days of inoculation, with the gfp strain confirmed by fluorescence microscopy. These findings suggests that the pathogen can survive in branches for at least 45 days. Additionally, we evaluated the control effect of metabolic extract of the endophytic fungus Diaporthe terebinthifolii over micelial growth and pycnidia formation of P. citricarpa in autoclaved branches. Branches fragments (1 cm) were placed on water agar media and mycelium fragments of the pathogen were inoculated on its sides. It was evaluated the micelial growth and pycnidia formation on the branches treated with the the endophytic fungus extract, compared with non-treated branches and branches treated with commercial fungicide. The extract treatment reduced the formation of pycnidia compared to the non-treated branches, and its inhibition was similar to the fungicide treatment. These findings confirm the potential of D. terebinthifolii extract in the control of P. citricarpa. Keywords: Citrus Black Spot, Phyllosticta citricarpa, epidemiology, disease control, endophytes, alternative control

Resumo: A Mancha Foliar de Glomerella (MFG) é causada por espécies de Colletotrichum e é a principal doença de verão da cultura da macieira, ocasionando sintomas em folhas e frutos e prejudicando a produção do ano subsequente à sua ocorrência devido à intensa desfolha que provoca nas plantas. Os objetivos deste trabalho foram (I) verificar as fontes de inóculo primário existentes em um pomar com alta pressão de inóculo, (II) monitorar a densidade de conídios de Colletotrichum spp. disseminados pelo ar e pela água em diferentes alturas da planta, em áreas sem e com tratamento químico, e verificar se ocorre a dispersão dos conídios por insetos-praga da cultura e (III) verificar a época de início da epidemia, o progresso da doença e a relação entre a severidade da MFG com a desfolha das plantas, de acordo com a localização das folhas no dossel. Para avaliação da sobrevivência do patógeno no outono e no inverno, coletas mensais de ramos e gemas dormentes, folhas caídas e de solo foram realizadas entre os meses de abril e agosto, e para avaliação da sobrevivência do patógeno de forma epifítica, coletas mensais de folhas assintomáticas foram realizadas entre setembro e março, durante dois anos. A patogenicidade dos isolados foi verificada em frutos com e sem ferimento e em folhas. A densidade de conídios de Colletotrichum spp. ao longo do tempo foi determinada pela coleta destes com armadilhas caça-esporos instaladas a 0,3, 1,0 e 2,5 m de altura em relação ao solo e com a coleta do escorrimento interno de água na planta a 0,3 e 1,0 m de altura em relação ao solo. Insetos-praga da cultura (Grapholita molesta e Bonagota cranaodes) foram coletados quinzenalmente para verificação da presença do patógeno externamente a estes. A incidência, severidade e desfolha ocasionada pela MFG foram quantificadas em 10 folhas por ramo, posicionados a 0,3, 1,0 e 1,8 m de altura em relação ao solo. Detectou-se a presença de inóculo do patógeno no outono/inverno em ramos e gemas dormentes e em folhas caídas no solo, sendo que o número de isolados e sua patogenicidade variou de acordo com o órgão vegetal de origem e o ano de obtenção. Em nenhum momento foi observada a presença de Colletotrichum spp. no solo durante o período de outono/inverno, e em folhas assintomáticas durante o período vegetativo. A disseminação de conídios de Colletotrichum spp. foi observada a partir dos meses de outubro e novembro em áreas sem tratamento e a partir dos meses de novembro e janeiro em áreas com tratamento, cessando em meados do mês de abril. A maior densidade de conídios foi observada nos meses de janeiro e fevereiro, independentemente do manejo fitossanitário. Em ano com maior pressão de inóculo a aplicação de fungicidas não foi capaz de reduzir a área abaixo da curva calculada a partir da quantidade de conídios ao longo do tempo. A maior captura de conídios ocorreu próximo ao solo e a presença destes foi constatada tanto no ar quanto no escorrimento de água no interior da planta. Não foram observados conídios de Colletotrichum spp. em G. molesta e B. cranaodes. A quantidade de sintomas de MFG foi altamente dependente das condições ambientais observadas, principalmente a quantidade de precipitação e a umidade relativa do ar, havendo correlação positiva entre a severidade imediatamente anterior a queda e o tempo de permanência da folha na planta para todas as alturas avaliadas. A desfolha mostrou-se mais acentuada nas partes altas do dossel das plantas.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-16T16:54:09Z No. of bitstreams: 1 2012_SaluanaRochaCraveiro_Parcial.pdf: 10672925 bytes, checksum: 0939eba1de8766746468f493f67e2742 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-16T17:51:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SaluanaRochaCraveiro_Parcial.pdf: 10672925 bytes, checksum: 0939eba1de8766746468f493f67e2742 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-16T17:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SaluanaRochaCraveiro_Parcial.pdf: 10672925 bytes, checksum: 0939eba1de8766746468f493f67e2742 (MD5) / A lagarta falsa-medideira (Pseudoplusia includens; Walker, 1857) tornou-se uma praga de grande importância nas lavouras de soja no Brasil. Sete isolados virais, caracterizados como variantes genotípicos do baculovirus Pseudoplusia includens single nucleopolyhedrovirus(PsinSNPV), foram obtidos de larvas P. includens coletadas em plantações de soja e algodão no Brasil e Guatemala. Visando determinar a diversidade genética e filogenia de sete isolados de PsinSNPV (IA a IG), sequências parciais dos genes lef-8 e lef-9(late expression factor), pif-2 (per os infectivity factor 2),phr (DNA photolyase) e polh/gran (polyhedrin/granulin)foram obtidas e árvores filogenéticas foram construídas usando análises da máxima parcimônia (MP) e Bayesiana (IB).DNA de sete isolados foi amplificado por PCR utilizando oligonucleotideos degenerados específicos aos genes lef-8, lef-9, pif-2, phr e polh/gran e as sequências obtidas foram de 513, 260, 357, 780 e 510 pb de tamanho, respectivamente. Para cada gene, as sequências alinhadas mostraram pouco polimorfismo nucleotídico entre os isolados de PsinSNPV. A relação filogenética de PsinSNPV com outros 57 baculovirus sequenciados foi também determinada a partir de sequências nucleotídica e peptídica, individual e concatenada, dos genes lef-8, lef-9, pif-2 e polh/gran. As árvores filogenéticas demostraram que PsinSNPV agrupou-se com os baculovirus do gênero Alphabaculovirus Grupo II, onde PsinSNPV é mais proximamente relacionado ao Chrysodeixis chalcites NPV (ChchNPV) e Trichoplusia ni SNPV (TnSNPV). Árvores filogenéticas por máxima parcimônia e Bayesiana foram obtidas da concatenação das sequências nucleotídicas dos cinco genes lef-8, lef-9, phr, pif-2 epolh, onde pif -2 foi o mais variável. As árvores exibiram dois grupos monofiléticos estreitamente relacionados, um contendo os isolados IB, IC e ID e o outro contendo os isolados IA, IE, IF e IG. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The soybean looper (Pseudoplusia includens ; Walker, 1857) has become a major pest in soybean crops in Brazil. Seven isolates, characterized as genotypic variants of the Pseudoplusia includens single nucleopolyhedrovirus(PsinSNPV) baculovirus were obtained from P. includenslarvae collected in soybean and cotton crops in Brazil and Guatemala. In order to determine the genetic diversity and phylogeny of the seven isolates PsinSNPV (IA - IG), partial sequences of the genes lef-8and lef-9(late expression factor), pif-2 (per osinfectivity factor 2), phr (DNA photolyase) and polh/gran (polyhedrin/granulin) were obtained and phylogenetic trees constructed using maximum-parsimony (MP) and Bayesian analyses (IB). DNA from seven isolates was amplified by PCR using lef-8, lef-9, pif-2, phrand polh/gran specific degenerate primers and the sequences obtained were 513, 260, 357, 780 and 510 bp long, respectively. For each gene, the aligned sequences showed little nucleotide polymorphism between PsinSNPV isolates. The phylogenetic relationship of PsinSNPV with 57 other baculoviruses was also determined from the individual and concatenated nucleotide and amino acid sequences of the genes lef-8, lef-9, pif-2and polh. The phylogenetic trees clearly place PsinSNPV with the group II Alphabaculovirus, where PsinSNPV is most closely related to ChchNPV and TnSNPV. Maximum parsimony and Bayesian phylogenetic trees were obtained from the concatenation of the nucleotide sequence of the five genes, lef-8, lef-9, phr, pif-2 andpolh, where pif-2 was by far the most variable. The trees exhibited two closely related monophyletic groups, one containing the isolates IB, IC and ID and another containing the isolates IA, IE, IF and IG.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-06-01T11:13:33Z No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Baculovírus são vírus de DNA dupla-fita circular que infectam insetos principalmente da ordem Lepidoptera. O problema de seu uso como inseticida é o tempo que este leva para matar o inseto hospedeiro. A fim de resolver este problema, inserção de genes inseticidas no genoma viral pode ser requerida. Uma importante fonte de proteínas inseticidas é o veneno de aracnídeos, cujo alvo e ação permanecem pouco elucidados. Assim, promopos o uso de baculovírus como ferramenta para entender mecanismo de ação de peptídeos tóxicos em células de inseto. Diante disso, diferentes versões da toxina putativa BaTx derivada de biblioteca de cDNA da glândula de veneno da aranha caranguejeira Brachypelma albiceps foram obtidas por PCR e usadas para construção de baculovírus recombinantes. Os recombinantes foram usados para infecção de duas linhagens de lepidópteros, IPLB-Sf1-AE e BTI-Tn5B1-4 e a viabilidade celular foi avaliada durante a infecção. As diferentes versões da toxina causaram morte celular precoce por necrose em níveis diferenciados. Análise estrutural e ultraestrutural mostraram clara mudança citomorfológica em células, corroborando perda de integridade da membrana plasmática e do conteúdo citoplasmático, permanência do núcleo com carioteca intacta e associada a restos de membranas circundantes. Esta característica criou um aspecto rugoso quando observado em microscopia de luz. Além disso, o gene da toxina BaTx foi expresso em sistema procariótico para obtenção de antisoro policlonal murino. Entretanto, quando testado contra extratos de células infectadas com recombinantes, não houve marcação. Fato este esperado, uma vez que a toxina não foi observada em gel SDS-PAGE. Não há relatos de genes de toxinas de aranha com ação citotóxica clonadas em baculovírus, provavelmente esta característica não permitiu que houvesse acúmulo da toxina em níveis diagnosticáveis por imunomarcação ou pode ter promovido instabilidade peptídica. Peptídeos formadores de canais apresentam alto conteúdo de resíduos básicos (arginina e lisina), de cisteínas e conformação em folha-beta. BaTx apresenta todas estas características, porém alvo e ação permanecem obscuros. Canais tipo-TRP são encontrados em insetos e há indícios da presença desses transportadores na membrana plasmática e em membranas intracelulares. Talvez estes canais possam ser o alvo de ação da toxina BaTx. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are dsDNA circular virus infectives to insects mainly from the Order Lepidoptera. Its biopesticide use problem is the time of death during insect infection. To solve this problem, insecticide genes can be inserted into the viral genome. An important insectice protein source is the venom of arachinids. However, the target and action of many peptides remain unclear. Baculoviruses can be used as a tool to udersatand the toxic peptides playing in insect cells. Thus, different vesions of a putative toxin were obtained from cDNA library of the tarantula Brachypelma albiceps venom gland by PCR and used to construct recombinant baculoviruses. The recombinants were used to infect two lepidopteran cell lines, IPLB-Sf1-AE and BTITn5B1- 4, and cell viability was evaluated during infection. The toxin versions caused wide and early cell death by necrosis in different levels. Structural and ultrastructural analyses showed clear cytomorphological changes, corroborating loss of the plasma membrane integrity and cytoplasmic contents, and nucleus with intact karyotheca linked with surrounding plasma membrane remains. The features created a rough aspect when those infected cells were observed by light microscopy. Furthermore, the BaTx toxin gene was expressed by a prokaryotic system to obtain murine polyclonal antiserum. However, when the antiserum was tested against infected cells extract with recombinant virus carrying the BaTx toxin no reaction was detected. This observation was expected since the toxin was not observed by SDS-PAGE. There are no reports of spider toxin genes with necrotic action cloned into baculovirus, probably this feature did not allowed toxin accumulation in detectable levels by immunoblot or it could have promoted protein instability. Channel former peptides show high content of basic amino acid residues (lysine and arginine), cystein residues, and beta-sheet conformation. BaTx presents all those features, but its target and mode of action remain unknown. TRP-like channels are found in insects and there is evidence of the presence of these iontransporters in intracellular membranes as well as in plasma membrane. Perhaps TRPlike channels can be the BaTx toxin target of action.

Orientador: Carmem S. Fontanetti Christofoletti / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Banca: Izabela Braggião Calligaris / Resumo: Milípedes, popularmente conhecidos no Brasil como piolho-de-cobra, emboá ou gongolô, apresentam distribuição cosmopolita e constituem uma das classes de Myriapoda. Podem se tornar importantes pragas agrícolas e causar prejuízos caso haja uma diminuição na quantidade de alimento habitual. Infestações e surtos populacionais de milípedes têm ocorrido em várias partes do mundo, sendo responsáveis por danos em plantações e transtornos em áreas urbanas. A espécie Urostreptus atrobrunneus vem apresentando surtos populacionais nos últimos anos no estado de São Paulo, com potencial de se tornar uma praga agrícola e urbana. O controle da mesma torna-se difícil diante da falta de informação sobre o grupo e do escasso número de estudos referentes à biologia e morfologia dos mesmos. Neste aspecto, o presente trabalho pretende contribuir com informações sobre a morfologia, ultra-estrutura e distribuição dos túbulos de Malpighi do diplópodo U. atrobrunneus, colaborando com subsídios para o entendimento de sua biologia e, assim, contribuir para a elaboração de ações eficazes para seu controle quando em expansão populacional. Os estudos referentes a este órgão dentro do grupo são escassos e antigos, os quais se focam, sobretudo, na fisiologia e função. Para tanto, espécimens adultos foram dissecados em solução fisiológica e os túbulos de Malpighi retirados e fixados de acordo com a técnica a ser utilizada. Segundo os resultados aqui encontrados, a espécie possui um longo par de túbulo de Malpighi, conforme o padrão observado no grupo. Sua inserção ocorre no piloro, de onde parte e percorre praticamente todo o corpo do animal, desde a região do íleo (intestino posterior) até a região anterior, onde encontra-se intimamente associado ao intestino anterior a às glândulas salivares. Ao longo de sua extensão é possível encontrar diferentes tipos de células / Abstract: Millipedes, popularly known in Brazil as millipede, emboá or gongolô, have a cosmopolitan distribution and represent a class of Myriapoda. They may become an important agricultural pest and cause damage if a decrease in the amount of usual food occurs. Millipedes' infestations and outbreaks have occurred in various parts of the world and may damage crops and disorders in urban areas. The species Urostreptus atrobrunneus has been showing population outbreaks in recent years in São Paulo state, with the potential to become an agricultural and urban pest. Its control is difficult due to the lack of information about the group and the small number of studies concerning its biology and morphology. In this aspect, the present work aims to contribute with information about morphology, ultrastructure and distribution of the U. atrobrunneus Malpighian tubule and collaborate to the understanding of its biology. Malpighian tubules studies in this group are scarce and old, which focus mainly on the physiology and function. For this purpose, adult specimens were dissected in saline solution and the Malpighian tubules were removed and fixed in accordance with the technique being used. According to the results found here, this species has a long pair of Malpighian tubule, as the pattern observed in the group. Its insertion occurs at the pylorus; the Malpighian tubules leaves this region and covers practically the whole animal body, since the region of the ileum (hindgut) up to the anterior region, which is closely associated with the foregut and the salivary glands. Throughout its length it is possible to find different types of cells / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T20:29:32Z : No. of bitstreams: 1 souza_rb_me_rcla.pdf: 714471 bytes, checksum: cd89a75efa191dae5cb68b297e68035c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Milípedes, popularmente conhecidos no Brasil como piolho-de-cobra, emboá ou gongolô, apresentam distribuição cosmopolita e constituem uma das classes de Myriapoda. Podem se tornar importantes pragas agrícolas e causar prejuízos caso haja uma diminuição na quantidade de alimento habitual. Infestações e surtos populacionais de milípedes têm ocorrido em várias partes do mundo, sendo responsáveis por danos em plantações e transtornos em áreas urbanas. A espécie Urostreptus atrobrunneus vem apresentando surtos populacionais nos últimos anos no estado de São Paulo, com potencial de se tornar uma praga agrícola e urbana. O controle da mesma torna-se difícil diante da falta de informação sobre o grupo e do escasso número de estudos referentes à biologia e morfologia dos mesmos. Neste aspecto, o presente trabalho pretende contribuir com informações sobre a morfologia, ultra-estrutura e distribuição dos túbulos de Malpighi do diplópodo U. atrobrunneus, colaborando com subsídios para o entendimento de sua biologia e, assim, contribuir para a elaboração de ações eficazes para seu controle quando em expansão populacional. Os estudos referentes a este órgão dentro do grupo são escassos e antigos, os quais se focam, sobretudo, na fisiologia e função. Para tanto, espécimens adultos foram dissecados em solução fisiológica e os túbulos de Malpighi retirados e fixados de acordo com a técnica a ser utilizada. Segundo os resultados aqui encontrados, a espécie possui um longo par de túbulo de Malpighi, conforme o padrão observado no grupo. Sua inserção ocorre no piloro, de onde parte e percorre praticamente todo o corpo do animal, desde a região do íleo (intestino posterior) até a região anterior, onde encontra-se intimamente associado ao intestino anterior a às glândulas salivares. Ao longo de sua extensão é possível encontrar diferentes tipos de células / Millipedes, popularly known in Brazil as millipede, emboá or gongolô, have a cosmopolitan distribution and represent a class of Myriapoda. They may become an important agricultural pest and cause damage if a decrease in the amount of usual food occurs. Millipedes’ infestations and outbreaks have occurred in various parts of the world and may damage crops and disorders in urban areas. The species Urostreptus atrobrunneus has been showing population outbreaks in recent years in São Paulo state, with the potential to become an agricultural and urban pest. Its control is difficult due to the lack of information about the group and the small number of studies concerning its biology and morphology. In this aspect, the present work aims to contribute with information about morphology, ultrastructure and distribution of the U. atrobrunneus Malpighian tubule and collaborate to the understanding of its biology. Malpighian tubules studies in this group are scarce and old, which focus mainly on the physiology and function. For this purpose, adult specimens were dissected in saline solution and the Malpighian tubules were removed and fixed in accordance with the technique being used. According to the results found here, this species has a long pair of Malpighian tubule, as the pattern observed in the group. Its insertion occurs at the pylorus; the Malpighian tubules leaves this region and covers practically the whole animal body, since the region of the ileum (hindgut) up to the anterior region, which is closely associated with the foregut and the salivary glands. Throughout its length it is possible to find different types of cells

Orientadora : Profª Drª Vanessa Kava / Coorientadora : Profª Drª Chirlei Glienke / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/11/2014 / Inclui referências : f.65-69;85-90;113-115;118-122 / Área de concentração : Genética / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que causa lesões nas principais variedades de frutos cítricos e, em casos mais severos, causa sua queda prematura, levando a prejuízos de produção e perdas no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, cujos esporos são encontrados em folhas aderidas à planta e em lesões nos frutos na forma assexuada (picnidiósporos), e na forma sexuada (ascósporos) em folhas em decomposição no solo. Neste trabalho foram investigados os mecanismos que desencadeiam o ciclo sexual em diferentes isolados de Phyllosticta citricarpa, obtidos de diferentes regiões geográficas e de diferentes hospedeiros, buscando reconhecer sistemas de compatibilidade existentes. Testes de compatibilidade em variadas condições descritas na literatura e em outras condições propostas neste estudo foram realizados com 165 isolados de Phyllosticta. Algumas condições ensaiadas, previamente descritas na literatura, mostraram-se inadequadas para ensaios de compatibilidade entre diferentes isolados de P. citricarpa. Estruturas semelhantes a corpos de frutificação imaturos foram observadas na zona de encontro entre os isolados LGMF 76 e 114, porém não foram obtidos ascósporos. Na produção de ascósporos estão envolvidos os genes mating type (MAT) que regulam o desenvolvimento da reação sexual. Estes genes foram identificados após o desenho de primers específicos para esta espécie, com o objetivo de caracterizar este importante fitopatógeno quanto à dinâmica de recombinação possível em campo. Dos 148 isolados investigados, 21,62% apresentaram o gene MAT 1-1-1, 78,38% o gene MAT1-2-1. Considerando que os ascósporos, desempenham um papel importante no ciclo da Mancha Preta dos Citros, condições de produção e liberação destes esporos foram recriadas em laboratório com o desenvolvimento de caixas com temperatura, ventilação e umidade controlada, onde plantas axênicas desenvolvidas a partir do embrião de sementes de citros e livres de microrganismos foram utilizadas. Ainda, aspectos da colonização dos frutos pelo fitopatógeno foram investigados, avaliando-se a relação entre o crescimento, colonização de folhas e produção de picnídios frente aos principais terpenos produzidos na casca dos frutos cítricos e que comprovadamente exercem um papel no processo de atração de pragas e patógenos. Em todos os testes realizados foi possível detectar que os terpenos influenciam de diferentes formas o crescimento e a produção de picnídios de P. citricarpa. Este pode ser mais um passo no entendimento do mecanismo de interação entre planta-patógeno, podendo se tornar uma futura forma de controle dessa doença. Palavras - chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, mating type, terpenos, interação planta-patógeno / Abstract: The citrus black spot (CBS) is a disease that causes lesions on the main varieties of citrus fruits and, in more severe cases, causes its premature drop, leading to production and consumer market losses. It is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, whose spores are found over leafs attached to the plant and in the lesions of fruits in the asexual form (pycnidiospores), and in the sexual form (ascospores) in decomposing leafs in the soil. The present study investigated the mechanisms that trigger the sexual cycle in different isolates of Phyllosticta citricarpa, obtained from different geographic regions and different hosts, seeking to recognize existing compatibility systems. Compatibility tests on various conditions described in the literature and in other conditions proposed in this study were performed with 165 Phyllosticta isolates. Some conditions tested, previously described in the literature, have proved inadequate for testing compatibility between different isolates of P. citricicarpa. Structures similar to immature fruiting bodies were observed in the area of contact between the isolates LGMF 76 and 114, however ascospores were not obtained. The production of ascospores involves the mating type (MAT) genes which regulate the development of sexual response. These genes were identified after drawing primers specific for this species, with the objective of characterizing this important phytopathogen regarding the dynamics of possible field recombination. Of the 148 isolates investigated, 21.62% presented the MAT 1-1-1 gene and 78.38% the MAT1-2-1 gene. Considering that the ascospores play an important role in the citrus black spot cycle, production conditions and release of these spores were recreated in the laboratory with the development of boxes with controlled temperature, ventilation and humidity, where axenic plants grown from the embryo of citrus seeds and free from microorganisms were utilized. Still, aspects of colonization of the fruit by the phytopathogen were investigated by evaluating the relationship among growth, leaf colonization and production of pycnidia front of the main terpenes produced in the peel of citrus fruits and proven to play a role in the process of attraction of pests and pathogens. In all tests conducted it was possible to detect that the terpenes influence in different ways the growth and production of P. citricarpa pycnidia. This can be another step in the understanding of the mechanism of interaction between plant-pathogen, and may become a future way of controlling this disease. Key - words: citrus black spot, Phyllosticta citricarpa, mating type, terpenes, plant-pathogen interaction

O gênero Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) é representado por 30 espécies de importância por incluir grande parte dos insetos que causam danos significat ivos a diversas culturas de interesse econômico cult ivada pelo homem. Entretanto, existem poucos estudos detalhados de biologia, especialmente relacionados a aspectos reprodutivos. Este estudo objet ivou desenvolver e validar uma metodologia que permita detalhar os parâmetros biológicos de representantes de Lepidoptera, para permit ir comparações intra e interespecíficas em condições controladas (25 ± 1ºC, 70 ± 10% UR e fotofase de 14 horas) e reunir informações sobre as plantas hospedeiras de suas lagartas. Para tanto foram empregadas e validadas novas metodologias de criação e dieta artificial. Nas fases imaturas observou-se que a viabilidade das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foram de 94,54; 97,33; 93,84 e 92,34%, para S. albula, e de 97,82; 93,62; 96,42 e 97,03% para S. eridania, respectivamente. A duração média das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foi de 4,14; 16,37; 1,69; e 9,34 dias, para S. albula e de 4,00; 16,18; 1,58; e 9,17 dias, para S. eridania. Na fase de larva observou-se que para ambas as espécies a maioria dos espécimes passaram por seis instares, com protandria larval significat iva. Foram relacionadas 55 plantas hospedeiras para S.albula e 202 para S. eridania. A longevidade das fêmeas foi significativamente maior que a dos machos para ambas as espécies. Os períodos médios de pré, pós e oviposição foram de 2,615; 1,769 e 9,385 dias, respectivamente para S. albula e 2,067; 0,600 e 8,133 para S. eridania. A fecundidade média foi de 1.417,69 ovos e a fertilidade 1.340,401 lagartas por fêmea para S. albula e 1.398.00 e 1.367.50 para S. eridania. Em média as fêmeas copularam 1,2 vezes. Observou-se forte correlação posit iva entre o número de cópulas e a fecundidade e, forte correlação negativa, entre o número de cópulas e a duração do período de pré-oviposição e a longevidade. O potencial biótico de S. albula e S. eridania foi estimado em 8,768 x 1022 e 1,894 x 1025 indivíduos/fêmea/ano respectivamente. A taxa líquida de reprodução (Ro), o tempo médio de geração, e a taxa intrínseca de aumento (rm) para S. albula e S.eridania foram respectivamente, 353,904; 560,531 vezes por geração, 37,187; 35,807 dias e 1,105; 0,177, com uma razão finita de aumento de (λ) 3,019 e (λ) de 1,193. Tanto a metodologia de criação quanto a dieta larval mostraram-se adequadas, pois permit iram alta sobrevivência, fertilidade e um melhor detalhamento das observações relacionadas ao ciclo biológico, especialmente do estágio larval. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T11:38:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Goulart Montezano.pdf: 2988963 bytes, checksum: cc4905da590ba9141c3bfa39949e880b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T11:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Goulart Montezano.pdf: 2988963 bytes, checksum: cc4905da590ba9141c3bfa39949e880b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) is represented by 30 species of great importance to encompass most of the insects that cause significant damage to several economically important crops cult ivated by man. However, there are few detailed studies of biology, especially related to reproductive aspects. This study aimed to develop and validate a methodology to detail the biological parameters of representatives of Lepidoptera, particularly S. eridania and S. albula to allow comparisons intra and interspecific under controlled condit ions (25 ± 1 º C, 70 ± 10% RH and 14h photophase) and gather informat ion about the host plants for their larvae. For both were employed and validated new methods of creation and artificial diet. In the immature stages was observed that the viability of the egg, larva, pupa and pre-pupae were 94.54, 97.33, 93.84 and 92.34% for S. albula, and 97.82, 93.62, 96.42 and 97.03% for S. eridania, respectively. The average duration of the stages of egg, larva, pupa and pre-pupa was 4.14, 16.37, 1.69, and 9.34 days for S. albula and 4.00, 16.18, 1.58, and 9.17 days for S. eridania. At the stage of larvae was observed that for both species passed through six instar, with significant larval protandry. 55 host plants were related for S. albula and 202 for S. eridania. The longevity of females was significant ly higher than in males for both species. The average periods of pre, post and oviposit ion were 2.615, 1.769 and 9.385 days, respectively for S. albula and 2.067, 0.600 and 8.133 for S. eridania. The average fecundity was 1.417,69 egss 1.340,401 larvae per female for S. albula and 1.398.00 and 1.367.50 to S. eridania. On average females mated 1.2 times. There was a strong posit ive correlation between the number of mat ings and fecundity, and a strong negat ive correlat ion between the number of copulations and duration of pre-oviposit ion and longevity. The biot ic potential of S. albula and S. eridania was estimated at 8,768 x 1022 and 1,894 x 1025 individuals / female / year respectively. The net reproductive rate (Ro), mean generat ion time and intrinsic rate o f increase (rm) for S. albula and S.eridania were respectively 353.904, 560.531 times per generation, 37.187, 35.807 days and 1.105, 0.177, with a finite rate of increase (λ) and 3.019 (λ) of 1.193. Both the methodology of creation as the larval diet were suitable, because they enabled high survival, fert ility and much more detail of the observat ions related to the biological cycle, especially the larval stage.