O desenvolvimento de uma matriz de colágeno associado à gelatina tem potencial como biomaterial devido sua alta biocompatibilidade, capacidade de alterar suas propriedades físico-químicas e estruturais por modificações químicas e a habilidade de formar géis estáveis. Porém, um ponto negativo de sua aplicação está na biodegradabilidade. Desta forma, para reduzir esta degradação, agentes de reticulação, como a proantocianidina (PA), que age formando ligações de hidrogênio as quais estabilizam o complexo proteína-PA, podem ser empregados. Este trabalho teve como objetivo a obtenção de hidrogéis neutros de colágeno aniônico:gelatina:extrato de semente de uva. Para tanto, foram utilizadas duas proporções de extrato, 0,25 e 0,50% e três diferentes tempos de hidrólise alcalina do colágeno, 24, 72 e 120 horas, gerando nove diferentes biomateriais, incluindo os hidrogéis sem tratamento com o extrato. O colágeno foi extraído de tendão bovino e o agente reticulante foi o extrato de semente de uva cujo componente majoritário é a proantocianidina. A caracterização foi feita por termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia de absorção no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), cinética de absorção de água e ensaios de citotoxicidade in vitro, pelos métodos de difusão em ágar e difusão de extrato em solução (MTT). Estudos de TG mostraram a perda de água em um processo único, representando em média 95% do hidrogel. As curvas DSC mostraram que quanto maior a concentração de extrato, maior é a temperatura de desnaturação, aumentando em média 6,8°C com a adição de 0,50% de extrato, o que indica a eficácia da proantocianidina na reticulação do colágeno. Além disso, notaram-se temperaturas menores para maiores tempos de hidrólise alcalina do colágeno, sendo de 58,4°C, 49,7°C e 46,5°C para hidrogéis preparados com colágeno 24, 72 e 120 horas, respectivamente. A presença do extrato não causou alterações significativas nos espectros FTIR, apenas surgimento das bandas em 1118 e 1288 cm-1 referentes ao anel aromático da proantocianidina, mas gerou mudanças nas estruturas internas dos hidrogéis, visualizadas por MEV, como aumento do número de poros e interconectividade entre eles. A cinética de absorção de água mostrou que o equilíbrio é atingido em aproximadamente 10 minutos, indicando vantagem para a aplicação do hidrogel, já que é obtido rapidamente a partir de sua forma liofilizada, adequada para o armazenamento. Também foi observado que quanto menor é o tempo de hidrólise, maiores são as absorções, variando de 540 até 1360%. Com os ensaios de citotoxicidade foi possível concluir que o hidrogel C24GE50 mostrou-se mais adequado para uma aplicação como biomaterial, com um índice de 92,7% de sobrevivência celular. / The development of a collagen matrix associated with gelatin has potential as biomaterial due to its high compatibility, ability to change its physical-chemical and structural properties by chemical modifications and also the ability to form stable gels. However, a negative point of its application is the biodegradability. Thus, to reduce this degradation, crosslinking agents, such as proanthocyanidin (PA), which acts forming hydrogen bonds which stabilize the PA protein complex may be employed. This project aimed to obtain neutral hydrogels prepared by mixture of anionic collagen: gelatin: grape seed extract. It was used two extract proportions (0.25 and 0.50%) and three different periods of time for collagen alkaline hydrolysis (24, 72, 120 hours), giving nine different biomaterials, including hydrogels without treatment with the extract. The collagen was extracted from bovine tendon and the crosslinking agent was grape seed extract whose major component is the proanthocyanidin. The characterization was done by thermogravimetry (TG), differential scanning calorimetry (DSC), Fourier transform infrared spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), water absorption kinetics and in vitro cytotoxicity assays, by agar diffusion method and diffusion of extract in solution (MTT). TG results showed loss of water in a single process, representing about 95% of the hydrogel.DSC curves showed that the higher the concentration of the extract, the higher the melting temperature, increasing on average 6.8 °C with the addition of 0.50% extract, which indicates the effectiveness of the proanthocyanidin crosslinking of the collagen. Moreover, lower temperatures were observed for longer periods of alkaline hydrolysis of collagen, being 58.4°C, 49.7°C and 46.5°C for preparations with 24, 72 and 120 hours, respectively. The presence of the extract did not cause significant changes in the FTIR spectra, only appearance of bands at 1118 and 1288 cm-1 related to the aromatic ring of proanthocyanidin but led to changes in internal structures of the hydrogels viewed by SEM, showing increased number of pores and interconnectivity between them. The water absorption kinetics showed that the equilibrium is achieved in approximately 10 minutes, indicating advantages in using this hydrogel, which is quickly obtained from its lyophilized form, a suitable form for storage. It was also observed that the shorter the time of hydrolysis, the greater the absorptions, ranging from 540 to 1360%. It was possible to conclude from the cytotoxicity analysis that the C24GE50 is more suitable for application as a biomaterial, with an index of 92.7% cell survival.

O objetivo deste trabalho foi elucidar a interação entre a proantocianidina (PA), um agente natural e não tóxico de ligação cruzada, e o colágeno dentinário tipo I. A hipótese proposta é que o modelamento de uma dentina desmineralizada mais resistente e com melhores propriedades propiciará um substrato mais estável e íntegro para restaurações adesivas. Para isto, o estudo foi dividido em 4 fases: 1) Validação da PA como agente exógeno de ligação cruzada, testando matrizes de dentina desmineralizadas tratadas com extratos a base de PA em teste microflexural para análise do módulo de elasticidade (ME), variando o tempo de exposição (10, 30, 60, 120, 240 min), o tipo de extrato usado (semente de uva-GSE, semente de cacau-CSE, oxicoco-CRE, canela-CNE e açaí-ACE) e a longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses); 2) Estudar parâmetros relacionados às soluções de PA, como solubilidade (água, etanol e acetona), fonte (GSE e CSE) e concentração (0,65%, 3,25%, 6,5%, 15% e 30%), através da mensuração do ME pelo teste micro-flexural de matrizes de dentina desmineralizada; 3) Caracterização da dentina tratada com PA (GSE e CSE), sorção de água, calorimetria e degradação enzimática; 4) Analisar a resistência de união entre a dentina tratada com PA (GSE/CSE) e sistemas de adesivos comerciais (Adapter Single Bond Plus e One Step Plus), variando a concentração (6,5% e 30%), tempo de exposição (1, 10 e 60 min) e longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses). Foram realizadas análises de variâncias e teste de contraste de médias, quando necessário, para todos os ensaios. Os resultados de ME foram influenciados pelo tratamento com PA, dependendo do tipo de extrato usado, exibindo os melhores resultados para o maior tempo de exposição (240 min) para os extratos GSE e CSE. Embora os resultados imediatos com os extratos CRE e CNE não tenham aumentado, estes se mantiveram constantes apos 1 ano de armazenamento, o que não aconteceu para o ACE e os grupos controles. A solubilidade das soluções é influenciada diretamente pelo modo de extração e manufaturação dos extratos, sendo que GSE é solúvel em água destilada e CSE em acetona-água. A efetividade do GSE mostrou ser concentração-dependente, exibindo o maior ME para a concentração de 30%. A dentina tratada com agentes a base de PA foi mais resistente contra a colagenase, obteve uma menor sorção de água e um aumento significativo na temperatura de desnaturação quando comparada ao grupo controle. O GSE foi capaz de aumentar a resistência de união (RU) imediata para ambos os sistemas adesivos, mantendo-se constante para o Adapter Single Bond Plus ao longo do tempo. Para o One Step Plus todos os grupos mostraram diminuição da RU após 1 ano, independente do tempo de exposição. Quando a dentina foi tratada por 1 minuto, os valores de RU para o grupo 30% de GSE foram maiores do que os demais e mantiveram-se constante pelo período de armazenamento. O efeito dos agentes ricos em PA mostrou ser concentração e tempo dependente, porém uma dentina mais resistente e estável ao longo do tempo é possível de ser obtida, levando-se em conta a estrutura química, conteúdo de PA, solubilidade e outros fatores inerentes ao extrato / The aim of this study was to elucidate the interaction between proanthocyanidin based extracts (PA), a natural and non-toxic cross-linker, and type I dentin collagen. The hypothesis is that if a stronger and more stable collagen layer is chemically engineered, the resultant hybrid layer will be stronger and less prone to degradation. So, this research was divided into four phases: 1) PA validation as an exogenous cross-linking agent, testing the elastic modulus (E) of demineralized dentin treated with various PA based extracts (grape seed-GSE, cocoa seed-CSE, cranberry-CRE, cinnamon-CNE, and açai berry-ACE), exposure times (10, 30, 60, 120, 240 min), and long term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months); 2) Evaluation of different parameters related to PA solutions, like solubility (water, ethanol and acetone), manufacturer (GSE and CSE) and concentration (0.65%, 3.25% 6.5%, 15% and 30%), E was also obtained by micro-flexural strength measurements of demineralized dentin matrix, 3) Characterization of PA treated dentin (GSE and CSE): water sorption, calorimetry and enzymatic degradation and 4) Analyze the bond strength ( BS) of PA treated dentin (GSE / CSE) with commercial adhesives systems (Adapter Single Bond Plus-SB and One Step Plus-OS), varying concentration (6.5% and 30%), exposure time (1, 10 and 60 min) and long-term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months). Data were statistically analyzed at a 95% confidence interval. GSE and CSE extracts showed a time-dependant effect and were able to improve and stabilize the E of the organic matrix. CRE and CNE extracts were able to maintain the E of collagen matrices constant after 12 months artifical saliva storage. ACE and controls groups showed no effect over dentin organic matrix, did not prevent degradation and consequently reduced the mechanical properties. Herbal extraction process and other pharmacognostic parameters have an important influence on extract solubility as well as constitution, therefore GSE is better dissolved in water and CSE in acetone-water. GSE effect on demineralized dentin is concentration-dependant, with highest E values at 30% GSE concentration. Dentin treated with PA-based agents was more resistant against enzymatic degradation, less susceptible to water sorption and showed a higher denaturation temperature. As compared to the controls, GSE stabilized the dentin-resin bond strength values over a period of one year for both adhesives, however better results were achieved with SB. CSE showed less predictable results depending on the adhesive system used. One minute treatment with 30% GSE was capable of increasing short-term BS and stabilizing it for at least 6 months. Increased mechanical properties and stability of dentin matrix can be achieved by the use of PA-rich collagen crosslinkers regarding inherent characteristics of the natural compounds as chemical structure, solubility and PA content.

O desenvolvimento de uma matriz de colágeno associado à gelatina tem potencial como biomaterial devido sua alta biocompatibilidade, capacidade de alterar suas propriedades físico-químicas e estruturais por modificações químicas e a habilidade de formar géis estáveis. Porém, um ponto negativo de sua aplicação está na biodegradabilidade. Desta forma, para reduzir esta degradação, agentes de reticulação, como a proantocianidina (PA), que age formando ligações de hidrogênio as quais estabilizam o complexo proteína-PA, podem ser empregados. Este trabalho teve como objetivo a obtenção de hidrogéis neutros de colágeno aniônico:gelatina:extrato de semente de uva. Para tanto, foram utilizadas duas proporções de extrato, 0,25 e 0,50% e três diferentes tempos de hidrólise alcalina do colágeno, 24, 72 e 120 horas, gerando nove diferentes biomateriais, incluindo os hidrogéis sem tratamento com o extrato. O colágeno foi extraído de tendão bovino e o agente reticulante foi o extrato de semente de uva cujo componente majoritário é a proantocianidina. A caracterização foi feita por termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia de absorção no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), cinética de absorção de água e ensaios de citotoxicidade in vitro, pelos métodos de difusão em ágar e difusão de extrato em solução (MTT). Estudos de TG mostraram a perda de água em um processo único, representando em média 95% do hidrogel. As curvas DSC mostraram que quanto maior a concentração de extrato, maior é a temperatura de desnaturação, aumentando em média 6,8°C com a adição de 0,50% de extrato, o que indica a eficácia da proantocianidina na reticulação do colágeno. Além disso, notaram-se temperaturas menores para maiores tempos de hidrólise alcalina do colágeno, sendo de 58,4°C, 49,7°C e 46,5°C para hidrogéis preparados com colágeno 24, 72 e 120 horas, respectivamente. A presença do extrato não causou alterações significativas nos espectros FTIR, apenas surgimento das bandas em 1118 e 1288 cm-1 referentes ao anel aromático da proantocianidina, mas gerou mudanças nas estruturas internas dos hidrogéis, visualizadas por MEV, como aumento do número de poros e interconectividade entre eles. A cinética de absorção de água mostrou que o equilíbrio é atingido em aproximadamente 10 minutos, indicando vantagem para a aplicação do hidrogel, já que é obtido rapidamente a partir de sua forma liofilizada, adequada para o armazenamento. Também foi observado que quanto menor é o tempo de hidrólise, maiores são as absorções, variando de 540 até 1360%. Com os ensaios de citotoxicidade foi possível concluir que o hidrogel C24GE50 mostrou-se mais adequado para uma aplicação como biomaterial, com um índice de 92,7% de sobrevivência celular. / The development of a collagen matrix associated with gelatin has potential as biomaterial due to its high compatibility, ability to change its physical-chemical and structural properties by chemical modifications and also the ability to form stable gels. However, a negative point of its application is the biodegradability. Thus, to reduce this degradation, crosslinking agents, such as proanthocyanidin (PA), which acts forming hydrogen bonds which stabilize the PA protein complex may be employed. This project aimed to obtain neutral hydrogels prepared by mixture of anionic collagen: gelatin: grape seed extract. It was used two extract proportions (0.25 and 0.50%) and three different periods of time for collagen alkaline hydrolysis (24, 72, 120 hours), giving nine different biomaterials, including hydrogels without treatment with the extract. The collagen was extracted from bovine tendon and the crosslinking agent was grape seed extract whose major component is the proanthocyanidin. The characterization was done by thermogravimetry (TG), differential scanning calorimetry (DSC), Fourier transform infrared spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), water absorption kinetics and in vitro cytotoxicity assays, by agar diffusion method and diffusion of extract in solution (MTT). TG results showed loss of water in a single process, representing about 95% of the hydrogel.DSC curves showed that the higher the concentration of the extract, the higher the melting temperature, increasing on average 6.8 °C with the addition of 0.50% extract, which indicates the effectiveness of the proanthocyanidin crosslinking of the collagen. Moreover, lower temperatures were observed for longer periods of alkaline hydrolysis of collagen, being 58.4°C, 49.7°C and 46.5°C for preparations with 24, 72 and 120 hours, respectively. The presence of the extract did not cause significant changes in the FTIR spectra, only appearance of bands at 1118 and 1288 cm-1 related to the aromatic ring of proanthocyanidin but led to changes in internal structures of the hydrogels viewed by SEM, showing increased number of pores and interconnectivity between them. The water absorption kinetics showed that the equilibrium is achieved in approximately 10 minutes, indicating advantages in using this hydrogel, which is quickly obtained from its lyophilized form, a suitable form for storage. It was also observed that the shorter the time of hydrolysis, the greater the absorptions, ranging from 540 to 1360%. It was possible to conclude from the cytotoxicity analysis that the C24GE50 is more suitable for application as a biomaterial, with an index of 92.7% cell survival.

O objetivo deste trabalho foi elucidar a interação entre a proantocianidina (PA), um agente natural e não tóxico de ligação cruzada, e o colágeno dentinário tipo I. A hipótese proposta é que o modelamento de uma dentina desmineralizada mais resistente e com melhores propriedades propiciará um substrato mais estável e íntegro para restaurações adesivas. Para isto, o estudo foi dividido em 4 fases: 1) Validação da PA como agente exógeno de ligação cruzada, testando matrizes de dentina desmineralizadas tratadas com extratos a base de PA em teste microflexural para análise do módulo de elasticidade (ME), variando o tempo de exposição (10, 30, 60, 120, 240 min), o tipo de extrato usado (semente de uva-GSE, semente de cacau-CSE, oxicoco-CRE, canela-CNE e açaí-ACE) e a longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses); 2) Estudar parâmetros relacionados às soluções de PA, como solubilidade (água, etanol e acetona), fonte (GSE e CSE) e concentração (0,65%, 3,25%, 6,5%, 15% e 30%), através da mensuração do ME pelo teste micro-flexural de matrizes de dentina desmineralizada; 3) Caracterização da dentina tratada com PA (GSE e CSE), sorção de água, calorimetria e degradação enzimática; 4) Analisar a resistência de união entre a dentina tratada com PA (GSE/CSE) e sistemas de adesivos comerciais (Adapter Single Bond Plus e One Step Plus), variando a concentração (6,5% e 30%), tempo de exposição (1, 10 e 60 min) e longevidade (imediato, 3, 6 e 12 meses). Foram realizadas análises de variâncias e teste de contraste de médias, quando necessário, para todos os ensaios. Os resultados de ME foram influenciados pelo tratamento com PA, dependendo do tipo de extrato usado, exibindo os melhores resultados para o maior tempo de exposição (240 min) para os extratos GSE e CSE. Embora os resultados imediatos com os extratos CRE e CNE não tenham aumentado, estes se mantiveram constantes apos 1 ano de armazenamento, o que não aconteceu para o ACE e os grupos controles. A solubilidade das soluções é influenciada diretamente pelo modo de extração e manufaturação dos extratos, sendo que GSE é solúvel em água destilada e CSE em acetona-água. A efetividade do GSE mostrou ser concentração-dependente, exibindo o maior ME para a concentração de 30%. A dentina tratada com agentes a base de PA foi mais resistente contra a colagenase, obteve uma menor sorção de água e um aumento significativo na temperatura de desnaturação quando comparada ao grupo controle. O GSE foi capaz de aumentar a resistência de união (RU) imediata para ambos os sistemas adesivos, mantendo-se constante para o Adapter Single Bond Plus ao longo do tempo. Para o One Step Plus todos os grupos mostraram diminuição da RU após 1 ano, independente do tempo de exposição. Quando a dentina foi tratada por 1 minuto, os valores de RU para o grupo 30% de GSE foram maiores do que os demais e mantiveram-se constante pelo período de armazenamento. O efeito dos agentes ricos em PA mostrou ser concentração e tempo dependente, porém uma dentina mais resistente e estável ao longo do tempo é possível de ser obtida, levando-se em conta a estrutura química, conteúdo de PA, solubilidade e outros fatores inerentes ao extrato / The aim of this study was to elucidate the interaction between proanthocyanidin based extracts (PA), a natural and non-toxic cross-linker, and type I dentin collagen. The hypothesis is that if a stronger and more stable collagen layer is chemically engineered, the resultant hybrid layer will be stronger and less prone to degradation. So, this research was divided into four phases: 1) PA validation as an exogenous cross-linking agent, testing the elastic modulus (E) of demineralized dentin treated with various PA based extracts (grape seed-GSE, cocoa seed-CSE, cranberry-CRE, cinnamon-CNE, and açai berry-ACE), exposure times (10, 30, 60, 120, 240 min), and long term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months); 2) Evaluation of different parameters related to PA solutions, like solubility (water, ethanol and acetone), manufacturer (GSE and CSE) and concentration (0.65%, 3.25% 6.5%, 15% and 30%), E was also obtained by micro-flexural strength measurements of demineralized dentin matrix, 3) Characterization of PA treated dentin (GSE and CSE): water sorption, calorimetry and enzymatic degradation and 4) Analyze the bond strength ( BS) of PA treated dentin (GSE / CSE) with commercial adhesives systems (Adapter Single Bond Plus-SB and One Step Plus-OS), varying concentration (6.5% and 30%), exposure time (1, 10 and 60 min) and long-term effectiveness (immediate, 3, 6 and 12 months). Data were statistically analyzed at a 95% confidence interval. GSE and CSE extracts showed a time-dependant effect and were able to improve and stabilize the E of the organic matrix. CRE and CNE extracts were able to maintain the E of collagen matrices constant after 12 months artifical saliva storage. ACE and controls groups showed no effect over dentin organic matrix, did not prevent degradation and consequently reduced the mechanical properties. Herbal extraction process and other pharmacognostic parameters have an important influence on extract solubility as well as constitution, therefore GSE is better dissolved in water and CSE in acetone-water. GSE effect on demineralized dentin is concentration-dependant, with highest E values at 30% GSE concentration. Dentin treated with PA-based agents was more resistant against enzymatic degradation, less susceptible to water sorption and showed a higher denaturation temperature. As compared to the controls, GSE stabilized the dentin-resin bond strength values over a period of one year for both adhesives, however better results were achieved with SB. CSE showed less predictable results depending on the adhesive system used. One minute treatment with 30% GSE was capable of increasing short-term BS and stabilizing it for at least 6 months. Increased mechanical properties and stability of dentin matrix can be achieved by the use of PA-rich collagen crosslinkers regarding inherent characteristics of the natural compounds as chemical structure, solubility and PA content.

Apesar da capacidade regenerativa da dentina já ser bem estabelecida, este processo pode ser insuficiente no caso de injúrias decorrentes de traumas e/ou lesões cariosas extensas, podendo levar à exposição pulpar e perda de sua vitalidade. Assim, pesquisas recentes no campo da engenharia tecidual têm identificado materiais e substâncias que poderiam ser utilizadas como biomodificadores da dentina e auxiliares na regeneração do complexo dentina-polpa. Entre eles estão os extratos ricos em proantocianidina, um composto fenólico bioativo presente no extrato de semente de uva (GSE). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial estimulatório de quatro concentrações crescentes do GSE na atividade funcional de células odontoblastoides. Foram utilizadas células de camundongo da linhagem MDPC-23, cultivadas em garrafas de cultura até a subconfluência. Em seguida, as células foram cultivadas em placas de 24 poços em uma concentração de 104/poço e divididas em cinco grupos: células sem adição do GSE, células + 0.1 µg/mL de GSE; células + 1 µg/mL de GSE; células + 10 µg/mL de GSE; células + 20 µg/mL de GSE. Após 3, 7 e 10 dias, foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, detecção e atividade de fosfatase alcalina, quantidade de proteína total, detecção e quantificação de nódulos mineralizados, expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 por meio de PCR em tempo real e sua expressão proteica correspondente por meio de imunolocalização. Os dados obtidos foram analisados quanto à normalidade e submetidos aos testes estatísticos ANOVA e Kruskal-Wallis, com nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados mostraram proliferação e viabilidade celular com as concentrações mais baixas de GSE (0,1 e 1 µg/mL), assim como a atividade de síntese de proteínas totais e da fosfatase alcalina. A deposição de nódulos mineralizados foi significativamente maior com a concentração de 1 µg/mL do extrato. Esta mesma concentração favoreceu a expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 e a secreção das proteínas correspondentes vistas por imunolocalização. Conclui-se que baixas concentrações do extrato de semente de uva podem influenciar e favorecer a atividade de células odontoblastoides, contribuindo para a regeneração dentinária, devido à suas características antioxidantes e biomineralizadoras / The process of dentinogenesis generally involves several steps of cell differentiation, culminating with an extracellular matrix very similar to bone tissue. Dentin regeneration may be necessary in cases of pulp exposure, root resorption and carious lesions. Studies on functional regeneration of lost tissues are being carried on recently, based on the presence of cells, scaffolds and/or substances that induce cell proliferation and differentiation. Among the several substances which can interact with cell metabolism are the extracts rich in proanthocyanidin, bioactive phenolic compounds present in fruits, vegetables and seeds. The purpose of this project is to evaluate the stimulatory potential of four different concentrations of grape seed extract (GSE) in the functional activity of odontoblast-like cells. MDPC-23 cell line was seeded in culture flasks until subconfluence followed by cell seeding in 24-well culture plates in the concentration of 104/well and divided in five groups: 1) cells without GSE, 2) cells + 0,1 µg/mL of GSE; 3) cells + 1 µg/mL of GSE; cells + 10 µg/mL of GSE and cells + 20 µg/mL of GSE. After 3, 7 and 10 days, there were evaluated the following parameters: cell proliferation and differentiation, ALP detection and activity, total protein content, mineralization detection and quantification, as well as the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 through Real Time PCR and their corresponding proteins by means of immunolocalization. Data were analyzed by ANOVA and Kruskal-Wallis statistical tests, with significance level set at 5%. The results demonstrated cell proliferation and viability with low GSE concentrations (0,1 and 1 µg/mL), as well as total protein content and ALP activity. Deposition of mineralized nodules was significantly increased with the GSE concentration of 1 µg/mL. The same concentration favoured the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 as well as the corresponding proteins. It is concluded that low concentrations of grape seed extract may influence functional activity of odontoblast- like cells, contributing to dentin regeneration by means of its antioxidant and biomineralizing properties

Considerando que a Proantocianidina e outros componentes do Cranberry possam inibir as metaloproteinases da dentina quando esta é exposta a ação de agentes erosivos e tal fato pode minimizar o desgaste dentinário, o presente trabalho tem como objetivo avaliar o efeito protetor in vitro de géis à base de extrato de Cranberry e Proantocianidina em diferentes concentrações, aplicados sobre a dentina posteriormente submetida à erosão. Para tal, 150 espécimes de dentina bovina (4 x 4 mm) foram confeccionados e igualmente divididos em 10 grupos: G1- gel de clorexidina a 0,012%; G2- gel placebo; G3- gel a base de extrato de Cranberry a 0,05%; G4- gel a base de extrato de Cranberry a 1%; G5- gel a base de extrato de Cranberry a 5%; G6- gel a base de extrato de Cranberry a 10%; G7- gel a base de Proantocianidina 0,05%; G8- gel a base de Proantocianidina 1%, G9- gel a base de Proantocianidina 5%; G10- gel a base de Proantocianidina 10%. Os diferentes géis foram aplicados uma única vez sobre os espécimes antes do primeiro desafio erosivo durante 5 minutos. Em seguida, os espécimes foram submetidos a 3 ciclagens erosivas seguidas (imersão em bebida à base de Cola por 5 minutos seguido de imersão em saliva artificial por 3 horas) por dia, durante 5 dias. Após as 3 cilclagens erosivas diárias, os espécimes foram mantidos em saliva artificial por 15 horas. A perfilometria foi utilizada para quantificar o desgaste dentinário (&#x3BC;m). Os dados foram analisados pelo teste ANOVA seguido do teste de Fisher (p<0,05). Os resultados (G1: 15,6 ± 2,4b; G2: 23,1 ± 1,4e; G3: 15,1 ± 2,3b; G4: 20,4 ± 1,9cd; G5: 19,0 ± 2,1ac; G6: 18,7 ± 1,4a; G7: 18,2 ± 1,6a; G8: 21,1 ± 1,2d; G9: 19,2 ± 2,6ac; G10: 15,2 ± 2,5b) mostraram que o gel de Cranberry a 0,05% (G3) e gel de Proantocianidina 10% (G10) apresentaram eficácia estatisticamente significante na redução da erosão dentinária em comparação aos outros grupos analisados. / Considering that Proanthocyanidin and other Cranberrys components might inhibit dentin metalloproteinases exposed to erosive agents and it can prevent dental wear, the aim of this in vitro study was to evaluate the effect of Cranberry and Proanthocyanidin gels used in different concentrations on dentin before an erosive challenge. For this purpose, 150 bovine root dentin blocks (4x4mm) were treated by different gels and randomly divided into 10 groups: G1- 0.012% Chlorhexidine Gel (positive control), G2- Placebo gel with no active principle (negative control), G3- 0.05% Cranberry gel, G4- 1% Cranberry gel, G5- 5% Cranberry gel, G6- 10% Cranberry gel, G7- 0.05% Proanthocyanidin gel, G8- 1% Proanthocyanidin gel, G9- 5% Proanthocyanidin gel and G10- 10% Proanthocyanidin gel. The gels were applied over specimens once before the first erosive challenge for 5 minutes. After that, the blocks were subjected to 3 sequential erosive cycles (cola drink for 5 minutes and artificial saliva for 3 hours, each) per day, during 5 days. After 3 daily erosive cycles, the blocks were maintained in artificial saliva for 15 h. Profilometry was used to quantify the dentin wear (&#x3BC;m). Data were analyzed by ANOVA and Fisher\'s test (p<0.05). Results (G1: 15,6 ± 2,4b; G2: 23,1 ± 1,4e; G3: 15,1 ± 2,3b; G4: 20,4 ± 1,9cd; G5: 19,0 ± 2,1ac; G6: 18,7 ± 1,4a; G7: 18,2 ± 1,6a; G8: 21,1 ± 1,2d; G9: 19,2 ± 2,6ac; G10: 15,2 ± 2,5b) showed that 0.05% Cranberry gel (G3) and 10% Proanthocyanidin gel (G10) presented similar results when compared to positive control group (G1), and these three groups showed statistically lowest wear when compared to all other evaluated groups. The results of this study suggest a significant efficacy of Cranberry and Proanthocyanidin gels in preventing wear of dentin subjected to dental erosion in vitro.

Considerando que a Proantocianidina e outros componentes do Cranberry possam inibir as metaloproteinases da dentina quando esta é exposta a ação de agentes erosivos e tal fato pode minimizar o desgaste dentinário, o presente trabalho tem como objetivo avaliar o efeito protetor in vitro de géis à base de extrato de Cranberry e Proantocianidina em diferentes concentrações, aplicados sobre a dentina posteriormente submetida à erosão. Para tal, 150 espécimes de dentina bovina (4 x 4 mm) foram confeccionados e igualmente divididos em 10 grupos: G1- gel de clorexidina a 0,012%; G2- gel placebo; G3- gel a base de extrato de Cranberry a 0,05%; G4- gel a base de extrato de Cranberry a 1%; G5- gel a base de extrato de Cranberry a 5%; G6- gel a base de extrato de Cranberry a 10%; G7- gel a base de Proantocianidina 0,05%; G8- gel a base de Proantocianidina 1%, G9- gel a base de Proantocianidina 5%; G10- gel a base de Proantocianidina 10%. Os diferentes géis foram aplicados uma única vez sobre os espécimes antes do primeiro desafio erosivo durante 5 minutos. Em seguida, os espécimes foram submetidos a 3 ciclagens erosivas seguidas (imersão em bebida à base de Cola por 5 minutos seguido de imersão em saliva artificial por 3 horas) por dia, durante 5 dias. Após as 3 cilclagens erosivas diárias, os espécimes foram mantidos em saliva artificial por 15 horas. A perfilometria foi utilizada para quantificar o desgaste dentinário (&#x3BC;m). Os dados foram analisados pelo teste ANOVA seguido do teste de Fisher (p<0,05). Os resultados (G1: 15,6 ± 2,4b; G2: 23,1 ± 1,4e; G3: 15,1 ± 2,3b; G4: 20,4 ± 1,9cd; G5: 19,0 ± 2,1ac; G6: 18,7 ± 1,4a; G7: 18,2 ± 1,6a; G8: 21,1 ± 1,2d; G9: 19,2 ± 2,6ac; G10: 15,2 ± 2,5b) mostraram que o gel de Cranberry a 0,05% (G3) e gel de Proantocianidina 10% (G10) apresentaram eficácia estatisticamente significante na redução da erosão dentinária em comparação aos outros grupos analisados. / Considering that Proanthocyanidin and other Cranberrys components might inhibit dentin metalloproteinases exposed to erosive agents and it can prevent dental wear, the aim of this in vitro study was to evaluate the effect of Cranberry and Proanthocyanidin gels used in different concentrations on dentin before an erosive challenge. For this purpose, 150 bovine root dentin blocks (4x4mm) were treated by different gels and randomly divided into 10 groups: G1- 0.012% Chlorhexidine Gel (positive control), G2- Placebo gel with no active principle (negative control), G3- 0.05% Cranberry gel, G4- 1% Cranberry gel, G5- 5% Cranberry gel, G6- 10% Cranberry gel, G7- 0.05% Proanthocyanidin gel, G8- 1% Proanthocyanidin gel, G9- 5% Proanthocyanidin gel and G10- 10% Proanthocyanidin gel. The gels were applied over specimens once before the first erosive challenge for 5 minutes. After that, the blocks were subjected to 3 sequential erosive cycles (cola drink for 5 minutes and artificial saliva for 3 hours, each) per day, during 5 days. After 3 daily erosive cycles, the blocks were maintained in artificial saliva for 15 h. Profilometry was used to quantify the dentin wear (&#x3BC;m). Data were analyzed by ANOVA and Fisher\'s test (p<0.05). Results (G1: 15,6 ± 2,4b; G2: 23,1 ± 1,4e; G3: 15,1 ± 2,3b; G4: 20,4 ± 1,9cd; G5: 19,0 ± 2,1ac; G6: 18,7 ± 1,4a; G7: 18,2 ± 1,6a; G8: 21,1 ± 1,2d; G9: 19,2 ± 2,6ac; G10: 15,2 ± 2,5b) showed that 0.05% Cranberry gel (G3) and 10% Proanthocyanidin gel (G10) presented similar results when compared to positive control group (G1), and these three groups showed statistically lowest wear when compared to all other evaluated groups. The results of this study suggest a significant efficacy of Cranberry and Proanthocyanidin gels in preventing wear of dentin subjected to dental erosion in vitro.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:21:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Viviane Hass.pdf: 2803478 bytes, checksum: df63c0c38968187b894f9aa37339ef78 (MD5) Previous issue date: 2015-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study evaluated the effect of application of collagen cross-link agents under time and clinically relevant strategy, through two in vitro and one in situ studies. For in vitro experiment 1, 52 third human molars had exposed the dentin surface, acid etched and distributed according the 8 experimental groups: collagen cross-link agent (6.5% pronthocyanidin [PA], 0.1% UVA-light actived riboflavin [RB], 5% glutaraldehyde [GA] and distilled water as control group [CT], and 2 simplified etch-and-rinse systems (Adper Single Bond Plus [SB] and Tetric N-Bond [TN]. The cross-link agentes were activelly applied for 60 s, bonded and restorated with composite resin. Then, the teeth were sectioned to obtain specimens and tested in immediately [IM] and after 6 months [6M] storage time for microtensile bond strength (μTBS) and nanoleakage (NL), and IM for degree of conversion (DC) and MMP-activity within the hybrid layer. Additional 24 teeth were used by cytotoxicity assay. For in vitro experiment 2, 2 etchant agentes were tested (2%PA with 10% phosphoric acid [ACPA] and 35% phosphoric acid [CT]). Dentin of 16 teeth was exposed, etched, bonded using SB adhesive, and restored with composit resin. These teeth were tested by μTBS, NL in IM and 6M; and MMP-activity within the hybrid layer. Additional 10 teeth had flated the enamel surfaces and tested by enamel bond strength in IM and 6M. For the in situ experiment 3, 40 teeth were used, in which 2 cavities prepared. These cavities were etched, treated according the experiment 1, bonded and restored with composite resin. One restoration for each tooth was tested IM and another was included in a palatal device in cariogenic oral environment [COE] for 10 volunteers during 14 days. The restorations were sectioned and tested by microhardness, μTBS, NL and morphology of the hybrid layer for differential staining technique. All the data were analyzed by 2 way-ANOVA and Tukey’s test (α = 0.05). For experimente 1, all the collagen cross-link agentes were effective to reduce the resin-dentin degradation after 18M e did not exhibit cytotoxic potential, except the GA (p<0.05). For the experiment 2, the PA containing in etchant reduced the resindentin bond degradation (p<0.05) and did not affect the resin-enamel bond strentgh (p>0.05). However for in situ experiment 3, only the PA and GA reduced the resin-dentin degradation (p<0.05) in COE. The collagen cross-link agentes were effective to reduce the resin-dentin degradation, in time and relevant clinically strategy. The GA exhibited cytotoxic potential and should be avoided for clinical use. / O objetivo desse trabalho foi verificar o efeito da aplicação de agentes reticuladores de colágeno em tempo e estratégia clinicamente relevantes, através de dois estudos laboratoriais in vitro e um estudo in situ. Para o experimento 1 in vitro, 52 dentes tiveram a superfície dentinária condicionada, e distribuídos entre 8 grupos experimentais pela combinação dos fatores: agente de tratamento (proantocianidina 6,5% [PA], riboflavina 0,1% ativada pela luz ultravioleta [RB], glutaraldeído [GA] e água destilada como grupo controle [CT]; e os sistemas adesivos (Adper Single Bond Plus [SB] e Tetric NBond [TN]. Os agentes foram aplicados com primers aquosos por 60 s, seguido da aplicação do sistema adesivo e restauração com resina composta. Depois foram seccionados e testados imediatamente (IM) e após 18 meses de armazenamento (18M) para análise da resistência de união à dentina (RU), nanoinfiltração (NI) e em IM para análise do grau de conversão (CG) e atividade de metaloproteinases (MMPs), dentro da camada híbrida. Outros 24 dentes foram utilizados para análise da citotoxicidade. Para o experimento 2 in vitro, foi utilizado 2 condicionadores ácidos (2%PA mais ácido 10% [ACPA] e ácido fosfórico 35% [CT]). Foi exposta a superfície dentinária de 16 dentes, realizado o condicionamento ácido, aplicados o adesivo SB e incrementos de resina composta. Esses dentes foram destinados para análise da RU, NI em IM e após 6 meses de armazenamento (6M) e atividade de MMPs dentro da camada híbrida IM. Outros 10 dentes tiveram planificadas as faces de esmalte para análise da resistência de união ao esmalte (RE), que também foi testada em IM e 6M. Para o experimento 3 in situ, foram utilizados 40 dentes, nos quais foram confeccionadas 2 cavidades em cada dente. Essas cavidades foram condicionadas, aplicados os mesmos agentes reticuladores de colágeno como no experimento 1, sistema adesivo SB e restauradas com resina composta. Uma das restaurações de cada dente foi testada IM e a outra foi fixada em um dispositivo palatino, que foi usado por 14 dias em ambiente cariogênico oral [ACO] por 10 voluntários. Esses dentes foram testados para análise da microdureza, RU, NI e análise histológica da morfologia da camada híbrida. Todos os dados foram submetidos a ANOVA 2 fatores de medidas repetidas e teste de Tukey (α=0,05). Para o experimento 1, todos os agentes foram eficazes para reduzir a degradação da interface de união após 18M e ausentes de citotoxicidade, exceto o GA (p<0,05). Para o experimento 2, a inclusão da PA no condicionamento ácido foi eficaz para reduzir a degradação em dentina (p<0,05) e não afetou a RE (p>0,05). Já para o experimento 3, in situ, apenas a PA e o GA foram eficazes para reduzir a degradação da interface de união à dentina em ACO (p<0,05). Os agentes reticuladores foram eficazes para reduzir a degradação da interface de união à dentina, em tempos e estratégia clinicamente relevantes. Contudo o GA foi considerado potencialmente citotóxico e deveria ser evitado para uso clínico.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FABIANA SIQUEIRA.pdf: 4384235 bytes, checksum: 655ceab1a73a43f410cdb4b5e3773475 (MD5) Previous issue date: 2017-04-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of the present study was evaluate the adhesive properties of eroded dentin with different pH cycling using universal adhesive systems and to evaluate the application of collagen cross-linking agent or MMP inhibitors on the resin-eroded dentin interface, through of three in vitro studies. For the experiment 1, the teeth were randomly assigned into the experimental groups according to the combination of variables: dentin surface (sound dentin and eroded dentin) vs adhesive systems (10 universal adhesives) vs Adhesive strategy [etch-and-rinse (ER) and self-etch (SE)]. The adhesive systems were applied according to the manufacturer's instructions and the teeth were restored. They were sectioned to analysis of microtensile bond strength (μTBS) and nanoleakage (NL). The surfaces of 2 tooth were examined under scanning electron microscopy (SEM) to evaluate the surface characterization after erosive-cycling. For experiment 2, the teeth were randomly assigned into 18 experimental conditions according to the variables: Erosive cycling (eroded dentin with soft drink pH ≈ 2,7 and eroded dentin with citric acid pH 2.3) vs. adhesive systems [Prime & Bond Elect (PBE); Scotchbond Universal Adhesive (SBU); Tetric N-Bond Universal (TEU)] vs Treatment agents [6.5% primer containing proanthocyanidin (PA) and 0.1% riboflavin (RI)]. The surface was treated with primers and the adhesive systems were applied and restored. The samples were sectioned and tested for μTBS, NL and degree of conversion (DC). The surfaces of 2 tooth were examined under SEM to evaluate the surface characterization after erosive-cycling. For experiment 3, the teeth were randomly assigned into 18 experimental conditions according to the variables: Erosive cycling (eroded dentin with soft drink pH ≈ 2,7 and eroded eroded with citric acid pH 2.3) vs. Adhesive Systems (PBE; SBU; TEU) vs Acid pretreatment [control with 37% phosphoric acid;Phosphoric acid containing 2% chlorhexidine (CHXacid) and phosphoric acid containing 3% PA (PAacid)]. The teeth were acid-etched according to each experimental conditions, the adhesive systems were applied and the teeth were restored. The teeth were sectioned and tested for μTBS, NL and DC. Data were submitted to appropriate statistical analysis (α = 0.05). The μTBS values in eroded dentin were statistically lower than sound dentin, independent of the adhesive strategy (p < 0.01) The inclusion of primers containing collagen cross-linking agents in the eroded dentin adhesive protocol improved μTBS values (p <0.001),significantly reduced NL (p <0.004) for all the adhesives tested, as well as improved DC (p <0.03). The use of phosphoric acids containing MMPs inhibitors or collagen cross-linking agent improved μTBS values (p> 0.33), produced a significant reduction of NL (p <0.004) and improved DC (p <0.03). The application of MMP inhibitors (primer or acid etching - containing) were effective to improve the properties of the resin-eroded dentin interface. / O objetivo desse estudo foi avaliar as propriedades adesivas à dentina erosionada utilizando sistemas adesivos universais e verificar o efeito da aplicação de agentes reticuladores de colágeno ou inibidores de Metaloproteinases (MMPs) na interface resina-dentina erosionada, através de três estudos laboratoriais. Para o experimento 1, os dentes foram distribuídos aleatoriamente entre os grupos experimentais de acordo com a combinação das variáveis: superfície dentinária (controle sem erosão e erosionada) vs. sistemas adesivos (10 sistemas adesivos universais) vs.estratégia adesiva [condicionamento convencional (ER) e autocondicionante (SE)].Os sistemas adesivos foram aplicados de acordo com as especificações do fabricante e os dentes foram restaurados. Depois foram seccionados para análise da resistência de união à dentina (μTBS) e nanoinfiltração (NI). A superfície de 2 dentes foi examinada sob microscopia eletrônica de varredura (MEV) para avaliar as características da superfície após ciclagem erosiva. Para o experimento 2, os dentes foram aleatoriamente alocados em 18 condições experimentais de acordo com as variáveis: Ciclagem erosiva (dentina erosionada com coca-cola pH ≈ 2,7 e dentina erosionada com ácido cítrico pH 2,3) vs. Sistemas adesivos [Prime & Bond Elect (PBE), Scotchbond Universal Adhesive (SBU) e Tetric N-Bond Universal (TEU)] vs. Agentes de tratamento [primer contendo 6,5% de roantocianidina (PA) e primer contendo 0,1% de riboflavina (RI)]. Os sistemas adesivos foram aplicados de acordo com as especificações do fabricante após aplicação do primer e restaurados. A seguir, os dentes foram seccionados e testados para análise da μTBS, NI e grau de conversão (GC). A superfície de 2 dentes foi examinada sob MEV para avaliar as características da superfície após erosão. Para o experimento 3, os dentes foram alocados aleatoriamente dentro de 18 condições experimentais de acordo com as variáveis: Ciclagem erosiva (dentina erosionada com coca-cola pH ≈ 2,7 e dentina erosionada com ácido cítrico pH 2,3) vs. Sistemas adesivos (PBE, SBU e TEU) vs. pré-tratamento ácido [controle com ácido fosfórico 37%; Ácido fosfórico contendo 2% de clorexidina (CHXacido) e ácido fosfórico contendo 3% de PA (PAacido)]. Os dentes foram condicionados de acordo com cada grupo experimental, os sistemas adesivos foram aplicados e restaurados com resina composta. Posteriormente, os dentes foram seccionados e testados para análise da μTBS, NI e GC. Todos os dados foram submetidos a ANOVA 3 fatores e teste de Tukey (α = 0,05). Os valores de μTBS em dentina erosionada foi estatisticamente inferior à dentina sadia,independente da estratégia adesiva (p > 0,61). A inclusão de primers contendo agentes reticuladores de colágeno no protocolo adesivo a dentina erosionada,melhorou os valores de μTBS (p < 0,001), diminuiu significativamente a NI (p <0,004) para os adesivos testados, além de melhorar o GC (p < 0,03). A utilização de ácidos fosfórico contendo inibidores de MMPs ou agentes reticuladores de colágeno melhorou os valores de μTBS (p > 0,33), produziu uma redução significativa da NI (p < 0,004) e melhorou o GC (p < 0,03). Os agentes reticuladores independente do veículo (primer ou condicionamento ácido) foram eficazes para melhorar as propriedades da interface resina-dentina erosionada.

Buscou-se minimizar ou prevenir a degradação das fibrilas colágenas, tanto no controle da progressão do desgaste erosivo em dentina, quanto na preservação das interfaces adesivas aí estabelecidas, por meio do uso de agentes antiproteolíticos (clorexidina/CHX e epigalocatequina-3-galato/EGCG) ou, ao mesmo tempo, promotores de ligações cruzadas entre elas (proantocianidina/PAC). O papel de algumas dessas estratégias no estabelecimento, e conservação, de interfaces adesivas em dentina erodida, substrato adverso à interação com materiais adesivos, tem sido, porém, pouquíssimas vezes reportado. Este estudo in vitro propôs-se a avaliar, pois, o efeito de tais agentes, usados como estratégias para prevenção/controle do desgaste, na resistência de união (RU) do conjunto sistema adesivo condicione e lave simplificado-resina composta à dentina erodida, comparada à normal. A dentina superficial oclusal de terceiros molares foi apenas submetida à ação de uma lixa de SiC (granulação 600; 1 min; N: substrato normal) ou sequencialmente a desafio erosivo inicial (Coca-Cola®; 5 min). Recebeu, então, ou não (C: controle/sem aplicação), a aplicação de um dos géis com os seguintes princípios ativos - P: placebo/sem princípio ativo; CHX: digluconato de clorexidina a 0,12%; EGCG: epigalocatequina-3-galato a 400 ?m; PAC: proantocianidina a 10%. Aquela de início desmineralizada ainda foi submetida a ciclagem de pH (Coca-Cola®; imersões de 5 min, 3x/dia, 5 dias; E: substrato erodido). Após condicionamento (H3PO4 a 37%; 15 s; lavagem 30 s; secagem com papel absorvente), o adesivo AdperTM Single Bond 2® foi aplicado em todos os espécimes e a porção coronária, reconstruída com a resina FiltekTM Z350®. Transcorridas 24 h (água destilada/37?C), os espécimes foram seccionados em palitos e testados (?TBS; 0,5 mm/min). As superfícies fraturadas de cada palito foram avaliadas utilizando-se um microscópio digital (50x de aumento). Os valores de RU obtidos foram organizados considerando- se cada dente como unidade experimental e os testes de Análise de Variância a 2 critérios e de Tukey aplicados (?=0,05). Um dente extra para cada grupo foi tratado exatamente como os outros, mas o corante fluorescente rodamina B foi previamente adicionado (0,16 mg/mL) ao sistema adesivo para permitir a avaliação qualitativa da interface adesiva por meio de Microscopia Confocal de Varredura a Laser. Analisando-se os dados obtidos pôde-se observar que, diferentemente da variável aplicação de géis para prevenção/controle do desgaste erosivo (p=0,076), a variável condição do substrato dentinário exerceu influência significante sobre os resultados (p<0,001). Ademais, não houve interação entre elas (p=0,979). Os valores imediatos de RU ao substrato erodido foram, pois, sempre inferiores que aqueles ao substrato normal, independentemente da aplicação, ou não, de qualquer um dos géis para prevenção/controle do desgaste erosivo. Quanto ao padrão de fratura dos palitos testados, as falhas adesivas e mistas foram predominantes em relação às coesivas, independentemente se em dentina ou em resina. Menores porcentagens de falhas coesivas ainda puderam ser verificadas para o substrato erodido, com relação ao normal. No que se refere à análise qualitativa, observou-se, para o erodido, comparado ao normal, independetemente do tratamento para controle do desgaste, camada escura subjacente à de adesivo propriamente, representação da menor concentração de material marcado por rodamina B, bem como tags resinosos com maior comprimento e em maior quantidade. Assim sendo, conclui-se, por ora, que as estratégias estudadas não foram capazes de favorecer, tampouco de prejudicar, o estabelecimento de interface adesiva em dentina erodida. / In order to minimize the degradation of collagen fibrils, both to control the progression of the dentin erosive wear and to preserve adhesive interfaces established there, antiproteolytic (chlorhexidine/CHX and epigallocatechin-3-gallate/EGCG) or, at the same time, collagen cross-linking agents (grape seed proanthocyanidin extract/PAC) started to be successfully used. Some of these strategies in the establishment and preservation of adhesive interfaces on eroded dentin, a substrate adverse to the interaction with adhesive materials, has been seldom reported yet. This in vitro study aimed to evaluate, thus, the effect of such agents, used as strategies for wear preventing/controlling, on bond strength (BS) of a simplified etch-and-rinse adhesive system adhesive plus a resin composite to eroded, and normal (parameter for comparisons) dentin. Superficial occlusal dentin of third molars was only ground with a SiC paper (600-grit; 1 min; N: normal substrate), or subsequently submitted to an initial erosive challenge (Coca-Cola®; 5 min). It, then, received or not (C: control/without application), application of one of the gels with the following active principles - P: placebo/without active principle; CHX: 0.012% chlorhexidine digluconate; EGCG: epigallocatechin-3-gallate at 400 ?m; PAC: 10% proanthocyanidin. Initial demineralized dentin was still submitted to a pH cycling (Coca-Cola®, 5 min immersions, 3x/day, 5 days, E: eroded substrate). After acid-etched (37% H3PO4; 15 sec; 30 sec washing; drying with absorbent paper), the adhesive Adper(TM) Single Bond 2® was applied in all specimens and resin composite buildups were constructed with Filtek(TM)Z350®. After 24 h (distilled water/37?C), specimens were sectioned in beams and tested (?TBS; 0.5 mm/min). Obtained BS values were organized considering each tooth as an experimental unit and two-way ANOVA and Tukey tests were applied (?=0.05). An extra tooth for each group was treated just like the others, but the adhesive system was marked by the addition of rhodamine B (0.16 mg/mL) to allow qualitative evaluation of the adhesive interface by means of Confocal Laser Scanning Microscopy. As opposed to the variable application of gels for wear preventing/controlling (p=0.076), the condition of the dentin substrate had a significant influence on the results (p<0.001). In addition, there was no interaction between them (p=0.979). Immediate BS values to the eroded substrate were always lower than that to the normal substrate, regardless of the application or not of any of the gels for wear preventing/controlling. As for the fracture pattern of the tested beams, adhesive and mixed failures were predominant in relation to the cohesive failures, regardless of whether in dentin or in resin. Lower percentages of cohesive failures could still be verified for the eroded substrate, relative to the normal one. Concerning the qualitative analysis, it was observed, for the eroded substrate, compared to the normal, independently of the treatment for wear preventing/controlling, a dark layer underlying that of the adhesive itself, which represents a lower concentration of rhodamine B-labeled material, as well as resinous tags with greater length and in greater quantity. Therefore, studied strategies were not able either to improve, neither to impair, the establishment of adhesive interface on eroded dentin.