Background: Colorectal cancer is one of the most frequently diagnosed cancers today. Dlg is a tumor suppressor gene commonly silenced in cancer cells. Many colorectal cancer patients are subject to vitamin D3 deficiency and/ or an altered microbiome. Treatment using vitamin D3 or probiotics shown decreased cellular proliferation, invasiveness and induction of apoptosis. This study aimed to knockdown Dlg and map genetic interactions coupled to Dlg downregulation using a Drosophila model. Vitamin D3 and probiotic treatments were performed to investigate mechanism of action and capacity for Dlg rescue. Result and discussion: After vitamin D3 treatment, PGRP-SB1 (p<0.0001) and Drsl2 (p<0.0003) expression was significantly increased. These genes are part of the immune related Toll pathway suggesting its activation. Dlg and Veli (p=0.0042) upregulation could tentatively be through vitamin D receptor regulation of Wnt-signaling pathway, or direct VDR interaction. Traf6 and MPK2 (p38α) (p=0.0049) expression increased after vitamin D3 treatment suggesting MPK2 activation through Traf6. Pro-apoptotic pathways through Fas or Bax and decreased survival through inhibition of Pi3K/Akt and Ras/Raf pathways are also possible outcomes of MPK2 activation. Probiotic treatment increased PGRP-SB1 (p<0.0001) without enhanced Drsl2 expression, possibly activating the Imd pathway. JNK-induced apoptosis through Erg (p<0.0001) induction was speculated and increased Dlg (p=0.0113) expression was seen after probiotic treatment. Conclusion: Vitamin D3 and probiotic treatments increased Dlg expression. Genes linked to polarity, growth and apoptosis were also enhanced suggesting various mechanisms of action. Further studies concerning knockdown and treatments are needed to fully understand the true mechanisms of action and interactions.

The occurrence of coccidiosis is an enormous problem of pheasant farming. The aim of this study is to show, that this disease can be cured by unconventional dietary supplements. Dietary supplements which were used in this study were as follows: prebiotics (Ascophyllum nodosum), probiotics (Lactobacillus fermentum), homeopathics, Sulfacox and scrap from the seed by Vitis vinifera. The experiment took place in the Ranč Daniela farm in the town Hůrka (close to the Horní Planá Town) from 26.7.2014 to 5.10.2014. Six groups of pheasants were made - three experimental groups and one control group. All groups were consisted of 15 individuals. The pheasant Phasianus colchicus was used in this experiment. Dietary supplements were served for two weeks, than the serving stopped for two weeks and continued again. The samples of excrements were tested all the study long using the floatation method in Sheather's sugar solution. The results were marked and evaluated. The favourable effect of Ascophyllum nodosum, homeopatics and Lactobacillus fermentum on the intestinal tract of pheasant was significant.

Devido à limitação do uso de antimicrobianos, alternativas que seguem a linha de controle biológico, como os bacteriófagos líticos e probióticos, vêm sendo propostos para o controle de Salmonella sp. em animais de produção. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração oral de probiótico e bacteriófagos líticos sobre a ocorrência de infecção e excreção fecal de Salmonella sp. em suínos em fase de crescimento e terminação. O experimento foi realizado em dois períodos (blocos), com duração de 49 dias, em suínos com 43 dias de idade. Estes animais foram divididos em três tratamentos: T1 (controle), T2 (bacteriófagos) e T3 (probiótico), com 12 animais em cada tratamento e 10 animais controle. Após duas semanas de alojamento, os suínos foram inoculados com Salmonella Typhimurium (dia 0 P.I.). Os animais receberam uma suspensão de bacteriófagos líticos (CNPSA1, CNPSA3 e CNPSA4) por oito dias consecutivos, quatro dias antes e quatro dias após inoculação. O probiótico foi fornecido pela via oral nos dois primeiros dias de alojamento (108 Unidade Formadora de Colônia-UFC/ g), posteriormente o produto (107 UFC/g) foi fornecido diariamente na ração na concentração de 1%. Foram realizadas colheitas de sangue (-14, 0, 7, 14, 21, 28 e 35 PI) para pesquisa de IgG anti- Salmonella, e de fezes (-14, -7, 0, 3, 7, 14, 21 e 28) para pesquisa e quantificação de Salmonella, Enterococcus, Lactobacillus e coliformes totais. No dia 35PI os animais foram eutanasiados e fragmentos de órgãos foram coletados para pesquisa de Salmonella. Foram coletados segmentos do intestino delgado para análise de morfometria e pesquisa de IgA de mucosa. Os resultados indicam que o tratamento de suínos na fase de crescimento não foi capaz de impedir a infecção dos animais, e a soroconversão ocorreu a partir do dia 7PI. Não foi observada menor excreção de Salmonella nos grupos tratados. Não houve efeito sobre a população de Lactobacillus, Enterococcus e coliformes totais, nem diferença na morfometria de vilosidades entre grupos. O grupo tratado com probiótico apresentou uma tendência a maiores densidades óticas no teste de ELISA para pesquisa de IgA anti-Salmonella na mucosa intestinal. A partir disso, conclui-se que o tratamento com probiótico e fagos líticos testados de acordo com o protocolo proposto no presente estudo não influenciam a infecção e excreção de Salmonella sp. em suínos em fase de crescimento e terminação. / Due to the limited use of antimicrobial, alternatives that follow the line of biological control, as lytic bacteriophages and probiotics, have been proposed for the control of Salmonella sp. animal production. The aim of this study was to evaluate the effect of oral administration of probiotic and lytic bacteriophages on the occurrence of infection and fecal excretion of Salmonella sp. in growing pigs. The experiment was conducted in two periods (blocks), lasting 49 days, in 43 days old pigs. These animals were divided into three treatments: T1 (control), T2 (bacteriophages) and T3 (probiotic), with 12 animals in each treatment and 10 control animals. After two weeks of accommodation, the pigs were inoculated with Salmonella Typhimurium (day 0 PI). The animals received a suspension of lytic bacteriophages (CNPSA1, CNPSA3 and CNPSA4) for eight consecutive days, four days before and four days after inoculation. The probiotic was given orally in the first two days of lodging (108 of Colony Forming Units-CFU / g), then the product (107 CFU / g) was supplied daily in the diet at a concentration of 1%. Were collected blood (-14, 0, 7, 14, 21, 28 and 35 PI) for the detection of IgG anti-Salmonella, and feces (-14, -7, 0, 3, 7, 14, 21, 28) for research and quantification of Salmonella, Enterococcus, Lactobacillus and Coliforms. On 35PI the animals were euthanized and samples of organs were collected for Salmonella. We collected small intestinal segments for morphometric analysis and research of mucosal IgA. The results indicate that treatment of pigs in the growing phase was not able to prevent infection of animals, and seroconversion occurred on the day 7PI. There was no lower excretion of Salmonella in the treated groups. There was no effect on the population of Lactobacillus, Enterococcus and Coliforms, and no difference in the morphology of villi between groups. The group treated with probiotic showed a trend to higher optical densities in ELISA for the detection of IgA anti-Salmonella in the intestinal mucosa. From this, it is concluded that treatment with probiotic and lytic phages tested in accordance with the protocol proposed in this study did not influence the infection and excretion of Salmonella sp. in growing pigs.

The intestine and associated bacterial microbiota have a central role the physiology and homoeostasis of the host. The understanding of how farming conditions affect the intestine and associated microbiota of fish is the high importance to counteract the potential threats to health and welfare. Thus, this thesis aims to understand the role of stressful husbandry conditions on the intestine and associated microbiota of rainbow trout and Atlantic salmon. Within this context, the role of Pediococcus acidilactici as health promoter was also investigated Chapter 3 investigated the replacement of fishmeal by different plant protein ingredients in rainbow trout. The results of this chapter revealed that the effect of P. acidilactici on the microbiota of distal intestine in rainbow trout was dependent on the ingredients of the diet. The results also showed that the FM substitution induced major changes in the intestinal microbiota. Moreover, the modulation induced by plant-based diets on the microbiota varied according to the ingredients used. Chapter 4 studied the effect of dietary oxytetracycline in the distal intestinal microbiota of rainbow trout and the role of P. acidilactici to ameliorate the impact of antibiotic therapy. Experimental groups fed the diets with oxytetracycline had substantial changes in the distal intestinal microbiota including a decrease in the bacterial diversity. P. acidilactici did not ameliorate the effect of antibiotic therapy in the intestinal microbiota. Chapter 5 used Atlantic salmon during smoltification to study the changes in the microbiota of distal intestine and the role of P. acidilactici to promote intestinal health. The results showed that bacterial communities in the mucosa differed from the digesta. Seawater transfer and P. acidilactici had significant changes in the intestinal microbiota of both mucosa and digesta. However, the modulatory effect of both factors evaluated was larger in the mucosa-associated microbiota than in the digesta-associated microbiota. Furthermore, P. acidilactici induced a significant increase in antiviral-related genes. Chapter 6 investigated the replacement of fish oil by rapeseed oil alone or combined with P. acidilactici on the intestinal health and microbiota of two intestinal regions in Atlantic salmon. Replacement of fish oil by rapeseed oil alone or in combination with P. acidilactici supplementation did not induce major changes in the intestinal health and microbiota. The bacterial communities found were significantly different between the pyloric caeca and mid-intestine. In conclusion, this thesis contributes to new knowledge regarding the effect of dietary supplementation of P. acidilactici and the impact of different potential challenging factors in the health and intestinal microbiota of farmed salmonid species.

Introdução: Fibrose hepática é a resposta cicatricial a lesões celulares agudas ou crônicas do fígado. Produtos derivados do intestino podem chegar ao fígado através da veia porta e mediar resposta inflamatória via receptores TLR4. O aumento de citocinas inflamatórias induz a ativação de células estreladas, fibroblastos periportais e células de Kupffer. A ativação destas células estimula a secreção de TGFβ e a deposição excessiva de colágeno. Assim, a modulação da microbiota intestinal com uso de probióticos poderia reduzir a inflamação e fibrogênese hepática. Objetivo: Avaliar o efeito do Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) sobre a fibrose hepática em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. Métodos: Ratos Wistar (n = 29) adultos machos (299,89g ± 42,89 g) foram submetidos a ligadura de ducto biliar (BDL) ou a manipulação de ducto biliar comum sem ligadura (Ctrl). Após 14 dias, os grupos foram novamente divididos para receber gavagens durante 14 dias: os grupos Ctrl e BDL receberam 1 ml de PBS e os grupos Ctrl-P e BDL-P, 1 ml de PBS contendo 2,5 × 107 UFC de LGG. A eutanásia ocorreu 5 dias após o término do tratamento quando foram coletados amostras de sangue e fígado. Resultados: A ligadura de ducto biliar promoveu redução no peso e na albumina plasmática acompanhado da elevação das provas de disfunção hepatobiliar em comparação aos grupos controle. O tratamento com LGG não alterou os parâmetros séricos ou o peso corporal dos animais. Não houve diferença na atividade de superóxido dismutase (SOD) entre os grupos. A atividade de catalase (CAT) e os níveis de sulfidrilas foram significativamente menores no grupo BDL em relação aos controles. O tratamento com LGG mostrou uma tendência ao aumento dos níveis de sulfidrilas. A razão SOD/CAT foi maior no grupo BDL em relação aos controles e o tratamento com LGG preveniu este desequilíbrio. O tratamento com LGG mostrou uma tendência a redução da razão SOD / CAT. A expressão gênica de Tlr4, Tnfα e Il6 e os níveis de IL1β foram maiores no grupo BDL em relação ao controle. O tratamento com LGG atenuou parcialmente a elevação de IL1β e Tlr4. O grupo BDL-P teve redução da expressão gênica de Il6 em relação ao grupo BDL. A expressão gênica de Tgfβ foi maior no grupo BDL em comparação ao Ctrl. A expressão de metaloproteinases 2 e 9 foi significativamente maior nos grupos BDL e BDLP, sem diferença em relação ao tratamento com LGG. A deposição de colágeno e a reação ductular avaliado pelo conteúdo de citoqueratina 7 (CK7) foi maior nos animais submetidos a ligadura de ducto biliar. O tratamento com LGG reduziu significativamente a deposição de colágeno e conteúdo de CK7 no fígado em comparação com grupo de BDL. Conclusão: O tratamento com LGG foi capaz de reduzir a fibrose hepática, a reação ductular e a expressão gênica de Il6 em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. / Introduction: Liver fibrosis is a wound-healing response to acute or chronic cellular liver injury. Gut-derived products can reach the liver through the portal vein and mediate inflammatory response via TLR4. The increase of inflammatory cytokines induces the activation of stellate cells, periportal fibroblasts and Kupffer cells. The activation of these cells stimulates the secretion of TGFβ and the excessive collagen deposition. Thus, modulation of gut microbiota using probiotics could reduce inflammation and hepatic fibrogenesis. Aim: To evaluate the effect of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) on liver fibrosis in a model of cholestatic liver disease in rats. Methods: Adult male (n = 29) Wistar rats (299.89 g ± 42.89 g) were subjected to bile duct ligation (BDL) or the manipulation of common bile duct without ligation (Ctrl). After 14 days, groups were again divided to receive gavagens during 14 days: Ctrl and BDL groups received 1 ml of PBS and Ctrl-P and BDL-P groups, 1 ml of PBS containing 2.5 × 107 CFU of LGG. Euthanasia occurred five days after the end of the treatment when were collected samples of blood and liver tissue. Results: The bile duct ligation promoted a reduction in body weight and plasma albumin levels followed by an increase of liver dysfunction parameters in comparison to control groups. LGG treatment did not change serum analyses or body weight of animals. There was no difference in superoxide dismutase activity (SOD) between groups. The catalase activity (CAT) and sulfhydryl levels were significantly lower in the BDL group compared to controls. Treatment with LGG showed a tendency to increase sulfhydryl levels. The SOD / CAT ratio was higher in BDL group compared to controls and treatment with LGG prevented this imbalance. Treatment with LGG showed a tendency to decrease SOD / CAT ratio. The gene expression of Tlr4, Tnfα and Il6 and IL1β levels were higher in the BDL group compared to the control. Treatment with LGG partially attenuated the increase of IL1β and Tlr4. The BDL-P group had decreasing in Il6 gene expression compared to the untreated group. The gene expression of Tgfβ was higher in the BDL group compared to the Ctrl. The expression of metalloproteinases 2 and 9 was significantly higher in BDL and BDL-P groups, with no difference in comparison to treatment with LGG. The collagen deposition and ductular reaction evaluated by the content of cytokeratin 7 (CK7) was higher in animals submitted to the bile duct ligation. The hepatic collagen deposition and CK7 content was significantly decreased in BDL-P compared to BDL group. Conclusion: Treatment with LGG was able to reduce liver fibrosis, ductular reaction and Il-6 gene expression in a model of chronic cholestatic liver disease in rats.

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No. of bitstreams: 1 roselino_mn_dr_arafcf.pdf: 4114472 bytes, checksum: f4844081ace5b8eb414c051b805f2a04 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embutidos fermentados, processados e consumidos sem aquecimento, são os produtos cárneos mais promissores para a veiculação de probióticos, entretanto, apresentam como desvantagens o alto teor de gordura, presença de nitrito e nitrato residual e de compostos potencialmente tóxicos, como as aminas bioativas. O presente trabalho estudou o efeito da utilização de bactérias láticas com propriedade hipolipemiante nas características tecnológicas, sensoriais e de segurança de um embutido cárneo fermentado, similar ao salame, com teores de gordura, nitrito e nitrato reduzidos. Os potenciais efeitos benéficos do produto foram investigados em um estudo in vitro. Duas cepas probióticas (Enterococcus faecium CRL183 e Lactobacillus acidophilus CRL1014) foram testadas, separadamente, como culturas iniciadoras. Os embutidos com baixo teor de gordura (redução de 60%) foram processados em seis formulações: 2 - culturas tradicionais sem redução de sais de cura (nitrito 0,015% e nitrato 0,005%); 3 - culturas tradicionais e teor reduzido de sais de cura (nitrito 0,007% e nitrato 0,003%); 4, 5, 6, 7 – culturas probióticas (E. faecium CRL183 e L. acidophilus CRL1014) com teores normais e reduzidos de sais de cura, respectivamente. Para efeito de comparação, um produto controle (1 - culturas tradicionais, sem redução de gordura e de sais de cura) também foi produzido. As culturas probióticas (Enterococcus faecium CRL 183 e Lactobacillus acidophilus CRL 1014) foram submetidas a testes preliminares para determinação da resistência às concentrações de sais de cura usualmente empregadas em produtos cárneos fermentados e avaliação da capacidade de produção de substâncias antimicrobianas pela técnica spot-on-lawn. A qualidade dos embutidos foi avaliada através de análises físico-químicas e microbiológicas, no início do processamento e durante os períodos de maturação e estocagem. Foram realizados testes de aceitação a cada 30 dias de armazenamento e, uma análise descritiva quantitativa (ADQ) com os embutidos prontos para o consumo (T30). O embutido que apresentou as melhores características nos testes anteriores foi submetido a um teste in vitro, em simulador do ecossistema microbiano humano (SEMH), para avaliação da sobrevivência gastrintestinal do microrganismo probiótico, determinação do efeito do produto cárneo probiótico na produção de ácidos graxos de cadeia curta e de amônia e na modulação da microbiota intestinal. Nas análises de sensibilidades aos sais de cura, a cepa E. faecium CRL 183 não exibiu redução logarítmica na população de células viáveis (109 UFC/mL) para todas as concentrações de cloreto de sódio e nitrito de sódio avaliadas. Por outro lado, a cepa L. acidophilus CRL 1014 apresentou redução de um ciclo logarítmico em relação ao controle (p<0,05), com população final de células viáveis na ordem de 108 UFC/mL. As bactérias probióticas avaliadas não foram capazes de produzir substâncias antimicrobianas contra as cepas indicadoras utilizadas (Listeria monocytogenes IAL 628, Salmonella enterica ssp. enterica serovar typhimurium IAL 2431, e Escherichia coli IAL 339), uma vez que não houve formação de halos de inibição. Todas as formulações apresentaram características físico-químicas e microbiológicas adequadas aos padrões estabelecidos para embutidos cárneos fermentados. As cepas probióticas mantiveram-se viáveis até o final do período avaliado, exibindo população na ordem de 108UFC/g (final da maturação) e 107UFC/g (120 dias de armazenamento). Os resultados obtidos evidenciaram um comportamento muito semelhante entre as diferentes formulações, indicando que a substituição de culturas iniciadoras tradicionais por outras probióticas, bem como a redução de sais de cura, não influenciou negativamente a qualidade microbiológica dos produtos. A substituição parcial de gordura animal por óleo de oliva resultou em aumento de dureza, fato que não alterou a aceitação hedônica global das amostras. A ADQ não foi capaz de diferenciar as amostras em função da cepa utilizada e da quantidade de sais de cura adicionada. Entre os embutidos com redução de gordura e sais de cura e potencialmente probióticos, o produto fermentado com E. faecium CRL 183 (F5) apresentou, no final do período de armazenamento (T120), algumas características superiores as do produto fermentado com L. acidophilus CRL1014 (F7) – menor população de estafilococos coagulase positiva, menor oxidação lipídica, melhor perfil de textura e de aminas bioativas – sendo por esse motivo selecionado para a segunda etapa do estudo. Os testes utilizando o simulador do ecossistema microbiano humano (SEMH) evidenciaram que o consumo do produto fermentado com E.faecium CRL 183 e com redução de gordura e sais de cura pode resultar em redução de Lactobacillus spp. (cólon ascendente, transverso e descendente), Bacteroides spp. (cólon descendente) e enterobactérias (cólon transverso e descendente) e aumento nos níveis de íons amônio. O mesmo produto probiótico estimulou a produção de ácido butírico e propiônico, reduziu a concentração de ácido acético durante a fase de tratamento e alterou a população de microrganismos intestinais. Os resultados indicam que o salame probiótico (E. faecium CRL 183) com redução de gordura e sais de cura constitui uma alternativa mais saudável de produto cárneo fermentado, pois, além de possuir características nutricionais mais interessantes, apresenta potencial para atuar positivamente no perfil lipídico, através da melhora na produção de AGCC e modulação da microbiota, com aumento da população de E. faecium CRL 183 que é uma cepa comprovadamente hipocolesterolemiante. / Fermented sausages, processed and consumed without heating, are the most promising meat products for the placement of probiotics, however, have as disadvantages the high fat content and the presence of residual nitrite and nitrate and potentially toxic compounds, such as bioactive amines. This work studied the effect of using lactic acid bacteria with lipid lowering property in technological, sensory and safety characteristics of a fermented susage, similar to salami with fat, nitrite and nitrate reduced. The potential beneficial effects of the product were investigated in an in vitro study. Two probiotic strains (Enterococcus faecium CRL 183 and Lactobacillus acidophilus CRL 1014) were tested separately as starter cultures. The sausages with a low fat content (60% reduction) were processed in six treatments: 2 - traditional cultures with fat reduction and without curing salts reduction (nitrite and nitrate 0.015% 0.005%); 3 - traditional cultures with fat and curing salt reduction (nitrite and nitrate 0.007% 0.003%); 4, 5, 6, 7 - probiotic cultures (E. faecium CRL183 and L. acidophilus CRL1014) with fat reduction, without and with curing salt reduction, respectively. For comparison, a control product (1 - traditional cultures without fat and curing salts reduction) was also produced. Probiotic cultures (E. faecium CRL 183 and L. acidophilus CRL 1014) were submitted to preliminary tests to determine resistance to curing salt concentrations usually employed in fermented meat products and evaluation of antimicrobial substances production capacity by the spot-on-lawn technique. The quality of the sausages was evaluated by physical, chemical and microbiological analyzes at the beginning of processing and during periods of maturation and storage. Acceptance tests were performed every 30 days of storage, and a quantitative descriptive analysis (QDA) with sausages ready for consumption (T30). The sausage had the best characteristics of previous tests was subjected to an in vitro test on human microbial ecosystem simulator (SEMH) for evaluation of the gastrointestinal survival of the probiotic microorganism, determining the effect of probiotic meat product in the production of fatty acids short chain and ammonia and modulation of the intestinal microbiota. In the analysis of sensitivity to curing salts, E. faecium CRL 183 showed no log reduction in the population of viable cells (109 CFU/mL) for all concentrations of sodium chloride and sodium nitrite evaluated. On the other hand, L. acidophilus CRL 1014 showed a log cycle reduction compared to control (p <0.05) with final population of viable cells in the order of 108 CFU/mL. The evaluated probiotic bacteria were not able to produce antimicrobial substances against indicator strains (Listeria monocytogenes IAL 628, Salmonella enterica ssp. enterica serovar typhimurium IAL 2431, e Escherichia coli IAL 339), since there was no formation of inhibition zones. The results show that E. faecium CRL 183 and L. acidophilus CRL 1014 can be used as starter cultures in the preparation of meat sausages, they are tolerant to sodium chloride and sodium nitrite concentrations typically used in such products. All treatments showed appropriate physicochemical and microbiological characteristics to the standards established for fermented sausage. The probiotic cultures remained viable by the end of analysis period, showing a population of about 108UFC/g (final ripening) and 107UFC/g (120 days of storage). The results obtained showed a very similar behavior between the different treatments, indicating that replacement of traditional starter cultures by probiotic as well as the curing salts reduction did not influence the microbiological quality of products. The partial replacement of animal fats with olive oil resulted in increased hardness, which did not alter the overall hedonic acceptance of samples. The QDA was not able to differentiate between samples depending on the strain used and the amount of added curing salts. Among treatments with fat and curing salts reduction and potentially probiotics, the fermented product with E. faecium CRL 183 (F5) presented at the end of the storage period, some superior characteristics to the product fermented with L. acidophilus CRL1014 (F7) - smaller population of coagulase positive staphylococci, lower lipid oxidation, better texture profile and better bioactive amines profile - and therefore selected for the second stage of the study. Tests using the SEMH showed that the fermented product consumption with E. faecium CRL 183 with fat and curing salts reduction may result in areducing Lactobacillus spp. (ascending, transverse and descending colon), Bacteroides spp. (descending colon) and Enterobacteriaceae (transverse and descending colon) and increased levels of ammonium ions. The same probiotic product stimulated the production of butyric and propionic acid, reduced the concentration of acetic acid during the treatment phase and altered the population of intestinal microorganisms. The results indicate that the probiotic sausage (E. faecium CRL 183), with fat and curing salts reduction is a healthier alternative of fermented meat product, since, besides having more interesting nutritional characteristics, has the potential to act in lipid profile, by improving the production of SCFA and modulating the microbiota with increased E. faecium CRL 183 population which is a proven cholesterol lowering strain. / FAPESP: 2012/14129-2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-11Bitstream added on 2014-06-13T19:34:23Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_lca_me_arafcf.pdf: 496935 bytes, checksum: 779e7b40d373a53c216dd4ce5235cab2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No Brasil, o câncer é a segunda principal causa de morte, sendo o câncer de mama o segundo mais frequente entre as mulheres. Um tumor sólido é composto pelo tecido neoplásico, células estromais e o sistema imune. Todas as células envolvidas produzem mediadores de forma local e sistêmica que influenciam no desenvolvimento do tumor. Os macrófagos ativados se polarizam e são capazes de ativar uma resposta imune celular, induzindo as células T para um padrão Th1, eficaz na eliminação de tumores; ou ativar uma resposta imune humoral, induzindo Th2, ineficiente contra o câncer. Na teoria, uma imunoterapia eficiente poderia alterar a ativação das células envolvidas e gerar uma inflamação voltada para um padrão de resposta celular, que gerasse a destruição das células cancerígenas. Dentre as possíveis imunoterapias, encontra-se o consumo de alimentos funcionais. A soja vem sendo estudada como um dos alimentos capazes de prevenir o câncer de mama a longo prazo. Além disso, as bactérias probióticas, parecem ser capazes de prevenir o câncer. Neste trabalho, procuramos observar o potencial do produto de soja fermentado por Enterococcus faecium CRL 183 e Lactobacillus helveticus ssp jugurti 416 enquanto alimento funcional capaz de modular o sistema imune e exercer influência no desenvolvimento de câncer de mama experimental murino. Os animais consumiram diariamente produto não fermentado de soja (PNFS), produto fermentado de soja acrescido (PFSI) ou não (PFS) de isoflavonas por 40 dias, sendo o inóculo tumoral realizado no décimo dia. PNFS, PFS e PFSI elevam a produção de TNF-α, e PFS e PFSI eleva a atividade da enzima arginase de macrófagos peritoneais. PFS gera uma redução na produção de IFN-γ e PNFS, PFS e PFSI reduzem os níveis de IL-5 produzidos por linfócitos esplênicos. O volume tumoral é menor em PFS e PFSI, e o número de células apoptóticas... / In Brazil, cancer is the second main cause of death, and breast cancer is the second more frequent neoplasia in women. A solid tumor contains neoplastic tissue, stromal cells and immune cells. All cells present in this microenvironment may produce mediators locally and systemically which can influence tumor development. Activated macrophages polarize and are capable of activating a cellular response, inducing T cells into a Th1 cytokine pattern, which is effective against tumor; or activate a humoral response, leading T cells into Th2, unable to fight cancer properly. In theory, a effective immunotherapy could activate involved cells and trigger a acute inflammation, with a cellular pattern, capable of destroying cancer cells. One of the possible therapies is the use of functional food. Soy has been studied as one of the food capable of preventing breast cancer in a long term diet. Besides, probiotic bacteria seems to be able to prevent cancer as well. In the present work, we intended to observe the potential of a soy product fermented using Enterococcus faecium CRL 183 and Lactobacillus helveticus ssp jugurti 416 as a functional food capable of modulating immune system and influencing on experimental murine mamary tumor growth. Animals were fed daily non-fermented soy product (PNFS), fermented sou product (PFS) or fermented soy product plus isoflavones (PFSI) during 40 days, and tumor implant was performed on 10th day. PNFS, PFS and PFSI showed a higher production of TNF-α, while PFS and PFSI also showed a higher arginase activity by peritoneal macrophages. PFS reduced IFN-γ production, while PNFS, PFS and PFSI reduced IL-5 levels on splenic lymphocytes culture. Final tumor volume is reduced in PFS and PFSI, while number of apoptotic cells is elevated in these two groups. It appears that the product may influence on tumor development in a good way, but it is not clear whether immune system is important.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-19Bitstream added on 2015-04-09T12:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000815315_20160119.pdf: 119338 bytes, checksum: 5dd73d4aa0b35cd4f1e1bed4b422bee5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-19T16:32:48Z: 000815315_20160119.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-19T16:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000815315.pdf: 1570467 bytes, checksum: 33e9ac560c01ca5c2a629a5b0bc77ba7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ocâncer de cólon e reto representa a terceira causa mais comum de câncer no mundo, sendo que pesquisas apontam ação benéfica dos probióticos, prebióticos e simbióticos no câncer de cólon. O objetivo desta pesquisa foi definir as etapas da carcinogênese de cólon que são mais afetadas pelo consumo de extrato aquoso de yacon, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e extrato aquoso de yacon + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 em ratos induzidos quimicamente ao câncer de cólon com 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Cem ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: G1: ratos não tratados; G2: DMH; G3 (probiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiótico): DMH + extrato aquoso de yacon; G5 (simbiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + extrato aquoso de yacon. Todos os tratamentos foram administrados via oral durante 8 meses, sendo que o L. acidophilus CRL 1014 foi administrado na quantidade de 3 mL/ kg de peso/ dia na concentração de 109 UFC/ mL e o extrato aquoso de yacon administrado foi calculado em relação ao seu conteúdo de frutooligossacarídeos (FOS). Os animais ingeriram 10% de FOS na dieta. A concentração de FOS no extrato aquoso de yacon foi previamente determinada utilizando kit enzimático (Megazyme®). Cinco animais pertencentes a cada grupo experimental foram sacrificados após a primeira administração de DMH, no terceiro, quinto e oitavo meses. Os tecidos foram submetidos à análise macroscópica, verificando-se o número e volume de massa tumorais, análise de focos de criptas aberrantes (FCA), análise histológica do tecido, ensaio cometa em amostras de sangue periférico, índice de apoptose, imunohistoquímica para p53 e Ki-67. Houve redução no dano no DNA nos tratamentos G3, G4 e G5. Os grupos G5 e G4 apresentaram aumento no índice de apoptose e diminuição da proliferação celular em relação ao G2 (p<0.05). Não houve diferença na marcação de p53 nos grupos G3, G4 e G5 ... / Colorectal cancer is the third commonest type of cancer in both sexes in the world. Research suggests beneficial effects of consuming probiotics and prebiotics on colon cancer. The aim of this project was to define the phases of the development of colon cancer that are more affected by aqueous yacon extract, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 and aqueous yacon extract + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 ingested by rats chemically treated with 1,2 dimethylhydrazine (DMH) to induce colon cancer. Hundred male Wistar rats were randomly divided into five treatments: G1: untreated rats; G2: DMH; G3 (probiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiotic): DMH + aqueous yacon extract; G5 (synbiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + aqueous yacon extract. All treatments were administered orally for 8 months, L. acidophilus CRL 1014 was administered at 109 CFU/ mL in 3 mL/ kg body weight and amount of aqueous yacon extract administered was calculated in relation of its fructooligosaccharides (FOS) content using fructan assay kit (Megazyme®). Animals ingested 10% of FOS in diet. Five animals from each treatment group were sacrificed after the first DMH injection and in the third, fifth and eighth months. Tissues were subjected to macroscopic analysis, measuring polyp number, volume and thickness, aberrant crypt foci (ACF) analysis, histological tissue analysis, comet assay in peripheral blood, apoptosis index, and colon samples from the first sacrifice were assessed for K-67 and p53 by immunohistochemical procedures. G3, G4 and G5 showed DNA damage reduction. G5 and G3 groups showed higher apoptosis index and decrease of Ki-67, compared to G2 (p<0.05). p53 staining did not differ among G2, G3, G4, G5. G5 showed fewer ACF number per colon in third month and in the fifth month G3, G4 and G5 showed a reduction of ACF number per colon relative to G2 (p<0.05). In the last month, G3, G4 and G5 showed no effect on ACF number per colon relative to G2..

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:19Z : No. of bitstreams: 1 000833453.pdf: 664742 bytes, checksum: 9d6e642484cb6ccc9c8e11cbf6cb9cbb (MD5) / Foi realizado um estudo para verificar o efeito da inoculação in ovo de Bacillus subtilis e sua suplementação na ração durante a fase de criação, sobre as características morfológicas e morfométricas do intestino delgado, desempenho e rendimento de carcaça de frangos de corte. O estudo foi composto por dois experimentos. No primeiro foram utilizados 500 ovos férteis de frango distribuídos em cinco incubadoras horizontais. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, sendo cada incubadora considerada um bloco, com cinco tratamentos (Controle, NaCl, 106 UFC, 107 UFC, 108 UFC), e 100 ovos/tratamento. Aos 18 dias de incubação os ovos foram inoculados com as soluções na câmara de ar e ao eclodirem foram avaliados à quantificação e identificação de Bacillus subtilis na mucosa intestinal, taxa de eclosão de ovos de matrizes pesadas, taxa de eclosão total, mortalidade embrionária, qualidade dos pintinhos, peso ao nascer e pesos do intestino, fígado e saco de vitelo dos pintinhos machos. No segundo experimento foram incubados 2700 ovos férteis em uma incubadora CASP de estágio único. Aos 18 dias de incubação 1350 ovos foram inoculados com 107 UFC Bacillus subtilis e 1350 ovos permaneceram sem inoculação. Ao eclodirem os machos foram alojados no galpão de acordo com os tratamentos. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados com esquema fatorial 2x2 (inoculação in ovo de Bacillus subtilis X suplementação de Bacillus subtilis na ração), com seis repetições com 35 aves cada, totalizando 840 aves. Foram analisados a morfometria do intestino delgado, os pesos do fígado, intestino e pâncreas aos um, quatro, oito, 13, 20 e 41 dias de idade, o desempenho aos 21 e 42 dias de idade, o rendimento de carcaça e cortes, e a qualidade da carne aos 42 dias de idade. A inoculação in ovo e a suplementação de Bacillus subtilis na ração promoveram melhores resultados para altura das vilosidades e ... / A study was conducted to verify the effect of in ovo inoculation of Bacillus subtilis and feed supplementation during the creation, on the morphological and morphometric characteristics of the small intestine, performance and carcass yield of broilers. The study consisted of two experiments. In the first 500 fertile chicken eggs over five horizontal incubators were used. The experimental design was randomized blocks, each considered as a block incubator, with five treatments (control, NaCl, CFU 106, CFU 107, CFU 108), and 100 eggs/treatment. At 18 days of incubation the eggs were inoculated with the solutions in the air cell and the hatch were evaluated for quantification and identification of Bacillus subtilis in the intestinal mucosa, hatchability of fertile eggs, total rate of hatching, embryo mortality and chick quality, birth weight and weights of the intestine, liver and yolk sac of male chicks. The concentration 107 provided better results relative to hatchability and chick weight at birth. In the second experiment in 2700 fertile eggs were incubated in an incubator CASP single stage. At 18 days of incubation 1350 eggs were inoculated with 107 CFU Bacillus and 1350 eggs remained without inoculation. When the hatch in the shed males were housed according to the treatment. The design was a randomized block design with a 2x2 factorial design (in ovo inoculation of Bacillus subtilis or not X supplementation of Bacillus subtilis in the creation phase or not), with six replicates of 35 birds each, totaling 840 birds. Were analyzed the morphometry of the small intestine, the weights of the liver, intestine and pancreas at one, four, eight, 13, 20 and 41 days of age, the results at 21 and 42 days of age, performance at 21 and 42 days of age, carcass yield and cuts, and meat quality at 42 days of age. The in ovo inoculation of Bacillus subtilis and feed supplementation promoted best results for depths length of villi and crypts in ...

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:37Z : No. of bitstreams: 1 000830299.pdf: 772512 bytes, checksum: cced1cd5ada16b8ba16567307e576668 (MD5) / A hipótese do trabalho se baseou em que a adição de avilamicina (antibiótico promotor de crescimento), Bacillus subtilis (probiótico) e óleos essenciais (carvacrol, cinamaldeído, cineol e extrato de pimenta), elevam o desempenho zootécnico de frangos a partir de benefícios na mucosa intestinal e na microbiota a ela associada. No Capítulo 1 apresentamos uma revisão bibliográfica sobre o assunto, a qual nos permitiu desenhar a referida hipótese. Os objetivos específicos do presente estudo foram avaliar o efeito destes aditivos alimentares aos 7, 21 e 42 dias de vida sobre: 1) o desempenho zootécnico; 2) os níveis de RNAm dos genes SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1, (respectivamente codificadores de PepT1, SGLT1, GLUT2 e Na-K-ATPase) na mucosa do jejuno; 3) atividades de fosfatase alcalina, maltase e aminopeptidase nas membranas da borda em escova no jejuno; 4) absorção de glicose intestinal in-vitro. 5) número de cópias do 16S DNAr de grupos bacterianos de maior predominância na mucosa do íleo; 6) morfometria das vilosidades intestinais; Todos os dados foram avaliados em função do tempo, exceto os dados de desempenho. Para tanto, 1320 frangos foram divididos entre cinco tratamentos de acordo com a suplementação [dieta basal como controle (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus-subtilis + óleo essencial (BS + OEs); óleos essenciais (OEs); avilamicina como controle positivo (AVI)]. Os resultados do Capítulo 2 demonstraram que a suplementação de AVI e OEs na ração de frangos de 1 a 42 dias de idade promove maior atividade de fosfatase alcalina intestinal e aminopeptidase, enquanto a adição de Bacillus subtilis promove maior quantidade de RNAm do gene codificador do transportador de peptídeos 1 (SLC15A1). No Capítulo 3 evidenciou-se que a suplementação com BS ou OEs promove alterações momentâneas na morfometria intestinal dos frangos. Os Lactobacillus predominam na mucosa do íleo, e sua maior ... / It was hypothesized that, when added to the feed, avilamycin (antibiotic growth promoter), Bacillus subtilis (probiotic) and essential oils (carvacrol, cinnamaldehyde, cineol and pepper extract) increase growth performance of broilers through benefits on intestinal mucosa and its microbiota. In Chapter 1 we present a literature review on the subject, which allowed us to draw such hypothesis. The specific objectives of this study were to evaluate the effect of these feed additives nat 7 21 and 42 days of life on: 1) the growth performance; 2) SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1 mRNA levels (respectively encoding PepT1, SGLT1, GLUT2 and Na-K-ATPase) in the jejunum; 3) activities of alkaline phosphatase, maltase and aminopeptidase from the brush border membranes of the jejunum; 4) intestinal glucose absorption of in vitro; 5) 16S rDNA copy numbers of the major bacterial groups in association with the ileum mucosa. 6) morphology of the intestinal villi; All data were also evaluated over the time course, except for the performance data. Therefore, 1320 broiler chickens were divided among five treatments, according to supplementation [basal diet as control (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus subtilis + essential oils (BS + EOs); essential oils (EOs); avilamycin as positive control (AVI)]. The results of Chapter 2 demonstrated that supplementation of BS promoted greater expression of SLC15A1, while EOs and AVI increased the activities of both IAP and APN. Analysis over time revealed an increase in the amount of mRNA MGAM, SLC2A2, SLC15A1, SLC5A1 and SI from seven to 42 days. IAP was reduced after seven days, while MALT increased with age. Addition of Bacillus subtilis or essential oils in the diet induces changes in the expression of genes and activities of enzymes related to sugars and peptides utilization, but did not improve growth performance. In Chapter 3 it was shown that supplementation with BS or EOs supplementation promotes momentary ...