Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-24Bitstream added on 2014-06-13T19:04:08Z : No. of bitstreams: 1 000735718.pdf: 2141423 bytes, checksum: 581a76413b45fc590a05b11af8c88bbc (MD5) / O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra... / Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-19Bitstream added on 2015-04-09T12:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000815315_20160119.pdf: 119338 bytes, checksum: 5dd73d4aa0b35cd4f1e1bed4b422bee5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-19T16:32:48Z: 000815315_20160119.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-19T16:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000815315.pdf: 1570467 bytes, checksum: 33e9ac560c01ca5c2a629a5b0bc77ba7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ocâncer de cólon e reto representa a terceira causa mais comum de câncer no mundo, sendo que pesquisas apontam ação benéfica dos probióticos, prebióticos e simbióticos no câncer de cólon. O objetivo desta pesquisa foi definir as etapas da carcinogênese de cólon que são mais afetadas pelo consumo de extrato aquoso de yacon, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e extrato aquoso de yacon + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 em ratos induzidos quimicamente ao câncer de cólon com 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Cem ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: G1: ratos não tratados; G2: DMH; G3 (probiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiótico): DMH + extrato aquoso de yacon; G5 (simbiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + extrato aquoso de yacon. Todos os tratamentos foram administrados via oral durante 8 meses, sendo que o L. acidophilus CRL 1014 foi administrado na quantidade de 3 mL/ kg de peso/ dia na concentração de 109 UFC/ mL e o extrato aquoso de yacon administrado foi calculado em relação ao seu conteúdo de frutooligossacarídeos (FOS). Os animais ingeriram 10% de FOS na dieta. A concentração de FOS no extrato aquoso de yacon foi previamente determinada utilizando kit enzimático (Megazyme®). Cinco animais pertencentes a cada grupo experimental foram sacrificados após a primeira administração de DMH, no terceiro, quinto e oitavo meses. Os tecidos foram submetidos à análise macroscópica, verificando-se o número e volume de massa tumorais, análise de focos de criptas aberrantes (FCA), análise histológica do tecido, ensaio cometa em amostras de sangue periférico, índice de apoptose, imunohistoquímica para p53 e Ki-67. Houve redução no dano no DNA nos tratamentos G3, G4 e G5. Os grupos G5 e G4 apresentaram aumento no índice de apoptose e diminuição da proliferação celular em relação ao G2 (p<0.05). Não houve diferença na marcação de p53 nos grupos G3, G4 e G5 ... / Colorectal cancer is the third commonest type of cancer in both sexes in the world. Research suggests beneficial effects of consuming probiotics and prebiotics on colon cancer. The aim of this project was to define the phases of the development of colon cancer that are more affected by aqueous yacon extract, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 and aqueous yacon extract + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 ingested by rats chemically treated with 1,2 dimethylhydrazine (DMH) to induce colon cancer. Hundred male Wistar rats were randomly divided into five treatments: G1: untreated rats; G2: DMH; G3 (probiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiotic): DMH + aqueous yacon extract; G5 (synbiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + aqueous yacon extract. All treatments were administered orally for 8 months, L. acidophilus CRL 1014 was administered at 109 CFU/ mL in 3 mL/ kg body weight and amount of aqueous yacon extract administered was calculated in relation of its fructooligosaccharides (FOS) content using fructan assay kit (Megazyme®). Animals ingested 10% of FOS in diet. Five animals from each treatment group were sacrificed after the first DMH injection and in the third, fifth and eighth months. Tissues were subjected to macroscopic analysis, measuring polyp number, volume and thickness, aberrant crypt foci (ACF) analysis, histological tissue analysis, comet assay in peripheral blood, apoptosis index, and colon samples from the first sacrifice were assessed for K-67 and p53 by immunohistochemical procedures. G3, G4 and G5 showed DNA damage reduction. G5 and G3 groups showed higher apoptosis index and decrease of Ki-67, compared to G2 (p<0.05). p53 staining did not differ among G2, G3, G4, G5. G5 showed fewer ACF number per colon in third month and in the fifth month G3, G4 and G5 showed a reduction of ACF number per colon relative to G2 (p<0.05). In the last month, G3, G4 and G5 showed no effect on ACF number per colon relative to G2..

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-31Bitstream added on 2014-08-13T18:00:22Z : No. of bitstreams: 1 000760138.pdf: 1342792 bytes, checksum: 04e3113cab00466cb2ff5442738feb1d (MD5) / Estudos prévios têm demonstrado que baixas concentrações de agentes antineoplásicos como ciclofosfamida e paclitaxel (PAC) modulam positivamente a resposta imune, estimulando linfócitos T e células dendríticas (DCs). Além disso, são capazes de aumentar a imunogenicidade de células de câncer colorretal humano HCT-116, e de induzir a transcrição de genes de proteínas de choque térmico (HSPs). No presente trabalho, tivemos como objetivo avaliar a expressão das HSPs 40, 70 e 90 e comparar o efeito da concentração efetiva mínima (CEM) com a concentração não-tóxica (CNT) de PAC sobre a imunogenicidade das células HCT-116. Células HCT-116 foram tratadas com a CEM ou com a CNT de PAC. Lisados tumorais foram analisados quanto à expressão das HSPs e utilizados para sensibilizar DCs derivadas de monócitos de sangue periférico de indivíduos normais. As DCs foram avaliadas quanto ao seu fenótipo e foram co-cultivadas com linfócitos T alogênicos para a avaliação da capacidade de estimulação desses linfócitos. O tratamento das células tumorais com ambas as concentrações da droga induziu o aumento da expressão de HSP40, enquanto a produção de HSP70 e HSP90 foram aumentadas apenas pela CEM e pela CNT, respectivamente. Observou-se ligeiro, mas não significante aumento da capacidade de indução da resposta alogênica. Houve também uma tendência ao aumento da expressão de CD40 nos grupos HCT, CEM e CNT. É possível que a expressão das HSPs contribua para o aumento de imunogenicidade induzido pelo PAC. A CEM é menos eficiente que a CNT em aumentar a imunogenicidade das células tumorais, mas não prejudica a capacidade das DCs de induzir a resposta alogênica nem seus marcadores fenotípicos de ativação / Colorectal cancer (CRC) is one of the main causes of death worldwide and its conventional treatment is based on surgery, cytotoxic chemotherapy and radiotherapy, or a combination of these therapeutic modalities. The main chemotherapeutic agents for fighting CRC are metrotexate, 5-aza-2-deoxycitidine, taxans and 5-fluorouracil. Usually, their administration is based on maximum tolerable doses, but it has been shown that low concentrations of most of these drugs upregulate the immune system, both enhancing the immune responsiveness and increasing the immunogenicity of tumor cells. These features are associated with translational changes of a couple of genes, among them, there is an increased expression of heat-shock proteins (HSPs). Although the expression of HSPs may represent an adaptive response of tumor cells to the drug-induced damages, there is evidence that some of these proteins are fundamental for antigen processing and presentation by antigen-presenting cells. Then, in the present review we aimed to show that increased expression of HSPs by drug-treated tumor cells may be favorable for the development of an effective immune response, and that this phenomenon should enhance the combinatory schedules of chemotherapy and immunotherapy

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Ângela Maria VC Soares / Banca: Denise Fecchio / Banca: Andréa Vanessa Domeneghini / Banca: Silvia B. Mazzon / Resumo: O câncer colorretal (CCR) um dos principais tipos de tumor em todo mundo. Em alguns casos observa-se forte influência hereditária em seu desenvolvimento nas formas familiares, enquanto que na maioria dos pacientes (85%) essa doença se apresenta na forma esporádica, cuja origem é multifatorial, com grande influência da alimentação, tabagismo e etilismo, além de processos inflamatórios crônicos. Seu tratamento convencional consiste em intervenção cirúrgica acompanhada de terapias com doses elevadas de drogas citotóxicas. Apesar dessa intervenção radical, recidivas em pacientes com CCR são muito freqüentes, apontando para a necessidade de abordagens mais efetivas e para a possibilidade de combinação de diferentes formas de tratamento. Dada a importância do CCR como problema de saúde pública e da possibilidade de modulação do sistema imunológico dos pacientes, o presente trabalho é apresentado em dois capítulos, sendo o primeiro uma revisão de literatura sobre a doença propriamente dita, abordando os tratamentos empregados, a influência da resposta inflamatória em sua gênese e o papel da resposta imunológica na doença. Essa revisão foi redigida de acordo com as normas da revista Cancer Science. O segundo capítulo, redigido seguindo as normas da revista Cancer Immunology, Immunotherapy, refere-se ao desenvolvimento do estudo experimental, no qual foi avaliada a eficiência funcional de células dendríticas (DCs) humanas transfectadas com RNA total de células tumorais pré-tratadas com concentrações não tóxicas ou efetiva mínima de 5-fluorouracil (5-FU). Os resultados obtidos indicam que a transfecção das DCs com RNA de células tumorais expostas à droga aumenta sua capacidade de apresentação de antígenos alogênicos aos linfócitos T e de indução de resposta tumor-específica (geração in vitro de linfócitos T citotóxicos e produção de INF-γ). Esse achado mostra ... / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the most frequent tumor types worldwide, mainly in developed countries, and can be classified as inheritedfamilial (25%) or sporadic (75%) forms, which suggest an important relationship of gene-gene and gene-environment interactions in the development of the disease. CRC is characterized by genetic and epigenetic alterations, and is histologically featured by the infiltration of inflammatory cells among malignant and stromal cells. The most common inflammatory cells in tumor tissue are neutrophils, mast cells, natural killer cells, macrophages and dendritic cells as well as lymphocytes. However, the presence of these cells in CRC can both be associated with cancer inhibition and tumor progression, since the development a chronic inflammatory response can be a predisposal condition for the development of this type of cancer. Considering these multifactorial aspects of CRC development, in this review we present data on the main genetic and epigenetic aspects, and the influence of diet and inflammation on tumor progression. Moreover, we discuss the importance of dendritic cells on CRC immunological responsiveness and their use as therapeutic vaccine for cancer immunotherapy / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:28:35Z : No. of bitstreams: 1 mauro_mo_me_rcla.pdf: 556022 bytes, checksum: 9f3a9f0bccb916d47748cbddeebb6b90 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cânceres intestinais são correlacionados com a dieta. Assim, a determinação e compreensão das interações nutriente-genoma é importante. O presente trabalho avaliou a ação do selênio oligoelemento na citotoxicidade de proliferação celular, e na indução de apoptose in situ e na expressão dos genes CASP9, BCL-XL e APC em células de adenocarcinoma intestinal (HT29). Células HT29 foram cultivadas e tratadas com selênio nas concentrações de 5, 50 e 500 ng/mL, com ou sem o agente indutor de danos doxorrubicina. Essas células foram então avaliadas por meio do ensaio de citotoxicidade (MTT), proliferação celular e na indução de apoptose in situ. Para avaliar a expressão gênica, apenas as células tratadas com 500 ng/mL de selênio foram utilizadas. O RNA foi extraído a partir dessas células, e as expressões de CASP9, BCL-XL e APC foram analisadas pelo método de RTPCR. O gene GAPDH foi utilizado como gene de referência. O MTT mostrou que o selênio não foi tóxico em qualquer uma das concentrações testadas. O ensaio de proliferação celular mostrou que o selênio não interfere com a proliferação celular nas três concentrações testadas. Em contraste, quando as três concentrações foram combinadas com a doxorrubicina, uma diminuição significativa na taxa de proliferação celular foi observada. A taxa de apoptose foi significativamente maior no selênio (500 ng/mL) e doxorrubicina. A expressão CASP9 foi aumentada e expressão BCL-XL diminuiu no selênio (500 ng/mL) e o grupo de doxorrubicina. A expressão do gene APC foi significativamente maior no grupo selênio sozinho. Estes resultados mostram que a apoptose selênio aumenta, especialmente quando está associado com um agente de indução de danos. Além disso, o selênio tem um papel importante na expressão do gene APC, que está relacionada com a regulação do ciclo celular / Intestinal cancers are correlated with diet. Thus, determining and understanding nutrient-genome interactions is important. The present work assessed the action of the oligoelement selenium on cell proliferation, cytotoxicity, and in situ apoptosis induction and on the expression CASP9, BCL-XL and APC genes in intestinal adenocarcinoma cells (HT29). HT29 cells were cultured and treated with selenium at concentrations of 5, 50 and 500 ng/mL with or without the damage-inducing agent doxorubicin. These cells were then evaluated for cytotoxicity (MTT), cell proliferation and in situ apoptosis induction. To evaluate gene expression, only the cells treated with 500 ng/mL of selenium were used. RNA was extracted from these cells, and the expressions of CASP9, BCL-XL and APC were analyzed by the RT-PCR method. The GAPDH gene was used as a reference gene. The MTT assay showed that selenium was not cytotoxic at any of the concentrations tested. The cell proliferation assay showed that selenium did not interfere with cell proliferation at the three concentrations tested. In contrast, when the three concentrations were combined with doxorubicin, a significant decrease in the proliferation rate was observed. The apoptosis rate was significantly increased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. CASP9 expression was increased and BCL-XL expression decreased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. APC was significantly increased in the selenium group alone. These results show that selenium increases apoptosis, especially when it is associated with a damage-inducing agent. Also, selenium has an important role in the expression of the APC gene, which is related to cell cycle regulation

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-26Bitstream added on 2014-06-13T19:29:07Z : No. of bitstreams: 1 castro_ra_me_botfm.pdf: 397298 bytes, checksum: bd41f7c70dc73b4d33ae31fb53337714 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O câncer colorretal é o segundo câncer mais comum com 2,4 milhões de pessoas diagnosticadas. Desses casos, 27% são neoplasias retais (NR). Quimiorradioterapia neoadjuvante (QRTN) tornou-se padrão nestes casos, mas trouxe controvérsia no tratamento adjuvante. O objetivo foi avaliar o impacto da resposta patológica completa (RPC). Além disso, investigamos a influência da quimioterapia adjuvante (QADJ) após QRTN, biópsia, tempo entre QRTN e cirurgia e ausência de cirurgia após QRTN. Métodos: Entre mar/96 e Out/2010, 84 pacientes receberam QRTN, 58 foram submetidos à ressecção retal (RR). A QRTN consistiu de 5-FU em bolus, na primeira e na quinta semana das 25 sessões de radioterapia (RT) no acelerador linear (total 45 - 50 Gy). A biópsia foi feita de acordo com a opção do cirurgião após a RT. A cirurgia (excisão mesorretal total - TME), foi realizada idealmente 8 semanas após a QRTN. Aqueles não submetidos à cirurgia, também foram seguidos. Quando realizada, a QADJ consistiu de 5-FU no D1-D5 por 4 ciclos. Avaliação da sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença (SLD) foi realizada com uso da curva de Kaplan-Meier. Resultados: Dos 58 pacientes submetidos à cirurgia, 90% eram estágio II, 51% ocorreram no reto inferior e 66% eram ECOG 1. RPC foi obtida em 25,8% (15) dos casos. Destes, 20% (3) receberam QADJ. Pacientes sem RPC receberam QADJ em 51% dos casos (22). O tempo médio de seguimento foi de 41 meses. Tanto o SLD (p = 0,024) e SG (p = 0,0488) foram maiores em pacientes com RPC independente do uso de QADJ. Por outro lado, o uso de QADJ vs sem QADJ, independente da presença de RPC, não alterou significativamente a SLD (p = 0,74) ou SG (p = 0,32). Em pacientes com RPC, QADJ não interferiu nos desfechos (SLD, p = 0,76; SG, p = 0,73). No grupo dos pacientes sem RPC, o subgrupo com QADJ... / Colorectal cancer is the second most common cancer with 2,4 million people diagnosed. The rectal cancer (RC) is 27% of these cases. Neoadjuvant chemoradiotherapy (NCRT) has become standard but brought controversy in the adjuvant treatment. The objective was to assess the impact of Pathologic Complete Response (pCR). Furthermore, we investigated the influence of adjuvant chemotherapy (ADJC) after NCRT, biopsy and time between NCRT and surgery, and the absence of surgery after NCRT. Methods: Between mar/96 and Oct/2010, 84 patients received NCRT, and 58 patients underwent resection of the rectum. The NCRT consisted of 5- Fluorouracil (5-FU) and Leucovorin (LV) bolus in the 1st and 5th week of the 25 sessions of radiotherapy (RT) in linear accelerator (total 45 - 50 Gy). Biopsy was made according to the surgeon option after RT. Ideally surgery (Total mesorretal excision - TME) was performed after 8 weeks NCRT ends. Those not undergoing surgery, were followed too. When performed, Adjuvant Chemotherapy (ADJC) consisted of 5-FU and LV bolus on D1-D5 for 4 cycles. Evaluation of Overall Survival (O.S) and Disease-Free Survival (DFS) performed using Kaplan-Meier curve. Results: Of the 58 patients who underwent surgery, 90% were stage II, 51% occurred in the lower rectum, 66% were ECOG 1 and pCR was obtained in 25.8% (15) of patients (group 1). Of these, 20% (3) received ADJC. Patients without PCR (group 2) received ADJC in 51% of the cases (22). The mean follow-up was 41 months. Both the DFS (p = 0.024) and OS (p = 0.0488) were higher in patients with pPCR independent of the use of ADJC. Patients treated with ADJC vs without ADJC, independent of presence of pCR, did not alter DFS (p = 0.74) or OS (p = 0.32). In pCR patients, ADJC do not interfere in the outcome... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ramon Kaneno / Coorientador: Graziela Gorete Romagnoli / Banca: Maria Teresinha Serrão Peraçoli / Banca: Orlando Garcia Ribeiro Filho / Resumo: Estudos prévios têm demonstrado que baixas concentrações de agentes antineoplásicos como ciclofosfamida e paclitaxel (PAC) modulam positivamente a resposta imune, estimulando linfócitos T e células dendríticas (DCs). Além disso, são capazes de aumentar a imunogenicidade de células de câncer colorretal humano HCT-116, e de induzir a transcrição de genes de proteínas de choque térmico (HSPs). No presente trabalho, tivemos como objetivo avaliar a expressão das HSPs 40, 70 e 90 e comparar o efeito da concentração efetiva mínima (CEM) com a concentração não-tóxica (CNT) de PAC sobre a imunogenicidade das células HCT-116. Células HCT-116 foram tratadas com a CEM ou com a CNT de PAC. Lisados tumorais foram analisados quanto à expressão das HSPs e utilizados para sensibilizar DCs derivadas de monócitos de sangue periférico de indivíduos normais. As DCs foram avaliadas quanto ao seu fenótipo e foram co-cultivadas com linfócitos T alogênicos para a avaliação da capacidade de estimulação desses linfócitos. O tratamento das células tumorais com ambas as concentrações da droga induziu o aumento da expressão de HSP40, enquanto a produção de HSP70 e HSP90 foram aumentadas apenas pela CEM e pela CNT, respectivamente. Observou-se ligeiro, mas não significante aumento da capacidade de indução da resposta alogênica. Houve também uma tendência ao aumento da expressão de CD40 nos grupos HCT, CEM e CNT. É possível que a expressão das HSPs contribua para o aumento de imunogenicidade induzido pelo PAC. A CEM é menos eficiente que a CNT em aumentar a imunogenicidade das células tumorais, mas não prejudica a capacidade das DCs de induzir a resposta alogênica nem seus marcadores fenotípicos de ativação / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the main causes of death worldwide and its conventional treatment is based on surgery, cytotoxic chemotherapy and radiotherapy, or a combination of these therapeutic modalities. The main chemotherapeutic agents for fighting CRC are metrotexate, 5-aza-2-deoxycitidine, taxans and 5-fluorouracil. Usually, their administration is based on maximum tolerable doses, but it has been shown that low concentrations of most of these drugs upregulate the immune system, both enhancing the immune responsiveness and increasing the immunogenicity of tumor cells. These features are associated with translational changes of a couple of genes, among them, there is an increased expression of heat-shock proteins (HSPs). Although the expression of HSPs may represent an adaptive response of tumor cells to the drug-induced damages, there is evidence that some of these proteins are fundamental for antigen processing and presentation by antigen-presenting cells. Then, in the present review we aimed to show that increased expression of HSPs by drug-treated tumor cells may be favorable for the development of an effective immune response, and that this phenomenon should enhance the combinatory schedules of chemotherapy and immunotherapy / Mestre

Orientador: Lucia Regina Ribeiro / Co-orientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Trabalho apresenta abstract, resultados e discussão em inglês / Resumo: Cânceres intestinais são correlacionados com a dieta. Assim, a determinação e compreensão das interações nutriente-genoma é importante. O presente trabalho avaliou a ação do selênio oligoelemento na citotoxicidade de proliferação celular, e na indução de apoptose in situ e na expressão dos genes CASP9, BCL-XL e APC em células de adenocarcinoma intestinal (HT29). Células HT29 foram cultivadas e tratadas com selênio nas concentrações de 5, 50 e 500 ng/mL, com ou sem o agente indutor de danos doxorrubicina. Essas células foram então avaliadas por meio do ensaio de citotoxicidade (MTT), proliferação celular e na indução de apoptose in situ. Para avaliar a expressão gênica, apenas as células tratadas com 500 ng/mL de selênio foram utilizadas. O RNA foi extraído a partir dessas células, e as expressões de CASP9, BCL-XL e APC foram analisadas pelo método de RTPCR. O gene GAPDH foi utilizado como gene de referência. O MTT mostrou que o selênio não foi tóxico em qualquer uma das concentrações testadas. O ensaio de proliferação celular mostrou que o selênio não interfere com a proliferação celular nas três concentrações testadas. Em contraste, quando as três concentrações foram combinadas com a doxorrubicina, uma diminuição significativa na taxa de proliferação celular foi observada. A taxa de apoptose foi significativamente maior no selênio (500 ng/mL) e doxorrubicina. A expressão CASP9 foi aumentada e expressão BCL-XL diminuiu no selênio (500 ng/mL) e o grupo de doxorrubicina. A expressão do gene APC foi significativamente maior no grupo selênio sozinho. Estes resultados mostram que a apoptose selênio aumenta, especialmente quando está associado com um agente de indução de danos. Além disso, o selênio tem um papel importante na expressão do gene APC, que está relacionada com a regulação do ciclo celular / Abstract: Intestinal cancers are correlated with diet. Thus, determining and understanding nutrient-genome interactions is important. The present work assessed the action of the oligoelement selenium on cell proliferation, cytotoxicity, and in situ apoptosis induction and on the expression CASP9, BCL-XL and APC genes in intestinal adenocarcinoma cells (HT29). HT29 cells were cultured and treated with selenium at concentrations of 5, 50 and 500 ng/mL with or without the damage-inducing agent doxorubicin. These cells were then evaluated for cytotoxicity (MTT), cell proliferation and in situ apoptosis induction. To evaluate gene expression, only the cells treated with 500 ng/mL of selenium were used. RNA was extracted from these cells, and the expressions of CASP9, BCL-XL and APC were analyzed by the RT-PCR method. The GAPDH gene was used as a reference gene. The MTT assay showed that selenium was not cytotoxic at any of the concentrations tested. The cell proliferation assay showed that selenium did not interfere with cell proliferation at the three concentrations tested. In contrast, when the three concentrations were combined with doxorubicin, a significant decrease in the proliferation rate was observed. The apoptosis rate was significantly increased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. CASP9 expression was increased and BCL-XL expression decreased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. APC was significantly increased in the selenium group alone. These results show that selenium increases apoptosis, especially when it is associated with a damage-inducing agent. Also, selenium has an important role in the expression of the APC gene, which is related to cell cycle regulation / Mestre

Orientador: Rogério Saad-Hossne / Banca: Fábio Vieira Teixeira / Banca: Odair Carlito Michelin / Resumo: O câncer colorretal é o segundo câncer mais comum com 2,4 milhões de pessoas diagnosticadas. Desses casos, 27% são neoplasias retais (NR). Quimiorradioterapia neoadjuvante (QRTN) tornou-se padrão nestes casos, mas trouxe controvérsia no tratamento adjuvante. O objetivo foi avaliar o impacto da resposta patológica completa (RPC). Além disso, investigamos a influência da quimioterapia adjuvante (QADJ) após QRTN, biópsia, tempo entre QRTN e cirurgia e ausência de cirurgia após QRTN. Métodos: Entre mar/96 e Out/2010, 84 pacientes receberam QRTN, 58 foram submetidos à ressecção retal (RR). A QRTN consistiu de 5-FU em bolus, na primeira e na quinta semana das 25 sessões de radioterapia (RT) no acelerador linear (total 45 - 50 Gy). A biópsia foi feita de acordo com a opção do cirurgião após a RT. A cirurgia (excisão mesorretal total - TME), foi realizada idealmente 8 semanas após a QRTN. Aqueles não submetidos à cirurgia, também foram seguidos. Quando realizada, a QADJ consistiu de 5-FU no D1-D5 por 4 ciclos. Avaliação da sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença (SLD) foi realizada com uso da curva de Kaplan-Meier. Resultados: Dos 58 pacientes submetidos à cirurgia, 90% eram estágio II, 51% ocorreram no reto inferior e 66% eram ECOG 1. RPC foi obtida em 25,8% (15) dos casos. Destes, 20% (3) receberam QADJ. Pacientes sem RPC receberam QADJ em 51% dos casos (22). O tempo médio de seguimento foi de 41 meses. Tanto o SLD (p = 0,024) e SG (p = 0,0488) foram maiores em pacientes com RPC independente do uso de QADJ. Por outro lado, o uso de QADJ vs sem QADJ, independente da presença de RPC, não alterou significativamente a SLD (p = 0,74) ou SG (p = 0,32). Em pacientes com RPC, QADJ não interferiu nos desfechos (SLD, p = 0,76; SG, p = 0,73). No grupo dos pacientes sem RPC, o subgrupo com QADJ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer is the second most common cancer with 2,4 million people diagnosed. The rectal cancer (RC) is 27% of these cases. Neoadjuvant chemoradiotherapy (NCRT) has become standard but brought controversy in the adjuvant treatment. The objective was to assess the impact of Pathologic Complete Response (pCR). Furthermore, we investigated the influence of adjuvant chemotherapy (ADJC) after NCRT, biopsy and time between NCRT and surgery, and the absence of surgery after NCRT. Methods: Between mar/96 and Oct/2010, 84 patients received NCRT, and 58 patients underwent resection of the rectum. The NCRT consisted of 5- Fluorouracil (5-FU) and Leucovorin (LV) bolus in the 1st and 5th week of the 25 sessions of radiotherapy (RT) in linear accelerator (total 45 - 50 Gy). Biopsy was made according to the surgeon option after RT. Ideally surgery (Total mesorretal excision - TME) was performed after 8 weeks NCRT ends. Those not undergoing surgery, were followed too. When performed, Adjuvant Chemotherapy (ADJC) consisted of 5-FU and LV bolus on D1-D5 for 4 cycles. Evaluation of Overall Survival (O.S) and Disease-Free Survival (DFS) performed using Kaplan-Meier curve. Results: Of the 58 patients who underwent surgery, 90% were stage II, 51% occurred in the lower rectum, 66% were ECOG 1 and pCR was obtained in 25.8% (15) of patients (group 1). Of these, 20% (3) received ADJC. Patients without PCR (group 2) received ADJC in 51% of the cases (22). The mean follow-up was 41 months. Both the DFS (p = 0.024) and OS (p = 0.0488) were higher in patients with pPCR independent of the use of ADJC. Patients treated with ADJC vs without ADJC, independent of presence of pCR, did not alter DFS (p = 0.74) or OS (p = 0.32). In pCR patients, ADJC do not interfere in the outcome... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Kátia Sivieri / Banca: Luís Fernando Barbisan / Banca: Fernanda Lopes Kinoushi / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Ana Lúcia Martiniano Nasser / Resumo: Ocâncer de cólon e reto representa a terceira causa mais comum de câncer no mundo, sendo que pesquisas apontam ação benéfica dos probióticos, prebióticos e simbióticos no câncer de cólon. O objetivo desta pesquisa foi definir as etapas da carcinogênese de cólon que são mais afetadas pelo consumo de extrato aquoso de yacon, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e extrato aquoso de yacon + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 em ratos induzidos quimicamente ao câncer de cólon com 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Cem ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: G1: ratos não tratados; G2: DMH; G3 (probiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiótico): DMH + extrato aquoso de yacon; G5 (simbiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + extrato aquoso de yacon. Todos os tratamentos foram administrados via oral durante 8 meses, sendo que o L. acidophilus CRL 1014 foi administrado na quantidade de 3 mL/ kg de peso/ dia na concentração de 109 UFC/ mL e o extrato aquoso de yacon administrado foi calculado em relação ao seu conteúdo de frutooligossacarídeos (FOS). Os animais ingeriram 10% de FOS na dieta. A concentração de FOS no extrato aquoso de yacon foi previamente determinada utilizando kit enzimático (Megazyme®). Cinco animais pertencentes a cada grupo experimental foram sacrificados após a primeira administração de DMH, no terceiro, quinto e oitavo meses. Os tecidos foram submetidos à análise macroscópica, verificando-se o número e volume de massa tumorais, análise de focos de criptas aberrantes (FCA), análise histológica do tecido, ensaio cometa em amostras de sangue periférico, índice de apoptose, imunohistoquímica para p53 e Ki-67. Houve redução no dano no DNA nos tratamentos G3, G4 e G5. Os grupos G5 e G4 apresentaram aumento no índice de apoptose e diminuição da proliferação celular em relação ao G2 (p<0.05). Não houve diferença na marcação de p53 nos grupos G3, G4 e G5 ... / Abstract: Colorectal cancer is the third commonest type of cancer in both sexes in the world. Research suggests beneficial effects of consuming probiotics and prebiotics on colon cancer. The aim of this project was to define the phases of the development of colon cancer that are more affected by aqueous yacon extract, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 and aqueous yacon extract + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 ingested by rats chemically treated with 1,2 dimethylhydrazine (DMH) to induce colon cancer. Hundred male Wistar rats were randomly divided into five treatments: G1: untreated rats; G2: DMH; G3 (probiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiotic): DMH + aqueous yacon extract; G5 (synbiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + aqueous yacon extract. All treatments were administered orally for 8 months, L. acidophilus CRL 1014 was administered at 109 CFU/ mL in 3 mL/ kg body weight and amount of aqueous yacon extract administered was calculated in relation of its fructooligosaccharides (FOS) content using fructan assay kit (Megazyme®). Animals ingested 10% of FOS in diet. Five animals from each treatment group were sacrificed after the first DMH injection and in the third, fifth and eighth months. Tissues were subjected to macroscopic analysis, measuring polyp number, volume and thickness, aberrant crypt foci (ACF) analysis, histological tissue analysis, comet assay in peripheral blood, apoptosis index, and colon samples from the first sacrifice were assessed for K-67 and p53 by immunohistochemical procedures. G3, G4 and G5 showed DNA damage reduction. G5 and G3 groups showed higher apoptosis index and decrease of Ki-67, compared to G2 (p<0.05). p53 staining did not differ among G2, G3, G4, G5. G5 showed fewer ACF number per colon in third month and in the fifth month G3, G4 and G5 showed a reduction of ACF number per colon relative to G2 (p<0.05). In the last month, G3, G4 and G5 showed no effect on ACF number per colon relative to G2.. / Doutor