Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O ambiente marinho é um dos ecossistemas mais diversos e complexos em termos de biodiversidade. As condições químicas, físicas e biológicas desse ambiente favorecem a produção de uma variedade de substâncias pela biota, transformando os produtos naturais marinhos em um dos recursos promissores na pesquisa por novos compostos bioativos. O gênero Tubastraea (Scleractinia, Dendrophylliidae) inclui corais ahermatípicos que produzem compostos secundários bioativos em situações de competição. No estado do Rio de Janeiro são encontradas duas espécies invasoras desse gênero, Tubastraea coccinea e Tubastraea tagusensis. A primeira é amplamente distribuída nas águas tropicais do Atlântico e do Pacífico, e a segunda é nativa do leste do pacífico, ambas invasoras no Atlântico Sul. Este trabalho objetiva avaliar as atividades anti-inflamatória, antioxidante e toxicológica de extratos metanólicos de T. coccinea e T. tagusensis. As colônias de Tubastraea foram coletadas na Baía de Ilha Grande, Rio de Janeiro - Brasil e extraídas com metanol. A caracterização química foi realizada através da espectroscopia ultravioleta, visível e de infravermelho. Ação anti-inflamatória foi avaliada pelo modelo in vivo de edema em pata de camundongo induzido por carragenina. Atividade sequestrante de radicais livres foi avaliada pelo método do DPPH. Na avaliação toxicológica utilizamos o ensaio Salmonella/microssoma, na presença e ausência de ativação metabólica exógena, o teste in vitro de micronúcleo com células de macrófagos de rato e o teste de mortalidade com o microcrustáceo Artemia salina. Foi possível a distinção dos grupos químicos presentes nos extratos, com os resultados encontrados sendo corroborados com os presentes na literatura. Os extratos de ambas as espécies apresentaram inibição significativa no edema da pata nas doses testadas, em relação ao veículo. Ambos os extratos demonstraram capacidade pela captura do radical DPPH. Atividades citotóxica e mutagênica na ausência de metabolização exógena não foram observadas para as linhagens TA97, TA98 e TA102 nas duas espécies; para a TA100 o extrato de T. coccinea induziu citotoxidade na concentração de 50 g/placa. Os dois extratos induziram citotoxicidade na presença de metabolização exógena para a cepa TA98, tendo sido detectada também indução de mutagenicidade nesta linhagem para T. coccinea. Os extratos não foram capazes de induzir a formação de micronúcleos e não foram tóxicos para o microcrustáceo A. salina. A resposta inibitória do edema após 2 h da indução indica que os compostos presentes nos extratos atuam na segunda fase da inflamação, possivelmente pela inibição da produção de prostaglandinas. Os resultados sugerem que os extratos das espécies T. coccinea e T. tagusensis apresentam substâncias com potencial uso farmacológico, como agente anti-inflamatório e antioxidante. / The marine environment is one of the most diverse and complex ecosystems in terms of biodiversity. The conditions of chemical, physical and biological environment enables the production of a variety of substances by the biota, transforming the marine natural products resources on a promising research for new bioactive compounds. The genus Tubastraea (Scleractinia, Dendrophylliidae) includes ahermatypic corals that produce bioactive secondary compounds in competitive situations. In the state of Rio de Janeiro are found two invasive species of this genus, Tubastraea coccinea and Tubastraea tagusensis. The first is widely distributed in the tropical waters of the Atlantic and Pacific, and the second is native to the eastern Pacific, both are invasive in the South Atlantic. This study is focused on the anti-inflammatory, antioxidant and toxicological evaluation of methanol extracts of T. coccinea and T. tagusensis. Tubastraea colonies were collected in the Ilha Grande Bay, Rio de Janeiro - Brazil and extracted with methanol. Chemical characterization was performed by spectroscopies ultraviolet, visible and infrared. Anti-inflammatory properties were assessed by in vivo carrageenan-induced mouse paw oedema. Radical scavenging was evaluated by DPPH method. In toxicological evaluation Salmonella/microsome mutagenicity assay, in the presence and absence of exogenous metabolic activation, the in vitro mammalian cell micronucleus test and mortality test to brine shrimp Artemia salina were performed. Distinct chemical groups in extracts were found, with the results being corroborated with the literature. The extracts from both species showed significant inhibition of paw oedema at the doses tested, in relation to the vehicle. Both extracts showed DPPH radicals scavenger capacity. Cytotoxic and mutagenic activities in the absence of exogenous metabolism were not observed for TA97, TA98 and TA102 strains by both species. T. coccinea extract induced cytotoxicity in TA100 at 50 μg/placa. Both extracts induced cytotoxicity in the presence of exogenous metabolism for TA98 strain, and was also detected induction of mutagenicity by T. coccinea extract. The extracts were unable to induce micronucleus formation and were not toxic to the brine shrimp assay. The inhibitory response of carrageenan-induced mouse paw oedema after two hours indicates that the compounds present in the extracts act on the second stage of inflammation, possibly by inhibiting prostaglandin production. The results suggest that the extracts of the species T. coccinea and T. tagusensis contain pharmacological substances with potential use as anti-inflammatory and antioxidant.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-19T17:11:18Z No. of bitstreams: 1 Marcia Paula Oliveira Farias.pdf: 458390 bytes, checksum: 177ae1686037c9ba17a91bd3068a2d56 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T17:11:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcia Paula Oliveira Farias.pdf: 458390 bytes, checksum: 177ae1686037c9ba17a91bd3068a2d56 (MD5) Previous issue date: 2007-02-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was performed with the aim of to evaluate the “in vitro” acaricidal activity of the oil of the seed of andiroba against Boophilus microplus, Rhipicephalus sanguineus and Anocentor nitens; the biological activity of the third stage larvae (L3) of Musca domestica and the activity of the oil of the seed of andiroba on the larval culture of gastrointestinal nematodes of goat and sheep. The acaricidal activity in the related species of tick was carried by means of the engorged females immersion test, using groups of 10 engorged females with three repetitions for treatment; for the test with the third stage larvae (L3) of Musca domestica it had been formed four repetitions with 10 larvae for treatment. Strips of filter paper measuring 8.5 x 1.5cm (L x W) were soaked in 0.3ml of the solutions and controls, and next, they were introduced in test tubes, adding 1.30g of vermiculite, being the tubes closed with absorbent cotton. Daily observations were made for detection of mortality of larvae, formation of pupae and adults emergence. The activity of the oil of andiroba on larval culture of gastrointestinalnematodes was determined by the calculation of the percentages of reduction of infective larvae for gram of faeces, using three repetitions. For each experiment it had been used dilutions of 100%, 50%, 30%, 25% and 10% (T1, T2, T3, T4 and T5 respectively) of the oil of the seed of andiroba, using tween 80 as detergent. Two groups had been formed as controls, one with deionized water and another one with tween 80 + deionized water. For the test of reduction of gastrointestinal infective larvae of nematodes, another group was added as positive control (doramectina). The results showed effectiveness of 100% for all the dilutions tested in the three species of ticks. In the test with L3 of de M. domestica, eight days after the accomplishment of the test, it was observed in the 100% concentration 20.0% of larval mortality and 62.5% of inhibition of emergency of adults, values significantly higher than those got in the other treated groups.In the test of reduction of gastrointestinal infective larvae of nematodes, effective reduction (> 90%) was obtained for 100%, 50% and 30% treatments in goat, and for all the treatments for sheep. / Avaliou-se “in vitro” a atividade acaricida do óleo da semente da andiroba contra Boophilus microplus, Rhipicephalus sanguineus e Anocentor nitens; a atividade biológica do óleo da semente de andiroba em larvas de terceiro estágio (L3) de Musca domestica e a atividade do óleo da semente da andiroba sobre o cultivo de larvas de nematóides gastrintestinais caprinos e ovinos. A atividade acaricida nas referidas espécies de carrapatos foi realizada por meio do teste de imersão de fêmeas ingurgitadas, utilizando-se grupos de 10 fêmeas ingurgitadas com três repetições por tratamento; para o teste com L3 de Musca domestica quatro repetições compostas por 10 larvas de terceiro estágio foram formadas. Tiras de papel filtro medindo 8,5 x 1,5cm (C x L) foram embebidas em 0,3ml das soluções do óleo de andiroba e controles, em seguida, colocadas dentro de tubos de ensaio, acrescentando-se 1,30g de vermiculita, introduzindo-se, então, as 10 larvas e vedando-se com algodão hidrófilo. Fez-se observação diária para detecção de mortalidade de larvas, pupação e emergência de adultos. A atividadedo óleo de andiroba sobre cultivos de L3 de nematóides gastrintestinais foi determinada pelo cálculo dos percentuais de redução de larvas infectantes por gramas de fezes (LPG), utilizando-se três repetições. Para cada experimento empregaram-se diluições de 100%, 50%, 30%, 25% e 10% (T1, T2, T3, T4 e T5 respectivamente) do óleo da semente de andiroba, utilizando-se tween 80 como dispersante. Formaram-se dois grupos controle, um com água destilada e outro com tween 80 + água destilada. Para o teste de redução de larvas infectantes de nematóides gastrintestinais, acrescentou-se um grupo controle positivo (doramectina). Os resultados revelaram eficácia de 100% para todas as diluições testadas nas três espécies de carrapatos. No teste com L3 de Musca domestica, após oito dias da realização do teste, na concentração de 100% obteve-se 20,0% de mortalidade larval e 62,5% de inibição de emergência de adultos, valoressignificativamente superiores aos obtidos nos demais tratamentos. No teste de redução do LPG de nematóides gastrintestinais, os resultados revelaram redução altamente efetiva (> 90%) no número de larvas totais para os tratamentos 100%, 50% e 30% em caprinos e em todos os tratamentos para a espécie ovina.

Os isômeros de posição do triterpeno pentacíclico amirina (alfa e beta), estão presentes em várias espécies de plantas, como a Protium spruceanum. Estas moléculas vêm mostrando várias propriedades farmacológicas importantes, como efeitos anti-inflamatórios, efeito gastroprotetor, efeito antipruriginoso, efeito antitumoral, entre outros, sendo, dessa forma, uma candidata a um novo fármaco. No entanto, o comportamento destas substâncias frente as enzimas do citocromo P450 (CYP 450) ainda não foram estudadas. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo realizar um estudo de metabolismo in vitro com esses triterpenos, caracterizar os parâmetros cinéticos enzimáticos assim como possíveis metabólitos que possam surgir empregando microssomas hepático de ratos. Para isto, foi desenvolvido e validado um método bioanalítico para análise desses triterpenos em microssomas de ratos e análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM). Como técnica de preparação das amostras foi empregado a extração liquido-liquido utilizando hexano como solvente extrator. A metodologia para quantificação dos triterpenos em microssomas hepático foi validada de acordo com a legislação vigente para análise de fármacos em fluidos biológicos, avaliando os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, exatidão, estabilidade e recuperação. Todos os parâmetros avaliados corroboraram com as exigências da legislação. Após validação, iniciou-se os estudos para determinação dos parâmetros cinéticos enzimáticos avaliando a variação do tempo de incubação e da concentração de proteínas microssomais no consumo dos subtratos. Utilizando a faixa linear destes experimentos foi determinada a concentração de 0,25 mg mL-1 e o tempo de incubação de 20 min, respeitando as condições de Velocidade Inicial. Em seguida, ao avaliar a variação da concentração do substrato observou-se que a cinética obtida é do tipo sigmoidal. Dessa forma, para os cálculos dos parâmetros cinéticos foi utilizado a equação de Hill, obtendo Vmax = 0,698 ± 0,022 ?mol/mg proteína/min, S50 = 55,1 ± 10,5 ?M e o coeficiente de Hill 2,7 ± 0,17, já os parâmetros da beta amirina foram: Vmax = 0,775 ± 0,034 ?mol/mg proteína/min, S50 = 130,4 ± 42,8 ?M e coeficiente de Hill 2,5 ± 0,21. A partir destes dados obteve-se o clearance intrínseco para a beta e a alfa amirina de 3,05 mL/min/kg e 6,55 mL/min/kg, respectivamente. Apesar das amirinas serem metabolizadas pelas enzimas da CYP 450, nenhum metabólito foi encontrado. Nesse trabalho, foi demostrando pela primeira vez, o comportamento das enzimas das CYP 450 de ratos frente aos produtos naturais alfa e beta amirina, no qual foi verificado um comportamento atípico, que não segue a cinética michaeliana. / The isomers of pentacyclic triterpene amyrins (alpha and beta) occurring in a variety of plants, as Protium spruceanum. These molecules have showed significant pharmacological effects, as anti-inflammatory, gastroprotective and antitumor effects. Based on that, these substances have demonstrated great potential to become new drugs. However, the metabolic behavior by employing CYP enzymes (CYP450) has not been studied yet. The aim of this work was to perform an in vitro metabolism study by using these triterpenes and to determine the enzymatic kinetic parameters and possible metabolites by employing rat liver microsomes. To perform that, a bioanalytical method was developed and validated to analysis amyrins in rat microsomes. Gas chromatography coupled with mass spectrometer (GC-MS) was applied in the analysis. Liquid-liquid extraction was used to clean the sample and hexane was used as extraction solvent. Before metabolism studies, the method was validated according to current legislation to analysis of drugs in biological fluids. The following parameters were evaluated: linearity, sensitivity, selectivity, precision, accuracy, stability and recovery. All parameters evaluated were in agreement to legislation guidelines. After validation, enzymatic kinetic parameters were determined through variation of incubation time and concentration of microsomal proteins. By using linear range, the incubation time of 20 min and microsomal protein concentration of 0.25 mg mL-1 were determined to respect V0 conditions. The enzymatic kinect results showed a sigmoidal profile. Thus, to calculate the kinetic parameters it was used the Hill equation. It was observed a Vmax = 0.698 ± 0.022 ?mol/mg protein/min, S50 = 55.18 ± 10.5 ?M and Hill coefficient of 2.7 ± 0.17 to alpha amyrin and a Vmax = 0.775 ± 0.034 ?mol/mg protein/min, S50 = 130.4 ± 42.8 ?M and Hill coefficient of 2.5 ± 0.21 to beta amyrin. The intrinsic clearance to beta and alpha amyrin was 3.05 mL/min/kg e 6.55 mL/min/kg, respectively. In spite of amyrins were metabolized by the CYP 450 enzymes, none metabolite was found. In this work, it was demonstrated, for the first time, the behavior of rat liver microsomes front to alpha and beta amyrin, in which it was observed an atypical behavior, that it does not follow the Michaelis-Menten kinetics.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucienyOliveiraCosta_dissertacaocompleta.pdf: 360050 bytes, checksum: 8d7f1f64d7adf3c6ec4a39d01097d5a3 (MD5) Previous issue date: 2010-03-04 / Azadirachta indica A. Juss, a tree native to India, commonly Known as neem, characteristic of tropical climate, is virtually non-toxic to humans and does not harm the environment. Boophilus microplus belongs to the family Ixodidae and is a species of tick that undermines cattle productivity. This study determine the effect of two treatments - alcoholic extract of Azadirachta indica and TriatoxTM - on the reproductive parameters and tickcidal actions of the telegenic females of the Boophilus microplus tick. Neem leaf extract was obtained with alcohol 70° GL, according to the technique described by Caceres et al. (1990, 1995). About 200 Boophilus microplus telegenic females were obtained from two naturally infested dairy Holstein cows in a farm of Alfenas, MG, Brazil. The females were analyzed at the Universidade José do Rosário Vellano UNIFENAS Laboratory of Biology and Physiology of Microrganisms. The following preparations were used: neem leaf extract: non-diluted (pure) and diluted to 10-1 and 10-2; distilled water (negative control); and Amitraz, which was diluted according to the manufacturer's recommendation. The telegenic females were submitted to an immersion bath during 30 seconds, and then distributed, one by one, into test tubes capped with gauze and left in a horizontal position at room temperature. The parameters were evaluated only after the death of all the telegenic females in distilled water. The results were analyzed by means of the statistical software Bioestat, and the Kruskal-Wallis test was used to compare the groups (neem, distilled water, and Amitraz) at the 5% significance level. The results showed that Amitraz may be replaced by the Azadirachta indica extract, because the latter was effective against ticks by inhibiting oviposition, increased mortality, reduced survival, producing fewer numbers of fertile and/or infertile eggs and lower weight of egg masses. / A espécie Azadirachta indica A. Juss, popularmente conhecida como nim, é uma árvore nativa da Índia, característica de clima tropical, sendo praticamente atóxica ao homem e não agride ao meio ambiente. O Boophilus microplus é pertencente à família dos Ixodídeos e considerado a principal espécie de carrapato que compromete a produtividade da pecuária bovina. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de verificar o efeito do extrato hidroalcoólico de Azadirachta indica e do Amitraz (Triatox®) sobre os parâmetros reprodutivos e suas ações carrapaticidas nas teleógenas do carrapato da espécie Boophilus microplus. O extrato das folhas secas de nim foi obtido através da extração com álcool a 70° GL, conforme técnica descrita por Caceres et al. (1990,1995). Foram coletadas, aproximadamente 200 teleógenas do carrapato Boophilus microplus, de duas vacas leiteiras das raças holandesas, naturalmente infestadas, pertencentes a uma propriedade da cidade de Alfenas MG. As teleógenas foram transportadas para o Laboratório de Biologia e Fisiologia de Microrganismos da Universidade José do Rosário Vellano UNIFENAS Alfenas MG, onde foram realizadas as análises. Foi utilizado o extrato de nim sem diluir (bruto) e diluído a 10-1 e 10-2 mg/L, bem como a água destilada (controle negativo) e o Amitraz, que foi diluído conforme a recomendação do fabricante. As teleógenas foram submetidas ao banho de imersão durante 30 segundos e, em seguida, foram distribuídas unitariamente em tubos de ensaios tampados com gaze e deixados na posição horizontal, em temperatura ambiente. Os parâmetros foram avaliados somente após a quenógena (morte) de todas as teleógenas com água destilada. Para a análise dos resultados, utilizou-se o software estatístico Bioestat e o teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para a comparação dos grupos (extrato de nim, água destilada e Amitraz) ao nível de 5% de significância. Os resultados experimentais mostraram que o extrato de Azadirachta indica pode ser substituído pelo Amitraz (produto sintético), pois sua eficácia na inibição da oviposição, menor tempo de mortalidade, menor sobrevivência, menor quantidade de ovos férteis e/ou inférteis e menor peso das massas de ovos das teleógenas submetidas a esse extrato foi comprovada nesse trabalho.