Em bovinos , as flutuações nas concentrações de estradiol (E2) e progesterona ( P4) que ocorrem em torno do estro modulam a expressão gênica do endométrio, a composição histotrofo, o desenvolvimento do concepto e assim afetam o resultado da prenhez. Durante o ciclo estral, ações endócrinas bem orquestradas afetam o endométrio bovino (BAUERSACHS et al., 2005). No presente trabalho, a hipótese sustentada é que alterações endócrinas associadas ao crescimento e ovulação de folículos de diferentes tamanhos modulam a distribuição espacial das transcrições no trato reprodutivo de vacas da raça Nelore. O crescimento folicular de vacas Nelore multíparas e não lactantes foi farmacologicamente manipulado a fim de gerar grupos com folículos pré-ovulatórios e subsequente corpo lúteo (ou seja, diferentes ambientes endócrinos periovulatórios) grande (FG CLG; n = 6) ou pequeno (FP CLP, n = 6). Os animais foram abatidos, sete dias após a indução da ovulação e fragmentos das regiões anterior, média e posterior de ambos os cornos uterinos e da vagina foram coletados para a avaliação de expressão gênica por PCR quantitativo. A expressão gênica foi normalizada utilizando os genes referência ciclofilina A e beta actina, como indicado pelo software GeNorm. Os dados foram analisados utilizando-se o procedimento PROC MIXED do SAS (versão 9.2; Instituto SAS) em dois modelos independentes. O primeiro modelo incluiu os efeitos de grupo (FG CLG e FP CLP), lado do corno uterino (ipsolateral ou contralateral ao ovário contendo o CL) e sua interação, o segundo modelo incluiu os efeitos de grupo, região (anterior, médio e posterior) do corno ipsolateral e suas interações. Vacas do grupo FP CLP apresentou maiores folículos pré-ovulatórios e concentrações de E2 durante proestro e maiores CL e níveis de P4 no diestro inicial, quando comparados com os do grupo FP CLP. Animais do grupo FP CLP apresentaram uma maior abundância de transcritos que codificam o receptor de E2 (ESR2; 130%), a aldo-ceto redutase família 1, membro C4 (AKR1C4; 232%), a lipoproteína lipase (LPL; 116%), o carreador de soluto família 2, membro 1 (SLC2A1; 24%) e inibidor da peptidase da serina, subtipo A, membro 14 (SERPINA14; 75%). Por outro lado, a expressão de genes que codificam o receptor de P4 e receptor de oxitocina foi regulada positivamente no tecido endometrial do grupo FP CLP (36 % e 966 %, respectivamente). Além disso, a abundância da transcrição desse genes foi maior no corno contralateral ao CL. Além disso, a região anterior do corno uterino ipsolateral apresentou aumentada expressão de PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 e SERPINA14 em comparação com a região posterior. Com exceção da OXTR que apresentou interação grupo e lado, não houve interações grupo por lado ou região. Não houve efeito de grupo sobre a expressão de qualquer um dos genes na vagina. Em conclusão, o presente estudo mostrou que o padrão de expressão de genes específicos em resposta variou quanto a grupo e entre as regiões do trato reprodutivo de fêmeas bovinas. No entanto, os distintos ambientes endócrino periovulatórios não afetaram a distribuição regional de transcritos. / In cattle, fluctuations of progesterone (P4) and estradiol (E2) concentrations that occur around estrus modulate endometrial gene expression, histotroph composition, conceptus development and, thereby affect pregnancy outcome. During the estrous cycle, well-orchestrated endocrine actions affect the bovine endometrium (BAUERSACHS et al., 2005). In the present work, we hypothesized that endocrine changes associated with growth and ovulation of follicles of different sizes modulate the spatial distribution of transcripts in the reproductive tract of Nellore cows. The follicular growth of multiparous non-lactating Nelore cows was pharmacologically manipulated in order to generate groups with large (LF LCL; n=6) or small (SF SCL; n=6) preovulatory follicles and subsequent corpus luteum (i.e., different periovulatory endocrine milieus). Cows were slaughtered seven days after the induction of ovulation and fragments from the anterior, middle and posterior regions from both uterine horns and the vagina were collected. Gene expression assessment was performed by quantitative PCR. Gene expression was normalized using cyclophilin A and actin, beta as reference genes, as indicated by the GeNorm software. Data were analysed using the PROC MIXED procedure of SAS (Version 9.2; SAS Institute) in two independent models. The first model included the effects of group (LF LCL and SF SCL), side of the uterine horn (ipsilateral or contralateral to the ovary containing the CL) and interaction and the second model included the effects of group, region of the ipsilateral horn (anterior, middle and posterior) and interaction. Cows in the LF LCL group presented larger preovulatory follicles and E2 concentrations during proestrus and larger CL and P4 levels during early diestrus when compared to animals from SF SCL group. Animals in the LF LCL group had a greater abundance of transcripts coding the estrogen receptor (ESR2; 130%), aldo-keto reductase family 1, member C4 (AKR1C4; 232%), lipoprotein lipase (LPL; 116%), solute carrier family 2, member 1 (SLC2A1; 24%) and serpin peptidase inhibitor, clade A member 14 (SERPINA14; 75%). Conversely, the expression of genes coding the progesterone receptor and oxytocin receptor was upregulated in the SFSCL endometrial tissue (36% and 966% respectively). Furthermore, transcript abundance of the later genes was observed in the contralateral horn. In addition, the anterior region of the ipsilateral horn showed increased expression of PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 and SERPINA14 compared to the posterior region. Except for a group by side interaction for the expression of OXTR, there were no group by region or group by side interactions. There was no effect of group on the expression of any of the genes in the vagina. In conclusion, our study showed that the expression pattern of specific genes varied in response to group and among regions of the female reproductive tract. However, distinct endocrine periovulatory milieus did no affect regional distribution of transcripts.

Em bovinos , as flutuações nas concentrações de estradiol (E2) e progesterona ( P4) que ocorrem em torno do estro modulam a expressão gênica do endométrio, a composição histotrofo, o desenvolvimento do concepto e assim afetam o resultado da prenhez. Durante o ciclo estral, ações endócrinas bem orquestradas afetam o endométrio bovino (BAUERSACHS et al., 2005). No presente trabalho, a hipótese sustentada é que alterações endócrinas associadas ao crescimento e ovulação de folículos de diferentes tamanhos modulam a distribuição espacial das transcrições no trato reprodutivo de vacas da raça Nelore. O crescimento folicular de vacas Nelore multíparas e não lactantes foi farmacologicamente manipulado a fim de gerar grupos com folículos pré-ovulatórios e subsequente corpo lúteo (ou seja, diferentes ambientes endócrinos periovulatórios) grande (FG CLG; n = 6) ou pequeno (FP CLP, n = 6). Os animais foram abatidos, sete dias após a indução da ovulação e fragmentos das regiões anterior, média e posterior de ambos os cornos uterinos e da vagina foram coletados para a avaliação de expressão gênica por PCR quantitativo. A expressão gênica foi normalizada utilizando os genes referência ciclofilina A e beta actina, como indicado pelo software GeNorm. Os dados foram analisados utilizando-se o procedimento PROC MIXED do SAS (versão 9.2; Instituto SAS) em dois modelos independentes. O primeiro modelo incluiu os efeitos de grupo (FG CLG e FP CLP), lado do corno uterino (ipsolateral ou contralateral ao ovário contendo o CL) e sua interação, o segundo modelo incluiu os efeitos de grupo, região (anterior, médio e posterior) do corno ipsolateral e suas interações. Vacas do grupo FP CLP apresentou maiores folículos pré-ovulatórios e concentrações de E2 durante proestro e maiores CL e níveis de P4 no diestro inicial, quando comparados com os do grupo FP CLP. Animais do grupo FP CLP apresentaram uma maior abundância de transcritos que codificam o receptor de E2 (ESR2; 130%), a aldo-ceto redutase família 1, membro C4 (AKR1C4; 232%), a lipoproteína lipase (LPL; 116%), o carreador de soluto família 2, membro 1 (SLC2A1; 24%) e inibidor da peptidase da serina, subtipo A, membro 14 (SERPINA14; 75%). Por outro lado, a expressão de genes que codificam o receptor de P4 e receptor de oxitocina foi regulada positivamente no tecido endometrial do grupo FP CLP (36 % e 966 %, respectivamente). Além disso, a abundância da transcrição desse genes foi maior no corno contralateral ao CL. Além disso, a região anterior do corno uterino ipsolateral apresentou aumentada expressão de PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 e SERPINA14 em comparação com a região posterior. Com exceção da OXTR que apresentou interação grupo e lado, não houve interações grupo por lado ou região. Não houve efeito de grupo sobre a expressão de qualquer um dos genes na vagina. Em conclusão, o presente estudo mostrou que o padrão de expressão de genes específicos em resposta variou quanto a grupo e entre as regiões do trato reprodutivo de fêmeas bovinas. No entanto, os distintos ambientes endócrino periovulatórios não afetaram a distribuição regional de transcritos. / In cattle, fluctuations of progesterone (P4) and estradiol (E2) concentrations that occur around estrus modulate endometrial gene expression, histotroph composition, conceptus development and, thereby affect pregnancy outcome. During the estrous cycle, well-orchestrated endocrine actions affect the bovine endometrium (BAUERSACHS et al., 2005). In the present work, we hypothesized that endocrine changes associated with growth and ovulation of follicles of different sizes modulate the spatial distribution of transcripts in the reproductive tract of Nellore cows. The follicular growth of multiparous non-lactating Nelore cows was pharmacologically manipulated in order to generate groups with large (LF LCL; n=6) or small (SF SCL; n=6) preovulatory follicles and subsequent corpus luteum (i.e., different periovulatory endocrine milieus). Cows were slaughtered seven days after the induction of ovulation and fragments from the anterior, middle and posterior regions from both uterine horns and the vagina were collected. Gene expression assessment was performed by quantitative PCR. Gene expression was normalized using cyclophilin A and actin, beta as reference genes, as indicated by the GeNorm software. Data were analysed using the PROC MIXED procedure of SAS (Version 9.2; SAS Institute) in two independent models. The first model included the effects of group (LF LCL and SF SCL), side of the uterine horn (ipsilateral or contralateral to the ovary containing the CL) and interaction and the second model included the effects of group, region of the ipsilateral horn (anterior, middle and posterior) and interaction. Cows in the LF LCL group presented larger preovulatory follicles and E2 concentrations during proestrus and larger CL and P4 levels during early diestrus when compared to animals from SF SCL group. Animals in the LF LCL group had a greater abundance of transcripts coding the estrogen receptor (ESR2; 130%), aldo-keto reductase family 1, member C4 (AKR1C4; 232%), lipoprotein lipase (LPL; 116%), solute carrier family 2, member 1 (SLC2A1; 24%) and serpin peptidase inhibitor, clade A member 14 (SERPINA14; 75%). Conversely, the expression of genes coding the progesterone receptor and oxytocin receptor was upregulated in the SFSCL endometrial tissue (36% and 966% respectively). Furthermore, transcript abundance of the later genes was observed in the contralateral horn. In addition, the anterior region of the ipsilateral horn showed increased expression of PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 and SERPINA14 compared to the posterior region. Except for a group by side interaction for the expression of OXTR, there were no group by region or group by side interactions. There was no effect of group on the expression of any of the genes in the vagina. In conclusion, our study showed that the expression pattern of specific genes varied in response to group and among regions of the female reproductive tract. However, distinct endocrine periovulatory milieus did no affect regional distribution of transcripts.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La lapa (Fissurella sp.) es uno de los moluscos gastrópodos extraídos habitualmente para el consumo humano. Su captura desde los bancos naturales ha aumentando progresivamente en los últimos años, debido a sus características físico-organolépticas muy similares al loco (Concholepas concholepas) y al abalone (Haliotis sp.). El alza en los precios y el consecuente aumento de las exportaciones, sumado a la falta de vedas, hacen pensar en una posible crisis de este recurso en el futuro. Tanto para el manejo sustentable de las especies, como para el desarrollo de procedimientos de cultivo de ellas, es necesario conocer los procesos reproductivos y de crecimiento, y su regulación. Los objetivos de este trabajo fueron describir histológicamente el ovario, caracterizando los diversos estados de madurez gonadal de esta especie; detectar la presencia de progesterona en la gónada y analizar si existe relación entre la concentración hormonal con el estado de madurez gonadal. Se trabajó con 12 lapas hembras, mayores de 45 mm de longitud de concha, recolectadas en el sector de Montemar (V Región), mensualmente durante agosto, octubre y diciembre de 1997; febrero y abril de 1998 (total n=60). Luego de identificar las hembras, se registró la longitud y ancho de la concha, peso total, peso blando del animal y el de cada ovario, determinándose el Indice Gonadosomático: relación peso de la gónada con respecto al peso total de las partes blandas. Se observó que presentan dos períodos de evacuación de gametos, en relación al valor de IGS: el principal en el mes de diciembre (6,73) y otro menor en agosto (7,98), calificados histológicamente como desoves parciales y no totales como ocurre en otras especies de lapas. Además, se registró un incremento del IGS de mayor magnitud en el mes de octubre (9,95) y otro secundario en febrero (8,80). El análisis histológico del ovario de cada individuo, se realizó obteniendo una muestra de 5 a 8 mm de tejido gonadal que se fijó en Bouin alcohólico. Cortes histológicos de 5 grosor, fueron teñidos con Hematoxilina–Eosina. Adicionalmente, con el objeto de diferenciar en forma clara y selectiva los diversos elementos que comprenden el estroma ovárico, se realizaron 2 tinciones complementarias: Van Gieson para la identificación de fibras colágenas y PAS (Ácido Peryódico Shiff) para glicosaminoglicanos. El estudio de los cortes histológicos de los ovarios se dividió en dos partes principales: la primera, fue realizar una descripción de la línea germinal de F. crassa, reconociéndose una Línea Germinal Temprana (LGT) y una Línea Germinal Avanzada (LGA). La segunda, fue clasificar los cinco estados de madurez histológica del ovario: inmaduro E° 0, en maduración temprana E°1, en maduración avanzada E° 2, maduro E°3 y desove E° 4, según las características de la línea germinal y estructurales de la gónada. Durante los meses en estudio se encontraron presentes todos los tipos celulares que comprenden la LGT y LGA, en los cinco diferentes estados de madurez ovárica, caracterizados por un predominio celular diferente, según la época del año. De acuerdo al análisis de la estructura gonadal macro y microscópica observada, se puede concluir que Fissurella crassa posee similares características morfológicas, reproductivas y gametogénicas que otras especies de la familia Fissurellidae. Finalmente, con el objeto de estimar la concentración de progesterona, se tomaron 2; 1 ó 0,5 gramos de gónada respectivamente, según el peso de cada ovario y posteriormente se congelaron a - 20°C, hasta su procesamiento. La progesterona contenida en la fracción lipídica del tejido gonadal se obtuvo mediante triple extracción con diclorometano al 99,5 %, que luego se evaporó a sequedad, obteniéndose un extracto seco, el cual fue resuspendido con buffer PBS 0,01 M a pH 7,4 a partir del cual se realizó el radioinmunoanálisis (RIA) (D.P.C., Coat-A-Count ®). La concentración promedio mensual de progesterona, fue mayor en el mes de agosto (1,75 pmol/g ovario) y menor en el mes de febrero (1,19 pmol/g ovario). El análisis estadístico (ANDEVA y Test de Tukey) indicó que existe diferencia significativa (p<0,05) en la concentración de progesterona, entre los meses de agosto y abril con respecto a diciembre y febrero; la muestra de octubre no difiere significativamente del resto de los meses. Además, se encontró que no existe una fuerte correlación entre el grado de madurez del ovario y la concentración de progesterona (Correlación de Pearson = 0,56). Los resultados obtenidos en el presente estudio, todavía no permiten establecer el papel que cumple esta hormona en el ciclo reproductivo de Fissurella crassa. Lo más probable es que existan además de la progesterona, otros factores neuroendocrinos, de naturaleza tanto esteroidal como proteica, relacionados con el ciclo reproductivo de esta especie

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6068_DISSERTAÇÃO - VAGNER SARMENTO.pdf: 7047236 bytes, checksum: c1c1143aa92a874e1b41fe7df24cafb2 (MD5) Previous issue date: 2012-07-09 / Objetivou-se avaliar o padrão vascular luteal entre o 12º e 20º dias pós-inseminação em bovinos e determinar a confiabilidade do uso de Doppler colorido para predizer animais não-gestantes 20 dias após a Inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando como único parâmetro a avaliação visual do fluxo sanguíneo no corpo lúteo (FSCL). Foram utilizadas vacas e novilhas mestiças de Holandês x Gir, submetidas a protocolo de IATF, em duas repetições. No primeiro estudo, os animais (n=115) foram monitorados no período de 12 a 20 dias após a primeira IATF, e o corpo lúteo (CL) avaliado a cada 48h utilizando-se um equipamento portátil de ultrasonografia equipado com a função Doppler colorido (MyLab30, Esaote, Italia) e probe linear retal de 7,5 MHz. Foi calculada a área total do CL (ACL), área da cavidade luteal (CCL), área de tecido luteal (ATL, ACL menos área da CCL, se presentes), área do sinal Doppler (AV) e proporção entre AV e ATL (PV). No D30, os animais foram submetidos ao diagnóstico de gestação. A atividade luteal foi monitorada pela determinação da concentração plasmática de progesterona (CPP) no sangue, coletado em todos os dias em que ocorriam os exames ultrassonográficos. Os valores de ACL, CCL, ATL, AV, PV e CPP entre o D12 e D20 foram comparados entre animais posteriormente classificados como gestantes ou não gestantes. Não houve efeito de dia nas variáveis ACL, CCL, ATL, AV, PV e CPP de animais posteriormente diagnosticados como gestantes (P>0,05). Nos animais não gestantes, houve redução (P<0,01) nos parâmetros luteais até o D20. Apesar das medidas realizadas com Doppler colorido (AV e PV) apresentarem elevados CVs (>50%), elas apresentaram diferenças significativas entre animais gestantes e não gestantes mais cedo em relação à ATL (diferenças a partir de D18), a CPP (D18) e ACL (D20). No experimento 2, foram consideradas as avaliações (n=208) realizadas nos animais nas duas baterias de IATF 20 dias após a inseminação (D20). Os animais tiveram o fluxo sanguíneo luteal avaliado por ultrasonografia Doppler, conforme descrito no primeiro experimento. Com base unicamente na avaliação visual e subjetiva do FSCL, os animais foram classificados como gestantes ou não gestantes. No D30, o mesmo operador realizou o diagnóstico de gestação (DG) final. O DG final foi comparado retrospectivamente com o diagnóstico baseado no FSCL e o resultado de cada animal classificado como correto ou incorreto. O número de verdadeiro-positivos (VP), verdadeiro-negativos (VN), falsopositivos (FP) e falso-negativos (FN) foram inseridos em uma tabela de contingência 2x2. A sensibilidade (SEN), especificidade (ESP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e acurácia/confiabilidade (ACC) do diagnóstico por FSCL foram calculados com as seguintes equações: SEN=VP/(VP+FN); ESP=VN/(FP+VN); VPP=VP/(VP+FP); VPN=VN/(FN+VN); e ACC=(VP+VN)/n total. Variáveis binomiais (taxa de gestação e proporções) foram analisadas pelo teste quiquadrado. Os parâmetros de desempenho do diagnóstico baseado no FSCL foram: SEN=97,1%; ESP=51,9%; VPP=66,9%; VPN=94,7%; e ACC=74,5%. A proporção de FP foi 24,0% (50/208) e a de FN foi 1,4% (3/208). Conclui-se que o uso do Doppler colorido pode resultar em diagnósticos mais precoces e mais acurados de alterações da função luteal no período de reconhecimento materno da gestação e que a avaliação visual do FSCL 20 dias após a IATF pode ser utilizada na identificação de animais não-gestantes para re-sincronização.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:58:56Z : No. of bitstreams: 1 dias_cc_me_botfmvz.pdf: 323339 bytes, checksum: 725d51a35fb86fca8619ebfdadfe86cd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste experimento foi avaliar a influência da concentração sérica de progesterona ([P4]) nos dias (d) 0 e/ou d7 do protocolo de sincronização da ovulação e da reutilização de dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR) nos resultados a IATF em novilhas Nelore ciclando (n=398). O protocolo utilizado foi: d0-CIDR [sem utilização prévia (1ºuso), previamente utilizados por 9d (2ºuso) ou 18d (3ºuso)]+BE(2mg)+amostra de sangue para dosagem [P4], d7-PGF2(12,5mg)+amostra de sangue para dosagem [P4], d9-retirada do CIDR®+ECP(1mg), d11-IATF+mensuração do Fol, d13-avaliação da ovulação e d41-diagnóstico de gestação. Variáveis contínuas foram analizadas pelo PROC-GLM e binomiais pelo PROC-LOGISTIC do SAS. Foi considerada diferença estatística P<0,05 e tendência P<0,1. A [P4d0] influenciou de forma positiva Fol, concepção e prenhez. A [P4d7] não influenciou os parâmetros avaliados. O Fol, foi menor para 1uso (10,10,19mm) do que 3uso (11,00,21mm) e 2uso (10,60,20mm) não diferiu dos demais. A taxa de sincronização das classes de Fol diferiram entre si (Classe1:Fol<8,5, 28,2%, Classe2:8,5-10,0, 62,5%, Classe3:>10mm, 92,2%. A taxa de concepção das classes de Fol foi avaliada de acordo com o número de utilizações do CIDR no 1º e 2º usos as classes 1 e 2 tiveram menor concepção do que a Classe3, mas no 3ºuso as classes tiveram concepção similar (Classe1, 9,1%, 0%, 40,0%, Classe2: 24,0%, 21,7%, 54,5% Classe3, 52,4%, 48,9%, 53,8%, 1, 2 e 3usos respectivamente). A taxa de concepção, tendeu a ser maior com 3uso (53,2%) que 1ºuso (37,2%) e 2uso (37,8%). A taxa de prenhez, foi maior com 3ºuso (35,5%) que 1uso (20,5%) e 2uso (22,7%). / The aim of this study was to evaluate if progesterone concentrations [P4] on d0 and/or d7 of a protocol and if reutilization of intravaginal progesterone devices (CIDR) could affect FTAI success in Nellore cycling heifers. Heifers (n=398) received the protocol: d0: CIDR (with no previous use (1stuse), previously used for 9d (2nduse) or previously used for 18d (3rduse)) + EB(2mg) + blood samples to determine [P4d0], d7: PGF2 + blood sample to determine [P4d0], d9: CIDR® withdraw + ECP(1mg), D11: FTAI + largest follicle diameter measurement (Fol), D13: check ovulation and D41: pregnancy diagnoses. Continuous variables were analyzed by PROC-GLM and binomial by PROC-LOGISTIC of SAS. Statistical difference was considered with P<0,05 e tendency P<0,1. The [P4d0] positively influenced Fol, conception and pregnancy rates. The CIDR number of uses influenced [P4d7] (1stuse 2.4±1.1; 2nduse 2.0±1.0 and 3rduse 1.7±1.1ng/ml), but [P4d7] didn’t influence studied parameters. The Fol, was smaller on 1stuse (10,10,19mm) compared to 3rduse (11,00,21mm) and 2nduse (10,60,20mm) didn’t differ from others. Synchronization of Fol classes differed (Class1:Fol<8.5, 28,2%, Class2:8.5-10.0, 62.5%, Class3:>10mm, 92,2%. Conception of Fol classes were evaluated by CIDR number of uses. On 1st and 2nduse classes1 and 2 had lower conception compared to class3, but on 3rduse classes conceptions were similar (Class1, 9.1%, 0%, 40.0%, Class2: 24.0%, 21.7%, 54.5% Class3, 52.4%, 48.9%, 53.8%, 1st, 2nd and 3rduse, respectively). Conception tended to be higher on 3rduse (53.2%) compared to 1stuse (37.2%) and 2nduse (37.8%). Overall pregnancy was higher on 3rduse (35.5%) compared to 1stuse (20.5%) and 2nduse (22.7%).

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A depressão é um transtorno que possui maior prevalência nas mulheres do que nos homens. A progesterona pode estar envolvida nos mecanismos que geram estas diferenças. Este hormônio é utilizado clinicamente para mulheres em diversos eventos reprodutivos, e seu efeito na depressão não está bem estabelecido. Estudos em modelos animais mostraram que existe uma influência da progesterona no comportamento tipo-depressivo em roedores, mas estes estudos são inconclusivos. Autores têm demonstrado que as mudanças comportamentais em roedores ocasionadas pela progesterona estão associadas à alterações nas subunidades do receptor GABAA. O ácido Y-aminobutírico (GABA) é o principal neurotransmissor inibitório do sistema nervoso central. O receptor GABAérgico é composto de uma combinação de 5 subunidades que formam um poro iônico. A composição de subunidades mais comum é a composta de 2a1, 2b2 e 1g2. A modulação da atividade GABAérgica pela progesterona é específica à estrutura encefálica utilizada. O estriado é a estação de entrada para os núcleos da base, uma estrutura envolvida em respostas comportamentais. O córtex préfrontal é uma estrutura de grande importância no circuito límbico envolvida no controle de situações estressantes. Estudos têm mostrado uma assimetria funcional nesta estrutura relacionada ao gênero em respostas adaptativas ao estresse e no processamento emocional em humanos. Há também evidências relacionadas à depressão, de assimetria no sistema GABAérgico no estriado. Desta forma, no primeiro artigo, foi investigado o efeito antidepressivo de baixas doses de progesterona com dois protocolos de tratamento: agudo e crônico. No segundo e terceiro artigos foram avaliadas a expressão das subunidades a1 e g2 do receptor GABAA nos hemisférios direito e esquerdo do estriado e do córtex préfrontal de ratos Wistar machos e fêmeas que receberam o tratamento crônico com progesterona e de ratos que, adicionalmente, foram submetidos ao teste do nado forçado. No estriado, foi avaliada a expressão do mRNA, por RT-PCR, e no córtex pré-frontal foi avaliado em machos, adicionalmente, a expressão protéica por Western Blot destas subunidades. O tratamento agudo com progesterona não alterou o comportamento tipodepressivo dos ratos, mas o tratamento crônico diminuiu o comportamento tipodepressivo em fêmeas e aumentou em machos. A dose utilizada não alterou o ciclo hormonal das fêmeas. A análise da imobilidade dos animais que receberam veículo demonstrou que as fêmeas em diestro II foram mais depressivas do que os machos, refletida por sua maior imobilidade no teste do nado forçado. Este resultado comportamental das fêmeas pode estar associado aos mais baixos níveis séricos de progesterona característicos desta fase do seu ciclo reprodutivo. A expressão da subunidade g2 no estriado dos ratos controle foi assimétrica, onde machos mostraram maior expressão no hemisfério esquerdo do que no direito, que pode representar uma característica de risco mais baixo para depressão. Não houve assimetria no estriado das fêmeas ou no córtex pré-frontal dos grupos controle. No estriado e no córtex pré-frontal, o estresse altera a simetria da expressão da subunidade a1, induzindo maior expressão no lado direito do que no esquerdo. Esta resposta assimétrica ocorreu em ratos machos e em fêmeas submetidos ao estresse específico das injeções. Ainda, os machos respondem ao estresse pela alteração da expressão da subunidade a1 e têm a capacidade de se recuperar desta alteração após a exposição a outro tipo de estressor nas duas estruturas analisadas neste trabalho. O estresse, independente do tipo, diminui a expressão da subunidade g2, tanto no estriado como no córtex pré-frontal. O efeito antidepressivo da progesterona nas fêmeas está correlacionado com a maior expressão da subunidade a1 no córtex préfrontal. O efeito pró-depressivo nos machos está correlacionado com o aumento da expressão da subunidade g2 no estriado. Progesterona altera o comportamento tipo-depressivo alterando a eficiência do sistema GABAA no hemisfério direito do córtex pré-frontal de fêmeas e no estriado de machos. A análise da expressão do mRNA e da proteina demonstrou que progesterona e o nado forçado aumentaram bilateralmente a expressão do mRNA da subunidade α1, mas aumentaram a expressão protéica desta subunidade apenas no hemisfério direito. Além disso, progesterona não modificou o mRNA da subunidade g2 mas aumentou sua expressão protéica, indicando a existência de possíveis modificações pós-transcricionais. / Major depression is more prevalent among women than men, and progesterone might be involved in the mechanisms that generate these differences. Progesterone is clinically used for women in several reproductive events, but its antidepressant effect is unclear. Animal studies showed the interference of progesterone on depressive behaviors of rodents, but they are inconclusive, and no study compared different treatment durations. The behavioral changes ocasioned by progesterone has been associated with GABAAR activity modulation. Y-aminobutyric acid (GABA) is the main inhibitory neurotransmitter in the central nervous system, and generally consists of a combination of 2a1, 2β2 and 1g2 subunits. The modulation of GABAA receptor by progeterone is specific to brain region studied. Prefrontal cortex is a nodal point of a limbic circuit involved in the control of stress situations. Studies have shown a sex-related functional asymmetry in this region mediating adaptive coping responses to stress and emotional processing in humans.The striatum is the input station for the basal ganglia, which is involved in behavioral responses. In this structure, there is evidence of brain hemispheric asymmetry in the GABAergic system related to depression. This study investigated the antidepressant effect of low doses of progesterone in male and female rats under acute or chronic administration. Male and female Wistar rats in different phases of the estrous cycle were acutely administered different doses of progesterone (0.0, 0.4. 0.8 and 1.2 mg/kg) and tested in the forced swimming test (FST). The lowest dose of progesterone (0.4 mg/kg) was chronically administered during two complete estrous cycles and diestrous II female and male rats were tested in the FST. One group only received chronic progesterone without have been evalued in the FST. The effects on the GABAA a1 and g2 receptor subunit mRNA expressions by RT-PCR in the striatum and prefrontal cortex these animals were examined. In the prefrontal cortex, the protein expression by Western Blot of these subunits was additionally evaluated. Progesterone decreased depressive-like behaviors only in chronically treated diestrous II female rats and increased immobility in male rats. This low dose of progesterone did not interfere in the hormonal cycling in female rats. Results also showed that diestrous II female rats had greater immobility than male rats in the FST. The greater immobility of diestrous II female rats shows that rats in this estrous phase present more depressive-like behaviors that may be associated with their lower serum levels of progesterone. We showed that progesterone chronically administered at low doses reverses these depressive-like behaviors and has an antidepressant effect during the diestrous II phase of the estrous cycle. In the striatum, the expression of the g2 subunit displayed a gender-specific asymmetry. The stress caused by injections decreased the expression of g2 and a1 mRNA in the striatum of both male and female rats, while stress caused by forced swimming decreased only the expression of g2. Also, the expression of the g2 and a1 subunits modified in according to the nature of the stressor. Chronic progesterone treatment increased both, g2 and a1 subunits, depending on the brain hemisphere, the level of stress, and the gender. A positive correlation between depression-like behavior in male rats treated with progesterone and the expression of the g2 subunit in the right striatum was noted. Our findings suggest that the g2 subunit of GABAAR can play an important role in the regulation of depressive behavior under certain stress conditions. In the pre-frontal cortex, the expression of a1 and g2 mRNA subunits are gender-specific in the control and stressed rats. It occurred a hemispheric specificity in the expression of the a1 and g2 subunits in response to injections stress as well as to progesterone treatment differentially regulated by gender. The mRNA and protein expression analysis demonstrated that progesterone plus forced swimming increased billaterally the expression of α1 mRNA, but the protein expression was increased only in the right prefrontal cortex. Moreover, progesterone did not modify the g2 mRNA but it increased its protein expression, indicating the existence of possible post-transcriptional modifications in this structure. Also, there was a negative correlation between the mRNA and protein expression of α1 subunit in the right prefrontal cortex and the immobility behavior in female rats. Thus, progesterone may improve the depressive behavior of females restoring the efficiency of system GABAA of right prefrontal cortex.

Os leiomiomas são neoplasias benignas comuns do sistema reprodutivo feminino e são encontrados em até 50% das mulheres em idade reprodutiva. As causas e os mecanismos de desenvolvimento desse tumor não estão bem estabelecidos; eventuais descontroles nos percursos apoptóticos e influências dos hormônios esteróides ovarianos devem estar envolvidos. O objetivo deste trabalho foi examinar a expressão do gene e da proteína das isoformas A e B do receptor de progesterona, de p53 e de p21 em miométrio e leiomioma uterino. Foram obtidas amostras de 14 pacientes em idade reprodutiva que se submeteram à histerectomia abdominal por leiomiomatose. Os tecidos foram submetidos à extração de mRNA com o uso de Trizol®, para análise da expressão gênica pela técnica de RT-PCR, e à extração de proteínas, para análise de expressão proteica pela técnica de Western Blot. Não foram observadas diferenças nos níveis de expressão de mRNA para PRAB, PRB e nos níveis proteicos dos PRs entre o miométrio e o leiomioma uterino. Não houve correlação entre a fase do ciclo menstrual e os receptores de progesterona. A relação entre as isoformas (PRA:PRB) não foi diferente entre os tecidos e mostrou uma forte correlação entre ambos (r=0,767, P=0,004). As análises da expressão gênica e proteica mostraram aumento nos níveis de mRNA e de proteína de p53 no leiomioma comparado ao miométrio (P=0,030 e P=0,002, respectivamente). O mesmo aumento foi observado nos níveis de mRNA de p21 (P=0,016) e nos níveis proteicos de p21 (P=0,026) nas amostras de leiomioma uterino. As expressões gênica e proteica inalteradas dos PRs são características das doenças benignas, como a leiomiomatose; alterações da relação PRA:PRB são observadas em neoplasias malignas. Já o aumento significativo observado nos níveis de mRNA e de proteína de p53 e p21 em leiomiomas indica uma possível participação destes genes no desenvolvimento desse tumor podendo estar relacionado à estabilização funcional e detenção de possíveis danos, evitando a transformação carcinogênica. / Leiomyomas are common benign neoplasms of the female reproductive system and they are found in up to 50% of women of reproductive age. The causes and mechanisms of the development of this tumor are not well established. Occasional lack of control in apoptotic pathways and influences of ovarian steroid hormones must be involved. The aim of this study was to examine the expression of gene and protein progesterone receptor isoforms A and B, p53 and p21 in uterine leiomyoma and myometrium. Samples of 14 reproductive-age patients, submitted to abdominal hysterectomy due to leiomyomatosis, were obtained. The tissues were submitted to mRNA extraction using Trizol® for gene expression analysis through the RT-PCR technique, and protein extraction for protein expression analysis was developed through the Western blot technique. There were not significant differences in levels of mRNA expression for PRAB, PRB and PRs protein between the myometrium and uterine leiomyoma. It was not found any correlation between the menstrual cycle phase and progesterone receptors. The relationship between the isoforms (PRA: PRB) was not different in the tissues and it was observed a strong correlation (r = 0.767, P = 0.004) between them. The analysis of gene and protein expression showed an increase in levels of mRNA and p53 protein in leiomyoma when compared to myometrium (P = 0.030 and P = 0.002). The same increase was observed in the p21 mRNA levels (P = 0.016) and in the p21 protein levels (P = 0.026) in the samples of uterine leiomyoma. The unchanged gene and protein expressions of PRs are characteristic of benign diseases such as leiomyomatosis, and alterations in PRA: PRB relationship are observed in malignant neoplasms. However, the significant increase observed in the levels of mRNA and p53 and p21 protein in leiomyomas indicates a possible participation of those genes in the development of that tumor, which can be related to functional stabilization and retention of possible damage, avoiding the carcinogenic transformation.

El presente trabajo se realizó desde Junio a Diciembre del año 2003 en el Centro Medico Naval en el servicio de Gineco – Obstetricia en un grupo de 41 pacientes, que ingresaron con el Diagnóstico de Amenaza de Aborto, a quienes se midieron al ingreso, el valor plasmático de progesterona y de Beta hCG ésta última con un intervalo de 48 horas, y ecografía transvaginal para evaluación de la gestación y su control a los 7 días si el caso lo ameritaba. Encontramos que en los casos de amenaza de aborto diagnosticada al ingreso y en las gestaciones en principio evolutivas, que posteriormente abortaron; niveles hormonales bajos que no superaron en caso del primer grupo, a 6 ng/ml y del segundo, a 11 ng/ml; pero sin embargo existen diferencias significativas entre estos dos grupos y un tercero, de gestaciones que llegaron a término. Se observa que los niveles de Progesterona eran superiores a 14 ng/ml en las gestaciones evolutivas normales. El corte de 5 ng/ml que nos predice en el 100% de los casos que valores inferiores son seguramente embarazos perdidos por lo que estas pacientes no deberían ser medicadas inútilmente, no otorgando la misma seguridad para diferenciar ectópicos de evolutivos, por lo menos en la casuística presentada. / Tesis de segunda especialidad