Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-17T10:18:34Z No. of bitstreams: 1 2012_FabiansBrandaoAlvesSilva.pdf: 3339585 bytes, checksum: 3a2b291213f89307c5254e99ccac67ea (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-17T10:18:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FabiansBrandaoAlvesSilva.pdf: 3339585 bytes, checksum: 3a2b291213f89307c5254e99ccac67ea (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-17T10:18:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FabiansBrandaoAlvesSilva.pdf: 3339585 bytes, checksum: 3a2b291213f89307c5254e99ccac67ea (MD5) / O complexo Coesina tem a função essencial de assegurar a correta segregação das cromátides irmãs após replicação do DNA. A Coesina atua tanto na mitose como na meiose e é mais bem descrita em leveduras e mamíferos. O complexo se forma pela interação das subunidades proteicas conhecidas como SMC (proteínas de manutenção estrutural dos cromossomos), SMC1 e SMC3, e duas proteínas SCC (proteínas de coesão das cromátides irmãs), a SCC1 (também conhecida como Mcd1 ou Rad21) e SCC3 (SA1 e SA2 em células de mamíferos). Existem poucos estudos sobre a Coesina e sua função em tripanossomatídeos, sendo que foi verificada a presença dos genes para todas as subunidades da Coesina em Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei e a Leishmania major. Em trabalhos recentes do nosso grupo, foi observado que a subunidade SCC1 do complexo Coesina em T. cruzi está presente nas formas amastigotas com localização nuclear, em menor quantidade em epimastigotas distribuída por toda a célula e ausente em tripomastigotas. Desse modo, essa diferença da presença da proteína TcSCC1 nas diferentes formas do parasita nos levou a estudar nesse trabalho a expressão gênica dessa proteína de T. cruzi e sua regulação. Inicialmente, foi realizada uma quantificação relativa do mRNA da proteína SCC1 nas diferentes formas do T. cruzi por RT-PCR em tempo real. As formas amastigotas e tripomastigotas apresentaram uma quantidade relativa semelhante entre si e equivalente à metade da quantidade das formas epimastigotas, o que diverge do observado para a presença da proteína. Assim, é possível que haja um mecanismo regulatório provavelmente pós-transcricional, já que é descrito que esse tipo de regulação é peça chave na modulação da expressão gênica em T. cruzi. Nos experimentos onde foi inibido a transcrição e a transcrição juntamente com a tradução nas formas epimastigotas e amastigotas, observamos uma estabilidade do mRNA da TcSCC1 mais longa em amastigotas e pouco afetada com a inibição da tradução. Essa observação pode explicar a causa da maior abundância da proteína nas formas amastigotas. Embora em epimastigotas o mRNA também seja relativamente estável, a quantidade relativa decresce mais acentuadamente, sugerindo uma meia vida mais curta em epimastigotas. É provável que a regulação pós-transcricional desse mRNA possa estar modulando a expressão do gene TcSCC1 entre as formas do T. cruzi e essa não é dependente da tradução. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cohesin complex has the essential function of ensuring the correct segregation of sister chromatids after DNA replication. The cohesin acts both in mitosis as in meiosis and is best described in yeast and mammals. The complex is formed by the interaction of protein subunits known as SMC (structural maintenance of chromosomes), SMC1 and SMC3, and two proteins SCC (cohesion of sister chromatids), the SCC1 (also known as Mcd1 or Rad21) and SCC3 (SA1 and SA2 in mammalian cells). There are few studies of the cohesin and its function in trypanosomatids, and it was detected the presence of genes for all subunits of cohesin in Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei and Leishmania major. In recent work from our group, we observed that the SCC1 subunit of cohesin complex in T. cruzi amastigotes is present with nuclear localization, in epimastigotes with a lesser amount distributed throughout the cell and absent in trypomastigotes. Thus, this difference of the presence of TcSCC1 protein in the different forms of the parasite led us to study in this work the gene expression of this T. cruzi protein and its regulation. Initially, we performed a relative quantification of TcSCC1 mRNA in the different forms of T. cruzi by real time RT-PCR. The amastigotes and trypomastigotes forms presented a relative similar amount among themselves and as equivalent to half the amount of the epimastigote forms, which differs of that observed for presence of the protein. Thus, there may be a possible post-transcriptional regulatory mechanism, since it is reported that this type of regulation is a key part in the modulation of T. cruzi gene expression. In experiments where transcription was inhibited and transcription along with translation in epimastigotes and amastigotes, we observed longer stability of TcSCC1 mRNA in amastigotes and is not affected by the inhibition of the translation. This observation may explain why the protein is more abundant in amastigotes. Although in epimastigotes the mRNA is also relatively stable, the relative amount decreases more markedly, suggesting shorter half life in epimastigotes. It is likely that post-transcriptional regulation of this mRNA may be modulating the TcSCC1gene expression between the forms of T. cruzi and that is not dependent on translation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-06-14T19:52:21Z No. of bitstreams: 1 2008_MarioSergioAlmeidaFalcao.pdf: 864502 bytes, checksum: 3f289d82ea4925687527eef049a6d332 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-06-15T00:39:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MarioSergioAlmeidaFalcao.pdf: 864502 bytes, checksum: 3f289d82ea4925687527eef049a6d332 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-15T00:39:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MarioSergioAlmeidaFalcao.pdf: 864502 bytes, checksum: 3f289d82ea4925687527eef049a6d332 (MD5) Previous issue date: 2008-12-05 / Objetivou-se padronizar a técnica para detecção da concentração de proteína no humor aquoso pelos métodos de Bradford e Sensiprot®, estabelecer relação entre a concentração de proteínas plasmáticas e do humor aquoso, bem como determinar o proteinograma para este fluido em cães clinicamente saudáveis por meio de eletroforese unidimensional (SDS-PAGE) e coloração de nitrato de prata, mediante aprovação do Comitê de Ética da Universidade de Brasília (protocolo 66064/2007). Coletaram-se amostras do humor aquoso mediante paracentese da câmara anterior de ambos os olhos de 23 cães adultos, machos ou fêmeas, sem raça definida. A média da concentração protéica obtida pelo método de Bradford foi de 32,48 mg/dL (amplitude: 16,14 - 54,72) com erro padrão de ± 2,55 para o olho direito e 35,55 mg/dL (amplitude: 15,52 - 53,79) com erro padrão de ± 2,55 no olho esquerdo. O método do Sensiprot® apresentou valores de 9,04 mg/dL no olho direito (amplitude de 0,4 - 27,8) e 7,56mg/dL no olho esquerdo (1 - 18,9) e não se mostrou adequado para o objetivo proposto. Observou-se diferença estatística significativa (p<0,001) na comparação entre os testes. Resultados obtidos pelo método de Bradford representaram 0,5% do valor das proteínas plasmáticas, demonstrando linearidade dos dados. Através do marcador de massa molecular (190-15 Kda) utilizado para eletroforese unidimensional (SDS-PAGE), infere-se que as massas moleculares das proteínas presentes no humor aquoso de cães clinicamente saudáveis estão entre 120 e 25 Kda.

Uma das principais características do hipocampo após a isquemia é a vulnerabilidade diferencial das células da região CA1 e DG à morte celular. Os neurônios granulares do DG são resistentes, enquanto que os neurônios piramidais da região CA1 são mais sensíveis. Nosso objetivo nesse estudo foi investigar o possível envolvimento da via de sinalização celular PI3K, uma via que possui efeito proliferativo e antiapoptótico, e das proteínas de choque térmico (HSPs) no fenômeno da vulnerabilidade seletiva. Para isso foram usadas culturas organotípicas de hipocampo de ratos Wistar de 6-8 dias. As culturas foram tratadas com o inibidor da PI3K, LY294002 (LY), nas doses 10μM e 50μM. A morte celular foi quantificada pela medida da incorporação de iodeto de propídeo e da atividade das caspases 3 e 7. Alterações na fosforilação e no imunoconteúdo das proteínas foram obtidas com o uso de anticorpos específicos. Os resultados mostraram que a região do DG parece responder de forma tempo dependente e precocemente à presença da droga, sugerindo uma importância da via nessa região. Para investigar se a proteína AKT, uma cinase ativada por PI3K, estava envolvida na vulnerabilidade seletiva das células às condições de privação de oxigênio e glicose (POG), medimos a fosforilação e o imunoconteúdo dessa cinase após 60 minutos de POG seguida dos tempos de recuperação de 30 minutos, 6 horas e 24 horas. Nenhuma alteração foi observada nesses parâmetros, sugerindo que , nesse caso, a fosforilação da AKT não está envolvida na vulnerabilidade seletiva. Quando o imunoconteúdo da HSP27 e da HSP70 foi investigado após as condições de POG em ambas as áreas do hipocampo, não foi observada nenhuma alteração na HSP27 nos tempos de recuperação escolhidos. Por outro lado, observou-se aumento no imunoconteúdo da HSP70 em ambas as regiões 24 horas após a exposição às condições de POG, sendo este maior no CA1. Quando as quantidades das HSPs nas duas regiões em condições basais foram comparadas, observou-se que ambas estão em maior quantidade na região do DG. Esta diferença poderia estar relacionada com a resistência à morte celular observada no DG, uma vez que, possuindo maior quantidade HSPs, estas poderiam atuar como protetoras contra a morte. Esses resultados sugerem que a via de sinalização da PI3K pode estar envolvida na vulnerabilidade seletiva observada no hipocampo em resposta à condições de POG, e esta não envolve alterações na fosforilação da AKT. Por outro lado, HSP27 e HSP70 podem estar envolvidas no fenômeno da vulnerabilidade seletiva, protegendo o DG das lesões. / One of the main characteristics of hippocampus after ischemic episodes is the different vulnerability to cell death of cells from CA1 and from DG areas. DG granular neurons are resistant while CA1 pyramidal neurons are more vulnerable. Our intent in this study was to investigate a possible involvement of PI3K pathway and HSPs in the selective vulnerability phenomenom. For these purposes we used organotypic hippocampal cultures from 6-8 days old Wistar rats. Our first focus was PI3K, a known proliferative and antiapoptotic pathway. The cultures were exposed to treatment with LY294002 (LY), a PI3K inhibitor, in doses 10μM and 50μM. Cellular death was assessed by propidium iodide uptake and mesurement of caspase 3 and 7 activity. The results showed an effect time and dose dependent, always with earlier cellular death in DG area, suggesting the importance of this pathway in this region. To investigate if AKT protein, a downstream kinase in PI3K pathway, was involved in selective vulnerability of cells after oxygen and glucose deprivation (OGD) conditions, we measured the phosphorylation and imunocontent of this protein after 60 minutes of OGD, followed by to 30 minutes, 6 hours and 24 hours of reperfusion. No alterations were observed in this parameters, suggesting that, in this case, phosphorylation of AKT is not involved in the selective vulnerability. When we investigate HSP27 and HSP70 imunocontent after OGD conditions in both areas of hippocampus, we observed no alterations in HSP27 in these reperfusion times. Interestingly, HSP70 showed an imunocontent increase in both areas 24 hours after the insult, with higher levels in CA1 area. Comparing basal level of HSPs in CA1 and DG we observe that both proteins are higher in DG area. The difference could explain why DG area is more resistant to cell death, once there are more HSPs blocking cell death. These results are pointing that PI3K is involved in selective vulnerability of hippocampus in a way that does not require AKT phosphorylation. On the oder hand, HSP27 and HSP70 may be involved in this phenomenom, protecting DG from insults.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5064_1.pdf: 876086 bytes, checksum: d1474e1fb651a8b6c911bc02c23b0d8b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Lectinas, proteínas que reconhecem específica e reversivelmente carboidratos, podem ser purificadas por cromatografia de afinidade. O gênero Bauhinia (Fabaceae) inclui espécies nativas ou introduzidas usadas no tratamento de diabetes. Uma lectina específica à galactose foi previamente purificada de folhas de B. monandra (BmoLL) e disponível em quantidades de miligramas; IgG anti BmoLL de coelho estava também disponível, como tal e conjugada à peroxidase. O trabalho teve por objetivo produzir lectinas em diferentes culturas de tecidos de B. monandra (calos, raízes convencionais e transformadas por Agrobacterium rhizogenes), imunodetectar lectina nas diferentes preparações de B. monandra através de técnicas de imunodifusão e transferência eletroforética, assim como avaliar extratos das folhas da planta como fonte de compostos antioxidantes e hipoglicemiantes. Culturas foram obtidas de sementes de B. monandra; extratos (10 %, p/v) e preparações F 0-60% foram realizadas com tampão citrato-fosfato 10 mM, pH 6.5. Atividade hemaglutinante foi detectada na F 0-60% das culturas de tecidos quando testadas com eritrócitos de coelho e humanos do grupo sanguíneo AB. Imunodifusão com anti-BmoLL IgG revelou linhas de precipitação em todas as culturas. A eletroforese em gel de poliacrilamida da F 0-60% das culturas de tecidos apresentou padrão de bandas de massa molecular similar a BmoLL. Polipeptídeos de diferentes preparações de B. monandra interagiram com anti-BmoLL IgG. Folhas de B. monandra contêm no mínimo três diferentes compostos com atividade antioxidante. O efeito agudo de extrato etanólico (E) de folhas de B. monandra foi investigado sobre os níveis de glicose e insulina em ratos Wistar submetidos a mánutrição intra-uterina (ME) e em seus respectivos controles (CE) comparando com animais tratados com veículo (V), os grupos CV e MV. A administração aguda do E reduziu o nível de glicose, mas não variou a secreção de insulina em ratos controles. A capacidade dos ratos submetidos à má-nutrição intra-uterina de secretar insulina parece ter sido restaurada; a hipoglicemia induzida pelo E foi devido à secreção de insulina

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-31T22:29:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1020662 bytes, checksum: a30b2f8dc74abe95d386d11893be3958 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T20:05:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1020662 bytes, checksum: a30b2f8dc74abe95d386d11893be3958 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T20:05:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1020662 bytes, checksum: a30b2f8dc74abe95d386d11893be3958 (MD5) Previous issue date: 2009-12-15 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas que se ligam de forma reversível e específica a carboidratos. Devido a essa característica principal elas Tem sido uma importante ferramenta da biotecnologia, sendo utilizada em diversos ramos da pesquisa. Lectinas da folha da Caesalpinia ferrea (CfeLL) foram purificadas e juntamente com seu extrato bruto (EB) foram caracterizados e avaliados quanto ao seu potencial analgésico, antiinflamatório e antitumoral utilizando camundongos fêmeas. A pesquisa partiu do interesse em explorar a C. ferrea, uma planta com muitas propriedades terapêuticas utilizada pela medicina popular. Inicialmente obteve-se o extrato bruto a 10% de solução em Tampão citrato fosfato 10mM pH 6,5. Com uma amostra do extrato foi feita cromatografia em coluna de quitina. CfeLL aglutinou eritrócitos de coelhos e de humanos e teve sua atividade inibida por glicoproteínas (fetuína e soro fetal bovino) e por carboidratos (N-acetil-Dglicosamina); manteve sua atividade hemaglutinante mesmo a 100º C; não apresentou variação de atividade em presença de íons (Ca²⁺ e Mg²⁺); nem em diferentes valores de pH (2,0 – 10,0). Os resultados in vivo revelaram que tanto o EB quanto CfeLL (50 mg/kg) reduziram em 43,45% e 41,12% o tamanho do tumor sólido sarcoma-180. As preparações também diminuíram em até 63% as contorções e estiramentos dos ratos tratados com EB (30mg/kg) e em até 53% dos ratos tratados com CfeLL (30 mg/kg). Na avaliação da atividade antiinflamatória apresenta inibição da inflamação em 48% dos animais quando tratados com EB (100mg/kg) e 46% quando tratados com CfeLL(100mg/kg). Os resultados portanto revelam que tanto o EB quanto a Lectina possuem afinidade por fetuina, soro fetal bovino e N-acetil-D-glicosamina. São termoestáveis e não se alteram em presença de íons e em diferentes valores de pH. Os testes com camundongos mostraram que EB e CfeLL possuem atividade antitumoral, analgésica e antiinflamatória, podendo ser comparados aos resultados de fármacos já utilizados. Dessa forma confirma-se a crença popular da utilização para tratamento de ulceras gástricas e como cicatrizante. / Lectins are proteins or glycoproteins that bind reversibly and specifically to carbohydrates. Because of this feature in the main they were an important tool have biotechnology and is used in various branches of research. Caesalpinia ferrea leaves lectins (CfeLL) were purified and with his crude extract (CE) were characterized and evaluated for their potential analgesic, anti-inflammatory and antitumor using female mice. The study started from the interest in exploring the C. ferrea, a plant with many therapeutic properties used by folk medicine. Initially it was obtained the crude extract to a 10% solution in 10 mM phosphate citrate buffer pH 6.5. With a sample of the extract was made column chromatography on chitin. CfeLL agglutinated erythrocytes of rabbits and humans and their activity was inhibited by glycoproteins (fetuin and fetal bovine serum) and carbohydrate (N-acetyl-D glucosamine); retained their hemagglutinating activity even at 100 º C; did not change activity in the presence of ions (Ca2 + and Mg2 +); or at different pH values (2.0 - 10.0). The results in vivo showed that both the EB and CfeLL (50 mg / kg) reduced by 43.45% and 41.12% the size of solid tumor sarcoma-180. The preparations also decreased by 63% in the twisting and stretching of rats treated with EB (30mg/kg) and up to 53% of mice treated with CfeLL (30 mg/kg). in evaluation of the anti-inflammatory activity showed inhibition of inflammation by 48% of the treated animals with EB (100mg/kg) and 46% when treated with CfeLL (100mg/kg). The results therefore show that both the EB and have a Lectin affinity for fetuin, fetal calf serum and N-acetyl-D-glucosamine. Are heat-stable and not change in the presence of ions and different pH values. Tests on mice showed that EB and CfeLL have antitumor activity, analgesic and anti-inflammatory, can be compared to the results of drugs already in use. Thus it is confirmed the popular belief of the use for treatment of gastric ulcers and as a healing.

Orientador: Carlos Francisco Sampaio Bonafe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bispo_JoseAiltonConceicao_M.pdf: 1184622 bytes, checksum: 37c53eff050e5cf8e541c3c1bea04d8c (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Cooperatividade e alosterismo são fenômenos centrais na regulação de processos bioquímicos e têm sido investigados de maneira mais intensa em hemoglobinas de vertebrados. Neste trabalho é proposto o modelo estequiométrico de cooperatividade para proteínas em geral o qual se baseia na aplicação de processos multireacionais envolvendo a participação de ligantes e efetores tais como prótons. Para hemoglobinas, o grau de cooperatividade alcançado por estas proteínas é associado ao estado de protonação, ao número de ligantes acoplados, ao grau de dissociação e ao ambiente externo às mesmas. A assimetria e o índice de efeito são redefinidos e propostos como importantes parâmetros para a caracterização de sistemas cooperativos. Este modelo está em acordo com os resultados experimentais e permite previsões das propriedades das hemoglobinas humana e de serpente em diferentes condições, esta última apresentando um mecanismo de dissociação muito diferenciado. Em contraste, o clássico modelo dos dois estados e o modelo de três estados de cooperatividade mostraram algumas limitações acerca das propriedades de hemoglobinas indicando, desta forma, que suas propostas para explicar os acoplamentos cooperativos nestas proteínas baseado em transições conjuntas sem a participação do ligante pode não representar o mecanismo real de reação. Outros modelos mais recentes, que incorporam tais conceitos são, também, mostrados aqui sofrerem das mesmas limitações / Abstract: Cooperativity and allosterism are central phenomena in the regulation of biochemical pathways, and have been investigated most intensely in vertebrate hemoglobins. It is proposed in this work the stoichiometric model of cooperativity for proteins in general based on the thermodynamic application of a multiple reaction process involving participation of the ligand and effectors such as protons. In hemoglobins, the degree of cooperativity reached by a protein is related to the extent of protonation, the number of coupled ligands, the degree of dissociation and the protein environment. A redefmed asymmetry and an effect index are proposed as important parameters for the characterization of cooperative systems. This model agrees with the experimental data and allows prediction of the properties of mammalian and snake hemoglobins. Under different conditions, the latter having a very unusual pattem of dissociation. ln contrast, the classic two-state and the three-state models of cooperativity show large discrepancies, even for the most elementary experimental data on the properties of hemoglobin, thus indicating that their proposed concerted transitions to explain cooperative coupling in this protein should not represent the only possible mechanism of binding. Other more recent models that incorporate such concepts are also shown here to express similar constraints to they application / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-21T01:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucena_SergioLuizde_M.pdf: 3440640 bytes, checksum: 688dffc10890b0aaa48ebeffb74101ac (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: O fracionamento de proteínas em colunas de bolhas e espuma é um processo especialmente indicado para o tratamento de soluções muito diluídas onde outros métodos de separação apresentam limitações econômicas. A utilização do refluxo externo permite obter um produto de topo ainda mais concentrado: razões de refluxo iguais a 0,39 e 1,20 no fracionamento da BSA (albumina do soro bovino) com 'C IND. 0¿ = 100,0 mg/L. pH 7,00 e 'V IND. gás¿ = 0,30 cm/s, permitiram obter um produto de topo 7 e 9 vezes mais concentrado que a solução inicial, respectivamente; sem refluxo externo o enriquecimento foi 6 vezes e razões de refluxo iguais a 0,42 e 0,97 no fracionamento da BSA ('C IND. 0¿ = 100,0 mg/L, pH 7,00 e 'V IND. gás¿ = 0,45 cm/s) permitiram obter um produto de topo 3 e 5 vezes mais concentrado que a solução inicial, respectivamente; sem refluxo externo o enriquecimento foi 2,5 vezes. Razões de refluxo iguais a 0,32 e 0,88 no fracionamento da hemoglobina bovina ('C IND. 0¿ = 100,0 mg/L, pH 10,00 e 'V IND. gás¿ = 0,30 cm/s) permitiram obter um produto de topo 4 e 5 vezes mais concentrado que a solução inicial, respectivamente; sem refluxo externo o enriquecimento foi 3 vezes... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Foam fraction of proteins is specially advantageous in treating dilute solutions where other separation methods run into economical limitations. Improvement in enrichment can be obtained by adding external reflux to the top of foam column: external reflux rates such as 0.39 and 1.20, utilized when fractionating BSA (bovine serum albumin) solutions with 'C IND. 0¿ = 100,0 mg/L, pH = 7.00 and 'V IND. gas¿ = 0.30 cm/s enabled the top product 7 and 9 times more concentrated than inicial solution, respectively. Without external reflux, the top product achieved 6 times the initial concentration. External reflux rates such as 0.4 and 0.97, utilized when fractionating BSA ('C IND. 0¿ = 100.0 mg/L, pH 7.00 and 'V IND. gas¿ = 0.45 cm/s), enabled the top product 3 and 5 times more concentrated than inicial solution, respectively. Without external reflux the top product achieved 2.5 times the initial concentration. External reflux rates such as 0.32 and 0.88, utilized when fractionating bovine hemoglobin ('C IND. 0¿ = 100.0 mg/L, pH 10.00 and 'V IND. gas¿ = 0,30 cm/s), enabled the top product 4 and 5 times more concentrated than inicial solution, respectively. Without external reflux the top product achieved 3 times the initial concentration... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Engenharia de Processos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Vilma Regina Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T15:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cabral_AnaLuciaBeirao_M.pdf: 4525762 bytes, checksum: 29cb33347f03183f3303c34eb2fbdaa3 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Os hormônios glicocorticóides, com conhecida ação antiinflamatória e antitumoral, agem apenas em células com receptores citoplasmáticos específicos ( GR ), portanto se toma extremamente importante conhecer os mecanismos envolvidos na regulação da expressão destes receptores para avaliar a resposta ao hormônio. Trabalhos preliminares realizados pelo nosso grupo em células transformadas pelo oncogene EJ-ras apontam para uma regulação negativa de GR a nível transcricional de GR decorrente desta transformação. Entretanto, a oncoproteína não pode regular diretamente a transcrição gênica já que está ancorada à membrana celular. O promotor do gene de GR possui um elemento similar a AP-I e isto, aliado ao fato de que Ras participa diretamente do processo de fosforilação de c-Jun, sugere que o produto deste proto-oncogene pode ser um dos alvos nucleares de Ras para a regulação do promotor do gene de GR. O presente trabalho teve como objetivo determinar o papel de c-Jun na regulação do promotor do gene de GR e analisar a capacidade de ligação da proteína c-Jun ao elemento AP-l presente neste promotor. Para tanto foram gerados clones de células NIH3 T3 transfectadas com c-jun e estes foram analisados quant.o à expressão do RNA mensageiro ( RNAm ) de c-jun e GR, bem como as respectivas proteínas por eles codificadas. A análise dos dados da expressão de c-Jun e GR, a nível de RNAs mensageiros e de proteínas, mostram que nos clones onde há aumento do RNAm de c-jun há decréscimo do RNAm de GR, sugerindo que a presença de c-Jun possa atenuar a transcrição do gene de GR. Entretanto nem sempre se encontrou uma correlação inversamente proporcional entre o RNAm de c-jun e de GR. Os valores obtidos após a determinação da concentração das proteínas c-Jun e GR evidenciam um padrão de regulação gênica muito mais complexo. Novamente ficou constatado que não havia correspondência entre os valores dos RNAs mensageiros e proteínas c-Jun e GR. Foram realizados ainda ensaios de retardamento de mobilidade eletroforética, utilizando a seqüência AP-l do promotor do gene de GR e extratos nucleares dos clones NIH3 T3 c-jun. Estes experimentos comprovam uma regulação mais complexa, pois mostram que a proteína c-Jun contida nos extratos nucleares não é capaz de se ligar à seqüência similar à AP-l contida no promotor do gene de GR. Concluindo que. a regulação do gene de GR por c-Jun não é dada diretamente por sua interação com o elemento específico contido no promotor deste gene / Abstract: Glucocorticoid receptors ( GR ) mediate the cellular response to glucocorticoid hormones which are known for their anti-inflammatory and anti-tumoral actions. The mechanisms involved on the regulation of GR gene expression are extremely important for the cellular response to the hormone and remain unknow. Using transient transfections, we have previously reported that cells transformed with the oncogene EJ-ras had an attenuation on the GR gene transcription. However, this effect could not be mediated through a direct action of the oncoprotein on the gene transcription, once Ras is anchored at the cellular membrane. An AP-l like site was found in GR gene promoter and the fact that Ras protein activates fosforilation of c-Jun suggests that it might be a Ras' nuclear target and oÍle of the transcription factors responsible for the regulation of GR gene expression. The aim of this work was to settle the role of c-Jun on GR expression and evaluate the c-Jun ability to bind the AP-l like site present on GR gene promoter. In this study we generated NIH3T3 cells dones stabled transfected with c-jun and analyzed their c-Jun and GR mRNA and protein contents. We observed that dones with higher c-jun mRNA levels have lower GR mRNA when compared with non transfected cells suggesting that c-Jun can attenuate the GR gene transcription. We did not find a direct correlation between mRNA and protein levels of both c-jun and GR. These data indicate that a more complex mechanism may be involved. Eletrophoretic mobility shift assays were performed to test the binding of c-Jun to the AP-l like site present on the GR gene promoter. The results showed that this association is much lower than the one observed by the consensus AP-l, suggesting that the GR gene expression regulation by c-Jun does not seem to be due to its interaction with the AP-l like site present on the GR gene promoter / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientador: Valdemiro Carlos Sgarbieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:38:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prata_AnaSilvia_M.pdf: 9602027 bytes, checksum: ea0da6a1e07dfaf8ec42aeae1f60533d (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Há um interesse constante pela utilização do sangue gerado por abates em frigoríficos tanto pela solução do problema ambiental causado pelo descarte deste sem prévio tratamento, quanto recuperação e aproveitamento das proteínas constituintes deste tecido, que possuem altíssimo valor biológico e funcional. Este trabalho propôs-se a testar o método de saturação com sulfato de amônio na recuperação das duas principais frações protéicas do sangue, a partir do soro sangüíneo. As albuminas (BSA) e globulinas (GB) isoladas foram desidratadas por dois métodos de secagem e caracterizadas quanto sua composição química, solubilidade, propriedades espumantes e emulsificantes. Sua qualidade nutricional foi avaliada através da digestibilidade in vitro e da composição de aminoácidos e minerais. O método utilizado, apesar de seletivo, separa frações com características físicoquímicas semelhantes e, portanto a utilização das frações para fins farmacêuticos exige um posterior passo de purificação. As duas frações obtidas são compostas de aproximadamente 85% de proteínas, limitadas em 30% de triptofano (BSA) e 12% em isoleucina (GB), e com digestibilidades idênticas (91 e 98%) (p<O,05) à da caseína (90%). As frações apresentaram excelentes propriedades funcionais, sendo que a BSA mostrou-se bem mais solúvel que a GB, não tendo sofrido influência da variação do pH. Sua capacidade de formação de espuma (CFE) comparou-se à da proteína da clara de ovo, sendo superior em pequenas concentrações de proteína. A BSA, apesar de mesma CFE, forma uma espuma menos estável que a GB. As diferenças encontradas nos métodos de secagem são relevantes, tendo a secagem em spray melhorado as propriedades funcionais estudadas das duas frações protéicas, exceto a CFE da GB, e não interferido na composição química (centesimal e de aminoácidos). Portanto num escalonamento de produção de proteínas a partir do sangue bovino, seguramente poder-se-ia fazer uso da secagem em spray dryer, por ser mais rápida e mais barata. No entanto, através de um planejamento experimental, comparou-se o resíduo de secagem da BSA para saber se a fração do produto mantido nas condições do spray por um tempo prolongado teria suas características funcionais modificadas. Esse indicador de desnaturação foi observado, revelando que as condições de secagem em spray devem ser controladas. Mesmo assim, a BSA na forma de resíduo apresentou boa solubilidade e propriedade emulsificante, mas certamente isto se deve à sua estrutura compacta e com muitas pontes dissulfeto. / Abstract: It has been a constant interest in the utilization of animal blood from slaughter houses not only because of the intrinsical value of their constituents, mainly the proteins, but also to solve environmental problems. In this research the two main bovine protein fractions, the albumin (BSA) and globulin (GB) were isolated by using respectively 50% and 80% saturation with ammonium sulphate. The isolated fractions were dehydrated by two methods of drying (freeze drying and spray drying) Chemical composition and technological properties (solubility, foaming, emulsifying capacity and stability) were studied in the dehydrated powders. Protein content of two fractions was respectively, BSA 83%, GB 84-85%. BSA was 30% limited in tryptophan and GB 12% in isoleucine and protein digestibility was above 95% for both fractions. Both fractions presented excellent protein solubility. BSA was less sensitive to changes in pH than GB. Foaming capacity was very high in both fractions (equal or better than egg white). The influence ofthe drying methods was relevant. The drying method did not influence significantly the composition and the functional properties studied, except for the emulsifying capacity of GB that was decreased in the spray dried sample. The data suggested that for industrial operation the spray drying could perfectly replace the freeze-drying method. A factorial planned experiment was performed to compare the fractions that come out naturally from the spray drying with the portion that remains inside the equipment during the entire drying period. It was demonstrated that the retained sample (called BSA residue) was significantly affected by prolonged heat treatment. Even dough the solubility and emulsifying properties of this sample remained high but significantly inferior BSAthat was collected naturally out of the spray drying. The nutritional index estimated (PDCAAS) ranged from 80% for Iyophilized BSA to 91% for the spray dried GB, compared to 86% for casein. / Mestrado / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientador: Jose Merzel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duarte_MonicaMachado_M.pdf: 1989817 bytes, checksum: 5a5900a55bbb2d95070f23c019f2fc91 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Para analisar se o aumento da quantidade de proteínas não colágenas no ligamento periodontal de incisivos de ratos desimpedidos (hipofuncionais) está relacionado com o aumento da velocidade de erupção que ocorre nestes dentes, utilizamos a [3H]-fucose, precursor específico para glicoproteínas, e, através da radioautografia, observamos sua incorporação nos tecidos periodontais de incisivos de camundongos. Camundongos fêmeas foram divididos em três grupos com 4 animais cada. Em dois grupos o incisivo inferior esquerdo foi cortado à altura da papila gengival,tornando-o hipofuncional enquanto o contralateral direito tornou-se hiperfuncional. No terceiro grupo os incisivos foram mantidos intactos e portanto normofuncionais. A [3H]-fucose foi injetada na veia caudal no seguinte esquema: 1) no primeiro grupo, 1 dia após a instalação da alteração funcional; 2) no 2o grupo 7 dias após a desoclusão do incisivo esquerdo (assim mantida com cortes a cada 48 horas) e 3) no grupo normofuncional no mesmo tempo que no grupo 2. Os camundongos foram perfundidos com fixador de Karnovsky, em grupos de dois, 8 e 96 horas após a injeção do precursor radioativo. As hemimandíbulas foram removidas, descalcificadas, divididas em segmentos transversais e incluídas em araldite. Cortes de 1mm das regiões relacionadas à crista alveolar, primeiro molar e região odontogênica, foram cobertos com emulsão nuclear Ilford K-5 e expostos durante 14 dias. As radiografias foram analisadas quantitativamente utilizando um sistema de análise de imagens, determinando-se a densidade de área de grãos de prata nos tecidos periodontais. O exame microscópico das radioautografias mostrou que todos os tecidos dentais e periodontais do incisivo de camundongo apresentaram incorporação de [3H]-fucose, em graus variados de intensidade. Nos tecidos periodontais houve um aumento da biossíntese de glicoproteínas fucosiladas nos dentes desimpedidos por 7 dias, comparado aos normofuncionais, hiperfuncionais e hipofuncionais de 1 dia, particularmente no periodonto relacionado ao esmalte e no ligamento periodontal relacionado ao osso alveolar. Estes resultados sugerem que o aumento da quantidade de glicoproteínas fucosiladas (entre as quais fibronectina, integrinas, receptor de EGF) nos tecidos periodontais, não está diretamente relacionado a erupção acelerada que se estabelece nos dentes hipofuncionais no 10 dia de desoclusão. Como este aumento foi mais expressivo no tecido conjuntivo perivascular dos tecidos periodontais e ocorreu também na polpa, é possível que parte desta maior quantidade seja devida ao aumento dos receptores de EGF / Abstract: The periodontal ligament of unimpeded rat incisors show an increase in the amount of non-collagens proteins. To analyse if such increase is related to the higher eruption rate shown by those hipofunctional teeth we visualized through radiautography the uptake of 3H-fucose by periodontal tissues. Female mice were divided in three groups of four animals each. In two of these groups the left mandibular incisor was cut at the level of the gingival papila rendering the tooth hipofunctional while the contralateral incisor became hiperfunctional. In the third group the incisors were kept normofunctional. [3H]-fucose was injected throug the caudal vein: 1) in the first group, 1 day after the shortening of the left incisor; 2) in the second group, 7 days after the left incisor became unimpeded (and so maintained by repeating the shortening every 48h); and 3) in the normofunctional group at same time of the second group. Two animals of each group were killed by intracardiac perfusion of Karnovsky¿s fixative at 8 and 96h after injection. The hemimandibules were removed, decalcified, divided in transversal segments and embedded in araldite. 1mm-thick sections of the regions related to the alveolar crest, first lower molar and odontogenic organ were covered with Ilford K-5 nuclear emultion and exposed for 14 days. The area density of silver grains, over periodontal tissues was determined using an image analyzing system. In different degrees of intensity all dental and periodontal tissues were labeled by 3H-fucose. At 8h after the injection the silver grain density was markedly higher in the periodontal ligament related to the alveolar bone and in the enamel related periodontium of incisors kept unimpeded for 7 days as compared with all other groups. These results suggest that the increase of fucosileted glycoproteins (among them fibronectin, integrins and EGF-receptor) in the periodontal tissues of unimpeded incisors is not related to the accelerated rate of the eruption which begins 1 day after their crown is shortened. The uptake of 3H-fucose was conspicuously increased in the perivascular regions of the periodontal tissues and also in the pulp of 7 days hipofunctional incisors, indicating that the higher content of glycoproteins in these tissues may be related to the increase of EGF-receptors / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental