In this work, a model microbial agent for bioremediation was improved using fermentation and formulation methods. The outcomes of the fermentation work include the development of a new culture medium which increased the cell productivity greater than one order of magnitude. A robust functionality to degrade the herbicide atrazine was expressed. The new medium was scaled-up to a 2L bioreactor. Liquid bacterial culture was not inherently stable and lost viability at both 4°C and 25°C storage. When liquid bacterial culture was formulated by encapsulation in a biopolymer gel and applied to zeolite the transfer of cells from bacterial culture to formulated carrier was highly efficient. No loss of viability was measured from the immobilization process, and the functionality of the agent was retained. The formulated agent expressed an extended shelf life of at least 10 weeks when stored in ambient (25°C) temperature. When the formulation granules were inoculated into sterile soil, viability of the granules was stable and also retained the maximum level of functionality for the full test period of 10 weeks. The soil surrounding the formulation granules was also enumerated. The number of cells in the soil increased after a single inoculation of the formulation and the maximum level of functionality was conveyed from the formulation to the surrounding soil. The formulated inoculant constitutes an improvement for a bioremediation strain to stabilize the agent, produce an extended shelf life at ambient temperatures, and maintain the functionality of a microbe to utilize atrazine. In this thesis we have used a biopolymer formulation in which an inoculum is simply mixed into a gel and applied directly to the surface of the zeolite with no special equipment, drying, temperatures, or secondary re-growth steps required. It is a simple model system consisting of a carrier, and a artificial biofilm. As a technique to produce stable functional inoculants for bioremediation, the work presented here demonstrates an approach that is simple, practical, effective, and robust.

Polihidroxialcanoatos (PHA) são biopolímeros naturalmente produzidos e acumulados por diversos organismos, como bactérias, archaeas e alguns eucariontes, como fungos e leveduras. São materiais termoplásticos, biodegradáveis, biocompatíveis e podem ser produzidos a partir de fontes renováveis, exibindo grande potencial para substituir plásticos produzidos a partir de recursos não renováveis. Copolímeros híbridos de PHA, que podem ser formados por monômeros de cadeia curta e média, como P(3HASCL-co-3HAMCL), apresentam características físico-químicas diferenciadas, semelhantes às dos plásticos derivados de petróleo, sendo por isso interessantes para a indústria de materiais. A PHA sintase é considerada a enzima chave na síntese de PHA, responsável por catalisar a polimerização de diferentes monômeros de (R)-hidroxiacil-CoA, influenciando a composição monomérica do polímero formado. Sistemas de recombinação baseados em transposons bacterianos são explorados como ferramentas moleculares para inserção de sequências gênicas no cromossomo de bactérias Gram-negativas. Por exemplo, elementos mini-Tn7 podem ser prontamente transferidos para a construção de cepas recombinantes. No presente trabalho, é apresentada a construção de diferentes linhagens recombinantes a partir de Pseudomonas sp. LFM 046 e LFM 461, portando em seus cromossomos genes de PHA sintase de Ralstonia eutropha, Aeromonas hydrophila ou Aeromonas sp. TSM 81. Clones candidatos foram triados quanto a inserção das sequências de interesse em seu cromossomo, sendo os positivos avaliados em relação à capacidade de produção de PHA em ensaios em agitador rotativo, com glicose como única fonte de carbono. Um dos recombinantes obtidos se mostrou produtor do copolímero P(3HB-co-3HO-co-3HD), acumulando aproximadamente 2 % de sua massa seca celular na forma de PHA. / Polyhydroxyalkanoates (PHA) are biopolymers naturally produced and accumulated by many organisms such as bacteria, archaeas and some eukaryotes, such as fungi and yeasts. As thermoplastics, biodegradable, biocompatible and possibly made from renewable resources, they exhibit great potential to replace oil-derived plastics. Hybrid PHA copolymers can be formed by short and medium-chain monomers, P(3HASCL-co-3HAMCL), and present industry desired physicochemical properties, becoming similar to conventional oil-based plastics. PHA synthase is the key enzyme in PHA biosynthesis, responsible for catalyzing the polymerization of (R)-hydroxyacyl-CoA molecules, influencing polymer monomeric composition. Tn7-based recombination strategies represent powerful molecular tolls designed for gene delivery in Gram-negative bacteria, as mini-Tn7 elements can be readily transferred to recombinants production. In this work, its presented the constructions of recombinant Pseudomonas strains harboring PHA synthase genes from Ralstonia eutropha and Aeromonas strains in specific sites of its chromosome, and the production of P(3HB-co-3HO-co-3HD). Obtained clones were screened to confirm chromosomic insertion of the phaC sequences. Positive clones PHA production and composition were evaluated in shaken-flasks assays using glucose as the only carbon source. One of the constructed recombinants accumulated P(3HB-co-3HO-co-3HD), corresponding about to 2 % of its Cell Dry Weight as PHA.

Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de 39 isolados bacterianos para produção de polihidroxialcanoatos contendo monômeros de cadeia média (PHA|MCL). Os isolados foram incapazes de utilizar eficientemente amido, lactose ou sacarose. O desempenho na produção de PHA a partir de glicose ou frutose pelos isolados foi inferior à linhagem de referência (Pseudomonas sp. LFM046). Muitos dos isolados apresentaram bom desempenho na conversão de glicerol em PHAMCL. Pela primeira vez, foram detectadas bactérias capazes de produzir PHAMCL a partir de xilose. Com base no sequenciamento do rDNA 16S, estes isolados foram identificados como pertencentes ao gênero Pseudomonas. Cultivos em biorreator, resultaram em uma biomassa de aproximadamente 6 g/L, contendo cerca de 11 a 14% de PHA. A superexpressão dos genes responsáveis pelo catabolismo de xilose (xylAB) em Escherichia coli não levou a melhora no consumo de xilose ou produção de PHAMCL. / This work aimed to evaluate the potential of 39 bacterial isolates to produce polyhydroxyalkanoates containing medium-chain monomers (PHAMCL). The isolates were unable to efficiently utilize starch, lactose or sucrose. The performance of the PHA production from glucose or fructose by the isolates was lower than the reference strain (Pseudomonas sp. LFM046). Many isolates showed good performance in the conversion of glycerol into PHAMCL. For the first time, bacterial isolates capable of producing PHAMCL from xylose were detected. Based on the sequencing of 16S rDNA, these isolates were identified as belonging to the genus Pseudomonas. Bioreactor cultures resulted in a biomass of approximately 6 g/L, containing about 11 to 14% PHA. Overexpression of the genes responsible for the catabolism of xylose (xylAB) in Escherichia coli did not led to improved xylose consumption or production of PHAMCL.

Os polihidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres bacterianos. Na sua biossíntese, a PHA sintase incorpora monômeros 3HA à cadeia polimérica. O objetivo deste trabalho foi estudar o potencial da PHA sintase de 2 isolados do gênero Burkholderia sp. na produção de copolímeros. Construiram-se linhagens recombinantes que abrigavam os genes da PHA sintase classe I, em mutantes de Pseudomonas sp. e Burkholderia sacchari, que não acumulam PHA. Foram realizados ensaios de acúmulo de PHA usando glicose como fonte de carbono, apresentando a produção de unidades de 3HB, 3HO e 3HD nas linhagens recombinantes de Pseudomonas sp. As linhagens recombinantes de B. sacchari incorporaram como único constituinte P(3HB). Ensaios de acúmulo de PHA foram realizados nas linhagens recombinantes de B. sacchari, usando como co-substratos diferentes ácidos graxos, sendo detectada a incorporação de unidades de 3HV e 3HHx além do 3HB, quando foram fornecidos acido hexanóico e valérico. Estes resultados indicam que as PHA sintases classe I são capazes de incorporar diferentes unidades monoméricas. / The polyhydroxyalkanoates (PHA) are bacterial polyester. In their biosynthesis, the PHA synthase incorporates monomers 3HA to the polymer chain. The objective of this work was to study the potential of PHA synthase of 2 isolates of the genus Burkholderia sp. in the production of copolymers. Were constructed recombinant strains that housed the genes of PHA synthase class I mutants of Pseudomonas sp. and Burkholderia sacchari, which do not accumulate PHA. PHA accumulation assays were performed using glucose as carbon source, showing the production of units of 3HB, 3HO and 3HD in recombinant strains of Pseudomonas sp. The recombinant strains of B. sacchari incorporated as single constituent P(3HB). PHA accumulation assays were performed on the recombinant strains of B. sacchari, Using as co-substrates different fatty acids, being detected the incorporation of units of 3HV and 3HHx beyond the 3HB, when were supplied hexanoic acid and valerico. These results indicate that the PHA synthases class I are able to incorporate different monomer units.

Herein we describe the study biocatalytic potential of the whole cell of microorganisms isolated from a plant belonging to Cactacea family, Nopalea cochenillifera (L.) Salm- Dyck, popularly known as âpalma doceâ or âpalma forrageiraâ. The microorganisms were isolated by induction technique using as acetophenone susbtrate. Among the microorganisms strains (I-1, I-2, I-3, I-4) only I-2, (Pseudomonas sp), was effective as biocatalyst in reducing the acetophenone. The best conditions for carrying out the bioreduction of acetophenone were as follows: 1g of resting cells of Pseudomonas sp, resuspended in buffer solution pH 7, at 28 Â C and rotation of 175 r.p.m for 4 days, obtaining the (S)-1-phenylethanol with conversion of 77% e.e. and 89%. The bioreduction study, using the Pseudomonas sp strain, was extended to the following derivatives of acetophenone, 4-methoxy-acetophenone (2a), 4-methyl acetophenone (3a), 4-nitro-acetophenone (4a), 4 -bromo-acetophenone (5a), 4-chloro-acetophenone (6a), 4-fluoro-acetophenone (7a), 3-methoxy-acetophenone (8a), 3-methyl acetophenone (9a), 3-nitro-acetophenone (10a) 2-methoxy-acetophenone (11a), 2-methyl acetophenone (12a), 2-nitro-acetophenone (13a), 2-bromo-acetophenone (14a), 2-chloro-acetophenone (15a), 2 - fluoro-acetophenone (16a). It is not worthy that all the alcohols were obtained with Prelog selectivity (S configuration). In general, the best results were obtained for the derivatives of acetophenone with substituent methoxyl, methyl, nitro and bromine in position - ortho (e.e. of 94 to > 99% conversion and 23-80%). With respect to the chlorine and fluorine substituents, the best results of selectivity and enzymatic activity were obtained for the â para substituted derivatives (e.e. 93% and 73% conversion, 83% e.e. and conversion of 51%, respectively). / Neste trabalho descrevemos o estudo do potencial biocatalÃtico de cÃlulas Ãntegras de micro-organismos isolados de um vegetal da famÃlia das Cactaceas, Nopalea cochenillifera (L.) Salm-Dyck, popularmente conhecido como âpalma doceâ ou âpalma forrageiraâ. Os micro-organismos foram isolados pela tÃcnica de induÃÃo utilizando o substrato acetofenona. Dos quatro micro-organismo isolados (I-1, I-2, I-3, I-4) apenas o I-2, identificado como Pseudomonas sp, foi eficiente como biocatalisador na reduÃÃo do substrato padrÃo acetofenona. As melhores condiÃÃes para a realizaÃÃo da biorreduÃÃo da acetofenona foram as seguintes: 1g de cÃlulas em repouso de Pseudomonas sp, ressuspendidas em soluÃÃo tampÃo de pH 7, temperatura de 28 ÂC e rotaÃÃo de 175 r.p.m por 4 dias, com obtenÃÃo do (S)-1-feniletanol com conversÃo de 77% e e.e. de 89%. O estudo da biorreduÃÃo, utilizando a cepa isolada de Pseudomonas sp, foi estendido para os seguintes derivados da acetofenona: 4-metÃxi-acetofenona (2a), 4-metil-acetofenona (3a), 4-nitro-acetofenona (4a), 4-bromo-acetofenona (5a), 4-cloro-acetofenona (6a), 4-fluoro-acetofenona (7a), 3-metÃxi-acetofenona (8a), 3-metil-acetofenona (9a), 3-nitro-acetofenona (10a), 2-metÃxi-acetofenona (11a), 2-metil-acetofenona (12a), 2-nitro-acetofenona (13a), 2-bromo-acetofenona (14a), 2-cloro-acetofenona (15a), 2-fluoro-acetofenona (16a). Cabe ressaltar que todos os Ãlcoois foram obtidos com seletividade Prelog (configuraÃÃo S). Em geral, os melhores resultados foram obtidos para os derivados da acetofenona com substituintes metoxila, metila, nitro e bromo na posiÃÃo â orto (e.e. de 94 a > 99% e conversÃo de 23 a 80%). Com relaÃÃo aos substituintes cloro e flÃor, os melhores resultados de seletividade e atividade enzimÃtica foram obtidos para os derivados âpara substituÃdos (e.e. 93% e conversÃo 73%; e.e. 83% e conversÃo de 51%, respectivamente).

Os polihidroxialcanoatos (PHA) são poliésteres bacterianos. Na sua biossíntese, a PHA sintase incorpora monômeros 3HA à cadeia polimérica. O objetivo deste trabalho foi estudar o potencial da PHA sintase de 2 isolados do gênero Burkholderia sp. na produção de copolímeros. Construiram-se linhagens recombinantes que abrigavam os genes da PHA sintase classe I, em mutantes de Pseudomonas sp. e Burkholderia sacchari, que não acumulam PHA. Foram realizados ensaios de acúmulo de PHA usando glicose como fonte de carbono, apresentando a produção de unidades de 3HB, 3HO e 3HD nas linhagens recombinantes de Pseudomonas sp. As linhagens recombinantes de B. sacchari incorporaram como único constituinte P(3HB). Ensaios de acúmulo de PHA foram realizados nas linhagens recombinantes de B. sacchari, usando como co-substratos diferentes ácidos graxos, sendo detectada a incorporação de unidades de 3HV e 3HHx além do 3HB, quando foram fornecidos acido hexanóico e valérico. Estes resultados indicam que as PHA sintases classe I são capazes de incorporar diferentes unidades monoméricas. / The polyhydroxyalkanoates (PHA) are bacterial polyester. In their biosynthesis, the PHA synthase incorporates monomers 3HA to the polymer chain. The objective of this work was to study the potential of PHA synthase of 2 isolates of the genus Burkholderia sp. in the production of copolymers. Were constructed recombinant strains that housed the genes of PHA synthase class I mutants of Pseudomonas sp. and Burkholderia sacchari, which do not accumulate PHA. PHA accumulation assays were performed using glucose as carbon source, showing the production of units of 3HB, 3HO and 3HD in recombinant strains of Pseudomonas sp. The recombinant strains of B. sacchari incorporated as single constituent P(3HB). PHA accumulation assays were performed on the recombinant strains of B. sacchari, Using as co-substrates different fatty acids, being detected the incorporation of units of 3HV and 3HHx beyond the 3HB, when were supplied hexanoic acid and valerico. These results indicate that the PHA synthases class I are able to incorporate different monomer units.

Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de 39 isolados bacterianos para produção de polihidroxialcanoatos contendo monômeros de cadeia média (PHA|MCL). Os isolados foram incapazes de utilizar eficientemente amido, lactose ou sacarose. O desempenho na produção de PHA a partir de glicose ou frutose pelos isolados foi inferior à linhagem de referência (Pseudomonas sp. LFM046). Muitos dos isolados apresentaram bom desempenho na conversão de glicerol em PHAMCL. Pela primeira vez, foram detectadas bactérias capazes de produzir PHAMCL a partir de xilose. Com base no sequenciamento do rDNA 16S, estes isolados foram identificados como pertencentes ao gênero Pseudomonas. Cultivos em biorreator, resultaram em uma biomassa de aproximadamente 6 g/L, contendo cerca de 11 a 14% de PHA. A superexpressão dos genes responsáveis pelo catabolismo de xilose (xylAB) em Escherichia coli não levou a melhora no consumo de xilose ou produção de PHAMCL. / This work aimed to evaluate the potential of 39 bacterial isolates to produce polyhydroxyalkanoates containing medium-chain monomers (PHAMCL). The isolates were unable to efficiently utilize starch, lactose or sucrose. The performance of the PHA production from glucose or fructose by the isolates was lower than the reference strain (Pseudomonas sp. LFM046). Many isolates showed good performance in the conversion of glycerol into PHAMCL. For the first time, bacterial isolates capable of producing PHAMCL from xylose were detected. Based on the sequencing of 16S rDNA, these isolates were identified as belonging to the genus Pseudomonas. Bioreactor cultures resulted in a biomass of approximately 6 g/L, containing about 11 to 14% PHA. Overexpression of the genes responsible for the catabolism of xylose (xylAB) in Escherichia coli did not led to improved xylose consumption or production of PHAMCL.

Polihidroxialcanoatos (PHA) são polímeros biodegradáveis, biocompatíveis e podem ser produzidos a partir de matérias primas renováveis. Pseudomonas sp. é capaz de produzir PHA com composição monomérica variada e com teor controlável, o que confere grande variedade de aplicações. Flux Balance Analysis (FBA) foi utilizado no ambiente Matlab pelo uso do software COBRA. Para a análise foi necessário construir um core de Pseudomonas pela modificação dum core de E. coli, e assim fosse possível obter um modelo mais aproximado. Como resultado foi gerada uma rede metabólica viável contendo os genes da via de Weimberg de C. crescentus no core construído. Paralelamente, a Pseudomonas sp. LFM046 foi repicada sucessivas vezes em meio mineral (MM). Testes simples foram feitos para verificar o perfil das colônias isoladas, além de amplificar e sequenciar o gene 16S rDNA. O resultado do BLAST foi uma identidade de 99% com o gene da Pseudomonas sp. IPT 046, confirmando que a bactéria pertence a género Pseudomonas e tem a capacidade de consumir xilose. / Polyhydroxyalkanoates (PHA) are biodegradable, biocompatible polymers and can be produced from renewable raw materials. Pseudomonas sp. is capable of producing PHA with varied monomer composition and with controllable content, which confers a great variety of applications. Flux Balance Analysis (FBA) was used in the Matlab environment by the use of COBRA software. For the analysis, it was necessary to construct a Pseudomonas core by modifying an E. coli core, so that a more approximate model could be obtained. As a result a viable metabolic network was generated containing the C. crescentus Weimberg pathway genes in the constructed core. In parallel, Pseudomonas sp. LFM046 was repeated successively in mineral medium (MM). Simple tests were done to verify the profile of the isolated colonies, in addition to amplifying and sequencing the 16S rDNA gene. The BLAST result was 99% identity with the Pseudomonas sp gene. IPT 046, confirming that the bacterium belongs to the genus Pseudomonas and has the ability to consume xylose.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV12MA066.pdf: 926088 bytes, checksum: b36dd2d4d5cb4340b3553bb5206c6bb6 (MD5) Previous issue date: 2012-02-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the temporal dynamics of Entomosporiose leaf spot in diferente combinatos of European pear cultivars (Rocha, Abate fetel and Santa Maria) on diferente rootstocks (Quince A and Quince Adams) and evaluate the etiology and development of necrosis in flower bud in diferente combinations European pear (Clapp s Favorite, Packham s Triumph, Conference, William s, Rocha, Abate, Fetel, Santa Maria, Decana) European pear cultivars on diferente rootstocks (Quince A, Quince C and Quince Adams) at conditions of the Santa atarina state. In Entomosporiose the incidence and severity were assessed weekly to onset of symptoms in 100 random leaves, distributed in 4 medium branches per plant. The incidence was calculated by the percentage of leaves with at least one lesion relative to the total number of leaves evaluated and severity of infection classes. The experiments were consucted in comercial orchards in the municipalities of Fraiburgo and Urupema/Santa Catarine State, during the growing seasons 2009/10 and 2010/11. During the period from June to September of each growing season, 10 buds of each pear combination with rootstock at the phenological stages of vegetative rest and opening the scales, were evaluated for the presence of necrosis. The buds were incubated in BDA and King B culture media for fungi and bactéria identification, respectively. The fungal identification was performed by visualization of reproductive structures and identification Keys. For bacterial identification, purê cultures have been featured by LOPAT as described by Shaad (2001). The necrosis presence or not were correlated with pears combinations phenological stage and causal agente of necrosis. The Entomosporiose incidence and severity date were used to plotted the progress curves of the disease and the epidemix compared with respect to: a) the beginning of symptoms appearance (BSA); b) time to reach maximum incidence and severity of disease (TRMDI and TRMDS), c) masimum incidence and severity (Smax and Imax) and d) área under teh cuirve of progress in the incidence and severity of disease (AUCPID and AUCPSD). The necrotic buds showed the presence of Pseunomonas syringae and Xanthomonas spp bactéria and there is no significant difference of the correlation of buds necorsis occurrences with cultivars, rootstock and phonological stage evaluated. The identified bactéria were involved, in necrosis of flowers buds of the European pear as a factor inducing seconfary. All combinations of cultivars with rootstocks were susceptible to E. mespili, and the higher intensity of disease occurred in the Santa Maria cultivar, regardless of the rootstock used. There were significant diferences in the Entomosporiose incidence and severity progress curves of the cultivars Rocha, Abate Fetel and Santa Maria / Este trabalho objetivou avaliar a dinâmica temporal da Entomosporiose em diferentes combinações de cultivares copa pereira europeia (Rocha, Abate Fetel e Santa Maria) sobre diferentes portaenxertos (Marmelo A e Marmelo Adams) e avaliar a etiologia e a evolução da necrose de gemas florais em combinações de cultivares copa (Clapp´sFavorite, Packham´sTriumph, Conference, William s, Rocha, Abate Fetel, Santa Maria, Decana) de pereira europeia sobre diferentes portaenxertos (Marmelo A, Marmelo C e Marmelo Adams) nas condições edafoclimáticas do estado de Santa Catarina. Na Entomosporiose a incidência e a severidade foram avaliadas semanalmente ao surgimento dos primeiros sintomas em 100 folhas aleatórias, distribuídas em 4 ramos medianos por planta. A incidência foi calculada pela percentagem das folhas com pelo menos uma lesão em relação ao número total de folhas avaliadas e a severidade através de classes de infecção. Os experimentos de necrose foram conduzidos em pomares comerciais nos municípios de Fraiburgo e Urupema durante as safras 2009/10 e 2010/11. No período de junho a setembro foram coletas 10 gemas de cada combinação e área experimental, nos estádios fenológicos de repouso vegetativo e abertura das escamas, e avaliadas quanto a presença de necrose. As gemas foram incubadas em meios de cultura específico para fungos (BDA) e para bactérias (B de King). A identificação fúngica foi realizada através da visualização das estruturas reprodutivas e chaves de identificação. Para identificação bacteriana, culturas puras foram caraterizadas através do LOPAT segundo a descrição de Shaad (2001). A presença ou não de necrose de gemas foram correlacionadas com as combinações de cultivares e portaenxertos, estádio fenológicos e agente causal. Com os dados de incidência e severidade da Entomosporiose foram plotadas curvas de progresso da doença e as epidemias comparadas em relação a: a) início do aparecimento dos sintomas (IAS); b) tempo para atingir a máxima incidência e severidade da doença (TAMID e TAMSD); c) valor máximo de incidência e severidade (Imax e Smax) e d) área abaixo da curva do progresso da incidência e da severidade da doença (AACPID e AACPSD). Nas gemas necrosadas, verificou-se a presença das bactérias Pseudomonas syringae do gênero e Xanthomonas e não houve diferenças significativas na ocorrência de necrose das gemas tanto nas combinações de cultivares e portaenxerto quanto nos estádios fenológicos avaliados. As bactérias identificadas estão envolvidas na necrose de gemas florais de pereira europeia como um fator indutor secundário. Todas as combinações de cultivares e portaenxertos foram suscetíveis a Entomosporium mespili e a maior intensidade de doença ocorreu na cultivar Santa Maria, independente do portaenxerto utilizado. Houve diferença significativa nas curvas de progresso da doença tanto da incidência quanto da severidade da Entomosporiose nas cultivares Rocha, Abate Fetel e Santa Maria

Submitted by VÍTOR FLÁVIO FURTADO DAMASCENO null (vitor_ffd@yahoo.com.br) on 2016-11-03T19:59:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Definitiva com ficha e aprov.pdf: 1622796 bytes, checksum: 9b0b85e03f8767a6c8792fe9fc73caed (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-11-10T13:20:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 damasceno_vff_me_bot.pdf: 1622796 bytes, checksum: 9b0b85e03f8767a6c8792fe9fc73caed (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-10T13:20:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 damasceno_vff_me_bot.pdf: 1622796 bytes, checksum: 9b0b85e03f8767a6c8792fe9fc73caed (MD5) Previous issue date: 2016-09-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A avaliação da severidade - porcentagem da área lesionada em relação à área total - pode ser feita com auxílio de escalas diagramáticas, que são elaboradas com base na Lei WeberFechner e utilizam regressão linear simples em seu processo de validação, porém apresentam erros na metodologia estatística. O objetivo desta pesquisa foi propor um método de elaboração e validação de escalas de bacteriose em um híbrido Eucalyptus urophylla x Eucalyptus grandis, avaliar a da influência de concentrações de diferentes espécies de bactérias na validação de escalas, verificar a possibilidade de avaliações utilizando tons de cinza, e a influência da dispersão de lesões nas estimativas dos avaliadores no uso desta ferramenta. Foram conduzidos quatro experimentos com amostras das cidades de Bofete-SP e Botucatu-SP. No primeiro experimento, foram utilizadas 100 folhas de três clones (H13, I144 e AEC 1528) de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus grandis infectadas naturalmente com bacteriose, que tiveram sua severidade medida para elaboração, por quartis e Weber-Fechner, e validação das seis escalas diagramáticas. No segundo, mudas de eucalipto com três concentrações diferentes (105, 107 e 109 indivíduos/mL) de inóculo de três bactérias (Pseudomonas sp., Xanthomonas sp. e mix) tiveram folhas coletadas para construção de três escalas diagramáticas. No terceiro, imagens digitais das amostras de folhas dos três clones de eucalipto infectados com bacteriose foram analisadas em tons de cinza. Houve estudo de correlação entre as variáveis considerando os três clones como um único grupo e separadamente. No quarto, a escala diagramática construída para o clone AEC 1528 foi repetida em diferentes níveis de dispersão, com a mesma severidade das folhas representativas dos níveis da escala, seguidas de avaliação. No primeiro experimento, o método de quartis apresentou melhoras nas leituras quando comparado ao método Weber-Fechner, houve diferença entre os clones segundo as avaliações e o uso de escalas foi favorável. No segundo, houve melhoras nas estimativas com o uso das escalas. No terceiro, os tons de cinza podem diferenciar a severidade dos clones como um único grupo e há separação de clones por severidade. No quarto, foi detectada influência direta da dispersão das lesões da doença nas estimativas dos avaliadores. Conclui-se que o método de quartis obteve melhores resultados que o método Weber-Fechner; escalas levando em consideração a concentração de inóculo podem resultar em diferenças nas avaliações; tons de cinza podem avaliar severidade e diferenciar clones; variações na dispersão de uma mesma severidade influenciam diretamente as estimativas de um avaliador. / The severity evaluation – percentage of the injured leaf area relative to its total – could be done with the assistance of diagrammatic scales, which are elaborated based on the WeberFechner law and uses simple linear regression for its validation process. However, errors can be found in statistical methodology. The objective of this research was to propose methods of elaboration and validation for diagrammatic scales of bacterial leaf blight on the hybrid Eucalyptus urophylla x Eucalyptus grandis, evaluate the influence of concentrations and different species of bacteria on scales validation, verify the possibilities of evaluations using gray scale, and the influence of leaf injuries dispersion on the estimates done by evaluators using this tool. Four experiments were conducted with samples from Bofete-SP and Botucatu-SP. In the first experiment, 100 leaves were used from three different clones (H13, I144 e AEC 1528) of Eucalyptus urophylla x Eucalyptus grandis naturally infected with bacterial leaf blight, which had the severity measured for the elaboration, by quartiles and Weber-Fechner law, and the validation of the six resultant diagrammatic scales. In the second one, eucalypt leaves with three different concentrations (105, 107 e 109 individuals/mL) of three bacterial inoculums (Pseudomonas sp., Xanthomonas sp. and mix), had their leaves collected for the construction of three diagrammatic scales. In the third, the digital images of the sampled leaves of the three eucalypt clones were analyzed using gray scale values. There was made a correlation among the variables considering the three clones as one single group and separately. In the fourth, the diagrammatic scale built for the clone AEC 1528 was replicated into different levels of dispersion with the same severity of the levels present in the scale, followed by evaluation. In the first experiment, the quartiles method presented reading improvements in comparison with the Weber-Fechner method. There was difference among the clones and the use of the scale was favorable. In the second, there were estimates improvements using the scales. In the third, the gray scale can detect the difference of severity of the clones as a single group and there is clone differentiation by severity. In the fourth, it was detected direct influence of the injuries dispersion in the evaluations. It concludes that the quartiles method had better results than the Weber-Fechner method; scales considering the concentration of the inoculum could result into evaluation differences; gray scale can be used for severity evaluation and clone differentiation; variations of the same dispersion of severity can influence directly the estimates of and evaluator.