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京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(農学) / 甲第24653号 / 農博第2536号 / 新制||農||1097(附属図書館) / 学位論文||R5||N5434(農学部図書室) / 京都大学大学院農学研究科農学専攻 / (主査)教授 土井 元章, 教授 田尾 龍太郎, 教授 那須田 周平 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Agricultural Science / Kyoto University / DGAM

Development of winter wheat (Triticum aestivum L.) cultivars capable of more efficient uptake and utilization of applied nitrogen (N) has the potential to increase grower profitability and reduce negative environmental consequences associated with N lost from the plant-soil system. The first study sought to evaluate genotypic variation for N use efficiency (NUE) and identify lines consistently expressing high or low NUE under two or more N rates in a total of 51 N-environments. The results indicated that significant genotype by N rate interactions were frequently observed when trials utilized at least three N rates and identified wheat lines with high and stable yield potential that varied in performance under low N conditions. In addition, NUE was associated with above-ground biomass at physiological maturity were found to be both highly heritable across multiple N supplies. In the second study, two bi-parental mapping populations having a common low ('Yorktown') and two high (VA05W-151 and VA09W-52) NUE parents were characterized to dissect the genetics underlying N response. The populations were evaluated in eight N-environments and genotyped using single-nucleotide polymorphism data derived from a genotyping-by-sequencing protocol to identify quantitative trait loci (QTL) associated with high NUE. Six QTL for NUE were identified on chromosomes 1D, 2D, 4A, 6A, 7A, and 7D that were associated with N use efficiency. The QTL on 2D and 4A co-localized with known loci governing photoperiod sensitivity and resistance to Fusarium head blight (caused by the fungal pathogen Fusarium graminearum Schwabe), respectively. Three of the identified QTL (6A, 7A, and 7D) were associated with NUE in previous investigations, while the QTL on 1D was novel. The final experiment employed a small panel of soft red winter wheat lines to study the effects of photoperiod alleles on chromosome 1D (Ppd-D1) on yield-related traits under three or five N rates that were variably split over two growth stages in eight environments. The results validated the effect of a photoperiod sensitive allele (Ppd-D1b) that was associated with increased grain yield across N rates in half of the Virginia testing environments and under low N rates in all Ohio testing sites at the expense of grain N content. Yield advantages conferred by the Ppd-D1b allele were attributable to increased floret fertility and kernel number per spike. The findings from these studies have direct application for winter wheat breeding programs targeting NUE improvements. / Doctor of Philosophy / Wheat (Triticum aestivum L.) products account for a significant percentage of the total dietary calories and protein consumed globally. To meet production demands, wheat requires efficient nitrogen (N) management to ensure continued grower profitability and to reduce negative environmental impacts of N lost from agricultural systems. This dissertation sought to evaluate variation among wheat lines for N use efficiency (NUE), assess the performance of wheat lines under multiple N supplies, validate traits that are associated with NUE, investigate the role of photoperiod sensitivity genes on N response, and identify regions of the wheat genome associated with high N use efficiency. These studies were conducted using panels of winter wheat lines grown under two or more N conditions over a combined 32 location-years. Results of Chapter I identified variation in cultivar response to N rates was more frequently observed when a greater number of N rates were used in trials of wheat N response. The first chapter also identified variation among wheat lines for NUE and identified lines that consistently produce high grain yields over N-location-years. In addition, above-ground biomass at physiological maturity was found to be strongly associated with grain yield under all N rates and was highly heritable in both studies. Chapter II utilized a combination of genetic and observable trait data to perform genetic analysis in two bi-parental populations grown in eight Nlocation-years. The study identified reproducible and significant genetic markers associated with NUE for application in wheat breeding programs. Upon analysis of photoperiod sensitive versus insensitive wheat lines in Chapter III, photoperiod sensitive wheat lines had a significant yield advantage under N-limited conditions in Ohio and across N treatments in half of the Virginia testing location-years. This resulted from an increased number of kernels per spike and fertile florets in photoperiod sensitive wheat lines. Results from this dissertation suggest that active breeding and selection for N response may be achieved through the employment of high NUE genes and the continued identification of adapted high NUE wheat parental lines.

Aedes aegypti is an important vector of human pathogens including the viruses yellow fever, dengue and chikungunya. The small interfering RNA (siRNA) pathway is a critical immune response for controlling viral replication in Aedes aegypti. The goal of this research is to identify components of the Aedes aegypti genome that influence this pathway. A transgenic mosquito strain that reports the status of the siRNA pathway via enhanced green fluorescent protein (EGFP) intensity was employed to differentiate silencing abilities among individuals. Extreme EGFP expression phenotypes, representing efficient and poor silencing abilities, were enriched over five generations. Transcriptome sequencing and analyses were performed from pools of individuals from each enriched phenotype, revealing potential RNAi contributors. 1,120 transcripts were significantly different (FDR<0.0001) among the extreme phenotypes. Four genes were chosen, amplified, sequenced for SNP analysis. These analyses were performed on samples obtained by crossing enriched, extreme phenotype F0 individuals, intercrossing their progeny, then selecting individuals representing the extreme phenotypes from the F2 population. Though further verification is needed, findings from these analyses imply the regions of Aedes aegypti, Liverpool strain (AAEL) gene identifiers AAEL005026, AAEL013438 and AAEL011704 amplified do not contribute to the two extreme, opposite RNAi silencing in the sensor strain used here. SNP analyses of AAEL000817 indicate this gene either influences extreme RNAi phenotypes or is closely linked to a gene(s) that contributes to RNAi in Aedes aegypti. The 1,120 genes identified can be validated or eliminated as potential targets in the quest to mitigate the impact of Aedes aegypti. / Master of Science in Life Sciences

La transition florale est un évènement clef dans la vie d’une plante. Chez le fraisier, la compréhension des mécanismes génétiques de cette transition est un enjeu majeur pour mieux contrôler la production de fruits. La transition florale peut être étudiée à travers la remontée florale, qui est la capacité d’une plante à fleurir tout au long de la période végétative. Le fraisier cultivé octoploïde, F. x ananassa, comme le fraisier diploïde, F. vesca, présentent des génotypes remontants capables de fleurir en continu. L’objectif de cette thèse est de comprendre le déterminisme génétique et moléculaire de la remontée florale chez Fragaria. Ce travail a montré que chez les fraisiers diploïde et octoploïde, le caractère ‘remontée florale’ est contrôlé par deux verrous génétiques différents localisés à des positions non orthologues. Chez le fraisier diploïde, le gène FvKSN responsable de la remontée florale a été identifié et code pour un homologue du répresseur floral TFL1. Chez les génotypes remontants, ce gène présente une délétion dans la partie codante conduisant à une protéine non fonctionnelle, incapable de réprimer la floraison. Chez le fraisier octoploïde, le QTL majeur détecté contrôlant la remontée florale est lié à la production de stolons de manière antagoniste, suggérant l’existence d’une région génomique où s'exerce une compétition entre multiplication végétative et la reproduction sexuée. Cette région génomique comprend plusieurs gènes candidats intéressants dont FT, activateur de la floraison.Une hypothèse suggérée par ce travail est que chez le fraisier, l’alternance entre phase végétative et phase reproductive est liée à l’équilibre entre les gènes FvKSN, homologue de TFL1, et FvFT, homologue de FT. La remontée florale serait la conséquence d’une modification de cet équilibre entre ces deux gènes en faveur du développement reproductif. / The floral transition is a key event in plant life. In strawberry, understanding the genetic mechanisms of floral transition is a major issue for better control of fruit production. This transition is studied through the continuous flowering, which is the ability to flower throughout the growing season. Both, the octoploid cultivated strawberry, F. x ananassa, as the woody diploid strawberry, F. vesca, displayed continuous flowering genotypes. The objective of this work is to decipher the genetic and molecular mechanism of the continuous flowering in Fragaria.This work has shown that in diploid and octoploid strawberry the continuous flowering is controlled by two different genetic 'keys' located at non-orthologous position. In diploid strawberry, the gene FvKSN responsible of continuous flowering was identified and encodes a homologous to the TFL1 floral repressor. In the continuous flowering genotypes, this gene has a deletion in the coding region leading to a nonfunctional protein unable to repress flowering. In the octoploid strawberry, the major QTL controlling both the recurrent flowering and the runner production was identified. These traits were antagonist, which suggests competition between vegetative propagation and sexual reproduction in this region. This genomic region contains several interesting candidate genes whose FT, an activator of flowering.A hypothesis could be proposed. In strawberry, the switch between vegetative and reproductive phase is linked to balance between two genes, FvKSN, homologous to TFL1 and FvFT homologous to FT. Continuous flowering would be the consequence of balance modification between this two genes to the benefit of floral development.

L'arachide (Arachis hypogaea L.) est une plante allotétraploïde (2n = 4x = 40) issue d'un événement récent d'hybridation entre deux espèces sauvages suivi d'un doublement spontané des chromosomes. La variabilité génétique existant dans le compartiment cultivé est faible. Les espèces diploïdes sauvages apparentées à l'arachide cultivée représentent un important réservoir d'allèles nouveaux utilisables pour élargir le pool génique du cultigène. L'objectif général de cette thèse est d'augmenter les marges de progression en amélioration de l'arachide par recours aux ressources génétiques sauvages. Nous avons développé une population BC1F1 à partir du croisement entre Fleur11 et un amphidiploïde synthétique (A. ipaensis x A. duranensis)x4 qui associe les génomes des plus probables progéniteurs sauvages de l'espèce cultivée. Nous avons d'abord construit une carte génétique comprenant 298 loci positionnés sur 21 groupes de liaison avec une taille totale de 1843.7 cM. Nous avons ensuite conduit une analyse AB-QTL pour plusieurs caractères impliqués dans la productivité, l'adaptation et la domestication de l'arachide. Au total, nous avons cartographié 95 QTL. Pour plusieurs QTL, les effets positifs sont associés aux allèles provenant des espèces sauvages. Nous avons aussi identifié trois régions du génome qui portent des empreintes de la domestication. Nous avons enfin développé une population de 122 lignées d'introgression à l'aide d'une stratégie de sélection assistée par marqueurs. L'ensemble des groupes de liaison sont couverts avec des frag ments chevauchants, issus des donneurs sauvages, d'une taille moyenne de 39.2 cM et chaque lignée comprend en moyenne 1.2 fragments. Nous avons par ailleurs discuté l'utilisation de cette collection de lignées d'introgression pour des applications de sélection et de recherche. Nos résultats ouvrent de nouvelles perspectives pour l'amélioration de l'arachide par croisement avec les espèces sauvages apparentées. / Peanut (Arachis hypogaea L.) is considered to be an allotetraploid (2n = 4x = 40) originated from a single hybridization event between two wild diploids followed by spontaneous chromosomes duplication. Cultivated peanut harbours a limited genetic diversity. Peanut wild relatives represent an important source of novel alleles that could be used to broaden the gene pool of the cultigen. The general objective of this work is to enhance the rate of progress in peanut breeding using wild species resources.We developed a BC1F1 population from the cross between Fleur11 and a synthetic amphidiploid (A. ipaensis x A. duranensis)x4 that combines the genomes of the most probable wild progenitors of the cultigen. We first developed a SSR based genetic map of 298 loci on 21 linkage groups, spanning a total map distance of 1843.7 cM. We then conducted a detailed AB-QTL analysis for several traits involved in peanut productivity and adaptation as well as in the domestication syndrome. We mapped a total of 95 QTLs. About half of the QTL positive effects were associated with alleles of the wild parents and several QTLs involved in yield components were specific to the water-limited treatment. We identified three genomic regions which bear footprints of domestication. We finally developed, through a marker assisted backcross strategy, an exotic introgression library of 122 lines. This population, which has in average 1.2 fragments per line, allows covering all linkage groups with overlappi ng wild donor fragments of in average 39.2 cM length. The utilization of the exotic introgression lines library for breeding and research is discussed. Our findings open new avenues for peanut improvement using wild relatives.

Le semis précoce du tournesol, d’un à deux mois par rapport à la période habituelle (Avril dans le sud ouest de la France), a été envisagé pour esquiver les périodes de sécheresses estivales. Cette stratégie conduit à un abaissement des températures de l’ordre de 5 à 10°C durant les premières phases de développement de la culture. L’objectif de ce travail est donc d’identifier des génotypes de tournesol adaptés à des conditions de basses températures en début de cycle, et de fournir des outils pour la sélection de ces nouveaux idéotypes. Dans un premier temps le modèle de culture SUNFLO, développé pour l’analyse des interactions génotype x environnement chez le tournesol, a été utilisé pour identifier par simulation un idéotype pour le semis précoce. Cette étude a révélé que le type variétal valorisant le mieux de semis précoce présente une levée précoce et un cycle tardif. Dans un deuxième temps, la variabilité génétique d’une population de lignées recombinantes de tournesol a été une analysée pour des traits agro-morphologiques et physiologiques caractérisant le développement (vitesse de germination, phénologie) et la croissance à basse température (élongation de l’hypocotyle, production de biomasse, et traits physiologiques impliqués dans la tolérance au froid). L’analyse génétique de ces caractères a permis d’identifier les régions chromosomiques impliquées dans la variation de ces caractères (QTLs) ainsi que les marqueurs moléculaires associés à ces QTLs qui représentent des marqueurs d’intérêts pour la sélection. L’analyse des processus impliqués dans la levée (germination et élongation de l’hypocotyle) montre que la température de base pour l’élongation de l’hypocotyle présente un gain génétique significatif à basse température. Ce trait est sous le contrôle génétique de deux QTLs majeurs dont l’un, qui explique 40% de la variabilité phénotypique observée, est lié au marqueur SSR ORS1128. Le temps thermique du semis à la floraison est un caractère contrôlé par des QTLs spécifiques en conditions de semis précoces, parmi lesquels deux sont colocalisés avec des QTLs identifiés pour des traits relatifs à la levée. L’étude des traits physiologiques impliqués dans la réponse aux basses températures a révélé que le tournesol a un potentiel de sélection pour la tolérance au froid, notamment pour le potentiel osmotique. Le maintien des membranes plasmiques stables à basses températures est également un trait jouant un rôle important dans la tolérance au froid. Un QTL à effet majeur lié au marqueur SSR ORS331_2 a été identifié pour ce trait et pourrait être utilisé pour aider à la sélection de génotypes de tournesol adaptés au froid. / Early sowing to escape the drought during summer was studied in sunflower. Sowing one or two months earlier leads to reduce about 5 to 10°C during first stages of development compared with traditional sowing (April in south parts of France) in this species. The aim of this study is to identify sunflower genotypes adapted for low temperature and to identify tools for selecting them. Firstly the crop model SUNFLO, Which is developed to analyze “genotype x environment” interactions in sunflower, was used to identify by simulation favorable ideotypes for early sowing. Results show that they have to present early emergence and a late development cycle. Then, several experiments were undertaken to study genetic variability for agro-morphologic and physiologic traits under early sowing in sunflower. A population of 95 recombinant inbred lines and their two parents were used at low temperature in all experiments. Germination rate, hypocotyl elongation, biomass production and some physiological traits for cold tolerance were studied. Genetic analyses were performed and genomic regions (QTLs) involved in the variation of these traits as well as SSR markers associated with them were identified. Analysis of physiological processes related to emergence (germination and hypocotyl elongation) show that the base temperature of hypocotyl elongation presents a significant genetic gain at low temperature. This trait is controlled by two major QTLs and one of them explains 40% of the phenotypic variance and contains the SSR marker ORS1128. The thermal time from sowing to flowering is controlled by specific QTLs in early sowing and two of them are collocated with QTLs detected for emergence related-traits. The study of physiological traits implied with response to low temperature showed that sunflower present a high potential for cold tolerance variability, especially for the osmotic potential. The cell membrane stability at low temperature is also an important trait for cold tolerance. A major QTL associated with the SSR marker ORS331_2 was identified for this trait and should be used to select sunflower cold tolerant genotypes.

L'alternance de production est définie comme la charge en fruit d'un arbre irrégulière sur plusieurs années consécutives. La principale hypothèse en soulignant l'alternance est que la charge en fruits d'une année en cours inhibe la formation de fleurs pour l'année suivante. Ce phénomène génère d'importants problèmes agronomiques pour les espèces fruitières comme le pommier, en réduisant la production de fruits au cours des années 'OFF' et la qualité des fruits au cours des années 'ON', tout en augmentant les coûts de gestion des vergers, en particulier pour l'éclaircissage des fruits. Une stratégie pour atténuer l'alternance est de développer de nouvelles variétés avec une production régulière. Les principaux objectifs de ma thèse étaient: (i) d'améliorer les stratégies de phénotypage et les méthodes pour caractériser l'alternance de production, (ii) de disséquer le contrôle génétique de l'alternance de production en utilisant une descendance de pommier en ségrégation et d'identifier les principales régions génétiques responsables de la variation du caractère, et (iii) d'étudier les processus physiologiques sous-jacents à l'alternance de production. J'ai combiné des méthodes comme la modélisation, la génétique quantitative, la détection de Quantitative Trait Loci (QTL) et de gènes candidats ainsi que la cartographie et l'expression de gènes.Mon étude a utilisé une population de pommier ségrégation obtenue à partir d'un croisement entre des parents contrastés pour les caractéristiques architecturales et de floraison (‘Starkrimson' x 'Granny Smith'). Le phénotypage de la population pour l'alternance de production a été réalisée à l'échelle d'arbres entiers, en observant les occurrences de floraison pendant six années consécutives, et à l'échelle locale, en observant la succession de méristèmes floraux vs végétative en position terminale de rameaux. De ces données, de nouveaux modèles ont été développés afin de quantifier l'alternance de la production, en tenant compte de la croissance ontogénétique de la production et la présence / absence de floraison entre les années successives le long des pousses courtes. Ceci nous a conduits à proposer de nouveaux descripteurs de la tendance d'un génotype à l'alternance de production dans les premiers stades de développement des arbres et ouvre des possibilités pour une évaluation plus rapide et plus précoce de ce caractère dans les programmes de sélection de fruits à pépins.Pour identifier les régions génomiques impliquées dans l'alternance, une détection de QTL a été réalisée sur la base des données phénotypiques et des valeurs de BLUP obtenues à partir des modèles. J'ai démontré que la régularité de la production est sous contrôle polygénique. J'ai extrait une liste de gènes qui sont présents au sein de ces QTL en utilisant la séquence du génome du pommier. Les principaux gènes candidats identifiés sont liés aux gibbérellines, aux auxines, et à la floraison. J'ai étudié l'expression des gènes candidats co-localisant avec des QTLs par PCR quantitative en utilisant les méristèmes prélevés sur les arbres portant une forte charge en fruits vs une faible charge. Une analyse microarray m'a permis d'obtenir un aperçu global des processus biologiques et de l'expression des gènes qui sont modulés dans le méristème lorsque des fruits sont présents. Certains gènes liés à la floraison, au développement du méristème, aux gibbérellines et aux auxines ont montré un profil d'expression affectée par la présence de fruits.Mes résultats fournissent des éclaircissements sur le contrôle physiologique et génétique de ce caractère complexe qui est l'alternance et ouvrent la perspective d'inclure la régularité de production dans les schémas de sélection de pommier et d'autres espèces fruitières / Biennial bearing is defined as the irregular crop load of a tree over consecutive years. The main assumption underlining biennial bearing is that the fruit load of a given year inhibits flower formation for the following year. This phenomenon generates major agronomic problems for fruit species such as apple, by reducing fruit production during ‘OFF' years and fruit quality during ‘ON' years, while increasing orchard management costs, especially for fruit thinning. A strategy to attenuate biennial bearing is to develop new varieties with regular production. The main objectives of my project were (i) to improve phenotyping strategy and methodology for biennial bearing characterisation, (ii) to dissect the genetic control of biennial bearing using an apple segregating progeny and to identify key genetic regions responsible for the trait variation, and (iii) to investigate physiological processes underlying biennial bearing. I combined methodologies such as modelling, quantitative genetics, candidate gene and Quantitative Trait Loci (QTL) mapping and gene expression.My study used an apple segregating population issued from a cross between contrasting parents for architectural and flowering features (‘Starkrimson' x ‘Granny Smith'). Phenotyping of the population for biennial bearing was achieved at whole tree scale by observing flowering occurrence for six consecutive years, and at local scale, by observing the succession of floral vs. vegetative meristems in terminal position of shoots. From this data, new models were constructed to quantify the alternation of production, taking into account the ontogenetic increasing trend of production and the presence/absence of flowering between successive years along short shoots. This led us to propose new descriptors of the tendency of a genotype to biennial bearing in the early stages of tree development and opens possibilities for a faster and earlier evaluation of this character in pipfruit breeding programmes and for orchard management.To identify genomic regions involved in biennial bearing, a QTL detection was performed on the basis of phenotypic data and BLUP values obtained from the models. I demonstrated that the regularity of production is under polygenic control. I mined a list of genes that are present within these QTLs using the apple genome sequence. The main candidate genes identified are related to gibberellins, auxins, and flowering.I investigated the expression of candidate genes co-locating with QTLs by quantitative PCR using meristems collected on trees bearing heavy fruit load vs. light crop. A microarray analysis enabled me to obtain a global overview of biological processes and gene expression that are modulated in the meristem when fruits are present. Some genes related to flowering, meristem development, gibberellins and auxins showed an expression profile affected by the presence of fruit.My results provide elucidation on the physiological and genetic control of the complex trait that is biennial bearing and open up the perspective of including regular bearing in breeding schemes for apple and other fruit species.

Les QTL (Quantitative Trait Loci) sont des régions chromosomiques comportant un ou plusieurs gènes contrôlant l’expression d’un paramètre péhnotypique. La détection de ces QTL dans l’industrie des levures œnologiques permet la sélection de souches performantes. Dans cette étude, la dissection d’un QTL associé à la phase de latence durant la fermentation alcoolique en conditions œnologiques a permis de mettre en évidence une nouvelle translocation. Celle-ci, impliquant le gène SSU1 permet aux souches qui la possèdent d’avoir une phase de latence raccourcie. L’usage intensif du SO2 en œnologie a conduit à la sélection de cette translocation chez les souhes industrielles. Des marqueurs PCR ont été developpés pour contrôler ce caractère dans les processus de sélection des souches, permettant d’intoduire cette translocation dans différents fonds génétiques. Une première étape dans l’étude de l’impact organoleptique de ces translocations sur le vin a été faite, montrant une corrélation avec la production d’acidité volatile. Cette voie reste néanmoins à approfondir, tant au laboratoire qu’en conditions réelles dans un chai. / QTL (Quantitative Trait Loci) are chromosomics regions including one or more genes controlling the expression of a phenotypic parameter. The detection of these QTL in the wine industry allows the selection of more efficient yeast strains. In this study, the dissection of a QTL linked to lag phase variation during wine alcoholic fermentation was carried out. Our findings put in light a new translocation involving the SSU1 gene conferring a shorter lag phase. The intensive use of SO2 in oenology allows the selection of this translocation in industrials strains. Genetic markers were developed for introducing this translocation in various genetic backgrounds during selection programs. The study of translocations impact on the wine organoleptic properties was initiated, showing an unexplained role of VIII-XVI translocation on the volatile acidity production. These preliminary results need to be continued, in laboratory and cellar conditions.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-12-04T18:41:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_final_Adenilson.pdf: 1632453 bytes, checksum: ca3bab925a332585e719109a07462e72 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-04T18:41:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_final_Adenilson.pdf: 1632453 bytes, checksum: ca3bab925a332585e719109a07462e72 (MD5) Previous issue date: 2018-09-27 / Os objetivos deste trabalho foram a obtenção de um mapa genético de alta densidade utilizando marcadores SNP (Single Nucleotide Polymorphism) obtidos através de genotipagem por sequenciamento (GBS) e identificar as regiões genômicas ligadas à tolerância à murcha bacteriana (Ralstonia solanacearum Smith) em uma população de duplo-haploides (DH) de tabaco. As linhagens endogâmicas NC95 (tolerante) e NC2326 (suscetível) foram cruzadas entre si gerando a população F1, anteras foram coletadas destas plantas para produção de haploides e posterior duplicação cromossômica através da cultura de anteras, gerando 180 famílias duplo-haploides que foram avaliadas em ambiente controlado quanto à tolerância à murcha bacteriana, após inoculação com R. solanacearum, através de uma escala de notas com amplitude de 0 a 4. As famílias DH foram genotipadas utilizando a metodologia de GBS e os dados resultantes desta genotipagem foram alinhados com o genoma de referência do tabaco para posterior obtenção dos marcadores SNP utilizados na construção do mapa de ligação. O mapa de ligação juntamente com os dados de fenotipagem foram utilizados para realizar o mapeamento de QTLs através do mapeamento por intervalo composto. Foram identificados 6.842 SNPs, utilizados para construção de um mapa de ligação com 70.583 cM, sendo este o maior mapa de ligação utilizando marcadores SNP disponível para tabaco e com o maior número de marcadores. Utilizando este mapa de ligação foram mapeados 13 QTLs para tolerância à murcha bacteriana em oito grupos de ligação, dos quais oito QTLs ainda não tinham sido identificados na literatura especializada. Os locos presentes nos grupos de ligação 3, 17 e 22 apresentaram os maiores efeitos na variação fenotípica. O elevado número de QTLs mapeados nesta população confirma o padrão de herança quantitativa da tolerância de tabaco à murcha bacteriana causada por R. solanacearum. / The objectives of this work were to obtain a high-density genetic map using SNP (Single Nucleotide Polymorphism) markers obtained through Genotyping-by-Sequencing (GBS) and to identify the genomic regions linked to bacterial wilt tolerance (Ralstonia solanacearum Smith) in a tobacco double-haploid (DH) population. The inbred lines NC95 (tolerant) and NC2326 (susceptible) were crossed generating the F1 population, anthers were collected from these plants for haploid production and subsequent chromosomic duplication using anthers culture, generating 180 double-haploid families that were evaluated in a controlled environment for tolerance to bacterial wilt after inoculation with R. solanacearum, using an assessment scale from 0 to 4. The DH families were genotyped using the GBS methodology and the resulting data from this genotyping were aligned with the reference genome and then to obtain the SNP markers used to construct the genetic linkage map. The linkage map jointly with the phenotyping data were used to QTL mapping through the composite interval mapping method. A total of 6,842 SNPs was identified and used to construct a linkage map with 70,583 cM, being the largest SNP-based genetic linkage map available for tobacco and presenting the highest number of markers. Using this linkage map, 13 QTLs were mapped for bacterial wilt tolerance in eight linkage groups, from those eight QTLs had not yet been identified in the specialized literature. The loci present in linkage groups 3, 17 and 22 had the highest effects on phenotypic variation. The high number of QTLs mapped in this population confirms the quantitative genetic control of tobacco tolerance to bacterial wilt caused by R. solanacearum.