Uma estreita relação entre a ação dos hormônios tireoidianos (HT) no sistema cardiovascular sendo mediada por componentes do sistema renina-angiotensina (SRA) tem sido descrita na literatura. Já foi demonstrado que o processo de isquemia/reperfusão (I/R) promove diminuição na expressão do receptor de angiotensina II do tipo 2 (AT2) no miocárdio, com consequente prejuízo funcional, enquanto o aumento de sua expressão melhorou a recuperação da função cardíaca. A hipótese do presente estudo é que o papel cardioprotetor exercido pelos HT ocorre com a participação do receptor AT2. Esta hipótese foi testada utilizando o modelo de I/R com a perfusão de coração isolado de camundongos selvagens e nocautes para o AT2, submetidos a tratamento por 14 dias com T3. Ainda foi avaliado o SRA mitocondrial, assim como o papel do óxido nítrico (NO) na recuperação pós-isquêmica. Os resultados apontam que a cardioproteção induzida pelo T3 é mediada pelo AT2, com consequente aumento na produção de NO e modulação de parâmetros do metabolismo mitocondrial. / Some authors have shown a close relationship between the action of thyroid hormone (TH) on cardiovascular system and renin angiotensin system (RAS) activation. Have been shown that ischemia/reperfusion (I/R) promotes decrease on angiotensin II type 2 receptor (AT2) expression in the myocardium, with functional worsening, on the other hand the AT2R increased improves the cardiac function after ischemia episodes. So, we have hypothesized that the cardioprotective effect of TH in I/R model may occur with the participation of AT2. This hypothesis was tested using I/R model in isolated hearts AT2 knockout and wild-type mice submitted to high levels of T3 by 14 days. The mitochondrial RAS was evaluated, as well as the nitric oxide (NO) role in post-ischemic recovery. The results show that TH induces cardioprotection through AT2 receptor, some mitochondrial metabolism parameters were modulated by TH and the NO production was increased.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to verify the type of angiotensin II (AngII) receptor involved in nuclear maturation of bovine oocytes and the possible participation of bradykinin (BK) as a mediator of AngII in this process. The first experiment was conducted to analyze the type of AngII receptor, for this cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 7 or 12h in the presence of follicular hemisections and AngII (10-11M), with or without the antagonists losartan (10-6M; selective for AT1 receptor), PD123319 (10-6M; selective for AT2 receptor) or saralasin (10-7M; AT1 and AT2 antagonist). Additionally, two control groups were used where the oocytes were cultivated in the absence or presence of follicular hemisections (positive and negative control, respectively). Oocytes cultured for 7h in the presence AngII reached 70,4% germinal vesicle breakdown (GVBD). When losartan was added to the maturation medium with AngII, the GVBD oocytes did not have any difference (73,2%), however when COCs were cultured in the presence of AngII + PD123319, the nuclear maturation was lower (52,1%; P<0,05). The cultivation of the oocytes for a larger period (12h) did not cause a significant difference in relation to those 7h treatments (P<0,05). These data indicate that the AT2 receptor mediate the actions of AngII during the nuclear maturation in bovine. In a second experiment, the effect of different concentrations of PD123319 was verified in the oocytes nuclear maturation in the presence of AngII (10-11M) and follicular hemisections. The culture was accomplished by 7h in a similar experimental design as previous experiment and it was verified that the inhibition induced by the antagonist happened in a dose-dependent way and there is lineal relation between concentration of PD and rates of obtained RVG (P=0,0306). To verify the participation of BK in the action mechanism of AT2 receptors, the oocytes were cultured in the presence of AngII (10-11M) and follicular hemisections with or without Hoe-140 (antagonist of B2 receptors of BK) in different concentrations (10-6, 10-7, 10-8 and 10-9M) for 7h. In this experiment, there was not any difference in the rates of GVBD oocytes among the groups treated with the antagonist and the AngII group (P>0,05). These data allow to infer that AngII acts in the nuclear maturation of the bovines oocytes activating the AT2 receptors and that the BK/receptor B2 pathway is not involved in that process. / O objetivo deste estudo foi de verificar o tipo de receptor da angiotensina II (AngII) envolvido na maturação nuclear de oócitos bovinos e a possível participação da bradicinina (BK) como mediadora da AngII nesse processo. O primeiro experimento foi conduzido para analisar o tipo de receptor, para isso os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram cultivados por 7 ou 12h na presença de hemiseções foliculares e AngII (10-11M), com ou sem os antagonistas losartan (10-6M; seletivo para receptores AT1), PD123319 (10-6M; seletivo para receptores AT2) ou saralasina (10-7M; antagonista AT1 e AT2). Adicionalmente, foram utilizados dois grupos controle, onde os oócitos foram cultivados na ausência ou na presença de hemiseções foliculares (controle positivo e negativo, respectivamente). Oócitos cultivados por 7h em presença de AngII atingiram 70,4% de rompimento da vesícula germinativa (RVG). Quando o losartan foi adicionado ao meio de cultivo com AngII, não houve diferença na percentagem de oócitos em RVG (73,2%), porém, quando os CCOs foram incubados na presença de AngII + PD123319, houve queda significativa na maturação nuclear (52,1%; P<0,05). O cultivo dos oócitos por um período maior (12h) não causou diferença significativa em relação a esses tratamentos quando foram realizados às 7h (P<0,05). Esses dados indicam que os receptores AT2 mediam as ações da AngII na maturação nuclear em bovinos. Em um segundo experimento, foi verificado o efeito de diferentes concentrações de PD123319 na maturação nuclear dos oócitos na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares. O cultivo foi realizado por 7h em um delineamento similar ao do experimento anterior e verificou-se que a inibição induzida pelo antagonista ocorreu de maneira dosedependente e há relação linear entre concentração de PD e índices de RVG obtidos (P=0,0306). Para verificar a participação da BK no mecanismo de ação dos receptores AT2, os oócitos foram cultivados na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares com ou sem Hoe-140 (antagonista de receptores B2 da BK) em diferentes concentrações (10-6, 10-7, 10-8 e 10-9M) por 7h. Nesse experimento, não houve diferença nos índices de oócitos que atingiram RVG entre os grupos tratados com o antagonista e o grupo AngII (P>0,05). Esses dados permitem inferir que a AngII atua na maturação nuclear dos oócitos bovinos ativando os receptores AT2 e que a via BK/receptor B2 não está envolvida nesse processo.

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Material e métodos: foram utilizados ratos Wistar, não treinados, pesando entre 240-350 g. Os animais portavam cânula no ventrículo cerebral lateral direito para administração de 2 μL de PD (10 μg, n = 7) ou de 0,15 M NaCl (SAL, n = 7). A temperatura corporal interna (Tc), determinada por telemetria através de sensor de temperatura implantado na cavidade intraperitoneal do rato, e a temperatura da cauda (Tcauda) foram medidas durante o repouso e enquanto os animais realizavam exercício submáximo a uma velocidade de 18 m/min, 5 % de inclinação, até a fadiga. A partir dos dados obtidos foram determinados: a taxa de aquecimento corporal (BHR), a taxa de calor acumulado (HSR), o limiar térmico de vasodilatação da cauda (TTcV), o tempo total de exercício (TTE) e o trabalho (W). Resultados: Durante o repouso, a Tc dos animais de ambos os grupos permaneceu estável e diferenças não foram encontradas entre os tratamentos. Observou-se que a administração icv de PD promoveu aumento de 17 % no TTE (18 ± 1,8 min, PD vs. 15 ± 2,1 min, SAL, p < 0,01) e de 20 % no W quando comparado com os controles (4,62 ± 0,34 kgm, PD vs. 3,74 ± 0,4 kgm, SAL, p < 0,01). Apesar dos ratos injetados com PD apresentarem aumento semelhante da Tc durante o exercício físico, no ponto de fadiga verificou-se maior variação da Tc (2,37 ± 0,24 °C, PD; 1,73 ± 0,21 °C, SAL, p< 0,05). Entretanto, durante o exercício físico, diferenças não foram encontradas entre a BHR (0,14 ± 0,01 °C.min-1, PD vs. 0,13 ± 0,02 °C.min-1, SAL), a HSR (33,75 ± 1,37 cal. min-1, PD vs. 30,9 ± 2,82 cal. min-1, SAL) e o TTcV (37,75 ± 0,12 °C, PD vs. 37,61 ± 0,15 °C, SAL) entre os grupos. Adicionalmente, a partir do 13° minuto até a fadiga, a variação da Tcauda foi maior nos animais PD (4,87± 0,44 °C, PD; 3,10 ± 0,57 °C, SAL, p<0,05), que se mostrou intimamente relacionado com o TTE aumentado (r= 0,871, p <0,01). Conclusões: Os dados mostram que o bloqueio do receptor AT2 melhora o balanço térmico durante o exercício físico devido a maior habilidade de dissipar calor, consequentemente contribuindo para aprimoramento do desempenho físico. / Aim: The aim of the study was to verify the effect of central angiotensin ll AT2 receptor blockade in thermoregulatory responses during exercise in rats. Material and methods: Wistar rats weighing between 250 and 350g. Were implanted with a guide cannula in the right lateral cerebral ventricle for administration of 2µL PD (10 μg, n = 7) or 0,15 M NaCl (SAL, n = 7). The internal body temperature (Tb) was determined by telemetry via a temperature sensor implanted in the animal's intraperitoneal cavity. The tail temperature (Ttail) was measured using a temperature sensor attached to the animal's tail. Both temperatures were measured continuously, during resting and while the animals performed submaximal exercise at a speed of 18m/min and 5% inclination, until failure. From the data obtained, body heating rate (BHR), heat storage rate (HSR), body temperature threshold for tail vasodilation (TTbV), time to fatigue (TTF) and workload (W) were determined. Results: Tb remained stable in both group, and no difference was seen between treatments during a resting period. It was observed that icv administration of PD promoted an increase of 17% in the TTF (18 ± 1,8 min, PD vs. 15 ± 2,1 min, SAL, p < 0,01), and of 20% in the W, when compared with controls (4,62 ± 0,34 kgm, PD vs. 3,74 ± 0,4 kgm, SAL, p < 0,01). Despite that the rats injected with PD exhibited similar increase in Tb during exercise, at fatigue point it was found greater variation of Tb (2,37 ± 0,24 °C, PD; 1,73 ± 0,21 °C, SAL, p< 0,05). However, no difference was seen between BHR (0,14 ± 0,01 °C.min-1, PD vs. 0,13 ± 0,02 °C.min-1, SAL), HSR (33,75 ± 1,37 cal. min-1, PD vs. 30,9 ± 2,82 cal. min-1, SAL) and TTbV (37,75 ± 0,12 °C, PD vs. 37,61 ± 0,15 °C, SAL) in both group. Additionally, from the 13° minute of exercise until fatigue, Ttail variation was higher in PD animals (4,87 ± 0,44 °C, PD; 3,10 ± 0,57 °C, SAL, p<0,05), and closely related with the increased TTF (r= 0,871, p <0,01). Conclusion: The data shows that AT2 receptor blockade improves heat balance during exercise due to better ability to dissipate heat, which contributed to superior exercise performance.

A vasodilatação promovida pela triiodotironina (T3) ocorre por sua ação direta sobre o relaxamento das células musculares lisas vasculares (CMLV), porém os mecanismos envolvidos são desconhecidos. Neste estudo mostramos que o T3 rapidamente relaxa as CMLV através da geração de óxido nítrico (NO), via óxido nítrico sintase neuronal e induzível (nNOS e iNOS), efeitos mediados pela sinalização PI3K/Akt. Ensaios funcionais em aortas sem endotélio, incubados com T3, mostraram menor resposta contrátil a Fenilefrina (FE), efeito este revertido pelo L-NAME, inibidor da NOS. Aortas de ratos hipertiroideos apresentaram aumento do receptor de Angiotensina II (AngII) do tipo 2 (AT2), acompanhado de diminuição de proteínas contráteis. In vitro o T3 diminui estas proteínas contráteis via AT2. Aortas sem endotélio dos ratos hipertiroideos apresentaram menor reatividade a AngII e maior relaxamento ao nitroprussiato de sódio (NPS), efeitos estes mediados via AT2. Por fim, observamos que o T3 é capaz de induzir produção de NO nas CMLV via PI3K/Akt, a qual é ativada pelo AT2 / 3,3\',5-triiodo-l-thyronine (T3) has been shown to induce vasodilation by its direct effect on vascular smooth muscle cells (VSMC). However, the mechanism by which T3 causes VSMC relaxation is still unknown. Here, we have shown that T3 causes rapid relaxation of VSMC via increased NO production from inducible and neuronal nitric oxide synthase (NOS). We further showed that these effects were mediated by PI3K/Akt signaling pathway. Vascular reactivity studies showed that endothelium-denuded aortas treated with T3 had a decreased response to phenylephrine which was reserved by L-NAME, NOS inhibitors. Aortas from hyperthyroid rats showed an upregulation of AT2 accompanied by decreased of contractile proteins. In vitro we observed that T3 decreases contractile proteins via AT2. Furthermore, endothelium-denuded aortas from hyperthyroid rats showed a decreased response to angiotensinII and augmented relaxation to sodium nitroprusside (SNP) via AT2 participation. Our data also suggests that PI3K/Akt signaling pathway is involved in T3-induced NO production in VSMC via AT2.

A vasodilatação promovida pela triiodotironina (T3) ocorre por sua ação direta sobre o relaxamento das células musculares lisas vasculares (CMLV), porém os mecanismos envolvidos são desconhecidos. Neste estudo mostramos que o T3 rapidamente relaxa as CMLV através da geração de óxido nítrico (NO), via óxido nítrico sintase neuronal e induzível (nNOS e iNOS), efeitos mediados pela sinalização PI3K/Akt. Ensaios funcionais em aortas sem endotélio, incubados com T3, mostraram menor resposta contrátil a Fenilefrina (FE), efeito este revertido pelo L-NAME, inibidor da NOS. Aortas de ratos hipertiroideos apresentaram aumento do receptor de Angiotensina II (AngII) do tipo 2 (AT2), acompanhado de diminuição de proteínas contráteis. In vitro o T3 diminui estas proteínas contráteis via AT2. Aortas sem endotélio dos ratos hipertiroideos apresentaram menor reatividade a AngII e maior relaxamento ao nitroprussiato de sódio (NPS), efeitos estes mediados via AT2. Por fim, observamos que o T3 é capaz de induzir produção de NO nas CMLV via PI3K/Akt, a qual é ativada pelo AT2 / 3,3\',5-triiodo-l-thyronine (T3) has been shown to induce vasodilation by its direct effect on vascular smooth muscle cells (VSMC). However, the mechanism by which T3 causes VSMC relaxation is still unknown. Here, we have shown that T3 causes rapid relaxation of VSMC via increased NO production from inducible and neuronal nitric oxide synthase (NOS). We further showed that these effects were mediated by PI3K/Akt signaling pathway. Vascular reactivity studies showed that endothelium-denuded aortas treated with T3 had a decreased response to phenylephrine which was reserved by L-NAME, NOS inhibitors. Aortas from hyperthyroid rats showed an upregulation of AT2 accompanied by decreased of contractile proteins. In vitro we observed that T3 decreases contractile proteins via AT2. Furthermore, endothelium-denuded aortas from hyperthyroid rats showed a decreased response to angiotensinII and augmented relaxation to sodium nitroprusside (SNP) via AT2 participation. Our data also suggests that PI3K/Akt signaling pathway is involved in T3-induced NO production in VSMC via AT2.