A pré-eclâmpsia (PE) é causa importante de mortalidade fetal e materna. Existem evidências que a resistência à insulina esteja implicada em sua fisiopatologia. A via Akt/PKB (Akt/ Proteína quinase B) é estimulada pela insulina e exerce várias funções vitais como crescimento, sobrevivência e metabolismo celular. O objetivo do trabalho foi comparar a expressão da Akt/PKB em placentas de pacientes normais e com pré-eclâmpsia estimuladas com insulina. Foram utilizadas amostras de placenta de 12 pacientes normais e de 12 pacientes com PE foram coletadas, estimuladas com insulina e analisadas por Western blot para quantificação da expressão da proteína Akt/PKB basal e fosforilada em serina473. Como resultados, a estimulação das amostras com a insulina foi comprovada quando comparamos grupos estimulados (1,14 ± 0,10) e não estimulados (0,91 ± 0,08), P< 0,001. A atividade da via da Akt/PKB fosforilada em serina473 foi semelhante entre placentas de mulheres normais (1,26 ± 0,16) e com PE (1,01 ± 0,11), P = 0,237. Concluímos que não há diferença de fosforilação na via da Akt/PKB, após estimulação com insulina, em placentas de pacientes com PE e normais. Contudo, não podemos descartar alterações desta via de sinalização na PE sem analisarmos os substratos da Akt/PKB quando estimulados. / Preeclampsia (PE) is an important cause of fetal and maternal mortality around the world and there are evidences that insulin resistance has been implicated in the pathophysiology of preeclampsia. Akt/PKB pathway is stimulated by insulin and performs several vital functions as growth, survival and cellular metabolism. Objective: to investigate stimulates expression of Akt/PKB pathway in the placenta, of normal and preeclampsia parturient. Method: samples were collected from 12 normal patients and 12 PE patients, stimulate and analyzed by Western blot to quantify the proteins expression in signaling of Akt/PKB. Results: stimulation of insulin samples was confirmed when comparing stimulated groups (1.14 ± 0.10) and non-stimulated (0.91 ± 0.08), P <0.001. The Akt/PKB phosphor (Ser473) was not different in placenta of the normal (1.26 ± 0.16) and PE (1.01 ± 0.11) groups, with P = 0.237. Conclusions: there was no difference of phosphorylation in Akt/PKB pathway, after stimulation with insulin, in placentas of normal and PE patients. However, we cannot discard effects in this signaling pathway as pathophysiology of PE, because it is still necessary to analyze the substrates stimulation of this pathway.

Este trabalho foi dividido em duas seções, a primeira teve o objetivo de avaliar a ação da metformina sobre a expressão proteica e gênica dos receptores de insulina (IR) e IGF-1 (IGF-1R), como também proteínas da via de sinalização destes receptores, Akt/PKB, ERK, PI3K e GLUT4, em cultura primária de células estromais endometriais hiperandrogênicas e hiperinsulinêmicas, simulando características da Síndrome dos Ovários Policísticos (SOP). A segunda seção verificou a expressão de semaforina da classe 3 (SEMA3A-F) nas fases do ciclo menstrual e a ação da metformina, em diferentes concentrações, na expressão desta semaforina em cultura primária de células estromais endometriais. No primeiro estudo foram realizadas culturas primárias de células estromais endometriais em diferentes grupos estimulados com estrogênio, progesterona, insulina e androgênios (características da SOP), e tratados com metformina por 10 min, 24 e 48 h. Após 14 dias foram extraídos RNA e proteína para realização das técnicas de qRT-PCR, para avaliar IR e IGF-1R, e Western blot, para avaliar IR, IGF-1R, Akt/PKB, ERK, PI3K e GLUT4. Houve aumento da expressão gênica de IR nos grupos tratados com insulina, e uma potencialização deste efeito quando a metformina foi associada. Enquanto que o androgênio diminuiu a expressão de IGF-1R e a metformina reverteu este efeito. Quanto à expressão proteica, observou-se que a interação da metformina com a insulina aumentou a expressão do IR em relação aos outros grupos. O IGF-1R sofreu efeito principalmente da insulina, que causou o aumento da expressão deste receptor, e a metformina não influenciou em sua expressão. PI3K e GLUT4 apresentaram uma maior expressão nos grupos estimulados com insulina, e ainda maior quando tratados com insulina e metformina. A proteína ERK não sofreu influência da metformina, enquanto a fosforilação da Akt/PKB foi diminuída significativamente pela ação da metformina. No segundo estudo foram coletadas biópsias endometriais nas fases proliferativa e secretória do ciclo menstrual e por qRT-PCR e ELISA foi quantificada a expressão de SEMA3A-F comparando estas fases do ciclo menstrual. Também em culturas primárias de células estromais endometriais foi observado o efeito da metformina, em diferentes concentrações, sobre a expressão desta classe de semaforina. Foi observado uma maior expressão das semaforinas 3A, 3C, 3D e 3E na fase proliferativa do ciclo menstrual comparado com a fase secretória. Em cultura de células, altas doses de metformina inibiram a expressão das semaforinas 3A, 3D e 3E. Como conclusão, a metformina tem efeito sobre células estromais endometriais atuando sobre fatores de crescimento e proteínas de suas vias de sinalização, normalmente aumentando sua expressão, quando associada à insulina. A fosforilação da Akt/PKB foi inibida pela metformina possivelmente por sua ação antiproliferativa. A semaforina de classe 3 está relacionada com a proliferação de células endometriais, e a metformina, em altas doses, diminui sua expressão. / This study has two sections, the first aimed to evaluate the effect of metformin on gene and protein expression of insulin receptor (IR) and IGF-1 receptor (IGF-1R), as well as proteins of the pathway signaling of growth factors; Akt/PKB, ERK, PI3K and Glut4 in primary cultures hyperinsulinemic and hyperandrogenism of endometrial stromal cells, simulating polycystic ovary syndrome (PCOS). The second section to evaluate the expression of the class 3 semaphorin (SEMA3A-F) on phases of the menstrual cycle, and the effect of metformin on expression of this semaphorin in endometrial stromal cells. Method: At first, primary cultures of endometrial stromal cells were performed in different groups stimulated with estrogen, progesterone, insulin and androgens (PCOS characteristics) and metformin for 10 minutes, 24 and 48 hours. After 14 days were extracted RNA and protein for qRT-PCR to evaluate IR and IGF-1R, and Western blot to assess IR, IGF-1R, Akt/PKB, ERK, PI3K, and Glut4. In the second, were collected endometrial biopsies in proliferative and secretory phases of the cycle, and by qRT-PCR and ELISA observed the expression of SEMA3A-F comparing these phases of the menstrual cycle. Also in primary cultures of endometrial stromal cells was observed effects of metformin on the expression of semaphorin class. Results: In the first section, the gene expression of IR showed an increase in the groups treated with insulin, and a more effect when metformin was associated, whereas androgen decreased expression of IGF-1R and metformin reversed this state. Regarding protein expression, it was observed that the interaction of metformin with insulin increased the expression of IR; and of IGF-1R, insulin affected mainly by increasing expression of this receptor, and metformin did not affect expression. Glut4 and PI3K showed higher expression in insulin-stimulated groups, and even greater when treated with insulin and metformin. The protein ERK was not affected by metformin, while the phosphorylation of Akt/PKB was significantly decreased by metformin action. In the second section, we observed a higher expression of semaphorin 3A, 3C, 3D and 3E in the proliferative phase of the menstrual cycle compared with the secretory phase. In cell culture, high doses of metformin inhibited the expression of semaphorin 3A, 3D, and 3E. Conclusions: Metformin has an effect on endometrial stromal cell acting on growth factors and their proteins signaling pathways, usually increasing expressions when combined with insulin. Phosphorylation of Akt/PKB was inhibited by metformin possibly for its antiproliferative action. The semaphorin class 3 is related to the proliferation of endometrial cells, and metformin (high doses), decreases its expression.

A mutação recorrente JAK2V617F é a lesão molecular com maior impacto na fisiopatologia das neoplasias mieloproliferativas (NMP) BCR ABL1 negativas. A ausência de resposta clínica completa ao inibidor seletivo de JAK1/2, ruxolitinibe, indica a necessidade de novas abordagens terapêuticas. Dados recentes sugerem que IGF1R/IRS representa um potencial alvo de inibição para o tratamento das NMP: (i) o substrato do receptor de insulina 2 (IRS2) coopera com JAK2V617F na transformação maligna em NMP; (ii) a desregulação da via de sinalização de IGF1R induz NMP. O composto NT157 foi desenvolvido para inibir IRS1/2 e apresentou efeitos antineoplásicos em neoplasias sólidas. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos celulares e moleculares do tratamento com o inibidor de IRS1/2, NT157, isolado e em combinação com ruxolitinibe, em NMP JAK2V617F. Células HEL e SET2 JAK2V617F foram tratadas com veículo, NT157 e/ou ruxolitinibe e submetidas à avaliação da viabilidade celular, apoptose, proliferação, clonogenicidade, ciclo celular, expressão gênica e/ou expressão/ativação proteica. Células primárias de pacientes com policitemia vera foram submetidos a tratamento com NT157 e avaliação de formação espontânea de colônias eritroides. O efeito do NT157 in vivo foi avaliado utilizando modelo de xenotransplante de células HEL em camundongos NSG. A análise estatística foi realizada através do teste ANOVA ou t de Student. Em células HEL e/ou SET2 JAK2V617F, o tratamento com NT157 promoveu redução da viabilidade, clonogenicidade e proliferação celular, aumentou a apoptose e resultou em parada do ciclo celular em G2/M (p?0,05). Exposição ao NT157 resultou em inibição da fosforilação de STAT3, STAT5 e ERK e na modulação da expressão de 23 oncogenes (CCND1, MYB e WT1) e genes supressores tumorais (CDKN1A, JUN e FOS) em células HEL (p?0,05). O tratamento combinado com ruxolitinibe não apresentou efeito potencializador, sendo que a redução da viabilidade nas condições de combinação corresponde ao efeito das monoterapias nas linhagens celulares avaliadas. Em células primárias de pacientes com policitemia vera (n=3), NT157 reduziu a formação espontânea de colônias eritroides (p?0,05). O tratamento in vivo com veículo ou NT157 na dose de 70mg/kg, 3 vezes por semana, via intraperitoneal, em modelos de xenotransplante com células HEL em camundongos NSG (n=5 para cada grupo) não apresentou efeitos antineoplásicos. Em conclusão, a inibição farmacológica de IRS1/2 apresentou efeitos antineoplásicos significativos em modelos de linhagens celulares e amostras primárias de pacientes com NMP JAK2V617F. A inibição farmacológica combinada de IRS1/2 e JAK1/2 não potencializou o efeito antineoplásico das monoterapias nos processos celulares investigados. Os resultados dos estudos in vivo em modelos de xenotransplante indicam a necessidade de estudos de farmacocinética e farmacodinâmica para o NT157. Os efeitos moleculares identificados permitiram uma melhor compreensão sobre os mecanismos de ação da droga NT157 em NMP. / The recurrent V617F mutation in JAK2 is a major contributor to the pathogenesis of BCR-ABL1 negative myeloproliferative neoplasms (MPN). Absence of complete clinical response to ruxolitinib, a JAK1/2 inhibitor, highlights the need for targeting other signaling pathways that contribute to JAK2. Recent data indicate that IGF1R/IRS is a potential target in MPN: (i) insulin receptor substrate 2 (IRS2) cooperates to malignant transformation induced by JAK2V617F, (ii) IGF1R signaling upregulation induces MNP phenotype. NT157 is a synthetic compound designed as IRS1/2 inhibitor and was able to induce anti-neoplastic effects in solid tumors. We, herein, aimed to characterize the molecular and cellular effects of NT157 treatment, combined or not with ruxolitinib, in MPN JAK2V617F. HEL and SET2 JAK2V617F cells were treated or not with vehicle, NT157 and/or ruxolitinib and submitted to evaluation of cell viability assay, apoptosis, proliferation, clonogenicity, cell cycle, gene expression and protein expression/activation. Primary cells from polycythemia vera (PV) patients (n=3) were exposed to NT157 treatment and evaluated for erythropoietin-independent colony formation. NT157 effects in vivo were evaluated in a xenograft model of leukemogenesis induced by HEL cells in NSG mice. Statistical analysis was performed using ANOVA or Student\'s t test. In MPN cell lines, NT157 treatment significantly decreased cell viability, clonogenicity and cell proliferation, increased apoptosis and cell cycle arrest in G2/M (all p<0.05). NT157 exposure resulted in inhibition of STAT3, STAT5 and ERK phosphorylation. NT157 also modulated the expression of 23 oncogenes (CCND1, MYB and WT1) and suppressor tumor genes (CDKN1A, FOS and JUN) in HEL cells (p?0.05). In both cell lines, the combined treatment, NT157 plus ruxolitinib, did not potentiate the effects of monotherapies. In primary cells from polycythemia vera patients, NT157 exposition reduced spontaneous erythroid colony formation (all p<0.05). In vivo treatment with vehicle or NT157 (70mg/kg intraperitoneal), three times a week, showed no antineoplastic effects in NSG mice transplanted with HEL cells (n = 5 for each group). In summary, the IRS1/2 pharmacological inhibitor NT157 displayed remarkable antineoplastic effects in JAK2V617F cells lines and MPN primary cells. The combined treatment of NT157 plus ruxolitinib did not present potentializing effects when compared to the monotherapy. The results of in vivo treatment using a xenograft model highlight the need for pharmacokinetic and pharmacodynamic studies for the NT157 compound. The molecular effects identified allowed a better understanding about the mechanisms of NT157 action in MPNs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-08Bitstream added on 2014-06-13T19:29:41Z : No. of bitstreams: 1 astolphi_rd_me_araca.pdf: 531931 bytes, checksum: 9f2b534f155b8e3b0dc8038c304644f1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Patologias na cavidade oral podem gerar efeitos deletérios em diversos sistemas do organismo. Nesse sentido, a presença de bactérias nas polpas dentárias pode provocar lesão periapical (LP) e gerar inflamação, culminando na produção de citocinas inflamatórias, como o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) e a interleucina-6 (IL-6), que podem atingir a circulação sistêmica e causar a resistência insulínica (IR) em órgãos responsivos à insulina. A IR é definida como a diminuição da resposta de tecidos periféricos à ação da insulina, e indivíduos com esta característica são predispostos a desenvolver diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Tendo conhecimento de que as citocinas inflamatórias podem gerar alteração no sinal insulínico (SI), tornou-se primordial investigar a possibilidade de um processo inflamatório local, como a LP “per se”, causar IR em indivíduos não diabéticos. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar (02 meses de idade), divididos em dois grupos: ratos com LP induzida em primeiro molar superior direito, empregando-se broca em aço carbono dotada de esfera na extremidade com 0,1 mm de diâmetro e ratos-controle (CN). Após 30 dias de indução, realizaram-se os experimentos: 1) coleta de sangue (n=10) e obtenção de plasma para análise das concentrações de glicose, insulina, colesterol total, colesterol HDL (HDL-C), colesterol LDL (LDL-C), colesterol VLDL (VLDL-C), triglicérides, TNF-α e interleucina-6 (IL-6); 2) teste de tolerância à insulina (ITT) para a avaliação da sensibilidade à insulina (n=10); 3) avaliação do grau de fosforilação em tirosina da pp185 (IRS-1/IRS-2) e dos conteúdos de receptor insulínico beta (Rβ) e de substrato do receptor insulínico-1 (IRS-1) em tecido adiposo branco periepididimal, muscular... / Oral cavity’s pathologies may cause deleterious effects in different body systems. The presence of bacteria in dental pulp may cause periapical lesion (PL) and generate inflammation, culminating in the production of inflammatory cytokines including tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6). These cytokines can reach the systemic circulation and may cause insulin resistance (IR) in insulin-responsive tissues. IR is defined as a decreased response of peripheral tissues to insulin action, and individuals with this metabolic state are predisposed to develop type 2 diabetes mellitus (T2DM). Knowing that the inflammatory cytokines may generate alterations in insulin signal, it becomes essential to investigate the possibility of a local inflammatory process as the PL per se cause insulin resistance in non- diabetic individuals. Therefore, the purpose of this study was to determine whether PL can cause changes in the initial phase of insulin signaling and in insulin sensitivity in non-diabetic rats. For this purpose, Wistar rats (two-month-old) were used in the present study. The animals were divided into two groups: 1) group with induced PL in right first upper molars by using a dental handpiece (spot size 0.1 mm); 2) control group (CN). After 30 days post induction, experiments were carried out: 1) blood collection (n = 10) obtaining plasma for glucose, insulin, total cholesterol, HDL cholesterol (HDL-C), triglycerides, LDL cholesterol (LDL-C), VLDL cholesterol (VLDL-C), TNF-α and IL-6 analyses; 2) insulin tolerance test (ITT) for evaluating insulin sensitivity (n = 10); 3) assessment of pp185 (IRS-1 / IRS-2) tyrosine phosphorylation and insulin receptor-beta (Rβ) and insulin receptor substrate-1 (IRS-1) content in periepididymal... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-26Bitstream added on 2014-06-13T19:50:25Z : No. of bitstreams: 1 colombo_nh_me_araca.pdf: 920779 bytes, checksum: 7d1d402f0e33c8f4819f4d45f75868e1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A doença periodontal é considerada, pela Organização Mundial da Saúde, como a sexta complicação clássica do diabético. O diabetes pode influenciar a prevalência, severidade e progressão da periodontite. A literatura mostra uma associação bidirecional entre periodontite e Diabetes mellitus (DM). DM afeta negativamente a condição periodontal e a periodontite afeta negativamente o controle glicêmico, aumentando, assim, o risco de complicações no paciente diabético. No entanto, ainda não há estudos que demonstrem que um processo inflamatório local, como a doença periodontal “per si”, possa induzir alterações nas etapas iniciais no sinal insulínico em indivíduos não diabéticos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar se a doença periodontal é capaz de causar alteração na etapa inicial do sinal insulínico e na sensibilidade à insulina em ratos não diabéticos. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar (02 meses de idade) e os animais foram divididos em dois grupos: ratos com doença periodontal (DP) induzida por ligadura e ratos-controle (CN). Após 28 dias da colocação da ligadura, realizaram-se os experimentos: 1) coleta de sangue (n=10) e obtenção de plasma para análise das concentrações de glicose, frutosamina, colesterol total, colesterol HDL (HDL-C), triglicérides, TNF-α, IL-6 e resistina; 2) teste de tolerância à insulina (ITT) para a avaliação da sensibilidade à insulina (n=7); 3) avaliação tanto do grau de fosforilação em tirosina da pp185 (IRS-1/IRS-2) e em serina do IRS-1 como dos conteúdos de IRβ e de IRS-1 em tecidos adiposo branco periepididimal, muscular esquelético e hepático. A partir dos resultados pode-se observar que os ratos com DP apresentaram: 1) redução na sensibilidade à insulina (p<0.05); 2) nenhuma alteração nas... / Periodontal disease (PD) is considered by the World Health Organization as the sixth classic complication of diabetes. Diabetes may influence the prevalence, severity and progression of periodontitis. The literature shows a bidirectional association between periodontitis and Diabetes mellitus (DM). DM negatively affects periodontal status and periodontal disease, in addition to adversely affecting glycemic control, increasing the risk of complications in diabetic patients. However, there are no studies showing that local inflammatory events, such as periodontal disease, “per si”, can induce changes in early steps of insulin signaling in non-diabetic individuals. Therefore, the purpose of this study was to determine whether periodontal disease can cause changes in the initial phase of insulin signaling and in insulin sensitivity in non-diabetic rats. For this purpose, Wistar rats (two-month-old) were used in the present study. The animals were divided into two groups: 1) group with ligature-induced periodontal disease (PD); 2) control group (CN). Twenty eight days after ligature placement, experiments were carried out: 1) blood collection (n = 10) obtaining plasma for glucose, fructosamine, total cholesterol, HDL cholesterol (HDL-C), triglycerides, TNF-α, IL-6 and resistin analyses; 2) insulin tolerance test (ITT) for evaluating insulin sensitivity (n = 7); 3) assessment of both pp185 (IRS-1 / IRS-2) tyrosine phosphorylation and IRS-1 serine phosphorylation status, and IRβ and IRS-1 content in periepididymal white adipose tissue, skeletal muscle and liver. Observation of results in rats with DP showed: 1) reduction in insulin sensitivity (p <0.05); 2) no change in glucose, fructosamine, total cholesterol, HDL-C and triglycerides... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Doris Hissako Sumida / Banca: Maria Aparecida Visconti / Banca: Sandra Lia do Amaral / Resumo: Estudos têm demonstrado que existe uma correlação entre diabetes mellitus (DM) e doença periodontal (DP) de tal maneira que pessoas com DM apresentam uma maior prevalência e severidade da doença periodontal, quando comparadas com pessoas saudáveis. Ademais, verifica-se também que entre pessoas com DP, há uma maior incidência de diabetes. Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram que a DP induz alteração no sinal insulínico e resistência à insulina. Vários estudos evidenciaram que o exercício físico promove melhora na sensibilidade à insulina. Sabendo-se que a DP reduz a sensibilidade insulínica e o sinal insulínico, este trabalho procurou averiguar se o exercício físico consegue reverter ou melhorar esse quadro em ratos com DP. Portanto, foram avaliados em ratos com DP, submetidos ou não ao exercício: 1) sensibilidade à insulina; 2) glicemia, insulinemia; 3) concentração plasmática de TNF-α e IL-6; 4) colesterolemia e trigliceridemia; e 5) grau de fosforilação em tirosina e serina do substrato do receptor de insulina pp185 (IRS-1/IRS-2). Para tanto, 80 ratos Wistar (2 meses de idade) foram distribuídos em quatro grupos: 1) grupo controle sedentário sem DP (CNS); 2) grupo controle exercitado sem DP (CNEx); 3) grupo sedentário com DP (DPS); 4) grupo exercitado com doença periodontal (DPEx). Nos grupos com DP, esta doença foi induzida por meio da ligadura com fio de seda ao redor do 1º molar inferior. Após a colocação da ligadura foram avaliadas, três vezes por semana, a ingestão de ração e, uma vez por semana, o peso corporal dos ratos. No vigésimo oitavo dia após a indução da doença foi iniciado o treinamento resistido. Após 12 semanas de treinamento físico, os experimentos foram realizados. A análise estatística foi realizada pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste... / Abstract: Studies have shown that there is a correlation between Diabetes Mellitus (DM) and Periodontal Disease (PD) in a way that people with DM present higher prevalence and severity of PD, when compared with healthy people. It is also observed that among people with PD there is an increased prevalence of Diabetes. Previous studies in our laboratory showed that PD induces alterations in insulin signaling and insulin resistence. Several studies showed that exercise can promote improvements in insulin sensitivity. Knowing that DP reduces insulin sensitivity and signaling, this study investigated if physical exercise can revert or improve this condition in rats with PD. Therefore, it was assessed in rats with PD submitted or not to exercise: 1) insulin sensitivity; 2) glycemia, insulinemia; 3) TNF-α and IL-6 plasma levels; 4) cholesterolemia and triglyceridemia; 5) insulin receptor substrate pp185 (IRS-1/IRS-2) tyrosine and serine phosphorylation status. Therefore, 80 male Wistar rats (two-month-old) were distributed into four groups: 1) sedentary control group without PD (CNS); 2) exercised control group without PD (CNEx); 3) sedentary group with PD (DPS); 4) exercised group with PD (DPEx). In those groups with PD, the disease was induced by ligating silk thread on the lower first molars. After that, it was assessed food ingestion (three times a week) and body weight (once a week) of rats in all groups. In the 28th day after the disease induction, the resistance training began. After 12 weeks of training, the experiments were performed. Statistical analysis was performed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey's test. Significance value adopted was of 5%. No significant difference was observed in glycemia of the studied groups. DPS had higher insulin levels when compared to CNS, CNEx and DPEX. DPS showed increased insulin... / Mestre

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T19:03:52Z : No. of bitstreams: 1 000736961.pdf: 1111199 bytes, checksum: 66817919e317b4e4627df34fe48a7d25 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nos últimos anos, tem havido uma redução acentuada nos índices de cárie dentária em diversas regiões do mundo, fato que tem sido atribuído ao uso de produtos fluoretados, como o dentifrício. Simultaneamente, nota-se a ocorrência do aumento da prevalência de fluorose dentária. O NaF ocasiona inibição da glicólise, diminuição da secreção de insulina e hiperglicemia. Muitas destas respostas sugerem que o NaF pode ocasionar resistência à insulina. Sabendo-se que o fluoreto pode alterar o metabolismo de carboidratos, tornou-se fundamental caracterizar o efeito do NaF sobre: 1) o grau de fosforilação em serina do IRS-1, em tecidos responsivos à insulina; 2) concentração plasmática de colesterol, triglicérides e TNF-α. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar (1 mês de idade) castrados. Após 30 dias da castração, os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: 1) grupo controle (CN), o qual foi submetido ao tratamento sem NaF, mas com uma solução de NaCl (9,54 mg/kg p.c.) que contém a mesma quantidade de sódio em relação à do grupo fluoreto de sódio; 2) grupo NaF (FN) que foi submetido ao tratamento com NaF (4,0 mg de flúor/kg p.c.) na água de beber e na ração durante 42 dias. Após 6 semanas, foi realizada a avaliação da concentração plasmática de TNF-α e a quantificação do grau de fosforilação em serina de IRS-1, após estímulo insulínico, em tecido muscular gastrocnêmio (G), tecido hepático (TH) e em tecido adiposo branco periepididimal (TAB). Também foi realizada a avaliação da concentração plasmática de colesterol e triglicérides. O tratamento crônico com NaF promoveu: 1) aumento significativo, após estímulo insulínico, no grau de fosforilação em serina do substrato do receptor de insulina (IRS-1) no tecido adiposo branco; 2) nenhuma alteração, após estímulo... / Over the last years, there has been a significant reduction in the incidence of dental caries in several regions of the world. This has been attributed to the use of fluoridated products, such as toothpaste. Simultaneously, there has been an increase in the prevalence of dental fluorosis. NaF causes glycolysis inhibition, decrease on insulin secretion and hyperglycemia. These responses suggest that NaF can cause insulin resistance. Knowing that F can interfere with carbohydrate metabolism, we felt it was important and fundamental to undertake a study to examine the chronic effect of NaF on: 1) IRS-1 serine phosphorylation in insulin responsive tissues; 2) plasmatic concentration of cholesterol, triglycerides and TNF alpha. For this study, castrated Wistar male rats (1 month of age) were used. Thirty days after castration, the animals were randomly divided in two groups: 1) control group (CN) which was subjected to treatment without NaF, but with a solution of NaCl (9.54 mg / kg bw) which contains the same amount of sodium in relation to the group NaF; 2) group NaF (FN) that was submitted to treatment with NaF administered in the drinking water and F contained in food pellets (F total inferred: 4.0 mg F / Kg bw / day in the form of NaF) during 42 days. After 6 weeks, the evaluation of plasmatic concentration of TNF-α and quantification of IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in muscle, liver and white adipose tissue were performed. The plasmatic concentration of cholesterol and triglycerides also were evaluated. The chronic treatment with NaF promoted: 1) increase in the IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in the white adipose tissue; 2) no alteration in the IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in the liver and muscle; 3) increase in the plasmatic concentration of TNF-α, triglycerides, total cholesterol and ...

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-05. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:03Z : No. of bitstreams: 1 000831093_20150805.pdf: 165136 bytes, checksum: a51627932f24f3910e3e0f3c8281d7d3 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-07T12:19:58Z: 000831093_20150805.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-07T12:21:00Z : No. of bitstreams: 1 000831093.pdf: 661711 bytes, checksum: 804313b94cb9577c88cfb4e46b0602cf (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos têm demonstrado que existe uma correlação entre diabetes mellitus (DM) e doença periodontal (DP) de tal maneira que pessoas com DM apresentam uma maior prevalência e severidade da doença periodontal, quando comparadas com pessoas saudáveis. Ademais, verifica-se também que entre pessoas com DP, há uma maior incidência de diabetes. Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram que a DP induz alteração no sinal insulínico e resistência à insulina. Vários estudos evidenciaram que o exercício físico promove melhora na sensibilidade à insulina. Sabendo-se que a DP reduz a sensibilidade insulínica e o sinal insulínico, este trabalho procurou averiguar se o exercício físico consegue reverter ou melhorar esse quadro em ratos com DP. Portanto, foram avaliados em ratos com DP, submetidos ou não ao exercício: 1) sensibilidade à insulina; 2) glicemia, insulinemia; 3) concentração plasmática de TNF-α e IL-6; 4) colesterolemia e trigliceridemia; e 5) grau de fosforilação em tirosina e serina do substrato do receptor de insulina pp185 (IRS-1/IRS-2). Para tanto, 80 ratos Wistar (2 meses de idade) foram distribuídos em quatro grupos: 1) grupo controle sedentário sem DP (CNS); 2) grupo controle exercitado sem DP (CNEx); 3) grupo sedentário com DP (DPS); 4) grupo exercitado com doença periodontal (DPEx). Nos grupos com DP, esta doença foi induzida por meio da ligadura com fio de seda ao redor do 1º molar inferior. Após a colocação da ligadura foram avaliadas, três vezes por semana, a ingestão de ração e, uma vez por semana, o peso corporal dos ratos. No vigésimo oitavo dia após a indução da doença foi iniciado o treinamento resistido. Após 12 semanas de treinamento físico, os experimentos foram realizados. A análise estatística foi realizada pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste... / Studies have shown that there is a correlation between Diabetes Mellitus (DM) and Periodontal Disease (PD) in a way that people with DM present higher prevalence and severity of PD, when compared with healthy people. It is also observed that among people with PD there is an increased prevalence of Diabetes. Previous studies in our laboratory showed that PD induces alterations in insulin signaling and insulin resistence. Several studies showed that exercise can promote improvements in insulin sensitivity. Knowing that DP reduces insulin sensitivity and signaling, this study investigated if physical exercise can revert or improve this condition in rats with PD. Therefore, it was assessed in rats with PD submitted or not to exercise: 1) insulin sensitivity; 2) glycemia, insulinemia; 3) TNF-α and IL-6 plasma levels; 4) cholesterolemia and triglyceridemia; 5) insulin receptor substrate pp185 (IRS-1/IRS-2) tyrosine and serine phosphorylation status. Therefore, 80 male Wistar rats (two-month-old) were distributed into four groups: 1) sedentary control group without PD (CNS); 2) exercised control group without PD (CNEx); 3) sedentary group with PD (DPS); 4) exercised group with PD (DPEx). In those groups with PD, the disease was induced by ligating silk thread on the lower first molars. After that, it was assessed food ingestion (three times a week) and body weight (once a week) of rats in all groups. In the 28th day after the disease induction, the resistance training began. After 12 weeks of training, the experiments were performed. Statistical analysis was performed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey's test. Significance value adopted was of 5%. No significant difference was observed in glycemia of the studied groups. DPS had higher insulin levels when compared to CNS, CNEx and DPEX. DPS showed increased insulin... / FAPESP: 12/03688-0

Orientador: Doris Hissako Sumida / Banca: Suzely Adas Saliba Moimaz / Banca: Antonio Carlos Pereira / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: Cristina Berger Fadel / Resumo: Nos últimos anos, tem havido uma redução acentuada nos índices de cárie dentária em diversas regiões do mundo, fato que tem sido atribuído ao uso de produtos fluoretados, como o dentifrício. Simultaneamente, nota-se a ocorrência do aumento da prevalência de fluorose dentária. O NaF ocasiona inibição da glicólise, diminuição da secreção de insulina e hiperglicemia. Muitas destas respostas sugerem que o NaF pode ocasionar resistência à insulina. Sabendo-se que o fluoreto pode alterar o metabolismo de carboidratos, tornou-se fundamental caracterizar o efeito do NaF sobre: 1) o grau de fosforilação em serina do IRS-1, em tecidos responsivos à insulina; 2) concentração plasmática de colesterol, triglicérides e TNF-α. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar (1 mês de idade) castrados. Após 30 dias da castração, os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: 1) grupo controle (CN), o qual foi submetido ao tratamento sem NaF, mas com uma solução de NaCl (9,54 mg/kg p.c.) que contém a mesma quantidade de sódio em relação à do grupo fluoreto de sódio; 2) grupo NaF (FN) que foi submetido ao tratamento com NaF (4,0 mg de flúor/kg p.c.) na água de beber e na ração durante 42 dias. Após 6 semanas, foi realizada a avaliação da concentração plasmática de TNF-α e a quantificação do grau de fosforilação em serina de IRS-1, após estímulo insulínico, em tecido muscular gastrocnêmio (G), tecido hepático (TH) e em tecido adiposo branco periepididimal (TAB). Também foi realizada a avaliação da concentração plasmática de colesterol e triglicérides. O tratamento crônico com NaF promoveu: 1) aumento significativo, após estímulo insulínico, no grau de fosforilação em serina do substrato do receptor de insulina (IRS-1) no tecido adiposo branco; 2) nenhuma alteração, após estímulo ... / Abstract: Over the last years, there has been a significant reduction in the incidence of dental caries in several regions of the world. This has been attributed to the use of fluoridated products, such as toothpaste. Simultaneously, there has been an increase in the prevalence of dental fluorosis. NaF causes glycolysis inhibition, decrease on insulin secretion and hyperglycemia. These responses suggest that NaF can cause insulin resistance. Knowing that F can interfere with carbohydrate metabolism, we felt it was important and fundamental to undertake a study to examine the chronic effect of NaF on: 1) IRS-1 serine phosphorylation in insulin responsive tissues; 2) plasmatic concentration of cholesterol, triglycerides and TNF alpha. For this study, castrated Wistar male rats (1 month of age) were used. Thirty days after castration, the animals were randomly divided in two groups: 1) control group (CN) which was subjected to treatment without NaF, but with a solution of NaCl (9.54 mg / kg bw) which contains the same amount of sodium in relation to the group NaF; 2) group NaF (FN) that was submitted to treatment with NaF administered in the drinking water and F contained in food pellets (F total inferred: 4.0 mg F / Kg bw / day in the form of NaF) during 42 days. After 6 weeks, the evaluation of plasmatic concentration of TNF-α and quantification of IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in muscle, liver and white adipose tissue were performed. The plasmatic concentration of cholesterol and triglycerides also were evaluated. The chronic treatment with NaF promoted: 1) increase in the IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in the white adipose tissue; 2) no alteration in the IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulus in the liver and muscle; 3) increase in the plasmatic concentration of TNF-α, triglycerides, total cholesterol and ... / Doutor