O sistema renina-angiotensina (SRA) circulante é um sistema endócrino que promove a produção de angiotensina (Ang) II, a qual exerce seus efeitos pela interação com receptores específicos. O conceito clássico do SRA circulante está sendo modificado, pois tem sido demonstrada a existência de sistemas locais capazes de gerar angiotensinas de forma independente do SRA circulante em vários tecidos e órgãos. Trabalhos recentes sugerem a existência de alguns componentes do SRA em tecido gengival e fibroblastos gengivais de diferentes espécies. Porém, não são encontrados na literatura achados inequívocos sobre a presença de importantes componentes do SRA, tais como renina e angiotensinogênio, no tecido gengival de rato. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram: 1) estudar a expressão e localização de componentes do SRA no tecido gengival de rato e 2) estudar in vitro a funcionalidade do SRA local em homogenato de tecido gengival de rato quanto à formação de Ang II e outros peptídeos vasoativos a partir de precursores de Ang II. Transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RTPCR) foi utilizada para avaliar a expressão de RNAm. Análise imunohistoquímica foi utilizada para detecção e localização de renina no tecido gengival de rato. Um método fluorimétrico padronizado com o tripeptídeo Hipuril-Histidina-Leucina (Hip-His-Leu) foi usado para medir a atividade da ECA em homogenatos de tecido gengival de rato. A técnica de cromatografia líqüida de alto desempenho (HPLC) foi usada para analisar os produtos formados após a incubação de homogenatos de tecido gengival de rato com Ang I ou tetradecapeptídeo substrato de renina (TDP). RT-PCR revelou a expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio, ECA e receptores de Ang II (AT1a, AT1b e AT2) em tecido gengival; em fibroblastos cultivados de tecido gengival foi observada expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio e receptor AT1a. A técnica de imunohistoquímica demonstrou a existência de renina em vasos de tecido gengival de rato. Atividade da ECA foi detectada por meio do ensaio fluorimétrico (4,95±0,89 nmol His-Leu/g.min). Quando Ang I foi usada como substrato, análises de HPLC mostraram a formação de Ang 1-9 (0,576±0,128 nmol/mg.min), Ang II (0,066±0,008 nmol/mg.min) e Ang 1-7 (0,111±0,017 nmol/mg.min), enquanto que os mesmos peptídeos (0,139±0,031; 0,206±0,046 e 0,039±0,007 nmol/mg.min, respectivamente) e Ang I (0,973±0,139 nmol/mg.min) foram formados quando TDP foi usado como substrato. Adicionalmente, análises de HPLC revelaram a ausência de enzimas que degradam Ang II em homogenatos de tecido gengival de rato. Em conclusão, os resultados apresentados neste trabalho mostram claramente a existência de um SRA local em tecido gengival de rato, que é capaz de gerar Ang II e outros peptídeos vasoativos in vitro. Estudos adicionais são necessários para elucidar o papel deste sistema local no tecido gengival de rato. / Systemic renin-angiotensin system (RAS) promotes the plasmatic production of angiotensin (Ang) II, which acts through the interaction with specific receptors. The concept of this classic circulating RAS has been modified since there is growing evidence that local systems in various tissues and organs are capable of generating angiotensins independently of the circulating RAS. Recent works suggest the existence of some RAS components in the gingival tissue and cultured gingival fibroblasts of different species, but there is paucity of data in the literature regarding the unequivocal existence of crucial RAS components, such as renin and angiotensinogen, in the rat gingival tissue. Therefore, the aims of the present work were to: 1) study the expression and localization of RAS components in the rat gingival tissue and 2) evaluate the in vitro production of Ang II and other peptides catalyzed by rat gingival tissue homogenates incubated with different precursors of Ang II. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to assess mRNA expression. Immunohistochemical (IHC) analysis aimed to detect and localize renin in the rat gingival tissue. A standardized fluorimetric method with the tripeptide Hippuryl-Histidyl-Leucine (Hip-His-Leu) was used to measure tissue ACE activity in rat gingival tissue homogenates. High performance liquid chromatography (HLPC) was used to analyze the products formed after the incubation of rat gingival tissue homogenates with Ang I or tetradecapeptide renin substrate (TDP). RT-PCR revealed the mRNA expression for renin, angiotensinogen, ACE and Ang II receptors (AT1a, AT1b and AT2) in the rat gingival tissue; cultured gingival fibroblasts expressed renin, angiotensinogen and AT1a receptor. IHC demonstrated the existence of renin in vessels of the rat gingival tissue. ACE activity was detected by the fluorimetric assay (4.95±0.89 nmol His-Leu/g.min). When Ang I was used as the substrate, HPLC analyses showed the formation of Ang 1-9 (0.576±0.128 nmol/mg.min), Ang II (0.066±0.008 nmol/mg.min) and Ang 1-7 (0.111±0.017 nmol/mg.min) whereas these same peptides (0.139±0.031; 0.206±0.046 and 0.039±0.007 nmol/mg.min, respectively) and Ang I (0.973±0.139 nmol/mg.min) were formed when TDP was the substrate. Additionally, HPLC revealed absence of Ang II degrading enzymes in rat gingival tissue homogenates. In conclusion, the results presented here clearly show the existence of a local RAS in the rat gingival tissue, which is capable of generating Ang II and other vasoactive peptides in vitro. Further studies are required to elucidate the role of this system in the rat gingival tissue.

A prevalência da obesidade tem aumentado em todo mundo, afetando também mulheres em idade reprodutiva. Estudos têm demonstrado que o acúmulo excessivo de tecido adiposo resulta em prejuízos à reprodução feminina. O mecanismo pelo qual a obesidade diminui a fertilidade não está totalmente estabelecido. Atualmente, são propostas a condição inflamatória e a indução de estresse oxidativo como potenciais mecanismos de ação para as patologias relacionadas à obesidade. Adicionalmente, a angiotensina II (Ang II) é mais um fator que tem sido relacionado com alterações associadas à obesidade, e os efeitos deste peptídeo incluem ações pró-inflamatórias e pró-oxidativas. O presente estudo analizou o efeito da obesidade na ovulação e no metabolismo oxidativo ovariano, e a participação da Ang II como um possível modulador da formação de espécies reativas de oxigênio em ovários de ratas obesas e seus efeitos na ovulação. Foram utilizadas ratas submetidas a uma dieta hipercalórica composta por alimentos palatáveis, conhecida como dieta de cafeteria, a partir do desmame até a idade adulta, por um período de 17 semanas. Os animais foram divididos em grupos: CTL (controle), CTL LOS (controle + losartan), CAF (cafeteria) e CAF LOS (cafeteria + losartan). Avaliamos o consumo de alimentos e líquidos, o peso corporal, o peso da gordura abdominal e retroperitonial, a concentração de insulina plasmática, o número de oócitos, as atividades das enzimas antioxidantes (superóxido dismutase e catalase), concentração de peróxido de hidrogênio (H2O2) e parâmetros de dano oxidativo (lipoperoxidação e oxidação de proteínas). As fêmeas obesas do grupo CAF apresentaram maior consumo de energia e reduzido consumo de água e ração padrão, hiperinsulinemia, aumento das gorduras abdominal e retroperitonial, e aumento de peso corporal. A obesidade não reduziu significativamente a ovulação, mas aumentou a atividade das enzimas antioxidantes e a concentração de H2O2 no ovário. A administração do losartan, em ratas alimentadas com a dieta de cafeteria, reduziu a ingestão energética total, a concentração plasmática de insulina e o ganho de gordura abdominal, mas não evitou o desenvolvimento da obesidade. O losartan inibiu a atividade da enzima antioxidante superóxido dismutase no ovário das ratas obesas do grupo CAF, porém não alterou a atividade da enzima antioxidante catalase. Os resultados deste estudo demonstram que a obesidade resulta em alterações no metabolismo e sugerem a participação da Ang II na formação de espécies reativas de oxigênio no ovário. / The prevalence of obesity has increased worldwide, also affecting women of reproductive age. Studies have shown that excessive accumulation of adipose tissue results in impaired female reproduction. The mechanism by which obesity reduces fertility is not fully established. Currently, proposals are the inflammatory condition and the induction of oxidative stress as a potential mechanism of action for diseases related to obesity. Additionally, angiotensin II (Ang II) is another factor that has been related to changes associated with obesity, and the effects of this peptide include pro-inflammatory and pro-oxidative actions. The present study considers the effect of obesity on ovulation and ovarian oxidative metabolism, and the participation of Ang II as a possible modulator of the formation of reactive oxygen species in ovaries of obese rats and their effects on ovulation. Female rats fed a diet consisting of high calorie foods palatable, known as cafeteria diet from weaning to adulthood, for a period of 17 weeks. The animals were divided into groups: Control (CTL) CTL LOS (control + losartan), CAF (cafeteria) and CAF LOS (losartan + cafeteria). We evaluate the consumption of food and fluids, body weight, abdominal and retroperitoneal fat weight, the plasma insulin concentration, the number of oocytes, the activities of antioxidant enzymes (superoxide dismutase and catalase), concentration of hydrogen peroxide (H2O2 ) and parameters of oxidative damage (lipid peroxidation and protein oxidation). The females of the CAF group had higher energy consumption and reduced consumption of water and standard chow, hyperinsulinemia, increased abdominal and retroperitoneal fat, and weight gain. Obesity not significantly reduced ovulation, but increased the activity of antioxidant enzymes and the concentration of H2O2 in the ovary. The administration of losartan in rats fed the cafeteria diet, reduced total energy intake, plasma insulin concentration and abdominal fat gain, but did not prevent the development of obesity. Losartan inhibited the activity of the antioxidant enzyme superoxide dismutase in the ovary of rats CAF group, but did not alter the activity of the catalase antioxidant enzyme. The results of this study demonstrate that the cafeteria diet results in changes in metabolism and suggests the involvement of Ang II in the formation of ROS in the ovary.

O presente estudo avaliou aspectos relacionados ao contexto inflamatório na hipertrofia cardíaca induzida pelos hormônios tiroideanos (HT) e o possível envolvimento do sistema renina-angiotensina (SRA) nesse processo, utilizando análises in vivo e com enfoque maior na abordagem in vitro. Os resultados mostraram algumas alterações em citocinas circulantes e cardíacas de animais tratados com HT. Além disso, as expressões de S100A8 e MyD88 foram aumentadas no coração de ratos submetidos ao hipertiroidismo e em cardiomiócitos em cultura estimulados com HT. S100A8 e MyD88 mediaram a ativação do fator nuclear NF-κB pelos HT, tendo papel crucial para o crescimento hipertrófico de cardiomiócitos tratados com HT. Por fim, a ação dos HT modulando a expressão de S100A8 e NF-κB foi mediada pelo SRA. Estes dados contribuem com o entendimento das bases moleculares da ação dos HT e da relação deste com o SRA na hipertrofia cardíaca. / The present study evaluated inflammation related aspects in cardiac hypertrophy induced by thyroid hormones (TH) and the possible involvement of the renin-angiotensin system (RAS) in this process, by using in vivo and in vitro analysis. The results showed alterations in circulating and cardiac cytokines from TH treated animals. The expression of S100A8 and MyD88 were increased in the heart of hyperthyroid rats and in cultured cardiomyocytes stimulated with TH. S100A8 and MyD88 mediated the nuclear factor NF-κB activation by TH and these factors presented crucial role to the hypertrophic growth of TH-treated cardiomyocytes. Finally, the action of TH on S100A8 and NF-κB expression was mediated by RAS. These data contribute to the knowledge of molecular basis of TH action and the relationship between TH and RAS in cardiac hypertrophy.

A hipótese do estudo é a de que a Angiotensina II (AngII) é capaz de desencadear processos inflamatórios iniciais que compõem parte dos mecanismos envolvidos na lesão vascular ou no seu progresso. Os objetivos foram avaliar a expressão de marcadores iniciais de inflamação em resposta à ação da AngII e por qual receptor (AT1 ou AT2) esta levaria à expressão destes marcadores inflamatórios. O estudo foi realizado em camundongos machos C57Bl/6J submetidos ao tratamento com doses subpressoras de AngII, bloqueadores dos receptores AT1 e AT2 e uma combinação destes. Os tempos de tratamento foram determinados através de uma curva de tempo-resposta feita com injeções de AngII. Após definição da curva temporal foram preparados 6 grupos de animais: controle, tratados AngII, Losartan, AngII+Losartan, PD123319 e AngII+PD123319. Foram feitas avaliações dos marcadores inflamatórios nos corações por imunohistoquímica para citocinas IL-1<font face=\"Symbol\">b e IL-6, TNF<font face=\"Symbol\">a, TGF-<font face=\"Symbol\">b e MCP-1, a molécula de adesão ICAM-1, e foram quantificados a IL-6 e o TNF-<font face=\"Symbol\">a séricos pela técnica ELISA. / The study hypothesis is that the angiotensin II (Ang II) is capable of triggering inflammatory processes that comprise the initial part of the mechanisms involved in vascular injury or in progress. The objectives were to evaluate the expression of early markers of inflammation in response to the action of Ang II and which receptor (AT1 and AT2) this would lead to the expression of these inflammatory markers. The study was conducted in male C57Bl/6J mice undergoing treatment with subpressor doses of AngII, blockers of AT1 and AT2 receptors and a combination thereof. Treatment times were determined using a time-response curve performed with injections of AngII. After definition of time curve were prepared six animal groups: control, treated Ang II, losartan, Ang II + losartan, PD123319 and Ang II + PD123319. Evaluations were made in the hearts of inflammatory markers by immunohistochemistry for IL-1<font face=\"Symbol\">b and IL-6, TNF<font face=\"Symbol\">a, TGF-<font face=\"Symbol\">b and MCP-1, the adhesion TNF-<font face=\"Symbol\">a serum by ELISA.

O presente estudo avaliou o papel do receptor AT1 de Angiotensina II no desenvolvimento da hipertrofia dos cardiomiócitos promovida pelo T3, bem como a participação dos mecanismos intracelulares deflagrados pelo receptor AT1 neste modelo de hipertrofia cardíaca. O silenciamento do receptor AT1 com RNA de interferência preveniu totalmente o desenvolvimento da hipertrofia dos cardiomiócitos induzida pelo T3. Os cardiomiócitos tratados com T3 demonstraram uma rápida ativação da via da Akt/GSK-3/mTOR, a qual foi atenuada ou prevenida pelo silenciamento do receptor AT1. Ainda, a expressão de Angiotensina I/II no lisado celular e a expressão do receptor AT1 foram rapidamente aumentados pelo T3. Esses dados demonstram pela primeira vez que o receptor AT1 é um mediador crítico da hipertrofia dos cardiomiócitos induzida pelo T3, bem como para a ativação da via da Akt, sugerindo que a via Ang I/II-AT1-Akt/GSK-3/mTOR corresponde a um potencial mediador dos efeitos tróficos exercidos pelo T3 nessas células. / The present study investigated the role of Angiotensin type 1 receptor (AT1R) in T3-induced cardiomyocyte hypertrophy, as well as the participation of the intracellular mechanisms mediated by AT1R in this cardiac hypertrophy model. The AT1R silencing using small interfering RNA totally prevented the development of T3-induced cardiomyocyte hypertrophy. The cardiomyocytes treated with T3 demonstrated a rapid activation of Akt/GSK-3/mTOR signaling pathway, which was attenuated or prevented by the AT1R silencing. In addition, local Angiotensin I/II (Ang I/II) levels and the AT1R expression were rapidly increased by T3 treatment. These data demonstrate for the first time that the AT1R is a critical mediator to the T3-induced cardiomyocyte hypertrophy, as well as to the activation of the Akt signaling, suggesting that the Ang I/II-AT1R-Akt/GSK-3/mTOR pathway corresponds to a potential mediator of the trophic effect exerted by T3 in cardiomyocytes.

Introdução: Hipertrofia de ventrículo esquerdo (HVE) detectada pelo ecocardiograma é um preditor independente de morbidade e mortalidade em indivíduos hipertensos e na população em geral. Na população adulta existe uma modesta correlação entre a medida casual da pressão arterial (PA) e HVE . A HVE pode preceder a hipertensão arterial (HA) sustentada. Existem trabalhos que demonstram que indivíduos normotensos e com resposta exagerada da PA ao esforço tem alta probabilidade de desenvolvimento de HA sustentada no futuro, assim como alta prevalência de HVE. Há divergências no que diz respeito a participação do sistema neurohumoral na HVE nesse grupo especifíco de indivíduos, sendo que alguns dados da literatura apontam a hiperatividade simpática como fator desencadeador , no entanto, parece haver uma correlação independente e significativa entre a relação aldosterona/renina e aumento da PA sistólica durante o exercício . Nosso trabalho teve como objetivo avaliar a influência neurohumoral nesses indivíduos comparando drogas que bloqueiam o sistema nervoso simpático (SNS) com drogas que atuam bloqueando o sistema renina angiotensina (SRA). Métodos e Resultados: Durante 12 meses foram avaliados 195 indivíduos normotensos, hiperreatores ao teste de esforço e com HVE que foram submetidos a tratamento com exercício físico supervisionado, rilmenidina 1 mg/dia, atenolol 50 mg/dia, enalapril 10 mg/dia ou losartan 50 mg/dia. Mudanças no índice de massa de ventrículo esquerdo (IMVE) medida através do ecocardiograma foi o desfecho primário. Mudanças na pressão sistólica de repouso e no esforço máximo também foram avaliadas. Enalapril reduziu significativamente o IMVE com relação ao basal (137,0±8,8 para 107,1±9,4 g/m2; n=36) similar ao losartan (136,0±8,7 para 107,7±10,6 g/m2; n=42); P>0,05, porém ambas foram mais eficazes de que exercício físico (136,7±10,1 para 132,8±10,4 g/m2; n=39), rilmenidina (135,7±10,2 para 129,0±9,4 g/m2;n=38) e atenolol (134,0±8,9 para 125,2±9,6 g/m2; n=40); p<0,05. Todos os tratamentos reduziram a pressão arterial sistólica no repouso e esforço máximo quando comparados ao basal, porém a redução da pressão sistólica de repouso foi mais acentuada com atenolol (135±5 para 123±6 mmHg), enalapril (134±5 para 122±7 mmHg) e losartan (133±5 para 123±6 mmHg) do que com exercício físico (132±5 para 128±7 mmHg) e rilmenidina (135±4 para 129±7 mmHg); P<0,05. Não houve diferença significativa na redução da PAS no esforço máximo entre os grupos atenolol (225±5 para 183±10 mmHg), enalapril (225±5 para 182±9 mmHg) e losartan (225±3 para 184±10 mmHg); P>0,05, sendo a redução nesses grupos superior a redução nos grupos exercício físico (225±4 para 193±11mmHg) e rilmenidina (226±6 para 191±12 mmHg); P<0,05. Conclusões: As drogas que bloqueiam o SRA foram mais eficazes na redução da HVE em pacientes hiperreatores de que exercício físico e drogas que bloqueiam o SNS e essa redução foi independente da redução dos níveis de PAS no repouso e esforço máximo / Introduction: Left ventricular hypertrophy (LVH) as detected by echocardiogram is an independent predictor of morbidity and mortality in individuals having high blood pressure and in population in general. In adult population there is a modest correlation between casual measurement of blood pressure (BP) and LVH. LVH may precede sustained arterial hypertension (AH). Some papers demonstrate that normotensive individuals with exaggerated BP response to effort are highly likely to develop sustained AH later, as well as high prevalence of LVH. There are divergences concerning the role neurohumoral system plays in LVH within this specific group of individuals, with some data in literature pointing out to sympathetic hyperactivity as a triggering factor. Nevertheless, there seems to be an independent and significant correlation between the aldosteron/renin ratio and an increase in systolic BP during exercise. Our paper aims at evaluating neurohumoral influence over these individuals by comparing drugs that block the sympathetic nervous system (SNS) to drugs that block the renin angiotensin system (RAS). Methods and Results: Over a period of 12 months, 195 individuals (normotensive, with exaggerated blood pressure response to treadmill exercise test and with LVH) were evaluated. These individuals underwent a treatment with supervised physical training, rilmenidine 1 mg/day, atenolol 50 mg/day, enalpril 10 mg/day or losartan 50 mg/day. Changes in left ventricular mass index (LVMI), measured by means of echocardiogram were the primary endpoint. Changes in systolic pressure at rest and at peak effort were also evaluated. Enalapril significantly brought LVMI down in relation to basal (137.0±8.8 to 107.1±9.4 g/m2 ; n=36) similarly to losartan (136.0±8.7 to 107.7± 10.6 g/m2; n=42); P>0.05. However, both were more efficient than physical training (136.7±10.1 to 132.8± 10.4 g/m2; n=39), rilmenidine (135.7±10.2 to 129.0± 9.4 g/m2;n=38) and atenolol (134.0± 8.9 to 125.2±9.6 g/m2; n=40); p<0.05. All treatments brought down systolic blood pressure (SBP) at rest and at peak effort when compared to basal, but systolic pressure reduction at rest was more pronounced with com atenolol (135±5 to 123±6 mmHg), enalapril (134±5 to 122±7 mmHg) and losartan (133±5 to 123±6 mmHg) than with physical training (132±5 to 128±7 mmHg) and rilmenidine (135±4 to 129±7 mmHg); P<0.05. There was no significant difference in SBP reduction at peak effort in groups with atenolol (225±5 to 183±10 mmHg), enalapril (225±5 to 182±9 mmHg) and losartan (225±3 to 184±10 mmHg); P>0.05. In such groups, reduction was greater than in groups with physical training (225±4 to 193±11mmHg) and rilmenidine (226±6 to 191±12 mmHg); P<0.05. Conclusion: Drugs that block the renin angiotensin system (RAS) were more efficient in bringing LVH down in patients having high blood pressure than physical training and drugs that block the sympathetic nervous system (SNS) and such reduction took place regardless of SBP level reduction at rest and at peak effort

O alto consumo de sódio é o principal fator de risco para o desenvolvimento de doenças cardíacas. A sobrecarga de sal na dieta aumenta o conteúdo de angiotensina II no coração. Muitos estudos tem avaliado o papel da angiotensina II no desenvolvimento da hipertrofia e fibrose cardíaca. A angiotensina II age através de dois receptores: o receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1) e o receptor de angiotensina tipo 2 (AT2). Embora muitos estudos têm elucidado o papel do receptor AT1 e sobrecarga de sal na dieta no desenvolvimento da hipertrofia, os estudos envolvendo o receptor AT2 ainda são controversos. Com o objetivo de entender melhor o papel do AT2 em modelos de sobrecarga de sal na dieta no desenvolvimento da hipertrofia cardíaca, ratos Wistars machos foram alimentados com uma dieta normal ou hipersódica desde o desmame até a décima oitava semana de idade. Ambos os grupos foram subdivididos em dois subgrupos. A partir da sétima semana de idade cada um dos subgrupos recebeu o tratamento com composto 21 (3mg/kg por dia, n=16), um agonista do AT2. Peso corporal, pressão arterial caudal, consumo de ração, ingestão hídrica, volume urinário, hematócrito, massas ventriculares, diâmetro transverso do cardiomiócito, porcentagem de fibrose intersticial, expressão gênica e proteica dos componentes do sistema renina-angiotensina foram avaliados. O C21 preveniu o desenvolvimento da hipertrofia e fibrose cardíaca em ratos alimentados com dieta hipersódica. O C21 preveniu o incremento da pressão arterial dos ratos alimentados com dieta hipersódica / High salt intake is one of the main risk factors for the development of cardiovascular diseases. Dietary salt overload was found to increase cardiac angiotensin II content. Many studies have evaluated the role of angiotensin II on the development of cardiac hypertrophy and fibrosis. Angiotensin II acts through two main receptors: angiotensin II type 1 (AT1) and type 2 (AT2) receptors. Though there are many studies pointing to the effects of the AT1 and high salt diet, the role of AT2 and its effects in dietary salt overload model is still not elucidated. Aiming to better understand the role of AT2 receptor in models of salt overload on cardiac hypertrophy and fibrosis, male Wistar rats were fed normal or high salt diet from weaning up to 18 weeks of age. Both groups were divided into two subgroups. Starting at 7 weeks of age they were treated or not with compound 21 (3mg/kg per day, n=16), an AT2 receptor agonist. Body weight, blood pressure, food intake, water intake, urine volume, plasma and urinary sodium and potassium, cardiomyocyte transverse diameter, percentage of cardiac fibrosis, gene and protein expression of renin, angiotensinogen, angiotensin converting enzyme, AT1 and AT2 were measured. Compound 21 prevented the development of cardiac hypertrophy and fibrosis in rats that received high salt diet. Compound 21 also reduced the increased blood pressure, prevented the lower weight gain in animals fed with high salt diet

Made available in DSpace on 2016-08-17T17:11:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_CELSO HENRIQUE SOUZA COSTA BARROS.pdf: 1419210 bytes, checksum: a1822ff5960d1998e001de7cc8bb7379 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective was to evaluate the effect of inhibition of Angiotensin Converting Enzyme (ACE) with enalapril maleate in follicular development, gene expression of granulosa cells and in vivo production of embryos in cattle. In Experiment 1, we used four Girolando (Bos taurus x Bos indicus) cows to evaluate the potential suppression of cardiocirculatory system and validation of the effective dose of Enalapril Maleate. Was administered 0.2, 0.3, 0.4 and 0.5 mg / kg of enalapril maleate and measured mean arterial pressure (MAP). The best effective dose was 0.4 mg / kg and was used in the experiments 2 and 3. In Experiment 2, we used 20 Nelore (Bos indicus) cows to measure the MAP and ovarian vascular density at 0, 2, 4 7, 10 and 24 hours after Enalapril administration. In Experiment 3, twelve Nelore (Bos indicus) cows were used. These were distributed homogeneously in two treatments: a) Enalapril Group; females subjected to superovulation protocol receiving enalapril maleate (20 mg / 5 ml) from D3 to D7 of protocol and b) Control Group; females subjected to superovulation protocol received placebo (saline 0.9 %) on the same dates and volume. In Experiment 4, follicular fluid and granulosa cells were collected in vivo by ultrasound guided follicular aspiration. Then was performed mRNA extraction and RT-PCR for the expression of enzymes P450 aromatase, angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) and MAS receptor. No effect of enalapril on MAP in animals treated with up to 0.3 mg / kg. Doses of 0.4 and 0.5 significantly decreased MAP in a dose-dependent level (P <0.05). There was no significant effect of enalapril maleate or the harvest time in MAP of Bos indicus cows. Enalapril significantly reduced vascular density ovarian up to 24 hours after administration. No effect of Enalapril on anovulatory follicles and corpora lutea (P> 0.05). The ovulation rate was significantly higher in the Enalapril group (P <0.001). Gene expression was similar between treated and untreated cows. The ACE inhibition through administration of Enalapril Maleate reduced MAP and ovarian vascular density, but not improved follicular growth did not increase the expression of genes associated with follicular development and did not increases in vivo production of embryos in superstimulated cows. / Objetivou-se avaliar o efeito da inibição da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) com Maleato de Enalapril no desenvolvimento folicular, expressão gênica de células da granulosa e produção in vivo de embriões em bovinos. No Experimento 1, utilizou-se quatro fêmeas da raça Girolando (Bos taurus x Bos indicus), para avaliação do potencial efeito supressivo cardiocirculatório e validação da dose efetiva de Maleato de Enalapril. Foram administrados 0,2, 0,3, 0,4 e 0,5 mg/Kg de maleato de enalapril e mensurada a pressão arterial média (PAM). A melhor dose efetiva foi de 0,4mg/ Kg e foi utilizada nos experimentos 2 e 3. No Experimento 2, utilizou-se 20 fêmeas da raça Nelore (Bos indicus) para aferir a PAM e a desnidade vascular ovariana 0, 2, 4, 7, 10 e 24 horas após a administração do Enalapril. No Experimento 3, foram utilizadas 12 fêmeas da raça Nelore (Bos indicus) homogeneamente distribuidas em dois diferentes tratamentos: a) grupo enalapril; fêmeas submetidas ao protocolo de superovulação que receberam solução de maleato de enalapril na concentração de 20 mg/5 mL/via subcutânea, do dia D3 a D7 e o grupo controle, fêmeas submetidas ao protocolo de superovulação, receberam placebo (solução fisiológica 0,9%) nas mesmas datas e volume. No Experimento 4, foi realizada a recuperação in vivo de fluido folicular e células da granulosa através da aspiração folicular, extração de RNAm e RT-PCR para avaliação da expressão da enzima P450 aromatase, enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2) e para o receptor MAS. Não houve efeito do Enalapril sobre a PAM em animais tratados com até 0,3 mg/kg. As doses de 0,4 e 0,5 diminuiram significativamente a PAM em escala dose-dependente (P<0,05). Não houve efeito significativo da administração do Maleato de Enalapril nem do horário de colheita na PAM das fêmeas Nelore estudadas. O Enalapril diminuiu significativamente a densidade vascular ovariana por até 24 horas após a administração. Não houve efeito do Enalapril no número de folículos anovulatórios e número de corpos lúteos no D15 (P>0,05). A taxa de ovulação foi significativamente maior no grupo tratado (P<0,001). A expressão de genes foi similar entre as fêmeas tratadas ou não tratadas. A inibição da ECA por meio da administração do Maleato de Enalapril reduziu a PAM e a densidade vascular ovariana, porém não melhorou o crescimento folicular, não aumentou a expressão de genes associados ao desenvolvimento folicular e não potencializou a produção in vivo de embriões em vacas da raça Nelore (Bos indicus) superestimuladas.

Os experimentos indicam, como já demonstrado em estudos prévios do laboratório, que angiotensina II (Ang II) apresenta efeito estimulatório sobre a cinética de recuperação de pHi em células OKP. Tal estímulo não é acentuado pela super-expressão de AT1aR recombinante, ao contrário do que imaginávamos inicialmente. Acreditamos que, por conta da capacidade de amplificação de sinal característica dos receptores acoplados a proteína G, um aumento de expressão do receptor AT1aR em relação ao nível endógeno seja redundante para o fenômeno biológico estudado. Por outro lado, os resultados para o grupo com super-expressão de ATRAP corroboram nossa hipótese inicial, ao indicar uma atenuação do efeito de Ang II sobre a recuperação de pHi, em comparação aos demais grupos experimentais tratados com Ang II. Considerando que a recuperação de pHi em células OKP reflete essencialmente a atividade de troca Na+/H+ mediada pelo contra-transportador NHE3, podemos concluir que a regulação positiva de NHE3 via AT1aR/AngII é prejudicada pelo aumento de expressão da proteína ATRAP. / The experimental data suggests that, as shown in previous works from our laboratory, angiotensin II (Ang II) raises the pHi recovery rate in OKP cells. This upregulation is not enhanced by recombinant AT1aR overexpression, contrary to our initial hypothesis. We believe that, due to signal amplification mediated by G-protein coupled receptors, any increase in AT1aR would be redundant considering the biological phenomenon of interest. On the other hand, results from the ATRAP overexpression group supports our initial hypothesis, pointing an attenuated effect of Ang II over pHi recovery in relation to the remaining groups treated with Ang II. Considering that pHi recovery in OKP cells primarily reflects the Na+/H+ exchange activity mediated by NHE3 antiporter, we can conclude that NHE3 upregulation mediated by AT1aR/AngII is impaired by an increase in ATRAP protein expression.

O mecanismo mais importante para a homeostase do K+ é o controle da secreção de K+ no néfron distal. O objetivo deste trabalho foi avaliar em animais submetidos à depleção de K+ por sete dias, a expressão de AT1R da ATRAP e algumas vias de sinalização como as WNK1, KS-WNK1 e WNK4. Estes animais apresentaram menor ganho de peso corporal, hipertrofia renal, isostenúria, e redução da FE de Na+ e K+, com aumento de Ang II, sem alterar a aldosterona. Verificamos aumento da expressão de AT1R mais acentuado em lisado celular e o aumento de ATRAP foram iguais nas frações de lisado total, membranas total e apical. Não detectamos variação nos níveis de RNAm dessas proteínas. A depleção de K+ induziu a fosforilação de c-Src, ERK1/2 e p38, bem como aumento dos RNAm de WNK1 e WNK4, e redução do RNAm de KS-WNK1. Considerando nossos resultados, a depleção aumenta a ação da Ang II, provavelmente devido à hiperexpressão de AT1R, sem diminuir a expressão de ATRAP. A hiperexpressão de WNK1 e WNK4, associada à redução da KS-WNK1. / The most important mechanism for the K+ homeostasis on varying the content of this ion in the diet is the control of K+ secretion in the distal nephron. Since angiotensin II (Ang II) is an important modulator of K+ secretion, the aim of this study was to evaluate, in animals subjected to K+ depletion for seven days, the expression level of angiotensin type 1 receptor (AT1R) and the AT1R-associated protein (ATRAP). Moreover, it was intended to evaluate the possible activation of some signaling pathways triggered by Ang II via AT1R. We also looked for evaluate the expression of ion transporters and \'\'with no lysine kinases\'\' (WNKs) WNK1, KS-WNK1 and WNK4 in these animals, since some of the effects of angiotensin II in the distal tubular segments are mediated by these kinases. The animals subjected to K+ depletion have showed lower body weight gain, renal hypertrophy, marked polyuria, isosthenuria, and significant reduction in FE Na+ and K+, and increased plasmatic Ang II levels, without changing the aldosterone levels. We found that the expression of ATRAP and AT1R is increased in all cell fractions analyzed, with the highest rise in the AT1R in total cell lysate and ATRAP increase was not significant in the apical membrane. We did not detect changes in mRNA levels of these proteins, suggesting no changes in the transcription rate. The mRNA levels of Na+/H+ exchanger isoform 3 (NHE3) and Cl-/Formate (CFEX), abundant in proximal tubuleswere not altered as well. Regarding signaling pathways, K+ depletion induced c-Src, ERK1/2 and p38 phosphorylation, as well as a significant increase in WNK1 and WNK4 mRNA , and reduced KS- WNK1 mRNA. Considering our results, K+ depletion increases Ang II action in renal tissue, probably due to the overexpression of AT1R, and that effect is not associated to the decreased expression of ATRAP. However, the total cell lysate AT1R increasing, was greater than that of ATRAP. The overexpression of WNK1 and WNK4 associated with (to) the reduction of KS - WNK1 appears to be important for K+ secretion inhibition in K+-depleted animals. The inhibitory activity of WNK4 on ROMK channels depends on its dephosphorylation, which depends on the activation of c-Src. The activation of c-Src was evidenced by the increase in K+ -depleted animals phosphorylation.