Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2017-05-04T11:01:13Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2954482 bytes, checksum: 5c03e73b2fe91ef8a3242b8c4b1e7773 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T11:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2954482 bytes, checksum: 5c03e73b2fe91ef8a3242b8c4b1e7773 (MD5) Previous issue date: 2016-06-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Over the years, evidence suggests a relationship between angiotensin II and proinflammatory cytokines, such as TNF-α, in the pathogenesis of cardiovascular diseases, including hypertension. Recently, the focus of new studies has been to understand the central mechanisms involved in the maintenance of events that trigger the increase in sympathetic activity in hypertension. The aim of this study was to evaluate the effects of central inhibition of TNF-α on blood pressure, sympathetic tone, baroreflex sensitivity and oxidative stress in RVLM of rats with renovascular hypertension (2K1C). A silver clip (internal diameter = 0.2 mm) was implanted in the right renal artery for hypertension induction (for six weeks). The animals were divided in three groups, Sham, 2K1C and 2K1C + PTX. This last group received central infusion (in the lateral ventricle) of pentoxifylline (30 nmol/uL/h), a TNF-α inhibitor, by osmotic minipumps for 14 days, four weeks after the silver clip implant. The catheters were implanted in the abdominal aorta and caudal venus cava to register the cardiovascular parameters and drug administration, respectively. Phenylephrine (8 μg / kg, i.v.) and sodium nitroprusside (25 μg / kg, i.v.) were administered to evaluate the baroreflex sensitivity, which was also evaluated by the sequence method for spontaneous baroreflex (Cardioseries v.2.4.). An indirect evaluation of autonomic modulation of vascular resistance was performed by spectral analysis of the low-frequency component (LF) of systolic blood pressure (SBP) (Cardioseries v.2.4.), while the vascular sympathetic tone was evaluated by ganglionic blockade with hexamethonium (30 mg/kg, i.v.). For superoxide accumulation measurements in the RVLM, was used the dihydroethidium technique (DHE), expressed by relative fluorescence (arbitrary units). The 2K1C group showed an increase in mean arterial pressure (MAP) compared to the Sham group (171 ± 11 vs. 113 ± 5 mm Hg; n = 8, p <0.05). Hypertensive animals showed a decrease in baroreflex sensitivity in relation to normotensive animals in the analysis by Oxford method (-1.30 ± 0.10 vs. -2.59 ± 0.17 bpm.mmHg−1; n = 8; p < 0.05) and by sequence method (0.58 ± 0.08 vs. 1.48 ± 0.04 ms/mmHg; n = 8; p<0.05). The evaluation of sympathetic vasomotor activity by spectral analysis showed an increase of LF component in 2K1C animals when compared to Sham group (9.16 ± 0.52 vs. .,32 ± 0.38 mmHg2; n = 8; p<0.05). The increase was also observed in animals 2K1C when compared to normotensive in relation to the variation in MAP after blockade with hexamethonium (-60 ± 5 vs. -33 ± 2 ΔmmHg; n = 8; p < 0.05) and superoxide accumulation in RVLM (18 ± 2 vs. 4 ± 1; n = 8; p < 0.05). When compared to 2K1C group that not received infusion of pentoxifylline (n=8), central inhibition of TNF-α for 14 days in animals with renovascular hypertension (n=6) reduces the mean arterial pressure (171 ± 11 vs. 131 ± 2 mmHg; p <0.05) and the superoxide accumulation in RVLM (18 ± 2 vs. 8 ± 1; p < 0.05). Furthermore,animals of 2K1C+PTX group had an improve in baroreflex sensitivity and reduced sympathetic tone when compared to 2K1C group (-34 ± 3 vs. -60 ± 5 ΔmmHg, n=8; p< 0.05). Additionally, spectral analysis of LF (PAS) showed that the central inhibition of TNF-α decreased this component in 2K1C+PTX group when compared to 2K1C (4.90 ± 0.66 vs. 9.16 ± 0.52 mmHg2; p < 0.05). Based on our results, we suggest the involvement of TNF-α in the maintenance of sympathetic vasomotor activity and oxidative stress in RVLM in renovascular hypertension model (2K1C). / Ao longo dos anos, evidências sugerem uma relação entre a angiotensina II e citocinas pró-inflamatórias, como o TNF-α, na patogênese de doenças cardiovasculares, tais como a hipertensão arterial. Recentemente, o foco de novos estudos tem sido compreender os mecanismos centrais envolvidos na manutenção de eventos que desencadeiam o aumento da atividade simpática durante a hipertensão. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da inibição central do TNF-α sobre a pressão arterial, o tônus simpático, a sensibilidade do barorreflexo e o estresse oxidativo no RVLM de ratos com hipertensão renovascular (2R1C). Um clipe de prata (diâmetro interno = 0,2mm) foi implantado na artéria renal direita para indução da hipertensão (por seis semanas). Os animais foram divididos em três grupos, Sham, 2R1C e 2R1C+PTX. Este último grupo recebeu infusão central (no ventrículo lateral) de pentoxifilina (30 nmol/uL/h), um inibidor do TNF-α, por minibombas osmóticas durante 14 dias, quatro semanas após a implantação do clipe de prata. Cateteres foram implantados na aorta abdominal e veia cava caudal de animais de todos os grupos para o registro dos parâmetros cardiovasculares e administração de drogas, respectivamente. Fenilefrina (8 μg/kg, i.v.) e nitroprussiato de sódio (25 μg/kg, i.v.) foram administrados para avaliação da sensibilidade do barorreflexo, o qual também foi avaliado por meio do método de sequências para barorreflexo espontâneo (Cardioseries v.2.4). Uma avaliação indireta da modulação autonômica da resistência vascular foi realizada com análise espectral do componente simpático de baixa frequência (LF) da pressão arterial sistólica (PAS) (CardioSeries v.2.4), enquanto o tônus simpático vascular foi avaliado mediante o bloqueio ganglionar por hexametônio (30 mg/kg, i.v). A medida do acúmulo de superóxido no RVLM dos animais foi feita pela técnica do diidroetídio (DHE), e expressa pela fluorescência relativa (unidades arbitrárias). O grupo 2R1C apresentou aumento na pressão arterial média (PAM) em comparação ao grupo Sham (171 ± 11 vs. 113 ± 5 mmHg; n= 8; p < 0,05). Os animais hipertensos apresentaram diminuição na sensibilidade do barorreflexo em relação aos animais normotensos na análise pelo método de Oxford (-1,30 ± 0,10 vs. -2,59 ± 0,17 bpm.mmHg−1; n = 8; p < 0,05) e pelo método de sequências (0.58 ± 0,08 vs. 1,48 ± 0,04 ms/mmHg; n = 8; p<0,05). Quanto a avaliação da atividade vasomotora simpática por análise espectral, os animais 2R1C apresentaram aumento do componente LF em relação ao grupo Sham (9,16 ± 0,52 vs. 3,32 ± 0,38 mmHg2; n = 8; p<0,05). O aumento também foi observado em animais 2R1C comparados aos normotensos em relação à variação da PAM após bloqueio com hexametônio (-60 ± 5 vs. -33 ± 2 ΔmmHg; n = 8; p < 0,05) e ao acúmulo de superóxido no RVLM (18 ± 2 vs. 4 ± 1; n = 8; p < 0,05). Quando comparado ao grupo 2R1C que não recebeu infusão de pentoxifilina (n=8), a inibição central do TNF-α por 14 dias em animais com hipertensão renovascular (n=6) reduziu a pressão arterial média (171 ± 11 vs. 131 ± 2 mmHg; p <0,05) e o acúmulo de superóxido no RVLM (18 ± 2 vs. 8 ± 1; p < 0,05). Além disso, animais do grupo 2R1C+PTX apresentaram melhora na sensibilidade do barorreflexo e redução do tônus simpático quando comparado ao grupo 2R1C (-34 ± 3 vs. -60 ± 5 ΔmmHg, n=8; p< 0,05). Adicionalmente, a análise espectral do LF (PAS) mostrou que a inibição central do TNF-α reduziu esse componente no grupo 2R1C+PTX em relação ao grupo 2R1C (4,90 ± 0,66 vs. 9,16 ± 0,52 mmHg2; p < 0,05). Baseado em nossos resultados, sugerimos o envolvimento do TNF-α na manutenção da atividade vasomotora simpática e no estresse oxidativo na região do RVLM no modelo de hipertensão renovascular (2R1C).

O endotélio vascular desempenha um papel central no controle do tônus vascular pela liberação de fatores relaxantes derivados do endotélio (EDRFs) e fatores contráteis derivados do endotélio (EDCFs). O óxido nítrico (NO) é um dos mais importantes mediadores da vasodilatação, sua produção é catalisada pelas enzimas NO-sintases (NOS). A eNOS é constitutiva e depende do Ca2+ para ser ativada. A fosfolipase A2 (cPLA2), também é dependente de Ca2+, esta enzima é responsável pela conversão de fosfolipídeos de membrana a ácido araquidônico, o precursor de prostanóides, tais como prostaciclina (PGI2) e tromboxano (TXA2). A disfunção endotelial está relacionada com uma menor biodisponibilidade de NO e maior produção de EDCFs e está presente em várias doenças cardiovasculares, como hipertensão arterial. Embora esta disfunção seja multifatorial, o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) parece contribuir de forma considerável. O aumento na [Ca2+]c está relacionado com o aumento na produção de EROs e liberação de EDCFs. Em nosso estudo, utilizamos o ionóforo de cálcio A23187 para avaliar as alterações na sinalização celular decorrentes da mobilização de cálcio, independente da ativação de receptores, que ocorrem na hipertensão arterial. O objetivo deste trabalho foi estudar as respostas vasculares desencadeadas pelo aumento da [Ca2+]c promovido pelo A23187 em aorta de ratos normotensos (2R) e hipertensos renais (2R-1C). Verificamos que o A23187 induz efeito vasodilatador dependente da produção de NO em aortas de ratos 2R e 2R-1C, pois o relaxamento foi abolido na presença do inibidor da NOS (L-NAME), bem como em aortas sem endotélio. Em aortas de ratos 2R-1C, mas não em aortas de ratos 2R, verificamos a participação da PGI2 no efeito vasodilatador induzido pelo A23187. A produção de PGI2 está aumentada em aortas de ratos 2R-1C em comparação com aortas de ratos 2R, o que indica que esse prostanóide está ativando receptores TP, induzindo contração. O A23187 induziu efeito contrátil de forma independente do endotélio em aorta de ratos 2R. Entretanto, em aortas com endotélio, de ratos 2R-1C o efeito contrátil está prejudicado. O efeito anti-contrátil em aortas de ratos 2R-1C é devido à produção de NO, que está aumentada a ponto de impedir a contração induzida pelo A23187. Verificamos que a contração induzida pelo A23187 é dependente da produção dos prostanóides contráteis, TXA2 e PGI2, que ativam os receptores TP, pois quando utilizamos o inibidor da ciclooxigenase (ibuprofeno) o efeito contrátil foi atenuado. Além disso, quando utilizamos o antagonista dos receptores TP (SQ29548) o efeito foi completamente abolido. O estímulo com A23187 aumentou a produção de TXA2 em aorta de ratos 2R e 2R-1C. Porém, a produção em aorta de ratos 2R-1C foi maior do que aquela observada em aorta de ratos 2R. Observamos que a catalase atenuou a resposta contrátil induzida pelo A23187, demonstrando que o peróxido de hidrogênio modula positivamente a contração induzida pelo A23187. / The vascular endothelium plays a pivotal role in the vascular tone due to the release of relaxing factors (EDRFs) and contractile factors (EDCFs). Nitric oxide (NO) is one of the most important EDRFs involved in the vasodilation and it is produced by the NO-synthases (NOS). eNOS is a constitutive isoform and its activity is dependent of the transient calcium. Besides eNOS, other important enzymes are modulated by Ca2+ such as phospholipase A2 (cPLA2). This enzyme converts membrane phospholipids to araquidonic acid, responsible for the formation of the prostanoids prostaciclin (PGI2) and thromboxane (TXA2). Endothelial dysfunction is related to the decreased NO bioavailability and increased production of EDCFs. It is present in several cardiovascular disorders like hypertension. Endothelial dysfunction is a multifactorial proccess that is also caused by the increased production of reactive oxygen species (ROS). Increased cytosolic calcium concentration ([Ca2+]c) is related to augmented ROS and EDCFs production. In the present study, we have used the calcium ionophore A23187 in order to evaluate the altered cellular signaling caused by [Ca2+]c in a receptor activation-independent way that occurs in hypertension. This work aimed to study the vascular responses stimulated by A23187 in normotensive rat (2K) aorta and in renal hypertensive (2K-1C) rat aorta. We have verified that A23187 induces vasodilator effect dependent on the production of NO in 2K and 2K- 1C rat aortas. The vascular relaxation was abolished by the non-selective NOS inhibitor (L-NAME) and by the endothelium removal. In 2K-1C but not in 2K rat aortas, PGI2 contributes to He vasodilator effect induced by A23187. PGI2 production is greater in 2K-1C than in 2K rat aortas, which suggests that PGI2 activates TP receptors inducing contraction. The contractile effect of A23187 is endotheliumdependent in 2K rat aorta. However, in 2K-1C intact-endothelium aortas, the contractile effect of A23187 is impaired. The anti-contractile effect is due to increased NO production that inhibits the contractile response to A23187. The contractile response induced by A23187 is dependent of the prostanoid production like TXA2 and PGI2 that activate TP receptors because this response is inhibited by the cyclooxygenase inhibitor (ibuprofen). In addition, this effect was abolished by the TP receptor antagonist (SQ29548). TXA2 production was stimulated with A23187 in 2K and 2K-1C rat aorta, which was greater in 2K-1C than in 2K rat aorta. We have also observed that catalase blunted the contractile response induced by A23187. These results suggest that hydrogen peroxide positively modulates A23187-induced contractile response.

A nefropatia isquêmica é caracterizada pela piora da função renal e perda de massa renal decorrente de uma estenose hemodinamicamente significativa. A reversibilidade potencial da injúria renal após intervenção terapêutica é ponto crucial. A intervenção terapêutica tem como objetivo restabelecer um fluxo renal adequado e conseqüentemente melhorar a taxa de filtração glomerular e obter um melhor controle pressórico. Objetivo: avaliar e comparar os marcadores prognósticos tradicionais e novos (quantificação da ecogenicidade renal - relação parênquimo-sinusal (RPS) e histologia renal) na nefropatia isquêmica em pacientes submetidos à angioplastia com ou sem implante de stent. Material e Métodos: foi realizado um estudo prospectivo de casos consecutivos no HC-FMUSP com duração de dois anos e sete meses. A população foi composta de 20 pacientes com diagnóstico de estenose de artéria renal e com creatinina sérica acima 1,5mg/dl, submetida à angioplastia renal com ou sem implante de stent. Coleta de Dados e Procedimentos: realizados antes da intervenção - exames laboratoriais (creatinina sérica e cálculo da depuração de creatinina estimada - Cockcroft-Gault e da depuração de creatinina do rim submetido à angioplastia, proteinúria de 24 horas, hemoglobina, ácido úrico sérico, dosagem de atividade de renina plasmática (ATP) em veias renais e veia cava inferior); exames de imagem e de radioisótopos (ultra-sonografia renal com histograma, Doppler renal, renograma com captopril e arteriografia renal digital); biópsia renal com realização de processamento para microscopia óptica. Após a intervenção os pacientes foram divididos em: grupo 1- melhora da função renal (n=14) e grupo 2 - piora ou estabilização da função renal (n=6). End-points: Depuração de creatinina estimada - Cockcroft- Gault no primeiro mês após à angioplastia. Análise Estatística: os dados foram o submetidos a análise uni variada, com aplicação do teste t de Student ou do teste de Mann-Whitney. O teste exato de Fisher foi utilizado para comparação de proporções. A curva ROC foi realizada para análise do RPS. Resultados: A dosagem de creatinina sérica (p=0,04), a depuração da creatinina no rim submetido à angioplastia (p=0,02), o tamanho renal (p=0,02), o renograma com captopril - teste positivo (0,04) e o RPS (p=0,02) apresentaram diferença significativa entre os grupos. Através da análise da curva ROC para o RPS, o cálculo da área sob a curva ROC foi 0,833 (0.63- 1.0, IC95%). Conclusão: O RPS é um novo teste capaz de prever a evolução da taxa de filtração glomerular após angioplastia com e sem stent na nefropatia isquêmica / The ischemic nephropathy is characterized by the worsening of the renal function and loss of renal mass due to an renal artery stenosis hemodynamically significant. To the potential reversibility of the renal injury after therapeutic intervention is a crucial point and the therapeutic intervention has as objective to reestablish an appropriate renal flow, and consequently improve the glomerular filtration rate and obtain a better pressorical control. Objective: to evaluate and to compare the markers traditional and new prognostics (measure of the renal ecogenicity - relationship sinusal parênquimum (RSP) and renal histology) in the ischemic nephropathy in patients submitted to the therapeutic intervention with success. Material and Methodology: prospective studies of consecutive cases were accomplished in HC-FMUSP in two years and seven months time. The population was composed of 20 patients with diagnosis of renal artery stenosis with plasma creatinine level above 1.5 mg/dl; that had indication of therapeutic intervention - angioplasty with or without stenting. Collection of Data and Procedures: accomplished before the intervention - laboratorial exams (plasma creatinine level and calculation of creatinine clearance by Cockcroft-Gault formula, calculation of creatinine clearance of kidney submitted to the therapeutic intervention, proteinuria of 24 hours, haemoglobin, serum uric acid and renin in renal veins and inferior cava vein), image exams and of radioisotopes (renal ultrasonography with histogram, renal Doppler ultrasonography, captopril-enhanced 99mTc-DTPA renal scintigraphy and digital renal arteriography) and renal biopsy with processing accomplishment for optical microscopy. After the intervention the patients were separate in group 1 - it gets better of the renal function (n=14) and group 2 - it worsens or stabilization of the renal function (n=6). End-points: Creatinine clearance by Cockcroft-Gault formula the first month after therapeutic intervention with success. Statistical analysis: the data were submitted the unvarieted analysis, with application of the Student test or the Mann-Whitney test. Also the exact test of Fisher was used for proportions comparison. ROC curv was used for RPS analisys Results: Plasma creatinine level (p=0,04), creatinine clearance of kidney submitted to the therapeutic intervention (p=0,02), renal size (p=0,02), renal scintigraphy with positive captopril-test (p=0,04) and RSP (p=0,02) presented significant difference among the groups. In the ROC curve analysis of RSP, the calculated area under the curve was 0.833 (95% CI, 0.63-1.0). Conclusion: the RSP is a new test to predict the evolution of glomerular filtration rate after angioplasty with or without stenting

O endotélio vascular é responsável por várias funções, dentre elas, o controle do tônus vascular realizado por meio da produção e liberação de substâncias constritoras (EDCFs) e relaxantes (EDRFs) derivadas das células endoteliais. Essas substâncias então envolvidas em várias ações como relaxamento ou contração do músculo liso vascular. Em algumas doenças como na hipertensão arterial, ocorre um desequilíbrio entre esses mecanismos. Essas alterações podem ocorrer devido ao aumento nas concentrações de espécies reativas de oxigênio (EROs) que reduzem a biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), principal EDRF, assim como aumentar os níveis de prostanóides como prostaglandinas (PGs) e tromboxano A2 (TXA2), principais EDCFs produzidos pela COX. Dessa forma, a liberação de NO e inibição da COX podem ser efetivas nesses casos. Os anti-inflamatórios não esteroidais associados a doadores de NO (CINODs) tem importantes ações no sistema vascular. O leito vascular coronariano pode sofrer com o desequilíbrio na produção de fatores endoteliais e apresentar disfunção endotelial. Porém, apesar da sua relevância, a microcirculação coronariana não tem sido explorada como alvo para os CINODs. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as alterações vasculares do leito coronariano no modelo de hipertensão renal (2R-1C) e determinar a ação do composto NCX 2121 em artéria coronária de ratos normotensos (2R) e hipertensos 2R-1C. Observamos alterações cardíacas com hipertrofia do coração e menor aumento da pressão de perfusão coronariana (PPC) sob aumentos de fluxo, pela técnica de Langendorff em corações de 2R-1C. Na artéria coronária isolada houve aumento da expressão da enzima cicloxigenase (COX-2), redução na expressão de Cav-1 e em canais para potássio, ausência de disfunção endotelial e redução na resposta contrátil ao agonista do receptor TP (U46619) mediada pela atividade de COX, bem como resposta relaxante dependente do endotélio também dependente de COX em 2R-1C. Ainda o U46619 induziu uma grande produção de PGI2 somente em artérias coronárias de 2R-1C. O composto NCX2121 promoveu relaxamento de baixa magnitude em artérias coronárias, sem diferenças entre a resposta entre artérias de ratos 2R e 2R-1C e sem a participação de EROs. Verificamos que o L-NAME induziu um ganho de contração nas artérias dependente de atividade de COX. . Nossos resultados sugerem que durante a hipertensão a via da COX com produção de PGI2 pode estar aumentada justificando a baixa magnitude de relaxamento ao composto NCX2121, um inibidor de COX / as prostaglandins (PGs) and thromboxane A2 (TXA2) the main EDCFs produced by COX. Thus, NO release and COX inhibition may be effective in these cases. Non-steroidal anti-inflammatory drugs associated with NO donors (CINODs) have important actions in the vascular system. The imbalance between the production of endothelial factors is recognized as endothelial dysfunction. However, despite its relevance the coronary microcirculation has not been explored as a target for CINODs. The objective of this study was to evaluate the vascular alterations of the coronary vascular bed in renovascular hypertension model (2K-1C) and determine the action of the compound NCX 2121. We observed cardiac changes with hypertrophy of the heart and lower increase of coronary perfusion pressure (CPP) under increases of flow, by the Langendorff technique in 2K-1C hearts. In the isolated coronary artery there was an increase in the expression of the cyclooxygenase 2 (COX-2) enzyme, reduction in Cav-1 expression and in potassium channels, absence of endothelial dysfunction and reduction in the contractile response to TP-receptor agonist (U46619) mediated by COX activity, as well as endothelium-dependent relaxing response dependent of COX in 2K-1C. Furthermore, U46619 induced a large production of PGI2 only in 2R-1C coronary arteries. The compound NCX2121 promoted low magnitude relaxation in coronary arteries with no differences between the arteries from 2K and 2K-1C rats also without participation of EROs. We found L-NAME induced contraction dependent on COX activity in 2K-1C. Our results suggest that during hypertension the COX pathway with PGI2 production may be increased justifying the low magnitude of relaxation to the compound NCX2121, a COX inhibitor.

EINLEITUNG: Die CT- Angiographie (CTA) ist eine neue Methode zum anatomischen Nachweis pathologischer Veränderungen am Gefäßsystem. Die Wertigkeit der an unserem Institut durchgeführten CT- Angiographien bezüglich der Diagnostik von Nierenarterienstenosen sollte untersucht werden. Außerdem sollten die einzelne Rekonstruktionsarten auf ihren Nutzen geprüft werden. MATERIAL UND METHODEN: Die Nierenarterien von 23 Patienten wurden sowohl angiograpisch als auch mit CTA untersucht. Aus dem Datensatz jeder Untersuchung wurden Axiale Schnittbilder (AS), axiale und coronale multiplanare Reformationen (cMPRa, cMPRc), 3D- Oberflächenrekonstruktion (SSD) und Maximum- Intensitäts- Projektion (MIP) angefertigt. Ohne Kenntnis des Angiographie- Befundes wurden in der ersten Befundungssitzung alle CTA- Rekonstruktionen einzeln beurteilt. Dabei kam eine fünfteilige Stenosengraduierung zum Einsatz. In der zweiten Befundungssitzung wurde die Diagnose anhand aller CTA- Rekonstruktionen eines Falles gestellt. Sensitivität, Spezifität und Kappa ergaben sich aus dem Vergleich mit den Angiographie- Befunden. ERGEBNISSE: Die CTA konnte relevante Nierenarterienstenosen (Lumeneinengung >50%) mit einer Sensitivität von 92,9 % und einer Spezifität von 86,7 % nachweisen. Der CTA- Stenosegrad stimmte bei Anwendung einer Unterteilung in fünf Kategorien in 65,9 % der Fälle mit dem der Angiographie überein (kappa = 0,468). Bei der Beurteilung der einzelnen Rekonstruktion lieferten die AS (Sensitivität 78,6 %, Spezifität 90,0 %, kappa 0,692) und die MIP (Sensitivität 71,4 %, Spezifität 96,7 %, kappa 0,726) die besten Resultate. Die cMPRa und cMPRc besaßen durch die ausschließliche Filmbefundung eine deutlich niedrigere diagnostische Qualität. Tendenziell wurde der Stenosegad mittels CTA unterschätzt. SCHLUSSFOLGERUNG: Die CTA besitzt eine hohe Wertigkeit bei der Diagnostik von Nierenarterienstenosen. Unsere Ergebnisse decken sich mit denen anderer Studien. Der Einsatz der CTA bei Verdacht auf eine Nierenarterienstenose kann die Zahl unnötiger Angiographien deutlich reduzieren. Zur Befunderhebung sollten die AS und die MIP regelmäßig genutzt werden. / PURPOSE: To evaluate the accuracy of Computed Tomographic Angiography (CTA) in the detection of renal artery stenosis in our department and to investigate the role of the different reformattings in making the right diagnosis. MATERIALS AND METHODS: CTA and conventional Arteriography were performed on 23 Patients and axial slices (AS), curved axial multiplanar reformatting (cMPRa), curved coronal multiplanar reformatting (cMPRc), shaded surface display (SSD) and maximum intensity projections (MIP) were performed. During the first reading- session all blinded images were reviewed seperately, while all reformattings of one patient were analysed in the second reading session by one experienced radiologist, using a five- point- scale to determine the grade of the stenosis. RESULTS: Stenoses greater than 50% could be depicted by CTA with a sensitivity of 92,9 % and a specifity of 86,7 %. Applying a 5 five- point- scale, 65,9% of the diagnoses met the ones made by angiography (kappa= 0,468). MIP and AS were the most usefull reformattings with sensitivity, specifity and kappa reaching 71,4 %, 96,7 %, 0,726 and 78,6 %, 90 %, 0,692respectively. A tendency for underestimating the degree of the stenoses was notable. CONCLUSIONS: CTA has a high accuracy in diagnosing renal artery stenoses. Our results do not differ much from other studies on this technique. Applying CTA in suspected renal artery stenosis can reduce the amount of unnessecary arteriographies. For best results, MIP and AS should always be reviewed.

O óxido nítrico (NO) é o principal agente vasodilatador endógeno que regula o tônus e a homeostase vascular, além de controlar o fluxo sanguíneo. Doadores de NO, entre eles os nitratos orgânicos, são importantes medicamentos para o tratamento de doenças cardiovasculares. O grande benefício clínico desses nitratos é atribuído ao seu efeito venodilatador. Isto se deve ao seu efeito sobre a redução do retorno venoso, da pré-carga cardíaca e da demanda de oxigênio pelo miocárdio. Porém, um dos efeitos adversos mais comuns dos nitratos orgânicos é a cefaléia causada pela vasodilatação cerebral. Os doadores de NO utilizados clinicamente, nitroglicerina (NTG) e nitroprussiato de sódio (NPS), possuem algumas limitações como indução de tolerância e toxicidade, respectivamente. Dentre os compostos amplamente estudados, que são capazes de liberar NO, estão os complexos nitrosilos de rutênio. Estes complexos têm interesse terapêutico devido à sua baixa toxicidade. Recentemente, verificamos que o complexo de rutênio [Ru(terpy)(bdq)NO]3+ (Terpy), sintetizado em nosso departamento, reduz a pressão de ratos hipertensos renais 2R-1C e promove relaxamento vascular da aorta desses animais e de ratos normotensos controles (2R). Desta forma, a hipótese deste trabalho é de que o Terpy seja capaz de induzir relaxamento vascular em anéis de artéria basilar e veia cava inferior, tanto de ratos normotensos (2R) quanto de ratos 2R-1C. O nosso estudo teve como objetivo estudar os efeitos deste composto doador de NO e do doador de NO de referência, NPS, e os seus mecanismos de relaxamento vascular na artéria basilar e veia cava inferior de ratos normotensos 2R e hipertensos renais 2R-1C. Nossos resultados demonstram que o Terpy, ao contrário do NPS, não promoveu relaxamento vascular na artéria basilar de ratos 2R e 2R-1C. Da mesma forma, o Terpy não liberou NO nas células do músculo liso vascular. O NPS liberou NO e induziu relaxamento da artéria basilar pela ativação da enzima guanililciclase solúvel (GCs), com conseqüente ativação da proteína quinase dependente de GMPc (GK) e ativação dos canais para K+(KV, KATP e KIR). Ambos doadores, assim como a NTG, promoveram relaxamento vascular em anéis de veia cava e artéria basilar de ratos 2R e 2R- 1C de forma dependente da concentração. O relaxamento das veias de ratos 2R-1C foi menor do que em veias de 2R para os doadores de NO: Terpy, NPS e NTG. A liberação do NO pelo Terpy foi menor nas veias de 2R-1C. O NPS induz relaxamento da veia cava inferior pela ativação da enzima GCs com conseqüente ativação da proteína GK e ativação de canais para K+ sensíveis ao TEA. O Terpy induziu relaxamento da veia cava inferior pela ativação da enzima GCs, com conseqüente ativação da GK, ativação da Ca2+-ATPase reticular (SERCA) e ativação dos canais para K+ (KV, SKca e BKca). Em conjunto, nossos resultados mostraram que o Terpy é menos potente que o doador de referência (NPS) na veia cava inferior de ratos 2R e 2R-1C. Sua resposta vasodilatadora se deve principalmente à ativação da GCs, de canais para K+,proteína GK e SERCA. O Terpy, ao contrário do NPS, não induz relaxamento na artéria basilar de ratos 2R e 2R-1C. A resposta vasodilatadora do NPS nesses vasos se deve principalmente à ativação da GCs, de canais para K+ e proteína GK. A SERCA parece não estar envolvida no mecanismo de relaxamento vascular induzido pelo NPS. / Nitric oxide (NO) is an endogenous vasodilator that regulates vascular tone, homeostasis and blood flow. NO donors, including organic nitrates are important drugs for the treatment of cardiovascular diseases. A major clinical benefit of NO donors is attributed to their venodilator effect, resulting in decreased venous return, cardiac preload, arterial pressure and decreased myocardial oxygen demand. But the most common side effect of these drugs is the headache, which is caused by cerebral vasodilatation. The clinically used NO donors, nitroglycerin (NTG) and sodium nitroprusside (SNP), have some limitations such as induction of tolerance and toxicity, respectively. Among the widely studied compounds, which are capable of releasing NO are the nitrosyl ruthenium complexes, which have therapeutic interest due to its low toxicity. Recently, we found that the ruthenium complex [Ru (terpy)(BDQ)NO]3+ (Terpy) reduces the blood pressure of renal hypertensive rats (2K- 1C) and promotes vascular relaxation in aorta from 2K-1C and normotensive rats (2R). Thus, the hypothesis of the present work was that Terpy is able to induce vascular relaxation in basilar artery and inferior vena cava rings in 2K and 2K-1C rats. Our study aimed to investigate the effects of Terpy and SNP (the classical NO donor) and their vascular mechanisms in basilar artery and inferior vena cava from 2K and 2K-1C rats. Our results demonstrate that Terpy, unlike the SNP, did not promote vascular relaxation in basilar artery of 2K and 2K-1C. Terpy did not release NO in vascular smooth muscle cells. SNP released NO and induced relaxation in basilar artery rings by activating the enzyme soluble guanylyl cyclase (sGC) with consequent activation of cGMP-dependent protein kinase (GK) and activation of K + channels (KV, KATP and KIR). Both NO donors and NTG promoted vascular relaxation in vena cava rings from 2K and 2K-1C rats in concentration-dependent way. We have observed an impaired relaxation to NO in cava vein from 2K-1C rats. The NO release by Terpy was lower in 2K-1C veins. NPS induces relaxation in inferior vena cava by the activation of GCs, GK and K+ channels. Terpy induced relaxation in inferior vena cava by the activation of the enzyme sGC, with consequent activation of GK, reticular Ca2 + ATPase (SERCA) and activation of K + channels (KV and BKCa SKca). Taken together, our results demonstrate that Terpy is less potent than the reference NO donor (SNP) in the inferior vena cava of 2K and 2K-1C. Its vasodilator effect is mainly due to activation of sGC, K + channels, SERCA and GK protein. In basilar artery Terpy, unlike SNP, does not induce relaxation in 2K and 2K-1C rats. Vasodilator response to SNP in basilar artery is mainly due to activation of sGC, K + channels and GK protein. SERCA appears not to be involved in the mechanism of vascular relaxation by SNP.

A crescente incidência da aterosclerose na população adulta e a obstrução da artéria renal são condições relacionadas à hipertensão renovascular. Independente das comorbidades presentes, a estenose de artéria renal é, por si só, importante causa de mortalidade cardiovascular. Frente a tal realidade, determinar o exame ou exames que possam identificar precocemente esta condição mórbida pode mudar a história natural da doença renovascular. Objetivo: Definir sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo dos exames não invasivos na estenose da artéria renal. Associar estes achados com a análise vascular quantitativa (QVA) das artérias renais. Métodos: Estudo prospectivo com 61 pacientes recrutados entre janeiro de 2008 e agosto de 2011. As características populacionais, os exames de ultrassom Doppler, cintilografia renal com DTPA e a tomografia computadorizada foram selecionados e seus resultados comparados à arteriografia digital das artérias renais e ao QVA. Resultados: A média das idades foi de 65,43 (DP 8,7) anos. Das variáveis relacionadas à população do estudo e comparadas à arteriografia, duas identificaram relação com a estenose da artéria renal, a disfunção renal e os triglicerídeos. A mediana do ritmo de filtração glomerular de 52,8 ml/min/m2 identificou uma razão de chance para estenose de artéria renal de até 10 vezes. Os triglicerídeos associaram-se a uma menor presença de estenose na artéria renal, p < 0,037. A análise da sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo dos diferentes testes diagnósticos permitiu identificar aquele que melhor detectava a estenose nos suspeitos e afastava nos sadios. O ultrassom doppler com sensibilidade de 82,90%, especificidade 70,00%, valor preditivo positivo 85,00% e preditivo negativo 66,70% e a angiotomografia com sensibilidade de 68,30%, especificidade 80,00%, valor preditivo positivo 87,50% preditivo negativo de 55,20%, foram os exames que permitiram predizer as maiores chances de estenose da artéria renal nos portadores e afastar na população sem estenose. A associação das características populacionais com o QVA, permitiu identificar duas novas variáveis, o sexo e a idade. A média do grau de estenose, 33,47% (DP 29,55) quantificada pelo QVA, identificou menores graus de estenose que na análise visual dos angiogramas. Exames não invasivos positivos em estenoses menores do que 60% da luz do vaso também foram identificados . Os resultados identificados pela curva ROC demonstraram respectivamente a arteriografia, a angiotomografia e o ultrassom Doppler como os exames com melhores chances em predizer estenose significativa da artéria renal. Conclusão: A angiotomografia e o ultrassom Doppler trouxeram qualidade e alta possibilidade no diagnóstico da estenose da artéria renal, com vantagem para o segundo, pois não há necessidade do uso de meio de contraste na avaliação de uma doença que, frequentemente, está acompanhada por portadores de disfunção renal, disfunção ventricular esquerda grave e diabetes melito. A incorporação de uma forma objetiva de medidas das artérias renais aprimora os resultados da angiografia invasiva. / The increasing incidence of atherosclerosis in adults and renal artery stenosis are conditions related to renovascular hypertension. Regardless all risk factors, renovascular stenosis is by itself an important cause of cardiovascular mortality. Choosing appropriate tests that can early identify this morbid condition can change the natural history of renovascular disease. Objective: To define sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of non- invasive tests in renal artery stenosis. Associate these findings with the renal arteries quantitative vascular analysis (QVA). Methods: Prospective study with 61 patients selected between January 2008 and August 2011. The population characteristics, Doppler ultrasound scanning, DTPA renal scintigraphy and computed tomography were selected and their results compared with renal arteries digital angiography as well as the comparison to QVA. Results: The mean age was 65.43 (SD 8.7). The risk factors of the study population compared to angiography identified two variables: renal dysfunction and triglycerides. The median glomerular filtration rate of 52.8 ml/min/m2 identified an odds ratio for renal artery stenosis up to 10 times. Triglycerides were associated with lower presence of renal artery stenosis p < 0.037. The analysis of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of different diagnostic tests allowed the identification of the stenosis in the group of suspected patients and this possibility was discarded in the group of healthy patients. Doppler ultrasound scanning with 82.90% sensitivity, 70.00% specificity, 85.00% positive predictive value, 66.70% negative predictive value and computed tomography with 68.30% sensitivity, 80.00% specificity, 87.50% positive predictive value and 55.20% negative predictive value. These were the tests which supplied better chances to predict renal artery stenosis in patients with or without stenosis. The relationship of population characteristics with QVA identified two new variables, gender and age. The mean degree of stenosis 33.47% (SD 29.55) quantified by QVA identified lesser degrees of stenosis than in visual analysis of angiograms. Non- invasive positive stenoses less than 60% of vessel lumen were identified. The results identified by the ROC curve showed respectively angiography, computed tomography, and Doppler ultrasound scanning as better chances for predicting renal artery stenosis. Conclusion: Computed tomography, Doppler ultrasound scanning have brought high quality and ability in the diagnosis of renal artery stenosis, with an advantage to Doppler, which avoids the use of contrast medium in the evaluation of a disease that is often accompanied by patients with renal dysfunction, severe left ventricular dysfunction and diabetes mellitus. The introduction of new methodology to measure renal arteries will certainly improve the angiography results.

INTRODUÇÃO: Em pacientes hipertensos com suspeita de doença arterial coronária (DAC), indicações para a realização de arteriografia renal no mesmo procedimento da cinecoronariografia estão bem estabelecidas. Entretanto, em hipertensos com suspeita de estenose de artéria renal (EAR) com indicação de arteriografia renal, não estão bem definidos os determinantes da presença de DAC grave. OBJETIVOS: Avaliar a prevalência e os determinantes de DAC grave em pacientes hipertensos com indicação de arteriografia renal por suspeita de EAR. METODOLOGIA: Oitenta e dois pacientes com suspeita clínica de EAR foram submetidos à cinecoronariografia e arteriografia renal no mesmo procedimento. Lesão arterial significativa em artérias renal e/ou coronária foi definida por obstrução luminal maior ou igual a 70%. RESULTADOS: Obstrução luminal significativa, tanto em artéria coronária quanto em renal, foi encontrada em 39% dos pacientes. Os pacientes com DAC grave apresentaram idade mais avançada (63±12 vs. 56±13 anos; p=0,03), maior prevalência de angina (41 vs. 16%; p=0,013), maior diâmetro do átrio esquerdo (44,7 vs. 40,6mm; p=0,005) e maior velocidade de onda de pulso (12,6 vs. 10,7 m/s, p=0,02), comparados com os pacientes sem DAC grave. A presença de EAR significativa esteve associada a uma maior prevalência de DAC grave comparada a pacientes sem a lesão (66% vs. 22%; p<0,001). A análise multivariada demonstrou que EAR70% esteve associada com DAC grave de maneira independente (OR: 11,48; 95%CI 3,2-40,2; p<0,001), mesmo em pacientes sem angina (OR: 13,48; 95%CI 2,6-12,1; p<0,001). CONCLUSÃO: Há elevada prevalência de doença coronária grave em pacientes hipertensos com estenose de artéria renal significativa. A presença de estenose maior ou igual a 70%, verificada em arteriografia renal, é preditor forte e independente para a presença de DAC grave, mesmo na ausência de angina / INTRODUCTION: In patients with suspected coronary artery disease (CAD), indications for performing coronary and renal angiography at the same setting are well established. However, in hypertensive patients with suspected renal artery stenosis (RAS) with indication for renal angiography, it is not well defined the determinants of the presence of severe CAD. OBJECTIVES: We aimed to evaluate the prevalence and determinants of severe CAD in hypertensive patients referred to renal angiography for the diagnosis of RAS. METHODS: Eighty-two consecutive patients with high clinical risk for RAS systematically underwent renal angiography and coronary angiography at the same procedure. Significant RAS and CAD were defined as arterial luminal obstruction 70%. RESULTS: Either significant RAS or significant CAD were present in 32/82 patients (39%). Patients with severe CAD were older (63±12 vs. 56±13 years, p=0.03), had more angina (41 vs. 16%; p=0.013), higher left atrial diameter (44.7 vs. 40,6mm; p=0.005), and higher pulse wave velocity (12.6 vs. 10.7 m/s); p=0.02) compared to patients without significant CAD. Significant RAS was associated with an increased prevalence of severe CAD compared to patients without the lesion (66% vs. 22%, respectively; p<0.001). Binary logistic regression analysis showed that RAS 70% was independently associated with severe CAD (OR: 11.48; 95%CI 3.2-40.2; p<0.001), even in patients without angina (OR: 13.48; 95%CI 2.6-12.1; p<0.001). CONCLUSION: The prevalence of severe CAD in hypertensive patients with significant RAS is high. The presence of RAS 70%, diagnosed by renal angiography, is a strong and useful predictor to identify severe CAD, independently of the presence of angina

O óxido nítrico (NO) é o principal agente vasodilatador endógeno que regula o tônus e a homeostase vascular, além de controlar o fluxo sanguíneo. Doadores de NO, entre eles os nitratos orgânicos, são importantes medicamentos para o tratamento de doenças cardiovasculares. O grande benefício clínico desses nitratos é atribuído ao seu efeito venodilatador. Isto se deve ao seu efeito sobre a redução do retorno venoso, da pré-carga cardíaca e da demanda de oxigênio pelo miocárdio. Porém, um dos efeitos adversos mais comuns dos nitratos orgânicos é a cefaléia causada pela vasodilatação cerebral. Os doadores de NO utilizados clinicamente, nitroglicerina (NTG) e nitroprussiato de sódio (NPS), possuem algumas limitações como indução de tolerância e toxicidade, respectivamente. Dentre os compostos amplamente estudados, que são capazes de liberar NO, estão os complexos nitrosilos de rutênio. Estes complexos têm interesse terapêutico devido à sua baixa toxicidade. Recentemente, verificamos que o complexo de rutênio [Ru(terpy)(bdq)NO]3+ (Terpy), sintetizado em nosso departamento, reduz a pressão de ratos hipertensos renais 2R-1C e promove relaxamento vascular da aorta desses animais e de ratos normotensos controles (2R). Desta forma, a hipótese deste trabalho é de que o Terpy seja capaz de induzir relaxamento vascular em anéis de artéria basilar e veia cava inferior, tanto de ratos normotensos (2R) quanto de ratos 2R-1C. O nosso estudo teve como objetivo estudar os efeitos deste composto doador de NO e do doador de NO de referência, NPS, e os seus mecanismos de relaxamento vascular na artéria basilar e veia cava inferior de ratos normotensos 2R e hipertensos renais 2R-1C. Nossos resultados demonstram que o Terpy, ao contrário do NPS, não promoveu relaxamento vascular na artéria basilar de ratos 2R e 2R-1C. Da mesma forma, o Terpy não liberou NO nas células do músculo liso vascular. O NPS liberou NO e induziu relaxamento da artéria basilar pela ativação da enzima guanililciclase solúvel (GCs), com conseqüente ativação da proteína quinase dependente de GMPc (GK) e ativação dos canais para K+(KV, KATP e KIR). Ambos doadores, assim como a NTG, promoveram relaxamento vascular em anéis de veia cava e artéria basilar de ratos 2R e 2R- 1C de forma dependente da concentração. O relaxamento das veias de ratos 2R-1C foi menor do que em veias de 2R para os doadores de NO: Terpy, NPS e NTG. A liberação do NO pelo Terpy foi menor nas veias de 2R-1C. O NPS induz relaxamento da veia cava inferior pela ativação da enzima GCs com conseqüente ativação da proteína GK e ativação de canais para K+ sensíveis ao TEA. O Terpy induziu relaxamento da veia cava inferior pela ativação da enzima GCs, com conseqüente ativação da GK, ativação da Ca2+-ATPase reticular (SERCA) e ativação dos canais para K+ (KV, SKca e BKca). Em conjunto, nossos resultados mostraram que o Terpy é menos potente que o doador de referência (NPS) na veia cava inferior de ratos 2R e 2R-1C. Sua resposta vasodilatadora se deve principalmente à ativação da GCs, de canais para K+,proteína GK e SERCA. O Terpy, ao contrário do NPS, não induz relaxamento na artéria basilar de ratos 2R e 2R-1C. A resposta vasodilatadora do NPS nesses vasos se deve principalmente à ativação da GCs, de canais para K+ e proteína GK. A SERCA parece não estar envolvida no mecanismo de relaxamento vascular induzido pelo NPS. / Nitric oxide (NO) is an endogenous vasodilator that regulates vascular tone, homeostasis and blood flow. NO donors, including organic nitrates are important drugs for the treatment of cardiovascular diseases. A major clinical benefit of NO donors is attributed to their venodilator effect, resulting in decreased venous return, cardiac preload, arterial pressure and decreased myocardial oxygen demand. But the most common side effect of these drugs is the headache, which is caused by cerebral vasodilatation. The clinically used NO donors, nitroglycerin (NTG) and sodium nitroprusside (SNP), have some limitations such as induction of tolerance and toxicity, respectively. Among the widely studied compounds, which are capable of releasing NO are the nitrosyl ruthenium complexes, which have therapeutic interest due to its low toxicity. Recently, we found that the ruthenium complex [Ru (terpy)(BDQ)NO]3+ (Terpy) reduces the blood pressure of renal hypertensive rats (2K- 1C) and promotes vascular relaxation in aorta from 2K-1C and normotensive rats (2R). Thus, the hypothesis of the present work was that Terpy is able to induce vascular relaxation in basilar artery and inferior vena cava rings in 2K and 2K-1C rats. Our study aimed to investigate the effects of Terpy and SNP (the classical NO donor) and their vascular mechanisms in basilar artery and inferior vena cava from 2K and 2K-1C rats. Our results demonstrate that Terpy, unlike the SNP, did not promote vascular relaxation in basilar artery of 2K and 2K-1C. Terpy did not release NO in vascular smooth muscle cells. SNP released NO and induced relaxation in basilar artery rings by activating the enzyme soluble guanylyl cyclase (sGC) with consequent activation of cGMP-dependent protein kinase (GK) and activation of K + channels (KV, KATP and KIR). Both NO donors and NTG promoted vascular relaxation in vena cava rings from 2K and 2K-1C rats in concentration-dependent way. We have observed an impaired relaxation to NO in cava vein from 2K-1C rats. The NO release by Terpy was lower in 2K-1C veins. NPS induces relaxation in inferior vena cava by the activation of GCs, GK and K+ channels. Terpy induced relaxation in inferior vena cava by the activation of the enzyme sGC, with consequent activation of GK, reticular Ca2 + ATPase (SERCA) and activation of K + channels (KV and BKCa SKca). Taken together, our results demonstrate that Terpy is less potent than the reference NO donor (SNP) in the inferior vena cava of 2K and 2K-1C. Its vasodilator effect is mainly due to activation of sGC, K + channels, SERCA and GK protein. In basilar artery Terpy, unlike SNP, does not induce relaxation in 2K and 2K-1C rats. Vasodilator response to SNP in basilar artery is mainly due to activation of sGC, K + channels and GK protein. SERCA appears not to be involved in the mechanism of vascular relaxation by SNP.

Submitted by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-22T18:04:35Z No. of bitstreams: 1 DissRMB.pdf: 1290621 bytes, checksum: 3870f44730785bfd4b123df5cbec0b90 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-22T18:04:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissRMB.pdf: 1290621 bytes, checksum: 3870f44730785bfd4b123df5cbec0b90 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-08-22T18:04:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissRMB.pdf: 1290621 bytes, checksum: 3870f44730785bfd4b123df5cbec0b90 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T18:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissRMB.pdf: 1290621 bytes, checksum: 3870f44730785bfd4b123df5cbec0b90 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The high blood pressure levels reach about 22% of the world population, increasing the risk factors for coronary disease, heart attack and heart failure. Many studies have tried to understand the causes of hypertension and possible mechanisms to facilitate the treatment of hypertension. The central nervous system seems to play a key role in the development and maintenance of hypertension. Among the various brain areas, we can highlight the role of the nucleus of the solitary tract (NTS), which is the primary site of visceral afferents. The macrophage migration inhibitory factor (MIF) is an intracellular inhibitory regulator of the actions of angiotensin II (ANG II) in the ANG II type 1 receptors. The spontaneously hypertensive rats (SHRs) and the rats with renovascular hypertension 2 kidney, 1 clip (2K1C) exhibit an increased activity of the renin-angiotensin system, increased sympathetic activity and reduced baroreflex function. We recently demonstrated that MIF overexpression in the NTS of SHRs lowers blood pressure of these animals and improved the function of the baroreflex. Therefore, in this study we tested if increased expression of MIF in the NTS of the 2K1C rats could alter the development of hypertension and improve the baroreflex function in these animals. For this, the left renal artery was partially obstructed in male Holtzman rats (150-180 g) using a silver clip (0.2 mm width) to induce 2K1C hypertension (n = 5-10/group) or sham surgery [normotensive rats (NT); n = 5-11/group] was performed. Three weeks after renal clip placement or sham surgery, rats received AAV2-CBA-MIF microinjections into the NTS to increase MIF expression in the area or AAV2-CBA-eGFP, which promoted the expression of GFP (enhanced green protein), which served as a control vector. Arterial pressure and heart rate were recorded by telemetry and baroreflex tests were performed. At the end of the experiments, the brains were harvested for immunohistochemistry RT-PCR. MIF injections into the NTS attenuated the hypertension in 2K1C rats from 2 weeks after viral transfection until the end of the experiment (4 weeks after viral transfection), (2K1C-MIF: 145 ± 7, vs. 2K1C-eGFP: 176 ± 9 mmHg; p < 0.05). MIF into the NTS also improved the reflex bradycardia (2K1C-MIF slope: -1.4 ± 0.3, vs. 2K1C-eGPF slope: -0.41 ± 0.3 bpm/mmHg; p < 0.05) and reflex tachycardia (2K1C-MIF slope: -4.7 ± 0.6, vs. 2K1C-eGPF slope: -1.7 ± 0.3 bpm/mmHg; p < 0.05). Baseline heart rate was decreased in 2K1C-MIF rats. In contrast to 2K1C rats, MIF overexpressed in the NTS in normotensive rats produced no change in arterial pressure neither baroreflex function. As expected, the transduction of MIF in the NTS increased mRNA levels for MIF at the same site (NT-MIF: 3.80 ± 0.97, vs. NT-eGFP: 1.00 ± 0.16 fold change and 2K1C-MIF: 3.53 ± 0.68, vs. 2K1C-eGFP: 0.88 ± 0.09 fold change; p < 0.05). These results suggest that increased expression of MIF in neurons within NTS attenuates the hypertension and improves baroreflex function in 2K1C rats, possibly through anti-ANG II actions. / Os altos níveis de pressão arterial atingem cerca de 22% da população mundial, aumentando os fatores de risco para doenças coronarianas, infarto e falência cardíaca. Muitos estudos tentam entender as causas da hipertensão e os possíveis mecanismos que facilitem o tratamento da hipertensão. O sistema nervoso central parece ter um papel chave no desenvolvimento e na manutenção da hipertensão. Dentre as diversas áreas encefálicas, podemos destacar o papel do núcleo do trato solitário (NTS), que é o sítio primário das aferências viscerais. O fator inibitório da migração de macrófagos (MIF) é um regulador inibitório intracelular das ações da angiotensina II (ANG II) em receptores do subtipo AT1. Os ratos espontaneamente hipertensos (SHR) bem como os ratos com hipertensão renovascular 2 rins, 1 clipe (2R1C), exibem uma atividade aumentada do sistema renina-angiotensina, do sistema nervoso simpático e uma diminuição da função do barorreflexo. Recentemente demonstramos que a super-expressão de MIF no NTS de SHRs reduziu a pressão arterial destes animais bem como melhorou a função do barorreflexo. Portanto, neste estudo testamos se a expressão aumentada de MIF no NTS de ratos 2R1C poderia altenuar o desenvolvimento da hipertensão e melhorar a função do barorreflexo nestes animais. Para tanto, a artéria renal esquerda foi parcialmente obstruída em ratos Holtzman (150-180 g) utilizando um clipe de prata (0,2 mm de abertura) para induzir a hipertensão 2R1C (n = 5-10/grupo) ou a cirurgia fictícia [ratos normotensos (NT); n = 5-11/grupo] foi realizada. Três semanas após a inserção do clipe renal ou após a cirurgia fictícia, os ratos receberam microinjeções do vetor viral AAV2-CBA-MIF no NTS para aumentar a expressão de MIF na área ou de AAV2-CBA-eGFP, que promoveu a expressão de GFP (proteína fluorescente verde), que serviu como vetor controle. A pressão arterial e a frequência cardíaca foram registradas por telemetria e testes do barorreflexo foram realizados. Ao término dos experimentos, os encéfalos foram colhidos para imunohistoquímica ou RT-PCR. As microinjeções de MIF no NTS atenuaram a hipertensão em ratos 2R1C a partir de 2 semanas após a transfecção viral até o fim dos experimentos (4 semanas após a transfecção), (2R1C-MIF: 145 ± 7, vs. 2R1C-eGFP: 176 ± 9 mmHg; p < 0,05). MIF no NTS também melhorou a bradicardia reflexa (2R1C-MIF slope: -1,4 ± 0,3, vs. 2R1C-eGFP slope: -0,41 ± 0,3 bpm/mmHg; p < 0,05) e taquicardia reflexa (2R1C-MIF slope: -4,7 ± 0,6, vs. 2R1C-eGFP slope: -1,7 ± 0,3 bpm/mmHg; p < 0,05). A frequência cardíaca basal foi diminuída em ratos 2R1C-MIF. Em contraste com os ratos 2R1C, MIF super-expresso no NTS de ratos normotensos não produziu alteração na pressão arterial ou na função do barorreflexo. Como esperado, a transdução de MIF no NTS aumentou os níveis de RNAm para MIF no mesmo local (NT-MIF: 3,80 ± 0,97, vs. NT-eGFP: 1,00 ± 0,16 número de vezes e 2R1C-MIF: 3,53 ± 0,68, vs. 2R1C-eGFP: 0,88 ± 0,09 número de vezes; p < 0,05). Estes resultados sugerem que a expressão aumentada de MIF nos neurônios do NTS atenua a hipertensão, melhora a função do barorreflexo em ratos 2R1C, possivelmente através de uma ação anti-ANG II. / FAPESP: 2013/02607-0