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Estudo experimental das alterações agudas na glicemia e concentrações testiculares de ATP e glicose induzidas por torção unilateral, in vivo / In vivo acute changes in ATP and glucose concentrations in the rat testicles following unilateral torsion: experimental studyGuimarães, Sérgio Botelho January 2002 (has links)
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Previous issue date: 2002 / Spematic cord torsion is one of the more common surgical urological emergencies in childhood. An experimental study has been conducted to investigate acute changes in testicular concentrations of ATP and glucose following one-hour unilateral 720º testicular torsion. Sixty prepubertal male Wistar rats were distributed into two groups: Group 2(Ischemia) and Group 1(Sham operated). Each group(n=30) was divided into 5 subgroups (n=6). All animals were subjected to right testicular torsion of 720º. The testicular torsion of animals from Group 1 was immediately corrected. Group 2 animals had their testicular torsion lasting one hour followed by detorsion. Testicles were collected and arterial blood samples taken from abdominal aorta of each animal subgroup at the and of ischemic period or one hour after sham operation and 0.5, 1,6 and 24 hours later. ATP and glucose concentrations were significantly decreased (p<0,05) in ischemia group as compared to sham group at the end of ischemic period. There was no difference in glycemia when comparing ischemic versus sham-operated rats. Glucose concentrations were significantly increase (p<0,05) in ipsilateral testis of sham-operated rats No significant change in ATP and glucose concentrations were found in the left testicle in comparasion to the ones measured in the rigth testicle of the same animal. The decrease in ATP and glucose concentrations may be explained by the reduction in blood flow to the torted testis imposed by torsion. The absence of significant contralateral alterations in the concentrations of ATP and glucose could be related to the limited time of isquemia imposed to the right testis. It is concluded that unilateral one-hour testicular torsion causes a decrease in ipsilateral testicular perfusion resulting in decresead testicular concentrations of glucose and ATP in the ipstelial (right) testicles and no alterations in the concentrations of glucose and ATP in the contraleral testicles. Simple testicle manipulation (Sham Operation) causes a signficant increase in glucose concentrations in the ipsilateral(right)testis. / A torção do cordão espermático é a emergência geniturinária mais comum na idade pediátrica. Foram estudadas as alterações metabólicas agudas nas concentrações testiculares de ATP e glicose após uma hora de isquemia induzida por torção do cordão espermático. Sessenta ratos wistar machos pré-púberes, foram distribuídos em 2 grupos de 30 animais cada e cada grupo em 5 subgrupos de 6 ratos. Os ratos do grupo 1 foram submetidos à torção seguida por distorção imediata (cirurgia simulada) do testículo direito. Os animais do grupo 2 foram submetidos à torção do testículo direito (720o) durante uma hora. Os animais dos diferentes subgrupos foram sacrificados 30 minutos, 1 hora, 6 horas e 24 horas após a distorção ou realização da cirurgia simulada para a remoção dos testículos e coleta de amostra de sangue arterial. As alterações das concentrações de glicose e ATP foram determinadas por métodos enzimáticos. Ocorreu queda significante (p<0,05) da concentração de glicose e ATP no tempo 0 h, nos testiculos isquemiados. Não ocorreram alterações na glicemia nem nas concentrações de glicose e ATP nos testículos contralaterais. Os animais submetidos à cirurgia simulada apresentaram aumento significante (p< 0,05) da concentração de glicose no testículo ipsilateral quando comparada à concentração de glicose no testículo esquerdo dos mesmos animais nos tempos 0 h e 24h. A diminuição do fluxo sangüíneo em decorrência da torção explica a redução das concentrações de ATP e glicose nos testículos isquemiados. A ausência de alterações nas concentrações de ATP e glicose nos testículos contralaterais (esquerdos) poderia ser uma decorrência do reduzido tempo de isquemia imposto ao testículo ipsilateral (direito). Concluiu-se que a torção testicular unilateral de 720o, por uma hora, induz uma redução significante (p < 0,05) das concentraçôes testiculares de ATP e de glicose no testículo isquemiado sem alterações correspondentes da glicemia. A simples manipulação do testículo direito (cirurgia simulada) induz um aumento da concentração de glicose testicular.
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Isquemia e reperfusão normotérmica hepática e efeitos do alopurinol : estudo experimental em ratosRhoden, Ernani Luis January 1998 (has links)
Evidências acumuladas em diversos estudos tem demonstrado que as Espécies Ativas do Oxigênio (EAO) contribuem para o dano celular decorrente da isquemia e reperfusão de órgãos, principalmernte, em função da propriedade oxidativa das mesmas sobre os constituintes lipídicos das membranas celulares. O alopurinol tem sido sugerido como droga capaz de interferir beneficamente diminuindo o dano celular decorrente da reperfusão de órgãos previamente isquêmicos, tendo em vista o seu potencial de inibir a enzima xantina-oxidase, a mais frequentemente referida como geradora de EAO. Este estudo foi desenvolvido como o objetivo de avaliar os efeitos da isquemia e reperfusão hepática em ratos e também os efeitos do prétratamento com o alopurinol, sobre a função deste órgão, lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos e, características histopatológicas decorrentes. Para tanto, ratos Wistar, pesando entre 250 e 300 gramas foram utilizados e divididos em 6 experimentos interdependentes. Experimento 1: realizado para avaliar os efeitos de diferentes procedimentos sobre a função hepática. Os animais foram divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia troncular total e intermitente durante um tempo de 45 minutos, tendo sido permitida a reperfusão durànte 5 minutos após os dois primeiros intervalos de 15 minutos; Grupo 3- ratos submetidos a hepatectomia parcial (lobo médio e esquerdo); Grupo 4- ratos submetidos a isquemia conforme descrito e, no final do período, a hepatectomia parcial como no grupo anterior. Colheitas de sangue 12, 24, 48, 72, 96, 120 horas e no 14, 21 e 28 dias foram obtidas para determinação da atividade das transaminases oxalo-pirúvicas (AL T), oxaloacética (AST) e fosfatase alcalina (FA). Experimento 2: realizado para avaliar o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos, através dos métodos de Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e da Quimiluminescência (QL), em diferentes tempos de reperfusão sanguínea. Para tanto, 40 ratos foram utilizados e divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1: ratos controle (submetidos a laparotomia); Grupo 2- ratos submetidos a isquemia total durante 60 minutos não tendo sido permitida a reperfusão; Grupo 3- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por 30 minutos; Grupo 4- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por igual tempo. A ressecção do lobo médio, ao final de cada tempo operatório, foi realizada e, o tecido removido utilizado para medidas do grau de lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 3: realizado para avaliar os efeitos do alopurinol sobre a função hepática em situações de isquemia e reperfusão. Para tanto 30 ratos foram utilizados, e divididos em 3 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- lsquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente; Grupo 3- ratos submetidos a isquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Medidas da ALT, AST e FA foram realizadas 12, 24, 48 e 72 horas após os procedimentos. Experimento 4: avaliar o efeito do alopurinol sobre o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos com 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidosum período de anestesia e laparotomia de 1 hora e 45 minutos; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora porém, pré-tratados com suspensão de alopurinol conforme descrição prévia. Grupo 3- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora. Após os respectivos tempos operatórios,os animais foram submetidos a ressecção do lobo médio, utilizado para as medidas da lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 5: avaliar os efeitos do alopurinol sobre a mortalidade pósoperatória em ratos submetidos a isquemia e reperfusão. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém com pré-t r~tamento com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Experimento 6: avaliar as alterações histopatológicas da isquemia hepática em ratos pré-tratados e não com alopurinol. Para tanto, 60 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos de 20 animais: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo, durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. A cada 24 horas durante 4 dias, 5 animais de cada grupo eram sacrificados e, os lobos médio e esquerdo foram removidos para estudo histopatológico. Experimento 1- Significativa elevação nas concentrações séricas, nas medidas das 12 e 24 horas após o procedimento, das enzimas AL T e AST foram observadas nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) (p<O.OS). Além disso, naqueles animais do Grupo 4 elevações mais pronunciadas foram eveifenciadas em relação aos demais grupos nas determinações efetuadas 12, 24 e 48 após a cirurgia (p<O.OS). A soma dos valores das medidas individuais dos Grupo 2 e 3 não se distinguiram daquelas obtidas no Grupo 4 (p>O.OS). A concentração sérica da FA foi mais elevada em todas as determinações efetuadas naqueles animais submetidos a hepatectomia (G.3 e 4) em relação aos grupos de animais nos quais este procedimento não foi efetuado (Grupos 1 e 2) (p<O.OS). Experimento 2- Foi observado uma maior formação de malondialdeído (TBARS) nos tecidos hepáticos dos Grupos 3 e 4 em relação aos Grupos 1 e 2 (p<O.OS) e, além disso, ausência de diferença entre os Grupos 3 e 4 e entre os Grupos 1 e 2 (p>O.OS). Resultados semelhantes foram obtidos pelo método da QL. Experimento 3- A concentração sérica da AL Te AST foi superior (p<O.OS) nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) nas medidas efetuadas 12 e 24 horas após o procedimento e, nas determinações das 48 horas do Grupo 3 em relação aos demais (p<O.OS). A FA foi semelhante em todos os grupos de animais (p>O.OS). Experimento 4- A formação de malondialdeído foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos Grupo 1 e 2 (p<O.OS). Entre estes dois últimos grupos não houve diferença estatisticamente detectável (p>O.OS). Além disso, a QL demonstrou uma maior emissão de energia luminosa no Grupo 3 em relação aos demais (p<0.05) e, entre estes dois últimos os resultados foram semelhantes (p>0.05). Experimento 5- A taxa de mortalidade no grupo de animais submetidos a isquemia sem pré-tratamento como alopurinol (Grupo 3) foi de 40% nas primeiras 24h após o procedimento, estatisticamente distinta quando comparado ao Grupo 1 (cbntrole)(p<0.05). Entretanto, entre os animais do Grupo 2, ou seja, submetidos a isquemia e pré-tratamento com alopurinol, 13.3% foram ao óbito e este valor não se distingue dos animais do Grupo 1 (p>0.05). A avaliação entre os Grupos 2 e 3 não demonstrou diferença estatística (p>0.05). A mortalidade na avaliação das 48 horas foi igual entre os dois grupos (6.6% e 6.6%) (2 e 3) e não distintas, estatisticamente (p>0.05). Os demais animais sobreviveram durante o período de observação. Experimento 6- Congestão vascular hepática e necrose hepatocitária foram significativamente mais pronuncidas nos animais dos Grupos 2 e 3 em relação aos animais do grupo controle na avaliação efetuada 24 e 48 horas após a isquemia (p<0.05) e, além disso, a necrose foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos do Grupo 2 (p<0.05) apenas na avaliação das primeiras 24 horas após o procedimento cirúrgico. Não se observaram diferenças estatisticamente demonstráveis nas avaliações realizadas 72 e 96 horas após a cirurgia(p>0.05). Estes resultados sugerem que a via da xantina oxidase é uma das mais importantes rotas metabólicas envolvidas na geraçãode EAO, elementos quimicamente reativos e com potencial lesivo ao nível das membranas celulares dos hepatócitos e, que pelo menos em parte, são responsáveis pelos danos funcionais do fígado na síndrome da isquemia e reperfusão. Além disso, o alopurinol demonstrou efeitos protetores contra a lipoperoxidação decorrente da injúria reperfusional, embora a análise histopatológica não tenha demonstrado uma diferença estatisticamente significativa, o que pode ser justificado pelo fato das alterações provocadas nesta síndrome ocorram a nível de biomembranas celulares e de organelas não adequadamente visualizáveis pela microscopia óptica. / lt has been demonstrated that the oxygen free radical (EAO) contributes to the cellular damage induced by ischemia/reperfusion, probably mainly due to its lipid-oxidative characteristics. lt has been suggested that allopurinol has beneficiai effects in reducing the injury due to the reperfusion of previously ischemic organs, in this syndrome, as a result of its property of inhibiting the enzyme xanthine oxidase, most frequently referred as responsible for the EAO generation. This study was carried out with the purpose of elucidating the effects of hepatic ischemia-reperfusion in rats, the effects of allopurinol in this syndrome, the development of the assay for lipid peroxidation of hepatocyte membranes and the histopathologic features. To achieve this goal, the functional repercussion and the histopathologic features (analized 24 hours and eight days after surgery) were evaluated in wistar rats weighing 250-300 g. Experíment 1: performed for evaluating the way in which different procedures reflected upon the hepatic function. The animais were divided into 4 groups of 1 O rats each. Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total intermittent hepatic ischemia for 45 minutes: the first two 15-minute periods of ischemia were intercalated with 5 minutes of reperfusion; Group 3- rats which underwent partia! hepatectomy (mediai and left lobes). Group 4- lschemia as described above and at the end of partia! hepatectomy. Blood samples were obtained at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours and 4, 21 and 28 days after the procedure to determine the leveis of the enzymes oxalopiruvic transaminase (AL T), oxaloacetic transaminase (AST) and alkaline phosphatase (AF). Experiment 2: performed for evaluating the lipoperoxidation of hepatocyte membranes by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL) at different times of reperfusion. The animais were divided into 4 groups of 10 rats each: Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total hepatic ischemia for 60 minutes ; Group 3- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 30 minutes; Group 4- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 60 minutes. At the end of each operation time, a resection of the mediai lobe was performed, and hepatic tissue was removed and used for measuring lipid peroxidation by the methods described above. Experiment 3: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatic function in the setting of ischemia-reperfusion. The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. Blood samples were obtained 12, 24, 48 and 72 hours after the procedure to determine the activities of the AL T, AST and AF enzymes. Experiment 4: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatocyte membrane lipoperoxidation by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL). The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 60 minutes of reperfusion and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and reperfusion during 60 minutes. After the respective surgical times, the left and mediai lobes were removed and used for the lipoperoxidation assay by the TBARS and QL methods. Experiment 5: performed for evaluating the effects of allopurinol on mortality after the ischemia-reperfusion procedure. Forty animais were used and divided into 3 groups: Group 1- 10 control rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- 15 rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3: 15 rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. The animais were observed for 7 days after the procedure. Experiment 6: performed for analyzing the hepatic histopathologic features and the effects of the pre-treatment wíth allopurinol in the rats submitted to ischemia-reperfusion. Sixty animais were used and divided into three groups of twenty animais each: Group 1- Contrai rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes. Twenty-four, 48, 72 and 96 hours after the procedure, 5 rats of each group were sacrificed, and their left and right lobes were removed for histopathologic study (vascular congestion, necrosis and steatosis). Experiment 1: The determination of the AL T and AST leveis, after the procedure, demonstrated that these leveis were significantly higher in the groups 2 and 3 than in group 1 (p<0,05). Besides, among the animais of ali groups, those of group 4 had the highest leveis 12, 24 and 48 hours after the surgery. When the values of group 3 were added to the values of group 2, the results were not different from the values of group 4 (p>0,05). AF was higher in ali determinations, in the animais which underwent hepatectomy (groups 3 and 4) compared to those which were not submitted to this procedure (groups 1 and 2) (p< 0,05). Experiment 2: Malondialdehyde (TBARS) formation was higher in the groups 3 and 4 than in the groups 1 and 2 (p<0,05); besides, no difference was observed between the groups 3 and 4 and between the groups 1 and 2 (p>0,05). Similar results were observed with the QL method. These results suggest that the enzyme xanthine oxidase is one of the most important pathways involved in the generation of the EAbs, chemical reactive elements with injury potential at the levei of the hepatocyte membranes in the ischemia-reperfusion syndrome. At last, the results showed that allopurinol had beneficiai effects on hepatic function and lipid peroxidation and protective effects against hepatic ischemia-reperfusion injury. The histopathologic findings can be explained by the fact that the changes induced by this mechanism occur in organelles and biomembranes which are not visualized by light microscopy.
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Avaliação dos efeitos do fator estimulador de colônia de granulócitos na isquemia/reperfusão renalRodrigues, Vinicius Correa 25 April 2014 (has links)
Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-11T18:53:33Z
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Versao Final Dissertacao Vinicius Correa.pdf: 1171952 bytes, checksum: 7ccdb0d8814d6e89eb154aa3a8776310 (MD5) / FAPES / A isquemia/reperfusão (IR) renal, pela oclusão temporária da artéria renal, provoca lesões similares aos casos de falência renal aguda encontrados na prática clínica. Diversas estratégicas terapêuticas têm sido estudadas para minimizar as consequências dos danos provocados pela IR. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos do fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF) em modelo animal de isquemia e reperfusão renal após o evento isquêmico. No presente estudo foram utilizados ratos Wistar, machos, pesando entre 150-250 g. Realizou-se uma curva dose-resposta para estabelecer uma dose segura de G-CSF sem prejuízo da função renal nas concentrações de 10, 50, 100 e 250 μg/kg/dia por 5 dias. Para o estudo de IR os animais foram distribuídos nos grupos: SHAM (n=10) (controle, sem clampeamento, com nefrectomia unilateral) que receberam solução glicosada 5% (veículo), IR (n=9) (IR sem tratamento, nefrectomia unilateral) e IR-GCSF (n=9) (IR associado com G-CSF 100 μg/kg por 3 dias). A isquemia foi obtida pelo clampeamento da artéria renal por 40 minutos, seguida de reperfusão. Os animais foram alocados em gaiolas metabólica para análise dos parâmetros de função renal e posteriormente sacrificados com sobredose de anestésico para coleta de sangue e órgãos de interesse. Os resultados obtidos foram normalizados e foi utilizada ANOVA-1 seguido do post hoc de Tukey, os valores estão apresentados como média ± EPM e considerados significantes quando p<0,05. Ao final do tratamento o total de leucócitos dos animais foi de 10370 células/dL (SHAM), 11775 células/dL (IR) e 28800 células/dL (IR-GSCF) (p>0,05; Grupos SHAM e IR vs IR-GCSF). Os valores de creatinina plasmática foram de 0,34±0,02; 0,43±0,03 e 0,33±0,02 mg/dL para os animais dos grupos SHAM, IR e IR-GSCF, respectivamente (p<0,05; IR vs IR-GCSF). A área de deposição percentual de colágeno na região medular foi de 17%±3,41, 33%±1,17 e 20 ±1,20% para os grupos SHAM, IR e IR-GSCF respectivamente (p<0,01; IR vs IR-GCSF). Houve ainda menor quantidade de células em apoptose e menor concentração de produtos avançados de oxidação de proteínas nos animais tratados quando comparados aos do grupo IR. Esses resultados demonstram o efeito protetor do G-CSF contra a lesão renal em modelo experimental de IR. / Ischemia/reperfusion (IR) in kidney obtained by temporary occlusion of the renal artery causes injuries similar to cases of acute renal failure founded in clinical practice. Several therapeutic strategies have been studied to minimize the consequences of the damage caused by IR. The aim of this study was to evaluate the effects of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in an animal model of renal ischemia and reperfusion after the ischemic event. In the present study male Wistar rats weighing between 150-250 g were used. We performed a dose-response curve to establish a safe dose of G-CSF without loss of kidney function at concentrations of 10, 50, 100 and 250 mg/kg/day for 5 days. For the study of IR animals were distributed in three groups: SHAM (n=10) (control, without clamping, with unilateral nephrectomy) who received reperfusion 5% glucose solution (vehicle), IR (n= 9) (IR unilateral nephrectomy) and IR- GCSF (n = 9) (IR injury associated with G-CSF 100 mg/kg for 3 days). Ischemia was achieved by clamping the renal artery for 40 minutes followed by reperfusion. The animals were placed in metabolic cages for analysis of parameters of renal function and subsequently euthanized with an overdose of anesthetic for blood and organs of interest. The results were normalized and the ANOVA-1 followed via a post hoc Tukey was used, the values are presented as mean ± SEM and considered significant when p<0.05. At the end of the treatment the amount of leukocytes of the animals was 10370 cells/dL (sham), 11775 cells/dL (IR) and 28800 cells/dL (IR- GSCF) (p < 0.05, vs. sham IR and IR-GCSF). The plasma creatinine values were 0.34 ± 0.02 , 0.43 ± 0.03 and 0.33 ± 0.02 mg / dL for animals in groups SHAM , IR and IR- GSCF , respectively (p<0.05, vs IR IR-GCSF). The percentage area of collagen deposition in the medullary area was 16.22 ± 3.41 %, 32.99% ± 1.17 and 20.0 ± 1.20 % for the SHAM, IR and IR- GSCF groups respectively (p < 0.01, IR vs IR-GCSF). There was even smaller amount of cells undergoing apoptosis and lower concentration of advanced oxidation protein products in treated animals when compared with the IR group. These results demonstrate the protective effect of G-CSF against renal injury in an experimental model of IR.
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Experimental glaucoma model (ischemia and reperfusion): histology, morphometry, protein and gene espression of apoptosis pathwayZanoni, Diogo Sousa [UNESP] 28 May 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2015-05-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:18Z : No. of bitstreams: 1
000852681.pdf: 1224340 bytes, checksum: 7e3993edae8f0d4badfed835114ffa9b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Purpose: The aims of this study were to better understand the mechanism of cell death by apoptosis in a glaucoma model (ischemia / reperfusion) and evaluate the role of apoptosis in this model and if treatment with Sildenafil helps prevent apoptosis. Methods: 36 rats, from 4 to 6 months, males, Lewis and weighing ± 350g were divided in 5 groups: control group (6 animals) and for groups with ischemia / reperfusion (7 and 21 days), two groups consisting of ten animals treated with sildenafil and two groups of Five animals treated with placebo. Paracentesis of the anterior chamber with needle 30G coupled to saline (0.9%) was made and maintained for 60 minutes. Intraocular pressure was measured by rebound tonometer (Tonovet®). There was histological, morphometric by hematoxylin and eosin and, immunohistochemical staining and qRT-PCR analysis by Caspase-7, Caspase-6, Caspase-9, Tnf-r2, Fas-l, Bcl-2 and Bax. For statistic analysis we used ANOVA and t-test for morphometric analysis and, for immunohistochemistry and qRT-PCR, Fisher exact test was employed with a statistical significance level of p <0.05 Results: Histology and morphometric analysis, proved more changes in the untreated group compared to the treatment and control group. Analysis of immunohistochemistry and qRT-PCR observed the more significant expression in untreated eyes. Conclusion: Sildenafil apperead to be protective to ganglion cell apoptosis. Cell survival was evident in histology and morphometry. For immunohistochemistry and RT-PCR was observed protective effect in the apoptosis pathways with similar or below expression compared to the control
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Obstrução experimental de jejuno em eqüinos: efeito da hidrocortisona nos parâmetros clínicos e laboratoriaisCosta, Nathalia dos Santos [UNESP] 22 January 2008 (has links) (PDF)
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costa_ns_dr_jabo.pdf: 657826 bytes, checksum: ea3cd1fea9c1ec9dc87c6c0888f96d4d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A síndrome abdômen agudo é uma das principais doenças dos eqüinos, colocando em risco a vida do paciente quando não se institui rapidamente um tratamento adequado. Com o incremento de informações sobre lesões isquêmicas difundiu-se o conceito de que a reperfusão nestes tecidos, apesar de essencial para prevenir a morte celular por anoxia, induz efeito paradoxal de agravamento das lesões pré-existentes, o que se denomina lesão de reperfusão. Os glicocorticóides representam uma alternativa terapêutica para o tratamento das lesões de reperfusão. No estudo proposto foram utilizados 15 eqüinos adultos, machos e fêmeas, sem alterações clínicas aparentes, distribuídos aleatoriamente em três grupos de cinco animais, sob neuroleptoanalgesia e anestesia local, submetidos ou não à obstrução experimental do jejuno, mediante a colocação de um balão intraluminal, , para reproduzir a isquemia intestinal o quadro de abdômen agudo. Os eqüinos do grupo I foram submetidos a todas as manobras cirúrgicas aplicadas aos dos outros grupos, exceto a distensão do balão para provocar obstrução; os do grupo II foram submetidos à isquemia do jejuno durante 4 horas; e os grupo III foram submetidos à isquemia de 4 horas, seguida de tratamento com hidrocortisona uma hora antes da desobstrução. Para os exames laboratoriais, foram obtidas amostras de material biológico em quatro momentos: uma hora antes do procedimento cirúrgico e aplicação da neuroleptoanalgesia (M1), ao final da isquemia (M2) e uma hora (M3) e 18 horas (M4) após o início da reperfusão. Para a verificação de lesões à distância, as amostras de diversos órgãos foram colhidas na ocasião da necropsia ao término do experimento. / The acute abdomen syndrome is a common equine’s disease, which goes on risk the patient when a correct treatment is not established. The reperfusion in ischemical tissues, despite it is essential in preventing cell death by anoxia, leads a paradoxical effect in worsing the pre-existed lesions, was spread and its called reperfusion lesion. Glucocorticoids represents an alternative to treatment of reperfusion’s lesions. In the proposed study, were used 15 adults horses, male or female, without clinical apparent changes, distributed ramdonly in three groups of five animals. These animals were submitted or not to jejuni experimental obstruction through intraluminal ballon, under tranquilization and local anesthesia to imitate acute abdomen. The group I was submitted to surgical procedures, except the distention of the balloon to induce obstruction; the group II was submitted to jejuni’s ischemia for 4 hours and the group III was submitted to jejuni’s ischemia for 4 hours followed by hydrocortisone treatment one hour before desobstruction. For laboratorial tests, samples of biological material were obtained in four moments: one hour before surgical procedure and practice of drugs (M1), in the end of ischemia (M2) and one hour (M3) and 18 hours (M4) after the beginning of reperfusion. To verify distant lesions, samples of many organs were collected in the necropsy at the end of experiment.
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Estudo da proteção renal com propofol e o isoflurano durante a esquemia e a reperfusão, com hiperglicemia transitóriaCarraretto, Antonio Roberto [UNESP] 24 February 2011 (has links) (PDF)
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carraretto_ar_dr_botfm.pdf: 822756 bytes, checksum: d39d7bb3ab7eed1fb356cccaf87705ec (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A hiperglicemia aumenta a lesão renal na isquemiareperfusão em ratos anestesiados com isoflurano (Iso). Este efeito é desconhecido com o uso do propofol (Prop). O objetivo desse estudo é avaliar o efeito do isoflurano (Iso) e do propofol na lesão renal de isquemia-reperfusão na presença de hiperglicemia transitória.Utilizou-se 36 ratos Wistar machos, distribuídos de modo aleatório em seis grupos de seis animais, designados: PHS (Prop + Hiperglicemia - Sham); IHS (Iso + Hiperglicemia - Sham); PHI (Prop + Hiperglicemia + Isquemia); IHI (Iso + Hiperglicemia + Isquemia); PI (Prop + Isquemia) e II (Iso + Isquemia). A anestesia foi mantida com isoflurano (1,5 a 2%) (IHS, IHI e II) ou propofol (1 mg.kg-1.min-1) (PHS, PHI e PI). A pressão arterial média (PAM) foi medida para o controle da anestesia. A hiperglicemia foi induzida com a injeção de 2,5 g.kg-1 de solução de glicose por via intraperitoneal. Todos os animais foram submetidos à nefrectomia direita. Os dois grupos “sham” foram submetidos à hiperglicemia. Os demais grupos foram submetidos à isquemia renal por 25 minutos. Os valores plasmáticos da glicose e da creatinina foram determinados no início (M1), no final do experimento (M2) e 24 horas após o final do experimento (M3), quando os animais retornaram ao laboratório e foram anestesiados com isoflurano para coleta de uma nova amostra sanguínea e nefrectomia esquerda, para análise histológica, com o uso de uma escala para avaliação da necrose tubular (0 a 5 = lesão máxima), e avaliação por citometria de fluxo, para determinação dos percentuais da apoptose inicial (APTi) e de células viáveis (VC). Houve tratamento estatístico para os valores da PAM, glicose e creatinina plasmáticas escore de lesão histológica e avaliação da citometria de fluxo,sendo as diferenças consideradas significantes quando <0,05.A glicemia (mg.dL-1) em M2 foi maior nos grupos... / The hyperglycemia augments the renal ischemic-reperfusion injury (IRI) in rats anesthetized with isoflurane (Iso). This effect with propofol (Prop) is unknown. The purpose of this investigation was to examine the effect of isoflurane and propofol in renal ischemia/reperfusion injury (IRI) during transient hyperglycemia.Rats were randomly assigned in six groups of six animals, groups: PHS (Prop + Hyperglycemia - Sham); IHS (Iso + Hyperglycemia - Sham); PHI (Prop + Hyperglycemia + Ischemia); IHI (Iso + Hyperglycemia + Ischemia); PI (Prop + Ischemia) and II (Iso + Ischemia). Propofol in a dose of 1 mg.kg-1.min-1 (PHS, PHI and PI) or saline was infused (IHS, IHI and II). Mean arterial pressure (MAP) was monitored for anesthesia control. Hyperglycemia was induced with the injection of 2.5 g.kg-1 of glucose solution. All animals underwent to right nephrectomy. The two sham groups underwent to hyperglycemia with ischemia. The others groups were submitted to a left renal ischemia for 25 minutes. Serum creatinine and glucose values were determined in the beginning (M1) and at the end of experiment (M2) and 24 hours after the experiment (M3) rats were anesthetized with isoflurane and blood sample was collected and the left kidney removed for histological analysis, using a scale for tubular necrosis (0-5 = injury maximum). In addition to a histological study, cells from the left kidney were evaluated for apoptosis by flow cytometry (FCM) as a % of initial apoptosis (APTi) and viable cell (VC). Statistical analysis were applied to the values of MAP, serum creatinine and glucose, histological score injury and FCM and statistical differences were considered when p<0.05.Serum glucose at M2 was higher in PHS (351.8±141.0) and IHI (348.3±52.3) in relation to groups PI (147.0±62.4) and II (162.7±40.2). Groups IHS (302.5±80.0) and PHI (308.5±74.5) showedintermediary values. Serum creatinine... (Complete abstract click electronic access below)
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Hipotermia hepática tópica associada ao pré-condicionamento isquêmico : análise dos danos hepatocelulares, função hepática e estresse oxidativo em um modelo de isquemia e reperfusão em ratosGrezzana Filho, Tomáz de Jesus Maria January 2009 (has links)
Introdução: O uso de Hipotermia Tópica ou Pré-Condicionamento Isquêmico (PCI) em ressecções hepáticas pode ser útil com o propósito de atenuar os danos de isquemia e reperfusão. Entretanto, até o presente momento, o uso combinado destas técnicas não foi avaliado. Objetivos: Desenvolver um modelo experimental para avaliar os danos de isquemia e reperfusão iniciais e a ocorrência de efeitos sinergísticos quando as duas ferramentas são aplicadas concomitantemente. Métodos: Realizou-se isquemia do fígado por noventa minutos e reperfusão por cento e vinte minutos. Os animais foram divididos nos grupos Controle (C), Isquemia Normotérmica (IN), Pré-condicionamento Isquêmico (PCI), Hipotermia 26ºC (H) e Hipotermia 26ºC + PCI (H+PCI). Foram avaliados a Pressão Arterial Média (PAM), a temperatura corporal e o fluxo biliar a cada 15 minutos, enquanto a ALT, AST, TBARS, SOD, CAT e os danos histopatológicos foram avaliados ao término da reperfusão. Resultados: Não foram observadas alterações na PAM e na temperatura corporal durante todo o experimento. O fluxo biliar retornou a valores semelhantes ao grupo C nos grupos H e H+PCI após 45 minutos de reperfusão, e foi significativamente maior nos grupos H e H+PCI em comparação aos grupos IN e PCI após 105 minutos (P<0,05 e P<0,05) e 120 minutos (P<0,05 e P<0,05) de reperfusão. Os níveis plasmáticos da AST e ALT demonstraram aumento significativo nos grupos IN (P<0,05 e P<0,05) e PCI (P<0,05 e P<0,05) em comparação ao grupo C. Os níveis de TBARS foram significativamente maiores nos grupos IN (P<0.01), PCI e H (P<0,05 e P<0,05) em comparação ao grupo H+PCI e significativamente maiores no grupo IN em comparação ao grupo C (P<0,05). No grupo H houve correlação negativa entre AST e ALT com o fluxo biliar (P<0,05 e P<0,05) e positiva entre AST e ALT com os níveis de TBARS (P<0,05 e P<0,05). Os níveis de CAT demonstraram aumento significativo no grupo PCI em comparação aos grupos C (P<0,01), IN e H+PCI (P<0,05 e p<0,05), enquanto os níveis de SOD foram significativamente maiores no grupo H em comparação ao grupo C (P=0,01), IN, PCI e H+PCI (P<0,05, respectivamente). Os danos histopatológicos foram leves, porém o grupo IN apresentou escores significativamente maiores em comparação ao grupo C (P<0,05). Conclusões: A utilização de hipotermia hepática tópica a 26ºC associada ao PCI promoveu um efeito protetor sinergístico sobre a peroxidação lipídica hepática. Além disso, a indução de hipotermia tópica isoladamente ou em associação com o PCI atenuou os danos hepatocelulares e permitiu uma recuperação precoce da função hepática após a reperfusão, um mecanismo provavelmente relacionado a um efeito da hipotermia sobre o estresse oxidativo e preservação de ATP. / Introduction: The use of Topical Hypothermia or Ischemic Preconditioning (IPC) in hepatic resections can be useful to attenuate ischemia/reperfusion injuries. However, until the present moment, the combination of both techniques was not evaluated. Objectives: Development of an experimental model to assess the initial ischemia/reperfusion injuries and the possible synergistic effects when both tools are applied concomitantly. Methods: Ninety minutes of ischemia and 120 minutes of reperfusion were applied to rat livers. Animals were divided into five groups: Control (C), Normothermic Ischemia (NI), Ischemic Preconditioning (IPC), Hypothermia 26ºC (H) and Hypothermia 26ºC plus IPC (H+IPC). Mean arterial pressure (MAP), body temperature and bile flow were assessed every 15 minutes whereas ALT, AST, TBARS, SOD, CAT and histopathologic injuries were evaluated at the end of reperfusion. Results: No differences were seen in MAP and body temperature throughout the experiment. Bile flow returned to values similar to C group in the H and H+IPC groups after 45 minutes of reperfusion and was significantly higher in the H and H+IPC groups after 105 minutes (P<0.05 and P<0.05) and 120 minutes (P<0.05 and P<0.05) of reperfusion in comparison to the NI and IPC groups. Plasmatic levels of AST and ALT were significantly higher in the NI (P<0.05 and P<0.05) and IPC (P<0.05 and P<0.05) groups in comparison to the C group. TBARS levels were significantly higher in the NI (P<0.01), IPC, and H (P<0.05 and P<0.05) groups in comparison to the H+IPC group and higher in the NI group in comparison to the C group (P<0.05). In the H group there was a negative correlation between ALT and AST to bile flow (P<0.05) and positive correlation between AST and ALT to TBARS (P<0.05 and P<0.05). CAT levels were significantly higher in the PCI group in comparison to the C (P<0.01), NI and H+IPC (P<0.05 and P<0.05) groups whereas SOD levels were significantly higher in the H group in comparison to the C (P=0.01), NI, PCI and H+IPC (P<0.05, respectively) groups. Histopathologic injuries were mild and the NI group showed a significantly greater score in comparison to the C group (P<0.05). Conclusions: The induction of topical liver hypothermia at 26ºC associated to IPC promoted a synergistic protective effect on hepatic lipid peroxidation. In addition, the induction of isolated topical hypothermia or hypothermia associated to IPC attenuated liver injuries and allowed an early recovery of the liver function after reperfusion, a mechanism probably related to an effect of hypothermia on oxidant stress and ATP preservation.
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Influência do óxido nítrico na resposta à isquemia-reperfusão em ratas sob distintas concentrações estrogênicasSchenkel, Paulo Cavalheiro January 2006 (has links)
O estrogênio, principal hormônio sexual feminino, tem importante papel na regulação da contratilidade miocárdica e função vascular. A escassez estrogênica esta associada ao aumento do risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares em mulheres. Uma vez que o estrogênio tem capacidade antioxidante e age estimulando tanto a síntese, quanto a liberação do óxido nítrico (NO), um potente vasodilatador, buscou-se verificar qual a influência dessas propriedades do estrogênio na contratilidade cardíaca e na função coronariana. Para isso foram utilizadas 29 ratas Wistar (± 200g) divididas em 3 grupos: SHAM, o qual foi submetido à cirurgia fictícia (sham operation) de ovariectomia bilateral; OVX, que foi ovariectomizado e OVX+RH, que foi ovariectomizado e recebeu reposição estrogênica. Os grupos foram subdivididos em 2 sub-grupos para o procedimento de perfusão do coração isolado, de acordo com a solução utilizada (TYRODE ou TYRODE+LNAME). Sete dias após cirurgia de ovariectomia ou simulação da mesma, foi iniciada a reposição hormonal com a implantação de cápsulas preenchidas com 17β-estradiol (5%(p:v)) ou apenas óleo de girassol (grupos SHAM e OVX). A reposição persistiu por 21 dias e, ao término desse período, foi iniciada a determinação do ciclo estral nas ratas não submetidas à OVX. Foram utilizadas no experimento as ratas que se encontravam na fase do diesto. Feito isso, foi coletado sangue pelo plexo retrorbital, sob anestesia etérea, de todos os animais e, em seguida, eles foram mortos por deslocamento cervical e iniciado protocolo de isquemia-reperfusão. Esse protocolo consistiu de estabilização por 20 minutos, seguida de isquemia global normotérmica por 30 minutos e reperfusão por 20 minutos. Foram avaliados os seguintes parâmetros: freqüência cardíaca (FC), pressão sistólica do ventrículo esquerdo (PSVE), pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE), índice de contratilidade (+dP/dt), índice de relaxamento (-dP/dt) e pressão de perfusão (PP). Ao término do protocolo, os corações foram pesados e preparados para análise das concentrações de peróxido de hidrogênio (H2O2) e nitratos totais (NO3 -), além da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). A concentração plasmática de 17β-estradiol no grupo SHAM foi de 30,7 ± 5,6 pg/ml. A OVX bilateral diminuiu em 53% a concentração estrogênica e a reposição hormonal aumentou 343% em relação ao grupo OVX as concentrações desse hormônio, comprovando a eficácia da reposição hormonal. A PP mostrou variação semelhante a atividade da CAT e oposta as concentrações de NO3 - e H2O2. Ao ser perfundido com TYRODE, o grupo OVX apresentou PP e atividade da CAT elevadas (28% e 20%, respectivamente) e menores concentrações de NO3 - e H2O2 (ambos 35%) em relação ao SHAM. Nos animais que receberam reposição hormonal, esses parâmetros foram parcialmente restabelecidos. Quando perfundidos com LNAME, foi observado, nos animais SHAM e OVX+RH, concentrações de NO3 - (22% e 18%, respectivamente) e H2O2 (36% e 30%, respectivamente) diminuídas e aumento na PP (54% e 22%, respectivamente) e CAT (19% e 31%, respectivamente) em relação aos mesmos grupos perfundidos com TYRODE. OVX-LNAME apresentaram menor contratura cardíaca isquêmica que os demais grupos. Não foram observadas diferenças significativas nos outros parâmetros hemodinâmicos, assim como na atividade da SOD, entre os demais grupos experimentais. Na ausência de estrogênio parece não haver uma dependência do NO na modulação do tônus vascular coronariano. Além do mais, parece haver uma influência desse vasodilatador no desenvolvimento da contratura cardíaca isquêmica nos animais ovariectomizados. Possivelmente o balanço desregulado entre pró e antioxidantes promova adaptações que alterem as respostas cardiovasculares à isquemia-reperfusão.
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Influência da suplementação de açaí (Euterpe oleracea Mart.) no modelo de isquemia-reperfusão em ratos / Influence of acai supplementation (Euterpe oleracea Mart.) in the model of ischemia-reperfusion in ratsAlegre, Patrícia Helena Corrêa [UNESP] 23 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: o estresse oxidativo é um dos principais mecanismos de lesão durante e após a isquemia miocárdica. O açaí é um fruto que possui uma elevada capacidade antioxidante. O objetivo do estudo foi avaliar a influência do açaí no modelo de isquemia global-reperfusão em ratos. Material e métodos: foram utilizados 19 ratos Wistar machos, alocados em 2 grupos: Controle (receberam dieta padrão) e Açaí (receberam dieta padrão suplementada de açaí a 5%). Após seis semanas, os animais foram submetidos ao protocolo de isquemia global-reperfusão e estudo do coração isolado. Durante o protocolo, foi avaliada a função ventricular no período pós-isquemia e reperfusão. Os corações foram utilizados para análise da porcentagem de área isquêmica, avaliação do estresse oxidativo e metabolismo energético miocárdico. Resultados: Não houve alteração estatisticamente significante entre os grupos com relação ao peso inicial, peso final, consumo diário de ração, área de infarto do miocárdio e na expressão das proteínas NF-κB fosforilado e total, FOXO1 acetilada e total, SIRT1 e Nrf-2. A suplementação de açaí promoveu menor concentração miocárdica de hidroperóxido de lipídio e observamos maior atividade das enzimas catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase. Observamos maior atividade da β-hidroxiacil-coenzimaA desidrogenase, piruvato desidrogenase e citrato sintase no miocárdio dos animais que receberam açaí e menor atividade das enzimas lactato desidrogenase e fosfofrutoquinase. Com relação à cadeia respiratória mitocondrial observamos maior atividade do complexo I, complexo II e ATP sintase no grupo suplementado com açaí. A função sistólica foi semelhante entre os grupos e os animais que receberam açaí apresentaram pior função diastólica quando comparados aos animais que não receberam. Não observamos diferença entre os grupos controle e açaí em relação à área seccional do miócito. Conclusão: apesar de melhorar o metabolismo energético e atenuar o estresse oxidativo, a suplementação de açaí não diminuiu a área de infarto, bem como não melhorou a função ventricular esquerda no modelo de isquemia global/reperfusão. / Introduction: Oxidative stress is one of the main mechanisms of injury during and after myocardial ischemia. Açaí is a fruit that has a high antioxidant capacity. The aim of the study was to evaluate the influence of açaí in the global ischemia-reperfusion model in rats. Material and methods: We used 19 male Wistar rats, allocated in 2 groups: Control (received standard diet) and Açaí (received a standard diet supplemented with 5% açaí). After six weeks, the animals were submitted to the global ischemia-reperfusion protocol and isolated heart study. During the protocol, the ventricular function in the post-ischemic and reperfusion period was evaluated. The hearts were used to analyze the percentage of ischemic area, evaluation of oxidative stress and myocardial energetic metabolism. Results: There was no statistically significant difference between the groups in initial body weight, final body weight, daily feed intake, myocardial infarction area and expression of phosphorylated and total NF-κB protein, acetylated and total FOXO1, SIRT1 and Nrf-2. Açaí supplementation promoted a lower myocardial concentration of lipid hydroperoxide and we observed higher activity of the enzymes catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase. We also observed increased activity of β-hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, pyruvate dehydrogenase, and citrate synthase in the myocardium of animals that received acai, as well lower activity of the enzymes lactate dehydrogenase and phosphofructokinase. Regarding the mitochondrial respiratory chain, we observed higher activity of complex I, complex II and ATP synthase in the group supplemented with açaí. The systolic function was similar between the groups and the animals that received açaí presented worse diastolic function when compared to the animals that did not receive. We did not observe difference between the control and açaí groups in relation to the sectional area of the myocyte. Conclusion: despite improving energy metabolism and attenuating oxidative stress, açaí supplementation did not decrease the infarcted area, nor did it improve left ventricular function in the global ischemia / reperfusion model.
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Isquemia e reperfusão normotérmica hepática e efeitos do alopurinol : estudo experimental em ratosRhoden, Ernani Luis January 1998 (has links)
Evidências acumuladas em diversos estudos tem demonstrado que as Espécies Ativas do Oxigênio (EAO) contribuem para o dano celular decorrente da isquemia e reperfusão de órgãos, principalmernte, em função da propriedade oxidativa das mesmas sobre os constituintes lipídicos das membranas celulares. O alopurinol tem sido sugerido como droga capaz de interferir beneficamente diminuindo o dano celular decorrente da reperfusão de órgãos previamente isquêmicos, tendo em vista o seu potencial de inibir a enzima xantina-oxidase, a mais frequentemente referida como geradora de EAO. Este estudo foi desenvolvido como o objetivo de avaliar os efeitos da isquemia e reperfusão hepática em ratos e também os efeitos do prétratamento com o alopurinol, sobre a função deste órgão, lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos e, características histopatológicas decorrentes. Para tanto, ratos Wistar, pesando entre 250 e 300 gramas foram utilizados e divididos em 6 experimentos interdependentes. Experimento 1: realizado para avaliar os efeitos de diferentes procedimentos sobre a função hepática. Os animais foram divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia troncular total e intermitente durante um tempo de 45 minutos, tendo sido permitida a reperfusão durànte 5 minutos após os dois primeiros intervalos de 15 minutos; Grupo 3- ratos submetidos a hepatectomia parcial (lobo médio e esquerdo); Grupo 4- ratos submetidos a isquemia conforme descrito e, no final do período, a hepatectomia parcial como no grupo anterior. Colheitas de sangue 12, 24, 48, 72, 96, 120 horas e no 14, 21 e 28 dias foram obtidas para determinação da atividade das transaminases oxalo-pirúvicas (AL T), oxaloacética (AST) e fosfatase alcalina (FA). Experimento 2: realizado para avaliar o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos, através dos métodos de Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e da Quimiluminescência (QL), em diferentes tempos de reperfusão sanguínea. Para tanto, 40 ratos foram utilizados e divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1: ratos controle (submetidos a laparotomia); Grupo 2- ratos submetidos a isquemia total durante 60 minutos não tendo sido permitida a reperfusão; Grupo 3- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por 30 minutos; Grupo 4- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por igual tempo. A ressecção do lobo médio, ao final de cada tempo operatório, foi realizada e, o tecido removido utilizado para medidas do grau de lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 3: realizado para avaliar os efeitos do alopurinol sobre a função hepática em situações de isquemia e reperfusão. Para tanto 30 ratos foram utilizados, e divididos em 3 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- lsquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente; Grupo 3- ratos submetidos a isquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Medidas da ALT, AST e FA foram realizadas 12, 24, 48 e 72 horas após os procedimentos. Experimento 4: avaliar o efeito do alopurinol sobre o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos com 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidosum período de anestesia e laparotomia de 1 hora e 45 minutos; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora porém, pré-tratados com suspensão de alopurinol conforme descrição prévia. Grupo 3- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora. Após os respectivos tempos operatórios,os animais foram submetidos a ressecção do lobo médio, utilizado para as medidas da lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 5: avaliar os efeitos do alopurinol sobre a mortalidade pósoperatória em ratos submetidos a isquemia e reperfusão. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém com pré-t r~tamento com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Experimento 6: avaliar as alterações histopatológicas da isquemia hepática em ratos pré-tratados e não com alopurinol. Para tanto, 60 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos de 20 animais: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo, durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. A cada 24 horas durante 4 dias, 5 animais de cada grupo eram sacrificados e, os lobos médio e esquerdo foram removidos para estudo histopatológico. Experimento 1- Significativa elevação nas concentrações séricas, nas medidas das 12 e 24 horas após o procedimento, das enzimas AL T e AST foram observadas nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) (p<O.OS). Além disso, naqueles animais do Grupo 4 elevações mais pronunciadas foram eveifenciadas em relação aos demais grupos nas determinações efetuadas 12, 24 e 48 após a cirurgia (p<O.OS). A soma dos valores das medidas individuais dos Grupo 2 e 3 não se distinguiram daquelas obtidas no Grupo 4 (p>O.OS). A concentração sérica da FA foi mais elevada em todas as determinações efetuadas naqueles animais submetidos a hepatectomia (G.3 e 4) em relação aos grupos de animais nos quais este procedimento não foi efetuado (Grupos 1 e 2) (p<O.OS). Experimento 2- Foi observado uma maior formação de malondialdeído (TBARS) nos tecidos hepáticos dos Grupos 3 e 4 em relação aos Grupos 1 e 2 (p<O.OS) e, além disso, ausência de diferença entre os Grupos 3 e 4 e entre os Grupos 1 e 2 (p>O.OS). Resultados semelhantes foram obtidos pelo método da QL. Experimento 3- A concentração sérica da AL Te AST foi superior (p<O.OS) nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) nas medidas efetuadas 12 e 24 horas após o procedimento e, nas determinações das 48 horas do Grupo 3 em relação aos demais (p<O.OS). A FA foi semelhante em todos os grupos de animais (p>O.OS). Experimento 4- A formação de malondialdeído foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos Grupo 1 e 2 (p<O.OS). Entre estes dois últimos grupos não houve diferença estatisticamente detectável (p>O.OS). Além disso, a QL demonstrou uma maior emissão de energia luminosa no Grupo 3 em relação aos demais (p<0.05) e, entre estes dois últimos os resultados foram semelhantes (p>0.05). Experimento 5- A taxa de mortalidade no grupo de animais submetidos a isquemia sem pré-tratamento como alopurinol (Grupo 3) foi de 40% nas primeiras 24h após o procedimento, estatisticamente distinta quando comparado ao Grupo 1 (cbntrole)(p<0.05). Entretanto, entre os animais do Grupo 2, ou seja, submetidos a isquemia e pré-tratamento com alopurinol, 13.3% foram ao óbito e este valor não se distingue dos animais do Grupo 1 (p>0.05). A avaliação entre os Grupos 2 e 3 não demonstrou diferença estatística (p>0.05). A mortalidade na avaliação das 48 horas foi igual entre os dois grupos (6.6% e 6.6%) (2 e 3) e não distintas, estatisticamente (p>0.05). Os demais animais sobreviveram durante o período de observação. Experimento 6- Congestão vascular hepática e necrose hepatocitária foram significativamente mais pronuncidas nos animais dos Grupos 2 e 3 em relação aos animais do grupo controle na avaliação efetuada 24 e 48 horas após a isquemia (p<0.05) e, além disso, a necrose foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos do Grupo 2 (p<0.05) apenas na avaliação das primeiras 24 horas após o procedimento cirúrgico. Não se observaram diferenças estatisticamente demonstráveis nas avaliações realizadas 72 e 96 horas após a cirurgia(p>0.05). Estes resultados sugerem que a via da xantina oxidase é uma das mais importantes rotas metabólicas envolvidas na geraçãode EAO, elementos quimicamente reativos e com potencial lesivo ao nível das membranas celulares dos hepatócitos e, que pelo menos em parte, são responsáveis pelos danos funcionais do fígado na síndrome da isquemia e reperfusão. Além disso, o alopurinol demonstrou efeitos protetores contra a lipoperoxidação decorrente da injúria reperfusional, embora a análise histopatológica não tenha demonstrado uma diferença estatisticamente significativa, o que pode ser justificado pelo fato das alterações provocadas nesta síndrome ocorram a nível de biomembranas celulares e de organelas não adequadamente visualizáveis pela microscopia óptica. / lt has been demonstrated that the oxygen free radical (EAO) contributes to the cellular damage induced by ischemia/reperfusion, probably mainly due to its lipid-oxidative characteristics. lt has been suggested that allopurinol has beneficiai effects in reducing the injury due to the reperfusion of previously ischemic organs, in this syndrome, as a result of its property of inhibiting the enzyme xanthine oxidase, most frequently referred as responsible for the EAO generation. This study was carried out with the purpose of elucidating the effects of hepatic ischemia-reperfusion in rats, the effects of allopurinol in this syndrome, the development of the assay for lipid peroxidation of hepatocyte membranes and the histopathologic features. To achieve this goal, the functional repercussion and the histopathologic features (analized 24 hours and eight days after surgery) were evaluated in wistar rats weighing 250-300 g. Experíment 1: performed for evaluating the way in which different procedures reflected upon the hepatic function. The animais were divided into 4 groups of 1 O rats each. Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total intermittent hepatic ischemia for 45 minutes: the first two 15-minute periods of ischemia were intercalated with 5 minutes of reperfusion; Group 3- rats which underwent partia! hepatectomy (mediai and left lobes). Group 4- lschemia as described above and at the end of partia! hepatectomy. Blood samples were obtained at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours and 4, 21 and 28 days after the procedure to determine the leveis of the enzymes oxalopiruvic transaminase (AL T), oxaloacetic transaminase (AST) and alkaline phosphatase (AF). Experiment 2: performed for evaluating the lipoperoxidation of hepatocyte membranes by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL) at different times of reperfusion. The animais were divided into 4 groups of 10 rats each: Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total hepatic ischemia for 60 minutes ; Group 3- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 30 minutes; Group 4- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 60 minutes. At the end of each operation time, a resection of the mediai lobe was performed, and hepatic tissue was removed and used for measuring lipid peroxidation by the methods described above. Experiment 3: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatic function in the setting of ischemia-reperfusion. The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. Blood samples were obtained 12, 24, 48 and 72 hours after the procedure to determine the activities of the AL T, AST and AF enzymes. Experiment 4: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatocyte membrane lipoperoxidation by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL). The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 60 minutes of reperfusion and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and reperfusion during 60 minutes. After the respective surgical times, the left and mediai lobes were removed and used for the lipoperoxidation assay by the TBARS and QL methods. Experiment 5: performed for evaluating the effects of allopurinol on mortality after the ischemia-reperfusion procedure. Forty animais were used and divided into 3 groups: Group 1- 10 control rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- 15 rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3: 15 rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. The animais were observed for 7 days after the procedure. Experiment 6: performed for analyzing the hepatic histopathologic features and the effects of the pre-treatment wíth allopurinol in the rats submitted to ischemia-reperfusion. Sixty animais were used and divided into three groups of twenty animais each: Group 1- Contrai rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes. Twenty-four, 48, 72 and 96 hours after the procedure, 5 rats of each group were sacrificed, and their left and right lobes were removed for histopathologic study (vascular congestion, necrosis and steatosis). Experiment 1: The determination of the AL T and AST leveis, after the procedure, demonstrated that these leveis were significantly higher in the groups 2 and 3 than in group 1 (p<0,05). Besides, among the animais of ali groups, those of group 4 had the highest leveis 12, 24 and 48 hours after the surgery. When the values of group 3 were added to the values of group 2, the results were not different from the values of group 4 (p>0,05). AF was higher in ali determinations, in the animais which underwent hepatectomy (groups 3 and 4) compared to those which were not submitted to this procedure (groups 1 and 2) (p< 0,05). Experiment 2: Malondialdehyde (TBARS) formation was higher in the groups 3 and 4 than in the groups 1 and 2 (p<0,05); besides, no difference was observed between the groups 3 and 4 and between the groups 1 and 2 (p>0,05). Similar results were observed with the QL method. These results suggest that the enzyme xanthine oxidase is one of the most important pathways involved in the generation of the EAbs, chemical reactive elements with injury potential at the levei of the hepatocyte membranes in the ischemia-reperfusion syndrome. At last, the results showed that allopurinol had beneficiai effects on hepatic function and lipid peroxidation and protective effects against hepatic ischemia-reperfusion injury. The histopathologic findings can be explained by the fact that the changes induced by this mechanism occur in organelles and biomembranes which are not visualized by light microscopy.
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