Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000439219-Texto+Completo-0.pdf: 722099 bytes, checksum: 87b93549e65018c129416830692d4bfc (MD5) Previous issue date: 2012 / Stenotrophomonas maltophilia is an important opportunistic and emerging pathogen commonly related to nosocomial infections and found in different environmental sources, including hospital settings. This microorganism is recognized for presenting intrinsic resistance to a range of important antimicrobials as well as to acquire resistance by horizontal gene transfer, which reduces the effective options for the treatment of infections caused by this organism. Therefore, the aim of this study was to determine the presence of S. maltophilia in the nosocomial environment and characterize the resistance of the environmental isolates, as well as clinical isolates obtained in the same hospital. Then, environmental samples were collected in the general ICU and the Unified Health System hospitalization unit of the São Lucas Hospital, Porto Alegre, Brazil. In addition, 100 clinical isolates were sent by the Clinical Pathology Laboratory of the same hospital. All samples were analyzed using a specific protocol for S. maltophilia detection by PCR developed in this study targeting 23S rRNA gene. Subsequently, the antimicrobial resistance was evaluated against ceftazidime, chloramphenicol, levofloxacin, minociclin and trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP/SMX). The presence of integrons was verified in all isolates and those that presented reduced susceptibility to TMP/SMX was evaluated the presence of sul1 and sul2 gene, as well as was determined the plasmid profile. All isolates were submitted to detection of smf-1 gene. Among the 936 samples collected in the nosocomial environment, S. maltophilia was identified in 28.High rates of susceptibility to minocycline, levofloxacin and chloramphenicol were observed, and all of the 19 isolates that presented reduced susceptibility to TMP/SMX carried the sul1 gene, 14 of them presented class 1 integron and nine isolates showed simultaneously sul1 and sul2. All isolates that carried the sul2 gene also presented the 7. 3 kb plasmid. The smf-1 gene was detected in 31 S. maltophilia isolates. The presence of S. maltophilia in hospital environment and medical devices indicates the permanence of this microorganism in the nosocomial environment, what can constitute a risk to infection for other hospitalized patients. In addition, the data obtained in this study in relation to TMP/SMX susceptibility can suggest that the resistance to these drugs have the tendency to increase, especially due to resistance determinants to these drugs can be associated to mobile genetic elements, which may facilitate horizontal transfer and the spread of these resistance genes. / Stenotrophomonas maltophilia é um importante patógeno oportunista e emergente, comumente relacionado a infecções nosocomiais e encontrado em diferentes locais, incluindo o ambiente hospitalar. Este microrganismo é reconhecido por apresentar resistência intrínseca a uma gama importante de antimicrobianos, bem como por adquirir resistência através de transferência gênica horizontal, o que reduz as opções efetivas para o tratamento de infecções ocasionadas por este microrganismo. Desta forma, o objetivo deste estudo foi determinar a presença de S. maltophilia no ambiente hospitalar e caracterizar a resistência a drogas antimicrobianas dos isolados ambientais, bem como dos isolados clínicos obtidos no mesmo hospital. Para tanto, amostras ambientais foram coletadas na UTI Geral e no andar referente à internação pelo Sistema Único de Saúde (SUS) do Hospital São Lucas, Porto Alegre, Brasil. Além disso, 100 isolados clínicos foram cedidos pelo Laboratório de Patologia Clínica do mesmo hospital. Todas as amostras foram analisadas utilizando um protocolo de detecção específica de S. maltophilia através de PCR desenvolvido neste estudo, tendo o gene RNAr 23S como alvo. Posteriormente, foi avaliada a resistência dos isolados frente à ceftazidima, cloranfenicol, levofloxacina, minociclina e trimetoprim/sulfametoxazol (TMP/SMX). A presença de integrons foi verificada em todos os isolados e naqueles com suscetibilidade reduzida a TMP/SMX foi avaliada a presença dos genes sul1 e sul2, bem como foi determinado o perfil plasmidial. Todos os isolados foram submetidos à detecção do gene smf-1. De um total de 936 amostras coletadas no ambiente hospitalar, S. maltophilia foi identificada em 28.Foram observadas elevadas taxas de suscetibilidade à minociclina, levofloxacina e cloranfenicol e todos os 19 isolados que apresentaram suscetibilidade reduzida à combinação TMP/SMX carrearam o gene sul1, 14 destes apresentaram o integron de classe 1 e nove isolados apresentaram concomitantemente os genes sul1 e sul2. Todos os isolados que carrearam o gene sul2 apresentaram o plasmídeo de 7,3 kb. O gene smf-1 foi detectado em 31 isolados de S. maltophilia. A presença de S. maltophilia nos materiais e equipamentos hospitalares indica a permanência destas bactérias no ambiente hospitalar, podendo constituir risco para infecção de outros pacientes internados. Além disso, os dados obtidos neste estudo em relação à suscetibilidade à TMP/SMX podem sugerir que a resistência a esta combinação de drogas possa estar em ascensão, especialmente porque os determinantes de resistência a estas drogas podem estar associados a elementos genéticos móveis, o que facilitaria a transferência horizontal e a disseminação destes genes de resistência.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437674-Texto+Completo-0.pdf: 1507951 bytes, checksum: 2f5468fe0bdb2401a723df07c96e2c43 (MD5) Previous issue date: 2011 / Acinetobacter baumannii is an important opportunistic pathogen commonly associated with nosocomial infections, especially in patients hospitalized in intensive care units (ICUs). This microorganism is renowned for its ability to survive under adverse conditions in the environment for extended periods, as well as to rapidly acquire resistance to antimicrobial drugs. Nowadays, the increasing antimicrobial resistance of A. baumannii has been a great challenge for the medical community, since there are few effective options for the treatment of infections caused by this organism. The aim of this study was to evaluate the presence of the A. baumannii from an ICU environment and to characterize the antimicrobial drug resistance of the isolates obtained, as well as of the isolates from patients in ICU of the same hospital in which it was collected environmental samples. For this, 886 environmental and gloves samples were collected from an ICU of São Lucas Hospital, Porto Alegre, Brazil, and 46 clinical isolates were obtained from the Laboratory of the same hospital. After the identification of the isolates as A. baumannii by PCR using as target 16S rDNA and blaOXA-51 genes, the resistance to 20 antimicrobial drugs and the production of metallo-beta-lactamases were evaluated in isolates presenting carbapenem reduced susceptibility. Also, it was evaluated the presence of integrons and blaOXA-23 and blaIMP genes by PCR. A. baumannii was identified in 9. 6% of environmental and glove samples collected. High percentage of multiresistant (MDR) isolates was found, as well as it was detected high rates of reduced susceptibility to carbapenems. All 89 isolates integron positive were MDR. Between isolates with reduced susceptibility to carbapenems, all presented blaOXA-23, and 41. 4% non-clinical and 54% clinical carried the blaIMP. High resistance to polymyxin B was detected, mainly in non-clinical isolates. Although high prevalence has been found in clinical and non-clinical isolates, the latter constitute a great concern, because they can indicate the hospital environment as a reservoir of MDR A. baumannii. / Acinetobacter baumannii é um importante patógeno oportunista comumente associado a infecções nosocomiais, especialmente em pacientes hospitalizados em unidades de tratamento intensivo (UTIs). Este organismo é reconhecido por sua capacidade de sobreviver em condições adversas no ambiente por períodos prolongados, bem como de facilmente adquirir resistência a drogas antimicrobianas. Atualmente, a crescente resistência antimicrobiana de A. baumannii tem constituído um grande desafio para a comunidade médica, uma vez que existem poucas opções efetivas para o tratamento de infecções causadas por este microrganismo. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de A. baumannii no ambiente de uma UTI e caracterizar a resistência a drogas antimicrobianas dos isolados obtidos, bem como de isolados de pacientes internados na UTI do mesmo hospital no qual as amostras ambientais foram coletadas. Para tanto, 886 amostras ambientais e de luvas foram coletadas de uma UTI do Hospital São Lucas, Porto Alegre, Brasil, e 46 isolados clínicos foram obtidos no Laboratório do mesmo hospital. Após a identificação dos isolados como A. baumannii através de PCR utilizando como alvos os genes rDNA 16S e blaOXA-51, foram determinadas a resistência a 20 drogas antimicrobianas previstas pelo CLSI e a produção de metalo-betalactamases em isolados com suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos. Também foi avaliada a presença de integrons e dos genes blaOXA-23 e blaIMP através de PCR. A. baumannii foi identificado em 9,6% das amostras ambientais e de luvas coletadas. Obteve-se um alto percentual de isolados multirresistentes (MDR), assim como foram detectadas alta taxas de suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos. Todos os 89 isolados que apresentaram integrons foram MDR. Dentre os isolados com suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos, todos apresentaram o gene blaOXA-23, e 41,4% não-clínicos e 54% clínicos carrearam o gene blaIMP. Alta resistência à polimixina B foi detectada, principalmente em isolados não-clínicos. Embora alta prevalência de resistência antimicrobiana tenha sido encontrada em isolados clínicos e não clínicos, os últimos constituem grande preocupação, pois podem indicar o ambiente hospitalar como um reservatório de A. baumannii MDR.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 1067.pdf: 443749 bytes, checksum: 373b05d6311ab99732dd76045a703772 (MD5) Previous issue date: 2008 / As infecções hospitalares acarretam o aumento da morbimortalidade de indivíduos internados em unidades hospitalares, como também, ampliam o tempo de permanência e conseqüentemente o aumento dos custos hospitalares. Atualmente, as Unidades de Terapia Intensiva-UTI representam uma importante e indispensável ferramenta da medicina moderna para prestar assistência a pacientes criticamente enfermos utilizando recursos humanos especializados e tecnológicos avançados. Porém, contamos com oônus do risco de IH. Neste contexto a UTI constitui um importante foco de atenção relacionada às práticas assistenciais por representar, em média, de 20 a 30 por cento de todas asinfecções notificadas. No Brasil, os leitos destinados para UTI, representam menos de 2 por cento dos leitos hospitalares disponíveis, no entanto, contribuem com mais de 25 por cento das infecções com uma alta taxa de óbitos. O objetivo do estudo foi analisar os casos notificados de infecções nosocomiais em UTI de dois hospitais de nível terciário do município de Fortaleza, estado do Ceará, no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2007. Tratou-se de um estudo descritivo, exploratório, retrospectivo, baseado na coletade dados secundários obtidos a partir do registro dos prontuários elaborados pela CCIH dos hospitais participantes. Além da coleta de dados, a equipe da CCIH respondeu um questionário sobre medidas adotadas para vigilância e controle de IH. De acordo com asrespostas, os hospitais são sentinelas, utilizam a metodologia NNIS, seguem os protocolos da ANVISA para diagnóstico de IH. No período do estudo foi encontrado nas duas instituições 1488 de IH, sendo 502 (33,7 por cento) na instituição 01 e 986 (66,3 por cento) na instituição 02. / Verificou-se alta taxa de prevalência IH nas duas instituições, 37 por cento para a instituição 01 e 52 por cento para a instituição 02. A idade dos casos variou de 15 a 95 anos, concentrando-se os maiores entre 55 a 74 anos, nas duas Instituições, com a média de 56 (...) 22 para a instituição 01 e de 60 (...) 18 para a instituição 02. O sexo feminino foi maior na instituição 01em relação à instituição 02. O sítio respiratório foi o mais prevalente para as duas instituições (29 por cento e 33 por cento) seguindo-se como segunda causa as infecções da corrente sangüínea para a instituição 01 (20,8 por cento) e infecção trato urinário para instituição 02 (25 por cento). Os pacientes apresentaram mais de um sítio de infecção ao mesmo tempo. O diagnóstico clínico para IH foi superior ao diagnóstico laboratorial na instituição 02. O uso de procedimentos invasivos foi acima de 99 por cento nas duas instituições. Verificou-se uma alta taxa de mortalidade nos pacientes 54,1 por cento na instituição 01 e 51,9 por cento na instituição 02. O tempo de permanência de internação mínima foi de um dia e máxima de 103 dias com média 29,67 dias. A pneumonia foi a primeira causa de internamento para a instituição 01 (21 por cento), enquanto que na instituição 02 foi a hipertensão arterial sistêmica (20 por cento). A Pseudomonas aeruginosa foi o microrganismo mais prevalente (24,3 por cento e 16,5 por cento, respectivamente) para as duas instituições; seguindose em segundo lugar para ambas as instituições o Acinetobacter baumanii (10,6 por cento e 11,0 por cento). / O estudo nas duas instituições encontrou prevalências de microrganismos diferentes, demonstrando que existem diferenças regionais ou locais representadas pelas características do hospital, tipo de atendimento e qualidade do serviço oferecido, que são atributos relevantes no contexto da infecção e que devem ser analisados criteriosamente. Elaborou-se um plano de prevenção e controle para subsidiar as unidades participantes do estudo.

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 123.pdf: 1294684 bytes, checksum: 49987dde78a9f73cea93a1d2691f5c4f (MD5) Previous issue date: 2006 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 123.pdf: 1294684 bytes, checksum: 49987dde78a9f73cea93a1d2691f5c4f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O presente estudo teve como proposta o monitoramento da resistência a drogas antimicrobianas entre 390 isolados de Salmonella Typhimurium de diversas fontes (animal, ambiental, alimentar, humana e de matéria-prima/rações) de contaminação da cadeia alimentar no Brasil, no período de 1999 a 2003. Todas as regiões geográficas brasileiras foram contempladas. Para o desenvolvimento deste trabalho, além da avaliação do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, foram utilizadas ferramentas epidemiológicas mais comumente usadas para este sorovar (lisotipia, perfil plasmidial e PFGE). Das 390 cepas avaliadas neste estudo, 346 apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, sendo Tetraciclina (85,84 por cento), Nitrofurantoína (67,63 por cento), Cloranfenicol (30,93 por cento) e Ácido Nalidíxico (26,01 por cento) os mais prevalentes. Três cepas apresentaram resistência à ceftriaxona e uma ao imipenem e todas as cepas foram susceptíveis à ciprofloxacina. Foram obtidos 72 perfis de susceptibilidade. O fagotipo prevalente em todos os anos, fontes e regiões geográficas foi o DT193. A multirresistência esteve associada em 44,13 por cento dos isolados deste fagotipo. Também foi caracterizado o fagotipo DT104 multirresistente. Este foi o primeiro relato deste fagotipo no Brasil. Foram caracterizados, no total, 14 fagotipos. Noventa e nove isolados foram submetidos à análise do perfil plasmidial, obtendo-se 28 perfis distintos. Treze isolados humanos foram submetidos à técnica de PFGE com a enzima XbaI. Foram identificados sete perfis de macrorrestrição, sendo encontrada clonalidade entre os isolados testados. / The present study aimed at monitoring the resistance to antimicrobian drugs in 390 isolates of Salmonella Typhimurium from different sources (animal, environmental, alimentary, human and from raw material/feed animal of contamination of the food chain in Brazil, from 1999 to 2003, including all geographic regions of this country. For such, as well as an evaluation of the profile of susceptibility to antimicrobian drugs, the epidemiological tools most commonly employed for this serovar (phage typing, plasmid profile and PFGE) were used. From the 390 isolates evaluated in the present study, 346 showed resistance to at least one antimicrobian drug, the most prevalent of which being Tetracycline (85,84%), nitrofurantoin (67,63%), chloramphenicol (30,93%) and naladixic acid (26,01%). Three isolates showed resistance to ceftriaxone and one to imipenem. All strains were susceptible to ciprofloxacin. A total of 72 profiles of susceptibility were obtained. The prevalent phage type in every year, source and geographic regions was the DT193. A multiresistance was found in 44,13% of the isolates of this phage type. The multiresistant phage type DT104 was also characterized. This was the first report of this phage type in Brazil. A total of 14 phage types were characterized. Ninety-nine isolates were subjected to the analysis of the plasmidial profile, from which 28 distinct profiles were obtained. Thirteen human isolates were subjected to the PFGE technique with the enzyme XbaI. Seven macrorestriction profiles were identified, with clonality having been found among the tested isolates.

Avaliou-se a aplicação rotineira de um método automatizado TSMA em comparação ao convencional TSMP na determinação da sensibilidade a drogas anti-micobacterianas de 126 isolados clínicos de bactérias do complexo M. tuberculosis. Os isolados clínicos foram divididos em: sem tratamento (NT), tratado anteriormente (RT) e multirresistentes (MDR). A concordância entre TSMP e TSMA, para Rifampicina no NT, foi de 98.3%, p=1.000 e Kappa=0.659. No RT, foi de 94.3%,p=0.625 e Kappa=0.639, no MR, foi de 96.6%, p=0.625 e Kappa=0.651. Para Hidrazida, no NT, foi de 88.5%, p=0.125 e Kappa=0.408 no RT foram de 88.6%, p=0.625 e Kappa=0.645 no de pacientes MR, foi de 86,7%, p=0.625 e Kappa=0.053. Para Estreptomicina no NT, foi de 93.5%, p=0.125 e Kappa=0.635. No RT, foi de 79.4%, p=0.016 e KAPPA=0.296 no MR, foi de 76,6%, p=0.453 e Kappa=0.533. Para Etambutol, no NT, foi de 93.4%, p=0.125 e Kappa=0.315, no RT foi de 94.3%, p=0.500 e Kappa=0.478. No MR, foi de 72.4%, p=0.70ª e Kappa=0.455. A metodologia automatizada mostrou-se mais rápida. / We evaluated the routinely application of an automated system(STAM) and the conventional method (STPM), used to determine the profile of sensitivity to antimycobacterial drugs of 126 clinical isolates of the complex M. tuberculosis. Clinical isolates was group divided into: without treatment (WT), previously treated (PT) and multidrug resistant (MDR).Concordant result between STPM and STAM, for Rifampin, in WT, was 98.3%, p=1.000 and Kappa=0.659. PT, was 94.3%, p=0.625 and Kappa=0.639; in MDR, was 96.6%, p=0.625 and Kappa=0.651. For Hidrazin, WT, was 88.5%, p=0.125 and Kappa=0.408; in PT, 88.6%, p=0.625 and Kappa=0.645; for MDR, 86.7%, p=0.625 and Kappa=0.053. For Streptomycin, PT was 93.5%, p=0.125 and Kappa=0.635. In PT, was 79,5%, p=0.016 and Kappa=0.296; in MDR, 76.6%, p=0.453 and Kappa=0.533. For Ethambutol, WT was 93.4%, p=0.125; in PT 94.3%, p=0.500 and Kappa=0.478. MDR was 72.4%, p=0.70 and kappa=0.455. Evaluation of mycobacterial sensitivity was faster in the automated method when compared with the conventional method.

O glioblastoma multiforme, tumor de alta malignidade é conhecido por ser um câncer de difícil cura devido sua resistência ao tratamento de quimioterapia. Neste contexto sabe-se a existência de um gene responsável pelo fenótipo de resistência (MDR) e produção de proteínas associadas à resistência a uma grande variedade de drogas (MRPs). As proteínas de resistência a múltiplas drogas funcionam como bombas de efluxo, capazes de retirar das células compostos citotóxicos, deixando o tratamento quimioterápico sem o efeito esperado. Atualmente a suposta relação entre as ciclooxigenases e as proteínas de resistência a múltiplas drogas tem sido estudada em alguns tipos de câncer e na maioria deles observa-se uma relação positiva no sentido da COX poder participar da super-expressão de proteínas de resistência, fazendo com que as células fiquem ainda mais resistentes ao tratamento. O objetivo do projeto é analisar o possível efeito das COX 1 e 2 na expressão e atividade de MDRs e MRPs. / Glioblastoma multiforme, a highly malignant tumor is difficult to cure because of its resistance to chemotherapy treatment. A well-established cause of multidrug resistance (MDR) involves the increased expression of members of the ATP binding cassette (ABC) transporter superfamily, many of which transport chemotherapeutic compounds from cells. Multidrug resistance proteins can act as efflux pumps allowing. The cells to remove cytotoxic compounds and often leaving the chemotherapy treatment without the expected effect. The possible relationship between cyclooxygenase and MDRPs has been studied in several cancers and in most there is a positive relationship. The role of cyclooxygenases (COX) has been extensively studied, especially COX-2, which is expressed in many human cancers. Recently studies have been performed to identify whether the presence of COXs has some involvement with the expression of MDRPs. A positive correlation between COXs and MDRPs has been identified in certain cancers. To analyze the possible relationship between COX 1 and 2 and the expression and activity of MDRs and MRPs in gliomas. The following family members of ABC transporters were studied: MDR1, MRP1, MRP2, MRP3, MRP4 e MRP5. Our analysis show e da constitutive expression of Cox-2 in U138MG and U251 cells, as well as the expression of all the MDRPs studied (MDR1 and MRPs1-6). However, in the U138MG cell line where COX-1 was not is expressed there was a large decrease in the expression of MDR1 in comparison with the COX 1 positive U251 cell line.

O aumento da resistência do parasita da malária a maioria da drogas antimaláricas disponíveis, tornandose necessário pesquisar novos compostos com potencial atividade antimalárica. O objetivo desta tese foi inicialmente caracterizar a atividade do risedronato contra as formas intraeritrocitárias do parasita in vivo, além de identificar seu possível mecanismo de ação. A IC50 do risedronato foi de 20 <font face=\"Symbol\">mM em culturas de Plasmodium falciparum. Risedronato reduziu a biossíntese de FOH e GGOH e a isoprenilação de proteínas, inibindo a transferência do grupo FPP para as proteínas farnesiladas, entretanto, a transferência do GGPP para as proteínas geranilgeraniladas não foi inibida, isto também ocorreu quando proteínas ras e rab foram analisadas, sugerindo que a droga está inibindo a enzima FPPS. A enzima FPPS de P. falciparum foi expressa e obtivemos uma proteína recombinante fusionada a GST (rPfFPPS). Os substratos IPP, DMAPP, GPP e FPP foram utilizados para determinação da atividade catalítica da enzima, demonstrando FPP e GGPP como principais produtos. Os valores de Km para os diferentes substratos foi determinado. Demonstramos também que rPfFPPS é inibida por risedronato, podendo ser explorado como potencial alvo antimalárico. / The increased resistance of the malaria parasite most of antimalarial drugs are available, making it necessary to search for new compounds with potential antimalarial activity. The aim of this thesis was initially characterize the activity of risedronate against intraerythrocytic forms of the parasite in vivo, and identify its possible mechanism of action. The IC50 of risedronate was 20 <font face=\"Symbol\">mM in cultures of Plasmodium falciparum. Risedronate reduced biosynthesis and FOH, GGOH and protein isoprenylation, inhibiting the transfer of FPP group for farnesylated proteins, however, the transfer of GGPP to geranygeranylated proteins was not inhibited, this also occurred when ras and rab proteins were analyzed, suggesting that the drug is inhibiting the enzyme FPPS. The FPPS enzyme from P. falciparum was expressed and obtained a recombinant protein fused to GST (rPfFPPS). The substrates IPP, DMAPP, GPP and FPP were used to determine the catalytic activity of the enzyme, demonstrating FPP and GGPP as main products. The Km values for the various substrates were determined. We also demonstrate that rPfFPPS is inhibited by risedronate, which can be exploited as potential antimalarial target.

Linezolida foi o primeiro fármaco da classe das oxazolidinonas a ser aprovado para o uso clínico. Esta nova oxazolidinona inibe a síntese protéica impedindo a formação do complexo de iniciação formado pelo mRNA, tRNA f-Met e a subunidade 50S do ribossomo bacteriano. Embora a resistência à linezolida possa ser mediada pelo produto do gene cfr ou por mutações nas proteínas ribossômicas L3, L4 e L22, o mecanismo de resistência mais comum envolve mutações no domínio V do gene rRNA 23S. Entre março de 2008 a dezembro de 2011, 38 cepas de estafilococos coagulase-negativos (SCNs) resistentes à linezolida (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) isoladas de hemoculturas e pontas de cateter de pacientes internados em dois hospitais terciários do Estado de São Paulo foram incluídas neste estudo para a determinação dos mecanismos de resistência e análise da estabilidade do fenótipo resistente. As cepas de SCNs apresentaram altos níveis de resistência à linezolida (CIMs de 16-128 &#181;g/ml) e foram multi-resistentes, permanecendo sensíveis à vancomicina e teicoplanina. A mutação G2576T foi identificada no domínio V do gene rRNA 23S em todas as cepas de SCNs, exceto em uma cepa de S. haemolyticus. O gene cfr e mutações nas proteínas L4 e L22 não foram detectados. Em relação à proteína L3, todas as cepas de S. epidermidis do hospital A, incluindo a cepa controle sensível à linezolida, apresentaram a substituição Leu101Val, sugerindo que essa mutação seja um marcador clonal dessa população sem envolvimento com a resistência à linezolida. A única cepa proveniente do hospital B (S. epidermidis) foi selvagem para essa proteína ribossômica. Somente uma cepa de S. haemoyticus teve uma mutação no gene rplC, resultando na alteração Val154Leu. Em S. hominis, a mutação Phe147Ile foi identificada em uma cepa, enquanto a associação de Gly139Arg e Met156Thr foi observada nas outras duas cepas dessa espécie. A identificação dessas mutações na proteína L3 de cepas de S. haemoyticus e S. hominis resistentes à linezolida reforça o papel desses sítios na aquisição da resistência ao fármaco em Staphylococcus spp. No entanto, a presença de G2576T no rRNA 23S torna difícil determinar exatamente qual o envolvimento das mutações na L3 com os elevados níveis de resistência à linezolida apresentados por essas cepas. Na ausência da pressão seletiva do antimicrobiano, após 130 passagens, a resistência à linezolida mediada pela mutação G2576T permaneceu estável nas cepas de SCNs deste estudo, as quais, de acordo com os perfis de restrição do domínio V gerados por NheI, tinham tanto alelos rRNA 23S selvagens como mutados. O sequenciamento individual do domínio V das diferentes cópias do gene rRNA 23S mostrou G2576T em todas as cópias amplificadas por PCR: 4/4 e 5/5 em S. epidermidis e 3/3 em S. haemolyticus (CIMs de 16-32 &#181;g/ml). A estabilidade da cópia rRNA 23S mutada foi observada mesmo em uma cepa S. epidermidis sensível à linezolida, a qual apresentou uma redução da CIM de 4 para 1 &#181;g/ml mantendo seu único alelo mutado ao longo do processo de reversão ao fenótipo sensível. A similaridade genética foi determinada por PFGE e mostrou uma disseminação clonal das diferentes espécies de SCNs resistentes à linezolida. A análise das cepas de S. epidermidis por MLST mostrou a ocorrência do clone ST-2 (CC2) nos dois hospitais. O aumento da pressão seletiva devido a exposições cada vez mais frequentes à linezolida, provavelmente, favoreceu a seleção e a disseminação de clones endêmicos de SCNs com a mutação G2576T na instituição A desde 2008. De forma diferente, o uso mais restrito do fármaco na instituição B poderia explicar a ocorrência isolada de uma única cepa resistente desde 2005. / Linezolid was the first agent of the oxazolidinone class to be introduced clinically. This oxazolidinone inhibits protein biosynthesis by preventing the formation of the initiation complex that consists of the mRNA, the f-Met tRNA and the 50S subunit of the ribosome. Although linezolid resistance has been mediated by the cfr-encoded product or by ribosomal proteins (L3, L4 and L22), the most common mechanism of resistance involves mutations in the central loop of domain V of the 23S rRNA gene. From March 2008 to December 2011, 38 coagulase-negative staphylococci (CNS) strains (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) exhibiting resistance to linezolid were isolated from blood and catheter cultures from patients in two tertiary care hospitals in the State of São Paulo and were included in this study for the ascertainment of the resistance mechanisms to this antimicrobial agent and for the analysis of the stability of this resistance. The strains exhibited high-level resistance to linezolid (MICs 16-128 &#181;g/ml) and all were multidrug resistant, remaining susceptible to vancomycin and teicoplanin. The G2576T mutation in domain V region of 23S rRNA was identified in all isolates, except in a linezolid-resistant S. haemolyticus strain. The cfr gene and mutations in ribosomal proteins L4 and L22 were not detected. Regarding L3 protein analysis, all S. epidermidis strains of hospital A, including the linezolid-susceptible control strain, showed the L3 Leu101Val mutation, suggesting that this alteration is probably not involved in linezolid resistance. The one strain from hospital B (S. epidermidis) was wild-type for this ribosomal protein. Only one S. haemolyticus strain had a mutation in the L3 protein, Val154Leu. Two S. hominis strains showed Gly139Arg/Met156Thr mutations whereas one strain had Phe147Ile in L3 protein. The identification of these mutations in L3 protein of the linezolid-resistant S. haemolyticus and S. hominis strains strengthens the role of these sites in the acquisition of linezolid resistance in Staphylococcus spp. However, the presence of G2576T in the 23S rRNA gene makes difficult to determine exactly the role of L3 mutations in conferring elevated linezolid MIC values showed by these clinical strains. In the absence of antibiotic pressure, after 130 passages, linezolid resistance was stable in the clinical strains of this study, which did not have all copies of the 23S rRNA gene mutated, according to the restriction of the domain V fragment with NheI enzyme. Sequencing of the individual copies of the 23S rRNA gene in the serially passaged strains showed G2576T in all amplified copies by PCR: 4/4 and 5/5 in S. epidermidis and 3/3 in S. haemolyticus strains (MIC of 16-32 &#181;g/ml). The stability of the mutant rRNA copy was also observed in the linezolid-susceptible S. epidermidis strain (MIC of 4 &#181;g/ml). After the passages in antibiotic-free medium, the linezolid MIC of this strain fell to 1 &#181;g/ml and the G2576T mutation persisted in one 23S rRNA gene copy. The clonal relatedness of the strains was determined by PFGE and revealed a clonal dissemination of different CNS species. Regarding MLST analysis, all S. epidermidis strains belonged to the sequence type ST2 (CC2). Most likely, the increased selective pressure has contributed to the selection of endemic linezolid-resistant CNS clones showing the G2576T mutation that have been disseminated in the institution A since 2008. Differently, the restricted use of linezolid in the institution B could explain the occurrence of a single resistant strain since 2005.

Para avaliar a sensibilidade da colistina e polimixina B de isolados de P. aeruginosa multirresistentes foram utilizadas diferentes metodologias, como microdiluição, Etest e disco-difusão, cujos resultados evidenciaram que a microdiluição continua sendo o método de referência. Do total de 109 isolados, não houve resistência para colistina e apenas um isolado mostrou-se resistente para a polimixina B. Para determinar a linhagem clonal destes isolados foi empregada a técnica de eletroforese em campo pulsado, a qual evidenciou a existência de um padrão molecular predominante durante o período de estudo e a presença de 7 grupos de isolados de P. aeruginosa multirresistentes em 2003 / -

O glioblastoma multiforme, tumor de alta malignidade é conhecido por ser um câncer de difícil cura devido sua resistência ao tratamento de quimioterapia. Neste contexto sabe-se a existência de um gene responsável pelo fenótipo de resistência (MDR) e produção de proteínas associadas à resistência a uma grande variedade de drogas (MRPs). As proteínas de resistência a múltiplas drogas funcionam como bombas de efluxo, capazes de retirar das células compostos citotóxicos, deixando o tratamento quimioterápico sem o efeito esperado. Atualmente a suposta relação entre as ciclooxigenases e as proteínas de resistência a múltiplas drogas tem sido estudada em alguns tipos de câncer e na maioria deles observa-se uma relação positiva no sentido da COX poder participar da super-expressão de proteínas de resistência, fazendo com que as células fiquem ainda mais resistentes ao tratamento. O objetivo do projeto é analisar o possível efeito das COX 1 e 2 na expressão e atividade de MDRs e MRPs. / Glioblastoma multiforme, a highly malignant tumor is difficult to cure because of its resistance to chemotherapy treatment. A well-established cause of multidrug resistance (MDR) involves the increased expression of members of the ATP binding cassette (ABC) transporter superfamily, many of which transport chemotherapeutic compounds from cells. Multidrug resistance proteins can act as efflux pumps allowing. The cells to remove cytotoxic compounds and often leaving the chemotherapy treatment without the expected effect. The possible relationship between cyclooxygenase and MDRPs has been studied in several cancers and in most there is a positive relationship. The role of cyclooxygenases (COX) has been extensively studied, especially COX-2, which is expressed in many human cancers. Recently studies have been performed to identify whether the presence of COXs has some involvement with the expression of MDRPs. A positive correlation between COXs and MDRPs has been identified in certain cancers. To analyze the possible relationship between COX 1 and 2 and the expression and activity of MDRs and MRPs in gliomas. The following family members of ABC transporters were studied: MDR1, MRP1, MRP2, MRP3, MRP4 e MRP5. Our analysis show e da constitutive expression of Cox-2 in U138MG and U251 cells, as well as the expression of all the MDRPs studied (MDR1 and MRPs1-6). However, in the U138MG cell line where COX-1 was not is expressed there was a large decrease in the expression of MDR1 in comparison with the COX 1 positive U251 cell line.